7免疫分析3匯總課件

1、7免疫分析37免疫分析38.4.1 熒光標(biāo)記物 FIA就是把一些強(qiáng)熒光的化合物用作標(biāo)記試劑。常用的熒光標(biāo)記物包括：熒光素類(fluoresceins)標(biāo)記物 熒光素具有很高的摩爾吸光系數(shù)和熒光量子產(chǎn)率，因而它是熒光免疫分析中最常用的熒光標(biāo)記物之一。羅丹明類(Rhodamine)標(biāo)記物 羅丹明類衍生物與熒光素類具有相同的基本結(jié)構(gòu)。與熒光素類化合物相比，它們的發(fā)射波長(zhǎng)要長(zhǎng)一些，但熒光量子產(chǎn)率要低一些。8.4.1 熒光標(biāo)記物熒光素類(fluoresceins)標(biāo)香豆素類(Coumarins)標(biāo)記物 藻膽蛋白類(Phycobiliproteins)標(biāo)記物 藻膽蛋白類的水溶性非常好，它們是藍(lán)綠細(xì)菌的光合

2、成器的一部分。在它們的結(jié)構(gòu)中含有幾個(gè)線性四吡咯輔基，因而具合很高的吸光能力。這類化合物常在微粒熒光免疫分析中被用作熒光探針。香豆素類(Coumarins)標(biāo)記物 藻膽蛋白類(Phyco 8.4.2 在生物體液中進(jìn)行熒光測(cè)定的局限性(1)光散射干擾 由于蛋白質(zhì)、類脂物及膠體顆粒對(duì)激發(fā)光的散射，將會(huì)出現(xiàn)瑞利散射、拉曼散射或丁達(dá)爾散射。瑞利散射和丁達(dá)爾散射與激發(fā)光波長(zhǎng)相同，但拉曼散射的波長(zhǎng)要比激發(fā)光的長(zhǎng)。散射光無(wú)壽命，即隨著激發(fā)光的終止而消失。(2)背景熒光干擾 生物體液中含有多種熒光物質(zhì)，其熒光光譜覆蓋很寬的波長(zhǎng)范圍，因而會(huì)產(chǎn)生非常強(qiáng)的背景熒光。 8.4.2 在生物體液中進(jìn)行熒光測(cè)定的局限性(1)

3、光散射干(3)淬滅效應(yīng) 血清中的蛋白質(zhì)、膽紅素及血紅蛋白等可以吸收激發(fā)或發(fā)射光的能量而產(chǎn)生淬滅現(xiàn)象。熒光標(biāo)記的抗原與血清蛋白的結(jié)合也會(huì)產(chǎn)生熒光淬滅。 (4)光漂白作用 當(dāng)熒光分子受到激發(fā)光的連續(xù)照射時(shí)會(huì)產(chǎn)生光分解而使得熒光強(qiáng)度減小，特別是當(dāng)激發(fā)光的波長(zhǎng)短，而激發(fā)光的強(qiáng)度又非常大時(shí)更是這樣(如采用激光光源時(shí))。(3)淬滅效應(yīng)8.4.3 熒光免疫分析的儀器 所有用于熒光免疫分析的熒光儀都由光源、激發(fā)和發(fā)射濾光片或單色器、一個(gè)光學(xué)系統(tǒng)(可以是棱鏡、反射鏡或光導(dǎo)纖維)和一個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)組成。更復(fù)雜的儀器還可以包括移液、洗滌、移動(dòng)和數(shù)據(jù)處理單元。時(shí)間分辨熒光儀有一個(gè)電子回路用于控制測(cè)定時(shí)間。這類復(fù)雜的儀器一

