分子病理學(xué)醫(yī)學(xué)知識講座課件

1、分子病理學(xué)醫(yī)學(xué)知識講座分子病理學(xué)醫(yī)學(xué)知識講座肝臟疾病單基因遺傳性肝?。?1-抗胰蛋白酶缺乏癥：1-antitrypsin(1-AT) deficiency； 遺傳性高膽紅素血癥: Gilbert綜合征，I型和型Crigler-Najjar(CN)綜合征； 肝豆?fàn)詈俗冃圆。篧ilson diease； 遺傳性果糖不耐受癥血色??； 間歇性急性卟啉病肝糖原累積?。?遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥； 半乳糖血癥； 肝臟疾病單基因遺傳性肝病：多因素復(fù)雜肝病病毒性肝炎： HAV、HBV、HCV、HDV、HEV； 多因素復(fù)雜肝病病毒性肝炎： 自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis,AIH）是與

2、自身免疫反應(yīng)密切相關(guān)的一種原因不明的肝實(shí)質(zhì)炎癥性病變。 女性發(fā)病占優(yōu)勢血漿總球蛋白，球蛋白和IgG升高血清自身抗體陽性常伴有其他自身免疫性疾?。ㄓ绕涫羌谞钕偌膊。└位顧z可發(fā)現(xiàn)在匯管區(qū)存在以淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤為主的 中，重度界面性肝炎，無明顯膽管損傷6. 免疫抑制劑治療有效 女性發(fā)病占優(yōu)勢發(fā)病機(jī)制自身免疫性肝炎發(fā)病的分子機(jī)制 目前，AIH的具體發(fā)病機(jī)制尚未明確，但作為一種自身免疫性疾病，其發(fā)病機(jī)制與自身抗原的產(chǎn)生和淋巴細(xì)胞的異常突變，引起機(jī)體對自身組織失去免疫耐受而產(chǎn)生自身抗體和自身致敏淋巴細(xì)胞，從而攻擊自身抗原細(xì)胞和組織，進(jìn)而造成病理性改變和功能障礙有關(guān)。 發(fā)病機(jī)制自身免疫性肝炎發(fā)病的分子機(jī)

3、制 目前，AIH的具1型：又稱為經(jīng)典型或狼瘡樣型，該型最常見。特征為ANA和（或）SMA陽性，對皮質(zhì)類固醇治療有效。2型：不常見，其特點(diǎn)為血中存在LKM-1抗體，而ANA和SMA通常為陰性。3型：稀少，特征是血中抗SLA/LP抗體陽性，但缺乏ANA，抗LKM-1和甲狀腺抗體。特殊類型：包括HCV感染與AIH共存；肝移植后新出現(xiàn)的AIH以及AIH作肝移植后復(fù)發(fā)。免疫學(xué)分類1型：又稱為經(jīng)典型或狼瘡樣型，該型最常見。特征為ANA和（或?qū)嶒?yàn)室常規(guī)檢查一般檢查：外周血中常見白細(xì)胞和血小板減少肝功能檢查：酶類的檢測:ALT持續(xù)反復(fù)增高,為正常的3-5倍以上，且ALTAST，GGT、ADA 亦有不同程度的增

4、高；蛋白類檢測:白蛋白正常，球蛋白增高（球蛋白），以IgG增高最為明顯，其次為IgM、IgA；血清膽紅素明顯增高。實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢查一般檢查：外周血中常見白細(xì)胞和血小板減少免疫學(xué)檢查：自身抗體檢測患者血清中一些特征性的自身抗體對自身免疫性肝炎（AIH）的鑒別診斷是極為重要的。其中以ANA、SMA、LKM-1最為常用，常用的測定方法有間接免疫熒光法（IFT）、免疫印跡法和放射免疫測定法（RIN）。免疫學(xué)檢查：自身抗體檢測患者血清中一些特征性的自身抗體對自身采用Hep2細(xì)胞為基質(zhì)的間接免疫熒光試驗(yàn)分析，AIH患者為陽性，其熒光模式多為均質(zhì)型，成人患者滴度一般1:80而小兒患者的滴度只要1:20即可認(rèn)作

5、陽性。尚未鑒定出AIH特異性的ANA靶抗原。同時(shí)，該指標(biāo)陽性有時(shí)也見于病毒性肝炎、藥物性肝炎、脂肪性肝病等其他肝臟疾病中，特異性較低。1.抗核抗體（ANA）ANA是臨床發(fā)現(xiàn)最早的一種自身抗體，也是該病最常見的自身抗體，陽性率約為75%，出現(xiàn)于1型AIH中。采用Hep2細(xì)胞為基質(zhì)的間接免疫熒光試驗(yàn)分析，AIH患者為陽高滴度（1:1000）為抗F肌動蛋白自身抗體，是診斷型AIH的最重要參考指標(biāo)，陽性率大于90%。低滴度見于抗G肌動蛋白抗體（與酒精性肝硬化有關(guān)）或抗非肌動蛋白抗體（與病毒性肝炎有關(guān)）。此類抗體靈敏度較高，但特異性差，單一自身抗體診斷不能確診，需結(jié)合其他臨床指標(biāo)分析。2.抗平滑肌抗體（

