病毒感染的檢查方法與防治原則-課件

1、病毒感染的檢查方法與防治原則 病毒感染的檢查方法與防治原則 目的與要求了解病毒的診斷，抗病毒治療，病毒感染的預(yù)防。目的與要求風(fēng)疹病毒人胚腎細(xì)胞 病毒增殖，CPE()細(xì)胞種類(lèi) 二倍體細(xì)胞（diploid cell）?？刹《救伺吣I細(xì)胞 病毒增殖，CPE()早期抗體檢測(cè)（IgM）應(yīng)用：人群免疫情況的調(diào)查亞單位疫苗（subunit vaccine）應(yīng)用：尚無(wú)敏感細(xì)胞的病毒培養(yǎng)病毒成分（抗原或核酸）臨床診斷少用單層細(xì)胞培養(yǎng)（monolayer cell culture）細(xì)胞種類(lèi) 二倍體細(xì)胞（diploid cell）單層細(xì)胞培養(yǎng)（monolayer cell culture） 第一節(jié) 病毒感染的檢查方法

2、風(fēng)疹病毒人胚腎細(xì)胞 病毒增殖，CPE() 病毒感染的檢查檢測(cè)內(nèi)容查病毒查特異性抗體 病毒顆粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶類(lèi)：如逆轉(zhuǎn)錄酶 電鏡直接觀(guān)察 光鏡檢查包涵體 分離培養(yǎng)病毒感染的檢查檢測(cè)內(nèi)容查病毒查特異性抗體 病毒顆粒 電鏡一、標(biāo)本的采集與送檢原則基本與細(xì)菌相似，但應(yīng)注意： 1.標(biāo)本用“雙抗”或兩性霉素B處理 ，盡快送檢 一、標(biāo)本的采集與送檢原則基本與細(xì)菌相似，但應(yīng)注意：二、病毒的分離與鑒定（一）病毒的分離培養(yǎng) 細(xì)胞培養(yǎng)（cell culture） 雞胚接種（egg inoculation） 動(dòng)物接種（animal inoculation）二、病毒的分離與鑒定（一）病毒的分離培養(yǎng)1.雞胚

3、培養(yǎng) 采用孵化914天的雞胚 絨毛尿囊膜 痘苗病毒、人類(lèi)皰疹病毒 尿囊腔接種部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔 流感病毒的初次分離 卵黃囊 嗜神經(jīng)病毒 1.雞胚培養(yǎng) 病毒感染的檢查方法與防治原則-課件1、雞胚培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)：易管理，不帶微生物，成本較低缺點(diǎn)：操作程序復(fù)雜1、雞胚培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)：易管理，不帶微生物，成本較低病毒感染的檢查方法與防治原則-課件2.動(dòng)物接種 應(yīng)用：尚無(wú)敏感細(xì)胞的病毒培養(yǎng) 動(dòng)物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 優(yōu)點(diǎn)：結(jié)果易觀(guān)察，可建立動(dòng)物模型 缺點(diǎn)：有飼養(yǎng)條件要求，費(fèi)用高，動(dòng)物 體內(nèi)常帶有潛伏病毒2.動(dòng)物接種病毒的分離培養(yǎng) 單層細(xì)胞培養(yǎng)（monolayer cell culture） 分類(lèi)

4、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)（suspended cell culture） 原代細(xì)胞（primary cell）細(xì)胞種類(lèi) 二倍體細(xì)胞（diploid cell） 傳代細(xì)胞系（continuous cell line）病毒的分離培養(yǎng)病毒的細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶單層細(xì)胞病毒的細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶單層細(xì)胞1病毒增殖鑒定 (1)細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathic effect, CPE ） 細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）； 形成多核巨細(xì)胞或稱(chēng)融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）； 在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。 （二）病毒的鑒定 1病毒增殖鑒定（二）病毒的鑒定 細(xì)胞種類(lèi)

5、二倍體細(xì)胞（diploid cell）第二節(jié) 病毒感染的防治原則接種部位 流感病毒、腮腺炎病毒雞胚接種（egg inoculation）Northern blot早期抗體檢測(cè)（IgM）進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查等（plaque formation test）風(fēng)疹病毒人胚腎細(xì)胞 病毒增殖，CPE()CPE(+)風(fēng)疹病毒(-)單層細(xì)胞培養(yǎng)（monolayer cell culture）應(yīng)用：人群免疫情況的調(diào)查電子顯微鏡：設(shè)備、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；采用孵化914天的雞胚病毒成分（抗原或核酸）應(yīng)用：人群免疫情況的調(diào)查細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落細(xì)胞種類(lèi) 二倍