4、般都是為特定的化學(xué)分析系統(tǒng)所設(shè)計(jì)的，所以所有的測(cè)定參數(shù)都已經(jīng)預(yù)先優(yōu)化好了，并且是固定的。8.4.3 熒光免疫分析的儀器 所有用于熒光免疫分析的熒8.4.4 熒光免疫分析法示例時(shí)間分辨熒光免疫分析法（Time - Resolved Fluorescence，簡(jiǎn)稱TRF） 用三價(jià)稀土離子及其螯合劑作為示蹤物(代替熒光物質(zhì)、同位素或酶)，標(biāo)記蛋白質(zhì)、多肽、激素、抗體、核酸探針或生物活性細(xì)胞，待反應(yīng)體系（如：抗原抗體免疫反應(yīng)、生物素親和素反應(yīng)、核酸探針雜交反應(yīng)、靶細(xì)胞與效應(yīng)細(xì)胞的殺傷反應(yīng)等）發(fā)生后，用時(shí)間分辨熒光儀測(cè)定最后產(chǎn)物中的熒光強(qiáng)度，以此來(lái)判斷反應(yīng)體系中被測(cè)物質(zhì)的濃度。 8.4.4 熒光免疫分析

5、法示例時(shí)間分辨熒光免疫分析法（TimTRF 分析法的優(yōu)點(diǎn)： 標(biāo)記物體積很小(為原子標(biāo)記)，標(biāo)記后不會(huì)影響被標(biāo)記物的空間立體結(jié)構(gòu)，保證了被檢測(cè)物質(zhì)的穩(wěn)定性(尤其對(duì)蛋白質(zhì)影響更小)； 實(shí)現(xiàn)了多位點(diǎn)標(biāo)記，這不僅使檢測(cè)更靈敏，也使一個(gè)試劑盒能夠同時(shí)檢測(cè)出兩種或兩中以上的項(xiàng)目（如前列腺特異抗原PSA的檢測(cè)）； 目前只有原子標(biāo)記才能準(zhǔn)確的定量檢測(cè)DNA、RNA。 TRF 分析法的優(yōu)點(diǎn)： 稀土原子具有的熒光發(fā)射峰譜范圍窄、激發(fā)光波長(zhǎng)范圍寬的特點(diǎn)，有利于增強(qiáng)熒光的特異性，提高分辨率；激發(fā)光和發(fā)射光之間存在較大的STOKES位移(激發(fā)光與發(fā)光之間的能量差 )，有利于排除非特異性熒光的干擾、降低本底熒光強(qiáng)度；稀土

6、離子螯合物產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度高、壽命長(zhǎng)，有利于消除環(huán)境中其它熒光物質(zhì)的影響，并可對(duì)樣品進(jìn)行多次檢測(cè)。 稀土原子具有的熒光發(fā)射峰譜范圍窄、激發(fā)光波長(zhǎng)范圍寬的特 時(shí)間分辨熒光免疫分析技術(shù)具有標(biāo)記物制備簡(jiǎn)便、有效期長(zhǎng)、不污染環(huán)境、操作流程短、標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍寬、有效期長(zhǎng)、應(yīng)用范圍十分廣泛等優(yōu)點(diǎn)。雖然問(wèn)世僅十余年，但在方法學(xué)研究和應(yīng)用方面均發(fā)展迅速。國(guó)外( 如：WALLAC公司)已有商品化試劑盒40余種，熒光測(cè)試儀研制已進(jìn)入第三代，分析技術(shù)也已實(shí)現(xiàn)高度自動(dòng)化。 時(shí)間分辨熒光免疫分析技術(shù)具有標(biāo)記物制備簡(jiǎn)便、有效期8.5 免疫分析發(fā)展趨勢(shì) 在免疫分析的諸方法中，放射免疫分析是第一個(gè)定量方法，而且至今也還有一些

7、使用。放免分析準(zhǔn)確而靈敏，但由于放射性風(fēng)險(xiǎn)和需要特殊的儀器。因此，研究工作者很早就開始尋找可以取代它的新方法。酶聯(lián)免疫分析是最先提出的一種，并在進(jìn)入八十年代后首次占據(jù)主導(dǎo)地位其方法覆蓋了一半以上的文獻(xiàn)。熒光免疫分析在建立時(shí)間分辨熒光免疫分析后有了突躍性發(fā)展，占目前工作的1015，成為具有發(fā)展前途的非放射免疫分析方法之一。非同位素標(biāo)記分析中另一個(gè)值得重視的方向是發(fā)光免疫分析法，由于方法的高靈敏度和測(cè)定的簡(jiǎn)單在免疫分析中一直占有一定的位置，每年約占5的工作。8.5 免疫分析發(fā)展趨勢(shì) 在免疫分析的諸方法中，放 從發(fā)展的趨勢(shì)來(lái)看，在今后比較長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)，酶免疫分析法將仍占主導(dǎo)地位，特別是在應(yīng)用方面更