6、SMA）1965年 Johnson首先用免疫熒光法在慢性活動性肝炎患者中發(fā)現(xiàn)該抗體，主要的靶抗原為肌動蛋白，用該法測定若滴度1:40即可判斷為陽性。高滴度（1:1000）為抗F肌動蛋白自身抗體，是診斷型2型AIH的標(biāo)志型抗體 LKM抗體可根據(jù)不同靶抗原分為LKM-1、LKM-2和LKM-3三型，其中抗LKM-1抗體的靶抗原為細(xì)胞色素P450D6。常用檢測方法有以靈長類動物肝腎冰凍切片為基質(zhì)的間接免疫熒光法；免疫印跡法以及酶聯(lián)免疫吸附法。3.抗肝腎微粒體-1（LKM-1）抗體2型AIH的標(biāo)志型抗體 3.抗肝腎微粒體-1（LKM-1）SLA/LP是AIH最特異的診斷標(biāo)志，此抗體僅見于AIH患者。雖

7、然它的陽性率只有10%-30%，但其陽性預(yù)告值幾乎為100%。 3型AIH的標(biāo)志性抗體，具有高度特異性，可在ANA低滴度或是其他自身抗體均陰性血清中檢出。為不典型的AIH患者的診斷提供了有利的證據(jù)4.抗可溶性肝抗原/肝胰抗原（SLA/LP）抗體SLA/LP是AIH最特異的診斷標(biāo)志，此抗體僅見于AIH4.5 .抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體（ANCA）ANCA主要見于1型AIH。常用酒精固定的人中性粒細(xì)胞作為基質(zhì)片，通過間接免疫熒光法測定ANCA，染色型為核周型ANCA(Pe-rinuclear ANCA、pANCA)或非典型ANCA(atypical ANCA、aANCA或xANCA)。其特異性靶抗原尚

8、未完全清楚，可能是肌動蛋白或位于核板層的某些粒細(xì)胞特異性抗原成分，而不同于原發(fā)性系統(tǒng)性血管炎患者中ANCA所常對應(yīng)的特異性靶抗原，如蛋白酶3和髓過氧化物酶等Ll。不典型pANCA在I型AIH患者中陽性率為4096，是I型AIH另一種血清學(xué)標(biāo)志性抗體，尤其在ANA、SMA等自身抗體陰性時(shí)。對I型AIH診斷有很大的診斷價(jià)值。不典型pANCA與I型AIH的疾病活動度(氨基轉(zhuǎn)移酶和r球蛋白水平)相關(guān)，陽性患者的病情常較重。5 .抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體（ANCA）ANCA主要見于1型A 6.抗去唾液酸糖蛋白抗體（ASGPR）抗-ASGPR對AIH具有很高的特異性，陽性率為5088，可與ANA、SMA或LK

9、M-1抗體同時(shí)存在，見于各型AIH患者，主要為I型AlH，在I型AIH中的陽性率大于80。其靶抗原去唾液酸糖蛋白受體(ASGPR)是僅存在于肝細(xì)胞肝竇面細(xì)胞膜上的一類跨膜糖蛋白。ASGPR主要表達(dá)在門靜脈周圍的肝細(xì)胞表面，而門靜脈周圍的碎片狀壞死又是AIH患者嚴(yán)重炎性反應(yīng)的標(biāo)志。因此,抗ASGPR抗體可能與AIH的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制有關(guān)。ASGPR的肝臟特異性與其在肝臟的特殊分布位置以及AIH的組織病理學(xué)改變，即匯管區(qū)周圍大量淋巴細(xì)胞浸潤、破碎狀壞死極為吻合，因此容易成為細(xì)胞免疫和體液免疫的靶抗原。目前認(rèn)為，ASGPR、P450D6等最有可能成為AIH的靶抗原。由于靶抗原的器官特異性，ASGPR抗

10、體在急慢性病毒性肝炎、酒精性肝病、PBC、PSC和非肝病自身免疫性疾病等中的陽性率一般低于15，且抗體水平較低，多呈一過性。通常從人或動物肝組織提取的ASGPR為靶抗原，用ELISA或RIA法進(jìn)行檢測，也可用免疫印記法.除了可作為AIH特異性抗體之外，抗ASGPR抗體最重要的特征及臨床應(yīng)用價(jià)值在于該自身抗體與肝臟炎性反應(yīng)的活動程度密切相關(guān) 6.抗去唾液酸糖蛋白抗體（ASGPR） 7.肝細(xì)胞胞質(zhì)抗原I型抗體(抗LC-1)肝細(xì)胞胞質(zhì)抗原I型抗體(抗LC-1) 抗LC-1被認(rèn)為是型AIH的另一個(gè)標(biāo)志性抗體，屬器官特異性而非種屬特異性自身抗體，識別的靶抗原存在于肝細(xì)胞的細(xì)胞溶質(zhì)中，其成分為亞甲基轉(zhuǎn)移酶