6、體細(xì)胞（diploid cell）細(xì)胞麻疹病毒感染細(xì)胞呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞形成多核巨細(xì)胞或稱(chēng)融合細(xì)胞(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathic effect, CPE)麻疹病毒感染細(xì)胞呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞形成多核巨細(xì)胞或稱(chēng)融形成包涵體(inclusion body)(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathic effect, CPE)形成包涵體(inclusion body)(1)細(xì)胞病變效腮腺炎病毒感染細(xì)胞(2)紅細(xì)胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)紅細(xì)胞表面HA受體腮腺炎病毒感染細(xì)胞(2)紅細(xì)胞吸附（hemadsorptio(3)干擾現(xiàn)象（interference

7、）風(fēng)疹病毒人胚腎細(xì)胞 病毒增殖，CPE()?？刹《救伺吣I細(xì)胞 病毒增殖，CPE()人胚腎細(xì)胞風(fēng)疹病毒？埃可病毒CPE(-)風(fēng)疹病毒(+) ?？刹《?-)CPE(+)風(fēng)疹病毒(-) 埃可病毒(+)(3)干擾現(xiàn)象（interference）風(fēng)疹病毒人胚腎細(xì)2. 病毒數(shù)量與感染性測(cè)定1.蝕斑形成試驗(yàn) （plaque formation test） 2.50組織細(xì)胞感染量 （50 tissue culture infectious dose, TCID50）感染性病毒量2. 病毒數(shù)量與感染性測(cè)定1.蝕斑形成試驗(yàn)感染性病毒量2.病毒形態(tài)學(xué)鑒定電子顯微鏡：設(shè)備、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限光學(xué)顯微鏡：可見(jiàn)大病毒（痘

8、類(lèi)病毒）， 對(duì)一般病毒檢測(cè)意義不大2.病毒形態(tài)學(xué)鑒定電子顯微鏡：設(shè)備、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限3.病毒血清學(xué)鑒定 用已知的抗體，鑒定病毒種、型、亞型 (1)血凝抑制試驗(yàn)-正粘病毒型與亞型鑒定 病毒雞紅細(xì)胞凝集（血凝試驗(yàn)） 病毒特異性抗體雞紅細(xì)胞不凝集 （血凝抑制試驗(yàn)） (2)免疫標(biāo)記法（FIA、EIA、RIA） 多種病毒鑒定3.病毒血清學(xué)鑒定 用已知的抗體，鑒定病毒種、型、亞型(2三、病毒分子生物學(xué)鑒定抗原變異病毒基因的鑒定 核酸擴(kuò)增 核酸雜交 基因芯片 基因測(cè)序三、病毒分子生物學(xué)鑒定抗原變異病毒基因的鑒定四、病毒感染的血清學(xué)診斷應(yīng)用：采取標(biāo)本分離病毒為時(shí)已晚目前尚無(wú)分離此病毒的方法或難以分離的病毒

9、為證實(shí)所分離的病毒的臨床意義進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查等四、病毒感染的血清學(xué)診斷應(yīng)用：1.中和試驗(yàn)（neutralizing test）病毒中和抗體 病毒失去感染性 特點(diǎn)：特異性高，抗體維持時(shí)間長(zhǎng)應(yīng)用：人群免疫情況的調(diào)查 臨床診斷少用1.中和試驗(yàn)（neutralizing test）病毒中和五、病毒感染的快速診斷數(shù)小時(shí)內(nèi)出結(jié)果病毒顆粒病毒成分（抗原或核酸） 早期抗體檢測(cè)（IgM）五、病毒感染的快速診斷數(shù)小時(shí)內(nèi)出結(jié)果病毒的快速診斷光鏡-包涵體電鏡免疫熒光ELISA分子生物學(xué)技術(shù)雜交Southern blotPCRNorthern blot病毒的快速診斷光鏡-包涵體電鏡免疫熒光ELISA分子第二節(jié) 病毒感染的防治原則第二節(jié) 病毒感染的防治原則滅活疫苗（inactivated vaccine）活疫苗（living vaccine）重組載體疫苗（recombinant carrier vaccine