8、將是如此；而在研究方面，以下諸方面的工作將有待于進(jìn)一步拓展和深入。 從發(fā)展的趨勢(shì)來(lái)看，在今后比較長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)，酶免疫分析8.5.1 基因工程抗體 從被免疫的動(dòng)物血清中獲得的抗體是多克隆抗體，雖然用于免疫分析的效果是良好的，但缺點(diǎn)是抗體不均一，來(lái)源是不連續(xù)的而且有較大的批間差別。 自七十年代發(fā)展了單克隆抗體技術(shù)，到現(xiàn)在已經(jīng)很成熟。單克隆抗體克服了多克隆抗體的上述缺點(diǎn)并且在一些方面進(jìn)一步提高了抗體的性能。近年來(lái)、一類特殊的單克隆抗體抗獨(dú)特型抗體開始在應(yīng)用中受到廣泛的關(guān)注。8.5.1 基因工程抗體 從被免疫的動(dòng)物血清中獲得的抗獨(dú)特型抗體(Antiidiotypic antibody) 免疫系統(tǒng)的抗

9、獨(dú)特型反應(yīng)可以導(dǎo)致產(chǎn)生一類特殊的抗體抗獨(dú)特型抗體。通過(guò)單克隆抗體篩選可得到、和等型抗體?？躬?dú)特型抗體的特點(diǎn)是其結(jié)合位置是獨(dú)特型抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)，即抗獨(dú)特型抗體的結(jié)合反應(yīng)性質(zhì)類似抗原。其中型反應(yīng)性與抗原完全相向，可與抗原對(duì)獨(dú)特型抗體進(jìn)行等結(jié)合位點(diǎn)的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，因而在目前分析中應(yīng)用較多。例如，利用雌二醇受體的抗體的結(jié)合位點(diǎn)可模擬雌二醇的結(jié)構(gòu)，兩者相互競(jìng)爭(zhēng)，可用于測(cè)定雌二醇。抗獨(dú)特型抗體(Antiidiotypic antibody雙特異性抗體(Bispecific antibody) 因?yàn)榭贵w是由四條肽鏈組成(HL2)型結(jié)構(gòu)，所以通過(guò)兩個(gè)不同單克隆抗體細(xì)胞系的二次融合雜交和抗體篩選便可得到具有兩個(gè)

10、不同的抗原結(jié)合位點(diǎn)的抗體(L1H1-L2H2型)。這就是雙特異性抗體。 雙特異性抗體的一個(gè)有趣的特點(diǎn)是抗體的兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)具有一定的協(xié)同作用，除了研究意義外，雙特異性抗體的這種協(xié)同作用已被用來(lái)設(shè)計(jì)均相免疫分析法。雙特異性抗體(Bispecific antibody)雙功能抗體(Bi-functional antibody) 雙功能抗體主要是通過(guò)基因工程的方法，將酶結(jié)合到抗體重鏈部分的恒定區(qū)，使抗體同時(shí)具備酶的功能。其特點(diǎn)在于抗體酶標(biāo)記的效率達(dá)到100。雙功能抗體(Bi-functional antibody)8.5.2 生物素-親和素體系的多重標(biāo)記 提高分析靈敏度的一個(gè)有效方法就是增加抗體(或抗