11、環(huán)化脫氫酶，是一種肝臟特異性代謝酶?？筁C-l為型AIH的特異性抗體，在型AIH患者中的陽性率約為30，在型AIH患者的血清中可與抗LKM-1同時(shí)存在，也可作為唯一的自身抗體出現(xiàn)。在臨床上，抗LC-I抗體多見于年齡小于20歲的年輕AIH患者，年齡大于40歲的AIH患者少見。該抗體的滴度與型AIH的疾病活動性具有相關(guān)性，對疾病的早期治療有很大的幫助，為AIH的疾病活動標(biāo)志及預(yù)后指標(biāo)。 7.肝細(xì)胞胞質(zhì)抗原I型抗體(抗LC-1病理學(xué)檢測自身免疫型肝炎典型特征病理形態(tài)與活動性慢性肝炎基本相同。在組織學(xué)上通常同時(shí)有慢性肝炎和肝硬化兩種病變。病理學(xué)檢測自身免疫型肝炎典型特征病理形態(tài)與活動性慢性肝炎基本Ku

12、pffer細(xì)胞中的Hyaline Droplets（透明滴）HE染色結(jié)果觀察到AIH患者的Kupffer細(xì)胞中，存在著Hyaline Droplets，而對照組的結(jié)果中，未發(fā)現(xiàn)有相關(guān)的結(jié)果存在，表明Hyaline Droplets在AIH的發(fā)生中具有潛在的生物學(xué)特異性。病理學(xué)檢測的新發(fā)現(xiàn)Kupffer細(xì)胞中的Hyaline Droplets（透明新的生物標(biāo)記診斷及相關(guān)細(xì)胞炎癥因子檢測在AIH中的價(jià)值如對IL-18和IL-18BP的檢測，有研究報(bào)道IL-18/IL-18BP的失衡與自身免疫性疾病相關(guān)。有報(bào)道顯示AIH患者肝穿樣本與正常對照組相比，細(xì)胞內(nèi)的炎癥因子HMGB1的陽性率要高很多。而HM

13、GB1陽性顆粒主要分布在肝細(xì)胞核和Kuffer細(xì)胞核中。新的生物標(biāo)記診斷及相關(guān)細(xì)胞炎癥因子檢測在AIH中的價(jià)值RPS20、Alba-like、dUTPase有研究者通過對人蛋白碎片(快速標(biāo)記了11個(gè)候選的自身抗原)和從44例AIH，50例健康對照者，180例乙型肝炎、丙型肝炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化的血清樣本中獲取的AIH特異蛋白碎片2個(gè)階段的構(gòu)建，標(biāo)記出了3種新抗原(RPS20、Alba-like、dUTPase)，這3種新抗原在AIH患者中具有高度的特異性與敏感性，其敏感性RPS20達(dá)475，Alba-like達(dá)455dUTPase達(dá)227。該研究證實(shí)

14、，這些新的生物標(biāo)記可以應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行檢測分析，用于臨床診斷或預(yù)測AIH。分子病理學(xué)醫(yī)學(xué)知識講座課件10/2/2022脂肪肝： 酒精性脂肪肝（AFLD）， 非酒精性脂肪肝（NAFLD）；肝硬化（hepatic cirrhosis）；肝癌：原發(fā)性肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC） 10/2/2022脂肪肝：肝病重癥化進(jìn)程肝病重癥化進(jìn)程分子病理學(xué)在肝臟疾病發(fā)病機(jī)制研究中的應(yīng)用分子病理學(xué)在肝臟疾病發(fā)病機(jī)制研究中的應(yīng)用遺傳性高膽紅素血癥(Hyperbilirubinemia)Gilbert綜合征常見也最輕微，I型和型CriglerNajjar(CN)綜合征則相對罕見

15、而嚴(yán)重；病因：由于肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)膽紅素尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(B-UGT)含量下降或缺乏，致非結(jié)合型膽紅素的葡萄糖醛酸化修飾過程障礙，引起非結(jié)合型膽紅素升高；分子機(jī)制：UGTIA1基因是B-UGT的編碼基因，它是肝臟中唯一具有膽紅素葡萄糖醛酸化反應(yīng)活性的相關(guān)酶，此基因具有多態(tài)性，其突變可引起Gilbert綜合征和CN綜合征；PCR-測序分析顯示: UGTIA1 野生型72位為GCA， 患者突變?yōu)镃CA；遺傳性高膽紅素血癥(Hyperbilirubinemia)G肝豆?fàn)詈俗冃?Wilson diease)為常染色體隱性遺傳性疾病；致病基因ATP7B定位于染色體13q14.3，編碼一種1411

