如何正確采集病原微生物標(biāo)本的課件

1、病原微生物標(biāo)本的采集1. 給臨床感染的診斷提供實驗室的依據(jù)2. 給臨床抗感染治療提供參考3. 臨床流行病學(xué)的調(diào)查微生物檢驗的一個重要功能就是進(jìn)行細(xì)菌耐藥監(jiān)測，以指導(dǎo)臨床合理使用抗生素，并制定合理的經(jīng)驗用藥方案。臨床微生物檢驗的主要功能但就目前的現(xiàn)狀，要實現(xiàn)上述的功能存在很大的問題1.分離的病原菌的耐藥譜不能真正代表病原菌的耐藥譜，很多敏感的病原菌沒有做培養(yǎng)或沒有取到感染部位的標(biāo)本；2.目前的分離的病原菌的耐藥率是遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于真正的耐藥率，目前統(tǒng)計的病原菌耐藥率的利用價值很低，所以在制定經(jīng)驗用藥方案時缺乏合理的依據(jù)。解決方案1.提高病原微生物的送檢率，強(qiáng)調(diào)在使用抗生素之前采集標(biāo)本；2.提高送檢標(biāo)本的

2、質(zhì)量；3.提高實驗室的檢測能力。期待明年的耐藥數(shù)據(jù)能真正反映我院病原菌的分布和耐藥情況，可以用作經(jīng)驗選藥的依據(jù)。實驗結(jié)果的影響因素實驗前因素實驗室因素實驗后因素常見微生物標(biāo)本的正確采集血液和骨髓的采集;痰標(biāo)本的采集;咽拭子標(biāo)本的采集;尿液標(biāo)本的采集;膿、創(chuàng)傷感染標(biāo)本的采集;穿刺液標(biāo)本的采集;糞便標(biāo)本的采集; 血液和骨髓的采集采血的時機(jī)？采血的方法？ 正確的采血量應(yīng)該是多少?血培養(yǎng)陰/陽性有什么臨床意義？什么情況需要做血培養(yǎng)有不明原因的發(fā)熱、體溫過低等癥狀；懷疑有菌血癥或膿毒癥如休克、寒顫等;嚴(yán)重的局部感染；呼吸頻率加快等。采集血培養(yǎng)標(biāo)本的最佳時間？1.有發(fā)熱等癥狀時；2.在使用抗生素的情況下；

3、3.懷疑有亞急性心內(nèi)膜炎時。細(xì)菌入血、內(nèi)毒素釋放和體溫上升的關(guān)系示意圖 濃度 1：細(xì)菌（溫度）2：內(nèi)毒素3：體溫 1 2 3 時間亞急性心內(nèi)膜炎病例:女性患者，懷疑為亞急性心內(nèi)膜炎入院，入院后當(dāng)天連續(xù)送三次血培養(yǎng)均為陰性，但臨床上有明顯的膿毒血癥癥狀。微生物室注意到三次血培養(yǎng)的抽血時間為4pm,6pm和9pm，與主管醫(yī)生溝通后，建議兩小時內(nèi)連續(xù)送三次血培養(yǎng)。結(jié)果第二批血培養(yǎng)中有二次為陽性，均培養(yǎng)出草綠色鏈球菌。 懷疑有亞急性心內(nèi)膜炎或?qū)Ч芟嚓P(guān)性菌血癥時：12小時內(nèi)采集三份血標(biāo)本正確的采血方法1.如果用注射器，應(yīng)先采集厭氧瓶；如果用真菌采血的軟管，應(yīng)先采集需氧瓶；采血時的皮膚消毒推薦采用三步消毒

4、法：1 首先用70%酒精擦拭靜脈穿刺部位待30秒鐘以上。2 然后用一根碘酊或碘伏棉簽消毒皮膚（1%2%碘酊30秒或10%碘伏消毒60秒），從穿刺點向外以1.5cm2cm直徑畫圈進(jìn)行消毒。3 最后用70%酒精脫碘。注意對碘過敏的患者，只能用70%酒精消毒，消毒60秒鐘，待穿刺部位酒精揮發(fā)干燥后穿刺采血。血養(yǎng)瓶消毒程序：1 用70%酒精或碘溶液(不要使用碘)消毒血培養(yǎng)瓶橡皮塞子。2 酒精作用約60秒。3 在血液注入血培養(yǎng)瓶之前,用無菌紗布清除橡皮塞子表面剩余的酒精,然后注入血液。正確的采血量應(yīng)該是多少?血培養(yǎng)應(yīng)采集多少次1.推薦24h內(nèi)連續(xù)采集三次血培養(yǎng)標(biāo)本； 一次血培養(yǎng)約可以檢出72的血流感染，

5、二次約可檢出約93，三次約可檢出約97；2.如果培養(yǎng)48h以后為陰性，若臨床懷疑為菌血癥的應(yīng)在24h內(nèi)再連續(xù)采集三次血培養(yǎng)標(biāo)本；3.不主張每天采集血培養(yǎng)標(biāo)本。血培養(yǎng)陽/陰性的臨床意義1.培養(yǎng)出革蘭陰性菌、金黃色葡萄球菌、腸球菌等時，多數(shù)可以確認(rèn)為病原菌；2.培養(yǎng)出凝固酶陰性葡萄球菌、草綠色鏈球菌、芽胞桿菌等時，感染？污染？有臨床意義的前10位細(xì)菌(1990-1993): CID 1997解決方案需多次多部位/天 采血。24小時內(nèi)連續(xù)采集三次血培養(yǎng)標(biāo)本。采集血培養(yǎng)標(biāo)本方面存在的問題1.采血的量不太準(zhǔn)確，很多培養(yǎng)采血量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超量；2.采血的時機(jī)不夠準(zhǔn)確，采血時機(jī)與體溫變化的關(guān)系不太熟悉；3.采集標(biāo)本