11、原)的標(biāo)記率。小分子探針不存在空阻效應(yīng)，因而多重標(biāo)記法可以獲得成百上千的標(biāo)記率，尤其是鑭系螯合物探針，由于沒有有機(jī)熒光分子的多重標(biāo)記時(shí)熒光淬火現(xiàn)象，加上多重標(biāo)記熒光增強(qiáng)效應(yīng)，可以獲得到100010000倍的熒光增強(qiáng)。8.5.2 生物素-親和素體系的多重標(biāo)記 提高分析靈敏度 為了避免標(biāo)記對(duì)抗體結(jié)合活性的影響同時(shí)也可以進(jìn)一步提高探針的偶聯(lián)數(shù)量，需要采取多重標(biāo)記的方法。在諸多方法中，以應(yīng)用生物素-親和素反應(yīng)對(duì)的方法備受崇。 為了避免標(biāo)記對(duì)抗體結(jié)合活性的影響同時(shí)也可以進(jìn)一步提高生物素親和素標(biāo)記系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)在于：1.試劑來(lái)源廣泛和較易提取，2.生物素與親和素結(jié)合速度較快并且結(jié)合物的穩(wěn)定性高；3.生物素分子

12、易于活化，然后再與蛋白質(zhì)分子相偶聯(lián)，生物4.素標(biāo)記可以達(dá)到較高的偶聯(lián)率而不影響抗體的生物活性；5.生物素親和素標(biāo)記體系有靈活多變的運(yùn)用方式，以適應(yīng)不同的分析設(shè)計(jì)；6.標(biāo)記體系采用分別標(biāo)記的方法(生物素標(biāo)記抗體，探針標(biāo)記親和素)，經(jīng)過(guò)探針標(biāo)記的親和素使之成為通用試劑，非常適合于試劑的商品化。生物素親和素標(biāo)記系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)在于：8.5.3 自動(dòng)化免疫分析法早期免疫分析通過(guò)觀察沉淀物形成，凝集及溶血現(xiàn)象發(fā)生來(lái)分析，如免疫擴(kuò)散、免疫電泳、血凝試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合等上世紀(jì)50年代末60年代初，利用AG-AB復(fù)合物形成使?jié)岫雀淖?，再用比濁?jì)來(lái)比濁，但因其敏感性差未被接受70年代初，開始有自動(dòng)檢測(cè)系統(tǒng)，但因其用的是激

13、光為光源，固定波長(zhǎng)，靈敏度較低，而且時(shí)間一般要23小時(shí)8.5.3 自動(dòng)化免疫分析法早期免疫分析通過(guò)觀察沉淀物形成，70年代未，速率比濁計(jì)的出現(xiàn)，使抗原抗體結(jié)合的反應(yīng)在幾十秒內(nèi)出結(jié)果，可以說(shuō)是免疫化學(xué)測(cè)定的革命的發(fā)展隨著標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展，免疫化學(xué)可以納入臨床化學(xué)檢驗(yàn)范疇現(xiàn)在，自動(dòng)化免疫分析系統(tǒng)發(fā)展迅速自動(dòng)化免疫分析的基礎(chǔ)是抗原抗體的結(jié)合，具有高特異性；手段多是利用標(biāo)記技術(shù)而將檢測(cè)信號(hào)放大，具有高靈敏度。70年代未，速率比濁計(jì)的出現(xiàn)，使抗原抗體結(jié)合的反應(yīng)在幾十秒內(nèi)自動(dòng)化免疫儀器種類（應(yīng)用技術(shù)）免疫比濁分析技術(shù)化學(xué)發(fā)光、電發(fā)光分析技術(shù)熒光免疫分析技術(shù)放射免疫分析技術(shù)酶免疫分析技術(shù)流式細(xì)胞術(shù)自動(dòng)化免疫儀

14、器種類（應(yīng)用技術(shù)）免疫比濁分析技術(shù)免疫比濁利用抗原抗體結(jié)合后溶液的濁度變化而檢測(cè)的一種方法此法準(zhǔn)確快速，已成為免疫診斷技術(shù)中重要的檢測(cè)手段比濁法與比色法免疫比濁利用抗原抗體結(jié)合后溶液的濁度變化而檢測(cè)的一種方法散射免疫比濁分析法 基本原理：抗原抗體復(fù)合物對(duì)一定波長(zhǎng)的光產(chǎn)生折射、偏轉(zhuǎn)，偏轉(zhuǎn)角度及散射光強(qiáng)度與復(fù)合物粒子的大小和量有關(guān)散射免疫比濁分析法 基本原理：抗原抗體復(fù)合物對(duì)一定波長(zhǎng)的光產(chǎn)免疫透射比濁基本原理：檢測(cè)信號(hào)是通過(guò)溶液的光，測(cè)量角度與正前方夾角為0，保持抗體過(guò)量，形成可溶性AG-AB復(fù)合物，使介質(zhì)濁度發(fā)生改變。實(shí)驗(yàn)要求： 選擇親和力高的抗體，抗原抗體復(fù)合物要大、數(shù)量要多，反應(yīng)時(shí)間充分。免