16、個(gè)氨基酸組成的銅轉(zhuǎn)運(yùn)P型ATP酶。ATP7B基因突變導(dǎo)致ATP酶功能減弱或消失，引致血清銅藍(lán)蛋白（ceruloplasmin，CP）合成減少以及膽道排銅障礙，蓄積在體內(nèi)的銅離子在肝、腦等臟器處沉積，引起進(jìn)行性加重的肝硬化等疾??；肝豆?fàn)詈俗冃?Wilson diease)為常染色體隱性遺1-抗胰蛋白酶缺乏癥(1-AT deficiency)病因：是因血中抗蛋白酶成份-1-抗胰蛋白酶簡稱缺乏引起的一種先天性代謝病，通過常染色體遺傳。分子病理：最常見的1-AT基因突變型是S型和Z型，都屬于單堿基改變型。S突變型是1-AT基因的外顯子中發(fā)生單個(gè)堿基取代，致使合成的1-AT分子中的264Glu被264V

17、al代替；Z突變型是1-AT外顯子E中發(fā)生單個(gè)堿基取代，其合成的1-AT分子中的 342Glu被342Lys代替。診斷：1-AT缺乏癥患者的純合子和雜合子的肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)，可見過碘酸Schiff試驗(yàn)（periodic acid schiff，PAS）陽性的耐淀粉酶顆粒。1-抗胰蛋白酶缺乏癥(1-AT deficiency)病1-AT 缺陷小鼠模型的PAS染色Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol, (2002)過碘酸Schiff (PAS)試驗(yàn)可見：隨周齡增加，肝細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)特征性的PAS陽性的耐淀粉酶顆粒。1-AT 缺陷小鼠模型的PAS染色Am J Ph

18、ysiolCon A誘導(dǎo)小鼠急性肝衰竭肝臟巨噬細(xì)胞中HMGB1的表達(dá)及轉(zhuǎn)位情況。紅色熒光標(biāo)記F4/80+巨噬細(xì)胞，綠色熒光標(biāo)記HMGB1蛋白。肝臟巨噬細(xì)胞中HMGB1的免疫熒光檢測鼠肝衰竭的肝臟巨噬細(xì)胞中HMGB1蛋白的轉(zhuǎn)位情況。紅色熒光為HMGB1蛋白，DAPI標(biāo)記核。ConA誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞中HMGB1的出核。Immunobiology. 2013 Oct;218(10):1284-92. Con A誘導(dǎo)小鼠急性肝衰竭肝臟巨噬細(xì)胞中HMGB1的表達(dá)及28抑制胞內(nèi)HMGB1對肝臟巨噬細(xì)胞遞呈功能無明顯影響（圖右上）；抑制胞內(nèi)HMGB1對肝臟巨噬細(xì)胞炎癥功能的影響干擾組TNF-及IL-6水平較對照

19、明顯下降（圖右中）；ERK/p38信號通路參與胞內(nèi)HMGB1對巨噬細(xì)胞的前炎癥功能的調(diào)節(jié)（圖右下）。HMGB1對肝臟巨噬細(xì)胞的功能調(diào)節(jié)機(jī)制28抑制胞內(nèi)HMGB1對肝臟巨噬細(xì)胞遞呈功能無明顯影響（圖右肝組織HMGB1的免疫組化HC CHB ALFBMC Gastroenterol. (2011) 15;11:21. 200X200X200X800X800X800XHBV感染相關(guān)的ALF患者，其肝細(xì)胞中HMGB1 由胞核轉(zhuǎn)移至胞漿肝組織HMGB1的免疫組化HC 30外周血肝內(nèi)Th17細(xì)胞相關(guān)促炎因子IL-17與抑炎因子IL-22在慢乙肝患者外周血及肝臟內(nèi)存在失衡，加重肝臟病理損傷。Wang FS,

20、 et al, Hepatology. 2010Wang FS, etal. Plos One, 2010 Xiang XG,et al. Immunology and Cell Biology 2011Th17加重乙型肝炎免疫病理損傷肝臟HAI指數(shù)和肝內(nèi)IL-22, IL-17表達(dá)的線性關(guān)系30外周血肝內(nèi)Th17細(xì)胞相關(guān)促炎因子IL-17與抑炎因子INK細(xì)胞的活化加重肝臟炎癥A.炎癥活動的乙肝患者肝臟匯管區(qū)及肝葉區(qū)的總NK細(xì)胞均明顯增多；B.炎癥活動的乙肝患者炎癥因子的分泌明顯增多。Zhang Z, et al, Hepatology.2011IT免疫抑制乙肝患者；IA免疫激活乙肝患者。NK

