一種肝前性門靜脈高壓癥模型的制備

1、一種肝前性門靜脈高壓癥模型的制備【摘要】目的通過門靜脈主干部分結(jié)扎附加3周后脾靜脈縮窄及其屬支結(jié)扎的方法建立犬的動物模型，觀察門靜脈系統(tǒng)變化，為該方法能否建立一種具有脾亢的門靜脈高壓癥大動物模型提供根據(jù)。方法實驗犬25只，隨機分為a組(正常組，n=5)、b組(對照組，n=10)、組(實驗組，n=10)。a組僅予以剖腹探查，b組予以門靜脈主干部分結(jié)扎建立模型，組那么通過門靜脈主干部分結(jié)扎附加3周后脾靜脈縮窄及其屬支結(jié)扎的方法建立模型，建模后術前及術后每周動態(tài)觀察兩組動物血象的變化，b、組在預定時間點(術后第5、第9周)分別隨機選擇5只動物開腹觀測門靜脈自由壓、脾臟大孝門體側(cè)支循環(huán)形成情況，并切取

2、脾臟行組織病理學檢查，此外，術前及術后預定時間點理解骨髓增生情況變化。結(jié)果兩種方法建模后，門靜脈自由壓的增高明顯，血常規(guī)示b組紅細胞和血小板在術后3周明顯低于正常值，4周后開場上升，而組血紅細胞和血小板的下降可以持續(xù)到術后第9周，且脾臟形態(tài)變化及術后脾臟組織病理學改變和骨髓增生情況證實組較b組可以形成良好的脾功能亢進狀態(tài)。結(jié)論門靜脈主干部分結(jié)扎附加3周后脾靜脈縮窄及其屬支結(jié)扎的方法建模后門靜脈系統(tǒng)的變化符合門靜脈高壓癥的表現(xiàn)，尤其是脾亢狀態(tài)適宜，具有良好的科研應用價值?！娟P鍵詞】高血壓，門靜脈;脾功能亢進;模型，動物;犬keyrdshypertensin，prtal;hypersplenis;

3、dels，anial;dgs門靜脈高壓癥的外科治療經(jīng)歷了近百年的探究和研究，其手術方式經(jīng)過不斷的改進和創(chuàng)新，得以廣泛應用于臨床，然而門靜脈高壓癥的外科治療仍是當今外科界極為關注的難題。此外由于脾臟功能日益受到重視，保脾術式已經(jīng)在脾外傷中得以應用，而門靜脈高壓癥外科手術中是否予以切除脾臟成為目前爭論的焦點之一，保脾手術和切脾手術對繼發(fā)性脾亢的緩解以及患者術后血凝狀態(tài)、免疫功能、生存質(zhì)量等各方面影響的利弊關系尚無定論1-3。然而，國內(nèi)外文獻顯示現(xiàn)有的門靜脈高壓癥模型都未能有效地形成脾功能亢進，與人體實際的門靜脈高壓癥表現(xiàn)的模擬度不夠，因此在實驗研究中迫切地需要一種可以形成脾亢的門靜脈高壓癥的大動物

4、模型，為此我們設想通過犬門靜脈主干部分結(jié)扎附加3周后脾靜脈縮窄及其屬支結(jié)扎的方法來觀察門靜脈系統(tǒng)的變化以及脾臟形態(tài)功能的改變，試圖制備一種具有脾功能亢進的門靜脈高壓癥模型。1材料和方法1.1實驗動物及分組安康成年雄性雜種犬25只，體質(zhì)量1015kg，購于溫州醫(yī)學院動物實驗中心。按照隨機數(shù)字表法分為a組(正常組，n=5)、b組(對照組，n=10)、組(實驗組，n=10)。1.2模型制備方法實驗動物術前禁食12h，禁水6h，腹部備皮后以速眠新(長春市軍需大學獸醫(yī)研究所提供)肌肉注射(0.1l/kg)行全身麻醉，取劍突下正中切口約8，逐層進腹，測量脾臟大小以及門靜脈自由壓，此后別離解剖暴露肝門部，游

5、離門靜脈主干約23，測量其直徑后，剪取一約1長輸液皮管，修剪到使其內(nèi)徑為門靜脈直徑的0.4倍，隨后套住門靜脈主干予以絲線部分結(jié)扎4，完成門靜脈主干縮窄達80%85%，觀察5in腸道輕度淤血，無明顯發(fā)黑，再次測量脾臟大小后逐層關腹。組實驗犬3周后再次進腹，測量門靜脈自由壓及脾臟大小，在脾靜脈匯入門靜脈處以一樣的方法縮窄脾靜脈主干約50%，觀察脾臟側(cè)支代償情況，約10in后徹底結(jié)扎脾門處的代償側(cè)支(保存脾胃韌帶處的胃短血管)，完畢后逐層關腹，a組僅予以剖腹探查術。術前及術后3d青霉素肌注(34萬單位/kg，每天2次)，飲水不限，加強護理。實驗動物按照預定時間點分別再次開腹，觀察門靜脈自由壓、脾臟大