15、疫透射比濁基本原理：檢測(cè)信號(hào)是通過(guò)溶液的光，測(cè)量角度與正前膠乳濁度測(cè)定法基本原理是：將抗體吸附在大小適中、均勻一致的膠乳顆粒上，當(dāng)遇到相應(yīng)抗原時(shí)，則使膠乳顆粒發(fā)生凝集。單個(gè)膠乳顆粒在入射光波之內(nèi)不阻礙光線透過(guò)，兩個(gè)或兩個(gè)以上膠乳顆粒凝聚時(shí)則使透過(guò)光減少，這種減少的程度與膠乳顆粒凝聚的程度呈正比，當(dāng)然也與待測(cè)抗原量呈正比（圖） 膠乳濁度測(cè)定法基本原理是：將抗體吸附在大小適中、均勻一致的膠光波膠乳濁度測(cè)定法原理dd 2d光波膠乳濁度測(cè)定法原理dd 2d影響免疫比濁的因素 抗原抗體比例抗體純度和效價(jià)增聚劑（PEG）影響免疫比濁的因素 抗原抗體比例自動(dòng)免疫濁度分析儀的要求校準(zhǔn)程序，使儀器處于正常的工作

16、狀態(tài)定標(biāo)程序，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性自動(dòng)控制，保證實(shí)施實(shí)驗(yàn)條件中的抗原抗體反應(yīng)體系要求自動(dòng)系統(tǒng)，障礙的檢測(cè)和預(yù)警。自動(dòng)免疫濁度分析儀的要求校準(zhǔn)程序，使儀器處于正常的工作狀態(tài)化學(xué)發(fā)光自動(dòng)免疫分析化學(xué)發(fā)光是指在化學(xué)反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生光的發(fā)射現(xiàn)象基本原理：標(biāo)記在抗原或抗體上的發(fā)光物質(zhì)在堿性介質(zhì)中氧化時(shí)產(chǎn)生激發(fā)態(tài)的中間體，中間體回基態(tài)時(shí)產(chǎn)生輻射，多余的能量為發(fā)射光子，產(chǎn)生發(fā)光現(xiàn)象，再對(duì)光信號(hào)進(jìn)行接收轉(zhuǎn)化，可得檢測(cè)物濃度發(fā)光物質(zhì)須具備：氧化致發(fā)光、光量子產(chǎn)額高、理化性能好化學(xué)發(fā)光自動(dòng)免疫分析化學(xué)發(fā)光是指在化學(xué)反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生光的發(fā)射化學(xué)發(fā)光自動(dòng)免疫分析類型 化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA） 是一種用發(fā)光劑直接標(biāo)記抗

17、體的一類免疫分析法，用來(lái)標(biāo)記的發(fā)光物必須能參與發(fā)光反應(yīng)、標(biāo)記和偶聯(lián)后能穩(wěn)定、理化性質(zhì)和免疫特性不改變，多用吖啶酯類和苯酚類化合物。 化學(xué)發(fā)光自動(dòng)免疫分析類型 化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）化學(xué)發(fā)光酶免疫分析（CLEIA） 以催化反應(yīng)的酶為標(biāo)記物，抗原抗體結(jié)合后，其中的酶可對(duì)發(fā)光體系產(chǎn)生催化作用，產(chǎn)生發(fā)光效應(yīng)。發(fā)光信號(hào)與抗原抗體的量成正比。多用的發(fā)光體系是HRP-魯米諾。 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析（CLEIA）微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析（ECIA） 也是一種酶免疫分析，用磁珠作為固相載體，增加反應(yīng)體積和分離效率。標(biāo)記的酶多為ALP。微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析（ECIA）電化學(xué)發(fā)光免疫分析（ECLIA） 一種在電