21、細(xì)胞的活化加重肝臟炎癥A.炎癥活動的乙肝患者肝臟匯管區(qū)及NKp46-rich NK與肝臟炎癥程度密切相關(guān) A. NKp46+占30% NK細(xì)胞，匯管區(qū)炎性壞死等級3；B. NKp46+占92% NK細(xì)胞， 匯管區(qū)炎性壞死等級8；C. NKp46免疫組化染色，顯示NKp46+ NK主要分布于匯管區(qū)；D. NKp46+ NK比例與肝臟炎性壞死分級及肝門炎癥分級呈正相關(guān)。ABCDTom P, et al. Gut. 2013NKp46-rich NK與肝臟炎癥程度密切相關(guān) A. NK肝纖維化進(jìn)展的關(guān)鍵分子環(huán)節(jié)Chem Biol Interact. 2011; 193(3): 225231. 氧化應(yīng)激

22、損傷、病毒、酒精、毒素等多種因素均會導(dǎo)致肝纖維化的發(fā)生； 肝臟Kupffer細(xì)胞活化，并釋放TGF-、PDGF等細(xì)胞因子，而誘導(dǎo)靜止肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cells, HSC）的活化； 肝星狀細(xì)胞（HSC）的活化，并轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞（myofibroblast）是肝纖維進(jìn)展的中心環(huán)節(jié)； 活化的HSC進(jìn)一步上調(diào)-SMA, COL1A1, TIMPs 及蛋白多糖的表達(dá)，而導(dǎo)致纖維化進(jìn)展。肝纖維化進(jìn)展的關(guān)鍵分子環(huán)節(jié)Chem Biol Interac大鼠二甲基亞硝胺(NDMA) 肝纖維化模型The International Journal of Biochemistry &

23、 Cell Biology 36 (2004) 307319. -SMA免疫組化 正常肝臟NDMA3天NDMA 5天NDMA 7天NDMA 14天NDMA 21天 NDMA注射3天后，出現(xiàn)HSC的激活（a-SMA陽性）； 5天時(shí)，活化的HSC 增多； 7天時(shí)，活化的HSC主要位于壞死灶； 14天后，活化的HSC主要位于慢性病變灶；大鼠二甲基亞硝胺(NDMA) 肝纖維化模型The Inter35BALB/c 小鼠CCl4肝纖維化模型FASEB J. 2006 Mar;20(3):444-54.正常肝臟50X400X正常肝臟CCl4肝纖維化100X400XCCl4肝纖維化TIMP-1免疫組化 正常

24、肝臟中，TIMP-1僅在肝竇處表達(dá)； 肝纖維化模型中，TIMP-1在門管區(qū)和隔區(qū)的表達(dá)明顯增加。35BALB/c 小鼠CCl4肝纖維化模型FASEB J. 36膽汁郁積型肝纖維化模型中COL1A1的表達(dá)J Clin Invest. 2005 Feb;115(2):209-18. Liver fibrosis.(A) Col11 主要由活化的HSC表達(dá)，而非肝細(xì)胞；膽管周圍的肌成纖維細(xì)胞（myofibroblasts）也大量表達(dá)Col11， HSCs增殖活化而啟動了膠原在肝實(shí)質(zhì)中的沉積。40X200X36膽汁郁積型肝纖維化模型中COL1A1的表達(dá)J Clin 37單獨(dú)的G1862T降低HBV復(fù)制

25、，而合并了A1762T/G1764A和G1896A的病毒株復(fù)制能力大大提高；上述突變使HBcAg在細(xì)胞核內(nèi)大量聚集；Jun Inoue,et al.Virology, 2009HBV特定突變株通過介導(dǎo)HBcAg的胞內(nèi)滯留而引發(fā)爆肝FH-B(fulminant hepatitis B patients)和AH-B (acutehepatitis B patients) 的HBcAg免疫組化37單獨(dú)的G1862T降低HBV復(fù)制，而合并了A1762T/CHB患者肝組織的HBx抗體免疫組化Modern Pathology (2004) 17, 1169117980%以上的CHB肝組織樣本中均能檢測到H

26、Bx；HBx在30%以上的肝細(xì)胞中均有分布；200X400XCHB患者肝組織的HBx抗體免疫組化Modern Patho39HBx與HCC分化水平密切相關(guān)Modern Pathology (2004) 17, 11691179200X400X400X400X肝硬化肝硬化肝癌-高分化肝癌-低分化39HBx與HCC分化水平密切相關(guān)Modern Pathol40抗病毒治療后肝組織的HBx免疫組化Modern Pathology (2004) 17, 11691179干擾素或拉米夫定治療后，肝組織中仍可檢測到HBx干擾素治療前干擾素治療后拉米夫定治療前拉米夫定治療后200X200X200X200X40