6、孝門體側(cè)支循環(huán)形成情況以及骨髓增生情況和脾臟組織病理學改變。b、組在預定時間點(術后第5、第9周)分別隨機選擇5只動物開腹觀測門靜脈自由壓、門體側(cè)支循環(huán)形成情況及脾臟和骨髓檢查等。1.3觀察指標及方法活潑(有核細胞50%以上);明顯活潑(有核細胞10%以上);活潑(有核細胞5%左右);減低(有核細胞1%以下);極度減低(有核細胞0.5%以下)。1.4統(tǒng)計學方法采用方差分析。2結(jié)果2.1門靜脈自由壓的變化b、組實驗犬門靜脈自由壓在術后即刻升高達術前近3倍左右，到第5周仍明顯升高，此后壓力有所下降但維持到術后第9周均高于術前，并且差異均有統(tǒng)計學意義(見表1)，而b組與組之間比擬差異無統(tǒng)計學意義。2

7、.2血常規(guī)b、組外周血紅細胞、血小板建模后開場下降，直到第3周后，b組兩者開場上升，而組可以持續(xù)下降到第9周rb(6.980.14)g/100l，術前為(7.410.25)g/100l;plt(42729.6)109/l，術前為(52410.4)109/l，與術前比擬差異均有統(tǒng)計學意義(p0.01)。各組白細胞術后與術前比擬無明顯下降，術后前幾周反而有所上升，總體變化沒有統(tǒng)計學意義，見圖13。2.3脾臟大小變化如表2所示，組脾臟長軸在建模后明顯增大，并且可以持續(xù)到第9周，其差異均有統(tǒng)計學意義，而b組建模后脾臟長軸亦明顯增大，但沒有持續(xù)到術后第9周，見表2。2.4脾臟組織病理學變化he染色：組建

8、模后5周動物脾竇擴張充血，同時巨噬細胞對紅細胞的吞噬現(xiàn)象多，可見到紅細胞被破壞后，部分有形成含鐵血黃素顆粒。術后9周的脾臟可見到淤血仍然存在，但程度已減輕，此時脾竇及外套叢增生，巢狀脾竇構(gòu)造增加，還可見到明顯的脾小梁增粗、脾竇上皮細胞排列嚴密，并形成了腺樣分支，脾臟呈纖維化改變。上述組織病理學表現(xiàn)符合慢性脾淤血改變。b組建模后5周脾臟亦呈慢性淤血性改變，但到第9周脾臟無明顯纖維化改變。2.5骨髓細胞涂片檢查組實驗犬術后5周、9周骨穿檢查顯示骨髓細胞表現(xiàn)為增生明顯活潑到極度活潑之間(按照人類的評分標準，正常犬骨髓細胞表現(xiàn)為增生活潑)，而b組實驗犬第9周骨髓細胞增生程度明顯不如組。2.6門-體側(cè)支

9、循環(huán)情況術后第46周開場實驗動物腹壁可見到1條或數(shù)條的曲張靜脈，在第5、9周我們觀察到胃底食管，腹膜后靜脈叢以及位于盆腔的痔靜脈叢等門靜脈系統(tǒng)與腔靜脈系統(tǒng)的交通支都有不同程度的曲張，并且個別實驗犬還出現(xiàn)腸壁肥厚，腹膜后水腫。3討論門靜脈主干部分結(jié)扎法6-7是目前制備肝前型門靜脈高壓癥模型的主要方法，詳細操作如下：開腹游離門靜脈主干后，并排放置一鈍頭注射針頭，連同血管和針頭予以結(jié)扎，隨后抽出針頭，完成縮窄。該方法適用于門靜脈較細的動物，最常用的是大鼠。在該模型的根底上已經(jīng)對門靜脈高壓癥進展了大量血流動力學、病理生理學等方面的研究8-10，但不少作者提出現(xiàn)有的門靜脈高壓癥動物模型對繼發(fā)性脾功能亢進