18、極表面由電化學(xué)引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，實(shí)際上包括了電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光二個(gè)過(guò)程,其中應(yīng)用了“親和素-生物素”放大系統(tǒng)，使檢測(cè)的靈敏度大大提高以雙抗體夾心法為例之圖示（圖）電化學(xué)發(fā)光免疫分析（ECLIA）ECLIA體系結(jié)構(gòu)圖ECLIA體系結(jié)構(gòu)圖ECLIA檢測(cè)流程圖一（雙抗體夾心的形成）ECLIA檢測(cè)流程圖一（雙抗體夾心的形成）ECLIA檢測(cè)流程圖二 （生物素與親和素結(jié)合）ECLIA檢測(cè)流程圖二 （生物素與親和素結(jié)合）ECLIA檢測(cè)流程圖三 （磁珠吸引吸附于電極表面）ECLIA檢測(cè)流程圖三 （ECLIA檢測(cè)流程圖四 （電極充電啟動(dòng)電化學(xué)反應(yīng)）ECLIA檢測(cè)流程圖四 （電極充電啟動(dòng)電ECLIA檢測(cè)流程

19、圖五 （撤消磁場(chǎng)沖洗磁珠）ECLIA檢測(cè)流程圖五 （撤消磁場(chǎng)沖洗磁珠）化學(xué)發(fā)光免疫分析是免疫技術(shù)、發(fā)光技術(shù)和計(jì)算機(jī)系統(tǒng)的結(jié)合，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高（pg/ml)、精密度好、準(zhǔn)確度好等特點(diǎn)，越來(lái)越多的人體微量指標(biāo)應(yīng)用這種方法來(lái)檢測(cè)，已漸漸代替了RIA。化學(xué)發(fā)光免疫分析是免疫技術(shù)、發(fā)光技術(shù)和計(jì)算機(jī)系統(tǒng)的結(jié)合，具有流式細(xì)胞儀流式細(xì)胞儀（FCM）是以激光為光源，檢測(cè)生物學(xué)顆粒理化性質(zhì)的儀器生物學(xué)顆粒包括免疫復(fù)合物、DNA、RNA、蛋白質(zhì)、病毒顆粒、脂質(zhì)體、細(xì)胞器、細(xì)胞、染色體、真核細(xì)胞等理化性質(zhì)則為細(xì)胞大小、形狀、胞漿顆粒、DNA含量、酶活性等流式細(xì)胞儀流式細(xì)胞儀（FCM）是以激光為光源，檢測(cè)生物學(xué)顆粒FCM綜合了激光技術(shù)、電子技術(shù)、流體力學(xué)、細(xì)胞化學(xué)及計(jì)算機(jī)技術(shù)，被稱為實(shí)驗(yàn)室“CT”FCM現(xiàn)正廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、血液學(xué)、病理學(xué)、遺傳學(xué)、臨床檢驗(yàn)學(xué)等FCM綜合了激光技術(shù)、電子技術(shù)、流體力學(xué)、細(xì)胞化學(xué)及計(jì)算機(jī)技流式細(xì)胞儀基本原理基本原理：?jiǎn)蝹€(gè)經(jīng)熒光染料染色的細(xì)胞經(jīng)過(guò)激光激發(fā)后，發(fā)射的熒光在不同的角度進(jìn)行測(cè)量，并對(duì)其信號(hào)進(jìn)行綜合分析（圖）細(xì)胞分選原理：通過(guò)測(cè)量區(qū)的細(xì)胞若其參數(shù)符合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的條件，在經(jīng)過(guò)偏轉(zhuǎn)板時(shí)被充上相應(yīng)的電荷并被偏轉(zhuǎn)收集（圖）流式細(xì)胞儀基本原理基本原理：?jiǎn)蝹€(gè)經(jīng)熒光染料染色的細(xì)胞經(jīng)過(guò)激光7免疫分