27、抗病毒治療后肝組織的HBx免疫組化Modern Path41HBx會激活NF-B信號通路 綠色熒光為p65蛋白(NF-B通路的核心分子)； Alexa Fluor 555 phalloidin (紅色)標(biāo)記細(xì)胞骨架； 左圖為轉(zhuǎn)染HBx表達(dá)質(zhì)粒的Huh7細(xì)胞，右圖為轉(zhuǎn)染對照質(zhì)粒的Huh7細(xì)胞； HBx可誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞中p65蛋白的入核，激活NF-B信號通路； NF-B信號通路與肝炎-肝硬化-肝癌進(jìn)程密切相關(guān)。Liu et al. Virology Journal 2013, 10:16841HBx會激活NF-B信號通路 綠色熒光為p65蛋白(N42HBx與HCC的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān) HBx會影響細(xì)胞

28、骨架蛋白(Cytoskeletal proteins)的表達(dá)，或通過影響Rho GTPases的表達(dá)（Rho GTPases是cytoskeleton重塑的主要調(diào)控分子）進(jìn)而影響細(xì)胞運(yùn)動性，促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移； HBx會下調(diào)calcium binding protein S100 family的表達(dá)，進(jìn)而導(dǎo)致多條細(xì)胞信號通路的激活，影響細(xì)胞增殖活化； HBx 會上調(diào)proteasome 亞基水平，進(jìn)而通過ubiquitin-proteasome途徑影響細(xì)胞更新；42HBx與HCC的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān) HBx會影響細(xì)胞骨架蛋HBsAg通過調(diào)控 LEF-1而導(dǎo)致HCCJournal of Experime

29、ntal & Clinical Cancer Research 2009, 28:58肝癌組織癌旁組織正常肝組織淋巴增強(qiáng)結(jié)合因子(LEF-1)是Wnt信號通路末端效應(yīng)蛋白家族的重要成員， Wnt活化條件下 LEF-1 會與-catenin形成二聚體而入核后促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄；LEF-1與HBsAg表達(dá)成正相關(guān)；在癌旁組織中LEF-1則主要存在胞漿中，在癌組織中，LEF-1 主要存在于核內(nèi)； 提示HBsAg通過上調(diào)LEF-1，促進(jìn)細(xì)胞增殖，促進(jìn)HCC。HBsAg通過調(diào)控 LEF-1而導(dǎo)致HCCJournal o44microRNAs參與了慢性肝炎-肝硬化-肝癌進(jìn)程Clinical Biochemist

30、ry, 2013,46: 946952. 44microRNAs參與了慢性肝炎-肝硬化-肝癌進(jìn)程Cli45 microRNA-21會抑制PTEN和Sulf-1的表達(dá)，并通過激活A(yù)KT/ERK信號通路而促進(jìn)HCC的發(fā)生發(fā)展。Bao L, et al. Cancer letters. 2013miR-21促進(jìn)肝癌發(fā)生發(fā)展45 microRNA-21會抑制PTEN和Sulf-1的表miR-122通過調(diào)控AFP表達(dá)而影響肝癌進(jìn)程肝組織的miR122原位雜交：miR122(藍(lán)紫色)在HCC組織中明顯低于正常組織，且與腫瘤分級呈負(fù)相關(guān)(bar=500 m)；AFP的免疫組化：AFP在HCC組織中的表達(dá)明顯

31、高于正常組織，且與腫瘤分級呈正相關(guān)(bar=500 m) ；miR122與AFP表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)；miR122與肝癌惡性分級呈負(fù)相關(guān)；miR-122干擾會增加肝癌細(xì)胞中AFP的表達(dá)；ZBTB20是AFP的轉(zhuǎn)錄抑制劑，miR-122通過調(diào)控其表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而影響AFP轉(zhuǎn)錄表達(dá)。efgmiR-122通過調(diào)控AFP表達(dá)而影響肝癌進(jìn)程肝組織的miR分子病理學(xué)在肝臟疾病診斷中的應(yīng)用分子病理學(xué)在肝臟疾病診斷中的應(yīng)用48HCC發(fā)生發(fā)展相關(guān)的信號通路及關(guān)鍵分子48HCC發(fā)生發(fā)展相關(guān)的信號通路及關(guān)鍵分子-catenin的免疫組化Normal liver HCCInt J Biochem Cell Biol. 20

32、11 Jul;43(7):1021-9. 正常肝組織中，-catenin主要分布在肝細(xì)胞膜上；肝癌組織中，-catenin表達(dá)顯著上調(diào)，并向細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移(箭頭所示)。-catenin的免疫組化Normal liver 50Molecular Cancer 2012, 11:64. 400X400X400X400X400X400X MUC1和c-Met在正常肝組織、纖維化肝組織和HCC組織中的表達(dá)逐漸升高； 正常肝組織中，MUC1主要分布于膽管；纖維化肝組織中，MUC1呈彌散狀分布于胞漿；HCC組織中MUC1染色更深； 正常肝組織中，c-Met基本為陰性；纖維化肝組織中，c-Met分布于胞漿；H