10、的制備并不理想11。隨著近幾年國內(nèi)外對脾臟功能認識的逐漸深化，對門靜脈高壓癥的治療，很多單位都積極采取各種行之有效的保脾術式12-14。為了更好地理解功能亢進的脾臟在門靜脈高壓癥手術中是否予以切除，以及哪種保存脾臟的手術方式更加符合門靜脈高壓癥的治療原那么，制備一個理想的含有脾功能亢進的門靜脈高壓癥動物模型就顯得非常重要，而且該大動物模型由于其解剖構(gòu)造明晰且與人有較好的同源性，也合適門靜脈高壓癥外科治療術式的改進和豐富，尤其是保脾術式的討論和研究。國內(nèi)夏穂生、姜洪池教授等15認為脾亢應具備以下條件：脾臟腫大;外周血細胞計數(shù)有1種、2種或全部減少;骨髓增生活潑。而目前制備門靜脈高壓癥模型的各種方

11、法，之所以不可以形成脾功能亢進，其原因可能包括：其一是門靜脈壓力增高缺乏，脾臟不可以持續(xù)淤血腫大;其二那么是門靜脈壓力足夠，但是腫大的脾臟由于脾門處豐富的側(cè)支形成而無法維持;另外，沒有足夠長的觀察時間也是其重要因素之一。因此，我們根據(jù)泊肅葉方程(r=8l/r4)，參照diguezb等4的大鼠門靜脈三重縮窄結(jié)扎的方法采取皮管套扎的方法獲得盡可能高的門靜脈壓，以利于脾亢的形成。而在預實驗中我們發(fā)現(xiàn)，門靜脈部分結(jié)扎后迅速上升的門靜脈壓力使脾臟明顯淤血腫大，術后3周內(nèi)血細胞下降，但是此后脾臟淤血減輕，脾亢未能維持，我們考慮可能由于脾門處側(cè)支循環(huán)的形成，系高壓抵抗狀態(tài)迅速緩解而致，于是我們結(jié)合程水兵等1

12、6通過脾靜脈縮窄及其屬支制備脾亢模型的方法，采取3周后附加脾靜脈主干縮窄及其屬支結(jié)扎的方法以加強脾臟淤血性腫大。本實驗各項觀察指標的結(jié)果說明，改進的方法同單純門靜脈部分結(jié)扎法均可以形成門靜脈系統(tǒng)的高壓狀態(tài)。兩者術后即刻門靜脈自由壓升高達術前的近3倍，脾臟各徑線也明顯增大，血常規(guī)示前3周紅細胞和血小板均顯著下降，與術前比擬差異有統(tǒng)計學意義(p0.01)。不同之處在于：組實驗犬附加脾靜脈縮窄及其屬支結(jié)扎之后，脾臟的腫大及血細胞的下降可以維持到術后第9周，并且脾臟病理檢查以及骨髓細胞增生情況證實，組實驗犬其脾亢狀態(tài)可以根本維持到術后第9周，兩組門體側(cè)支循環(huán)的形成情況從術后5周和9周的觀察來看并無明顯

13、差異，但是組由于實驗過程中人為地破壞了脾靜脈的屬支及脾門周圍的側(cè)支，因此該改進方法可能并不合適門靜脈高壓癥門體側(cè)支循環(huán)的研究。而b術后的改變可能同手術應激、切口線結(jié)反響以及術后的急性脾臟淤血刺激機體產(chǎn)生慢性炎癥反響等有關。門靜脈高壓癥是指門靜脈系統(tǒng)血運受阻、血流郁滯和壓力增高的一種病理狀態(tài)。臨床上常表現(xiàn)有食管和胃底靜脈曲張、脾臟腫大和脾功能亢進、腹水等病癥17。本實驗的研究說明，門靜脈部分結(jié)扎附加3周后脾靜脈縮窄及其屬支徹底結(jié)扎的方法，其門靜脈系統(tǒng)的變化根本符合門靜脈高壓癥的表現(xiàn)。該方法同現(xiàn)有的各種制備門靜脈高壓癥的方法相比，其優(yōu)點在于可以形成良好的脾功能亢進。而且其操作簡單、易于復制，尤其適

14、用于門靜脈高壓癥血流動力學改變對脾臟功能影響的相關根底研究，同時，也為門靜脈高壓癥外科術式(尤其是保脾術式)的探究和開展提供實驗根據(jù)。【參考文獻】1banus，brz，ppesug，etal.splen-renaldistalandprxialshuntsfrhypersplenisduethepatiirrhsisj.hirurgia(buur)，2022，102(6)：665-668.2gajinp，radevib，nenezid，etal.distalsplenrenalshuntithpartialspleenresetinj.srparhelklek，2022，135(5-6)：29

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