6、的次數(shù)和頻率不太準(zhǔn)確，很多醫(yī)生喜歡每天采集一次或僅采集一次；什么情況需要采集骨髓標(biāo)本1.疑為細(xì)菌性或真菌性骨髓炎的患者；2.疑為傷寒感染的患者；痰標(biāo)本的采集 要求采集肺深部的痰液，不要唾液。一般采用自然咳痰法，但以氣管鏡采集法標(biāo)本質(zhì)量最好。 自然咳痰法 ； 氣管鏡采集法； 小兒取痰法；(4) 導(dǎo)管尖送檢； 下呼吸道標(biāo)本所有病人的下呼吸道標(biāo)本應(yīng)在采集后立即送至微生物室，并于1小時內(nèi)接種室溫下放置1h會降低肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌的分離率而定植于上呼吸道的非致病菌則會過度生長下呼吸道標(biāo)本勿放冰箱或運(yùn)輸時勿置于冰塊中痰涂片檢查是否標(biāo)本合格痰肉眼觀察: 記錄標(biāo)本外觀 唾液、帶血、粘液樣、水樣、膿性的、

7、粘液膿性、膿性粘液樣顯微鏡檢查：取膿性部分涂在玻片上作革蘭染色. 低倍視野下看涂片，記錄5個視野下平均細(xì)胞數(shù)。痰涂片的判定分類 WBC 鱗狀上皮細(xì)胞 6 25 25 25 10-25 3 25 25 2 10-25 25 1 25分類中13類不做培養(yǎng)，要求重新留取標(biāo)本；4、5類為合格標(biāo)本；6類為氣管穿刺液時，如未見白細(xì)胞，而鱗狀上皮細(xì)胞10/低倍，亦應(yīng)重新留取標(biāo)本。痰標(biāo)本采集存在的問題1.痰標(biāo)本的合格程度偏低，全院痰標(biāo)本的合格率不到40%；2.標(biāo)本的轉(zhuǎn)運(yùn)時間過長，很多標(biāo)本送到實驗室已經(jīng)超過2小時。 咽拭子標(biāo)本的采集 標(biāo)本采集應(yīng)在用藥前，最好在清晨，囑患者用清水漱口，由檢查者將舌向外拉，使懸雍垂

8、向外牽引，將咽拭子超過舌根到達(dá)咽后壁或懸雍垂的后側(cè)，在咽部肉眼見明顯發(fā)紅或有假膜處局部反復(fù)涂抹棉拭(注意不要碰著口腔粘膜)，放入無菌試管內(nèi)立即送檢。 尿液標(biāo)本的采集 中段尿采集法導(dǎo)尿法膀胱穿刺取尿法留尿法 尿液標(biāo)本采集存在的問題1.隨機(jī)尿代替中段尿送檢，特別是門診病人；2.部份標(biāo)本存在污染情況；3.部份插管患者采集了尿袋中的尿液；4.標(biāo)本中的轉(zhuǎn)運(yùn)時間過長。膿、創(chuàng)傷感染標(biāo)本的采集 首先用無菌生理鹽水拭凈病灶表面的污染雜菌。對已破潰的膿腫用無菌的棉拭子取深部的膿液和分泌物；未破潰的膿腫消毒皮膚后，用無菌注射器抽取膿液及分泌物立即送檢。如深部膿腫在送需氧培養(yǎng)的同時應(yīng)考慮送厭氧培養(yǎng)，厭氧培養(yǎng)標(biāo)本應(yīng)隔絕

9、空氣立即送檢。當(dāng)創(chuàng)傷出血時，敷用藥物2h以內(nèi)及燒傷在12h內(nèi)不應(yīng)采集標(biāo)本，此時獲得陽性結(jié)果的機(jī)會很少。 穿刺液標(biāo)本的采集 應(yīng)在患者用藥之前或停藥12d后進(jìn)行穿刺，標(biāo)本應(yīng)立即送檢或保存于4冰箱。腦脊液標(biāo)本應(yīng)保溫（2537），抽2ml直接注入小兒瓶中,同時再另抽12ml于無菌容器同時送檢并立即送檢。 糞便標(biāo)本的采集 自然排便采集法直腸拭子采集法 有腹瀉的病人，在送培養(yǎng)標(biāo)本的同時可以送細(xì)菌涂片檢查?？股叵嚓P(guān)性腹瀉性腹瀉，培養(yǎng)是陰性，但涂片檢查卻可以看到細(xì)菌比例失調(diào)，涂片臨床意義大于培養(yǎng)。 微生物培養(yǎng)還應(yīng)注意的問題1.培養(yǎng)陽性的分離菌不一定是真的病原菌，特別從有菌部位來的，如痰標(biāo)本；2.無菌部位培養(yǎng)出來的病原菌應(yīng)當(dāng)連續(xù)監(jiān)測，若病原菌發(fā)生改變或治療效果不佳時應(yīng)考慮更換抗生素；3.細(xì)菌的耐藥性在治療過程中可以會發(fā)生改變，要注意觀察是否有耐藥性的變遷。醫(yī)院感染的防治醫(yī)院感染(nosocomial infec