33、CC組織中， c-Met主要表達(dá)在細(xì)胞膜上。50Molecular Cancer 2012, 11:6451血清因子GDF15作為病毒性肝炎及肝癌診斷標(biāo)識發(fā)現(xiàn)并鑒定了人細(xì)胞因子GDF15可作為HCV和HBV感染導(dǎo)致的肝細(xì)胞癌（HCC）的血清標(biāo)志物，可與其他HCC診斷方法聯(lián)合應(yīng)用作為輔助診斷方法。肝癌患者血清中升高的GDF15來源于肝癌細(xì)胞Yang W, et al51血清因子GDF15作為病毒性肝炎及肝癌診斷標(biāo)識發(fā)現(xiàn)并鑒定10/2/2022DDB1是HCV NS3/4A蛋白酶的一個(gè)相互作用蛋白和切割底物，對HCV的復(fù)制起著重要的調(diào)節(jié)作用?？勺鳛楸渭膊“l(fā)展進(jìn)程相關(guān)的生物標(biāo)志物。 Kang X.

34、 Shu. HB. Virology. 2013.DDB1可作為丙肝疾病發(fā)展進(jìn)程相關(guān)的生物標(biāo)志物10/2/2022DDB1是HCV NS3/4A蛋白酶的一個(gè)PNC可作為肝癌轉(zhuǎn)移性評價(jià)的新指標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)HepG2(ATCC)高轉(zhuǎn)移性HepG2 PNC是一種形態(tài)不規(guī)則、電子結(jié)構(gòu)致密的特殊細(xì)胞核亞結(jié)構(gòu)； PNC與細(xì)胞核仁鄰近； RNA及RNA結(jié)合蛋白-PTB是其重要組分； PNC比例與乳腺癌、結(jié)腸癌等多種腫瘤的轉(zhuǎn)移性和預(yù)后評價(jià)密切相關(guān)。PNC可作為肝癌轉(zhuǎn)移性評價(jià)的新指標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)HepG2(ATCC)microRNAs在肝病預(yù)警及診斷中的價(jià)值 指標(biāo)名稱臨床意義miR-487a該分子在孿生重肝患者中表達(dá)下調(diào)miR

35、-7a該分子在重肝患者中表達(dá)增高miR-16該分子在重肝患者中表達(dá)增高miR-122該分子為乙肝重癥化及疾病進(jìn)展提供了預(yù)警信號 miR-1187該分子的表達(dá)隨著肝衰竭的發(fā)展呈現(xiàn)明顯下降趨勢，可作為預(yù)測乙肝病情進(jìn)展、重癥化的標(biāo)志物miR-155該分子的表達(dá)隨著病毒的清除逐漸下降，可作為乙肝重癥化轉(zhuǎn)歸的生物學(xué)標(biāo)志，為乙肝重癥化及治療提供新的預(yù)警信號miR-197該分子的表達(dá)下調(diào)對肝臟炎癥活動具有預(yù)測價(jià)值microRNAs在肝病預(yù)警及診斷中的價(jià)值 指標(biāo)名稱臨床意義Micro array芯片結(jié)果 ：2個(gè)上調(diào)，147個(gè)下調(diào)miRNAs在乙型肝炎重癥化轉(zhuǎn)歸預(yù)警預(yù)測中的應(yīng)用miR-122上調(diào)：Fold ch

36、ange=1.299375，p=0.092873 抽樣誤差Xie. Q. et al.Micro array芯片結(jié)果 ：miRNAs在乙型肝炎重癥miR-122可作為預(yù)測肝衰竭的血清標(biāo)志物不同病毒引起的肝臟疾病血清中miR-122相對表達(dá)量均有所上升，其中乙肝肝衰竭血清miR-122的表達(dá)量最高乙肝肝衰竭患者血清miR-122在MELD評分30之內(nèi)呈上升趨勢，且與MELD評分呈正相關(guān)同一名患者在病情好轉(zhuǎn)時(shí)血清中miR-122的相對表達(dá)量明顯下降MELD30分的患者血清miR-122相對表達(dá)量與MELD評分的相關(guān)性分析MELD不同得分血清miR-122相對表達(dá)量Xie. Q. et al. 血清

37、miR-122的相對表達(dá)量可以反映肝組織的損壞程度miR-122可作為預(yù)測肝衰竭的血清標(biāo)志物不同病毒引起的肝臟microR-210可作為反映乙型肝炎病情嚴(yán)重程度的分子標(biāo)志物乙型肝炎重癥化進(jìn)程血清miR-210表達(dá)水平變化：健康對照及各型乙型肝炎患者各組間miR-210表達(dá)水平均有顯著性意義P0.01)。 各型乙型肝炎患者與健康人血清中miR-210表達(dá)水平（RT-qPCR結(jié)果）Song G, et al. JVH. (2013) microR-210可作為反映乙型肝炎病情嚴(yán)重程度的分子標(biāo)miR-210在肝損傷進(jìn)程中的作用機(jī)制缺氧缺氧誘導(dǎo)因子（HIF)miR-210發(fā)育/分化凋亡X染色體失活DN

38、A結(jié)合膜運(yùn)輸遷移/粘附細(xì)胞循環(huán)線粒體代謝轉(zhuǎn)錄/翻譯炎癥肝損傷 肝損傷進(jìn)程存在炎癥反應(yīng)，炎癥引起組織缺氧，缺氧誘導(dǎo)miR-210表達(dá)。因而miR-210間接反映肝損傷程度。 miR-210的靶基因參與調(diào)節(jié)細(xì)胞循環(huán)、發(fā)育/分化、凋亡、線粒體代謝等多種細(xì)胞過程。miR-210在肝損傷進(jìn)程中的作用機(jī)制缺氧缺氧誘導(dǎo)因子（HImiRNAs可作為預(yù)測HBV感染相關(guān)HCC的血清標(biāo)志物 血清miR-122水平在HCC患者中顯著升高，明顯高于無HCC的乙肝患者和健康對照(p0.05)； 血清miR-21水平在HCC患者中顯著降低，但較之無HCC的乙肝患者，無顯著差異(p0.05)；PLoS One. 2011;6

39、(12):e28486miRNAs可作為預(yù)測HBV感染相關(guān)HCC的血清標(biāo)志物 血清miRNA-122可作為CHC肝纖維化程度的指標(biāo) CHC患者的血清miRNA-122水平與肝纖維化分級呈負(fù)相關(guān)； CHC患者的肝內(nèi)miRNA-122水平與肝纖維化分級呈負(fù)相關(guān)；miRNA-122可作為CHC肝纖維化程度的指標(biāo) CHC患者與乙型肝炎重癥化密切相關(guān)的甲基化新位點(diǎn)谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶M3(GSTM3)：GSTM3是抗氧化應(yīng)激的關(guān)鍵酶之一，氧化應(yīng)激參與重型肝炎的發(fā)病機(jī)制。 慢加急性肝衰竭中，GSTM3基因啟動子甲基化組的病死率明顯高于非甲基化組（55.6% vs 14.3%）Qi L, . Wang K.

40、Tohoku J Exp Med. 2012;228(1) 谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶P1(GSTP1)：氧化應(yīng)激影響GSTP1啟動子甲基化狀態(tài)。 GSTP1啟動子甲基化與慢加急性肝衰竭的病情輕重密切相關(guān)。 慢加急性肝衰竭中，GSTP1甲基化組氧化損傷程度高于非甲基化組與乙型肝炎重癥化密切相關(guān)的甲基化新位點(diǎn)谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶M3過氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR)：其啟動子區(qū)含兩個(gè)CPG島(CPG-1和CPG-2)，在慢乙肝中均可發(fā)生甲基化；其甲基化程度與肝臟炎癥分級密切相關(guān)。 Zhao Q, . Wang K. Journal of Viral Hepatitis. 2013. 細(xì)胞因子信號抑制物

41、1(SOCS1)在慢加急性肝衰竭中發(fā)生甲基化； 慢加急性肝衰竭的SOCS1甲基化比率高于慢性乙肝； 且甲基化組病死率高于非甲基化組。過氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR)：其啟動子區(qū)含兩個(gè)CP10/2/2022AMN(氨萘非特)衍生型化合物的體內(nèi)驗(yàn)證 AMN作為一類Topo抑制劑具有高效且不導(dǎo)致耐藥等優(yōu)勢，但因其毒副作用明顯而終止了臨床實(shí)驗(yàn)。對其進(jìn)行修飾而合成了一系列新型化合物，經(jīng)PNC篩選體系確定了2種在體外具有同樣療效的衍生藥物（MEAN和AN）。 在荷瘤小鼠模型上進(jìn)一步驗(yàn)證其體內(nèi)療效，證實(shí)篩選得到的衍生物在體內(nèi)同樣具有良好的抗腫瘤效果，并且其細(xì)胞毒性低于傳統(tǒng)的化療藥物。10/2/2022AMN(氨萘非特)衍生型化合物的體內(nèi)驗(yàn)證 分子病理學(xué)在肝臟疾病治療中的應(yīng)用分子病理學(xué)在肝臟疾病治療中的應(yīng)用Resveratrol抑制LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的HMGB1轉(zhuǎn)位Resveratrol抑制LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的HMGB1轉(zhuǎn)66IFN-在CHB患者中治療無效機(jī)制Chen J,.Yuan ZH. Hepatology.