教學(xué)培訓(xùn)-醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實驗-抗原抗體反應(yīng)課件

1、醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實驗醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實驗第一講抗原抗體反應(yīng)antigen-antibody reaction第一講抗原抗體反應(yīng)antigen-antibody re什么是抗原抗體反應(yīng)？ 抗原與相應(yīng)抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)稱為抗原抗體反應(yīng)?？乖贵w反應(yīng)既可在體內(nèi)作為體液免疫應(yīng)答的效應(yīng)機制自然發(fā)生，也可在體外作為免疫學(xué)實驗的結(jié)果出現(xiàn)。在體內(nèi)，可表現(xiàn)為溶菌、殺菌、促進(jìn)吞噬或中和毒素等作用，有時亦可引起免疫病理損傷，在體外，依相應(yīng)抗原物理性狀 (顆粒狀或可溶性)以及反應(yīng)的條件 (電解質(zhì)、補體等)不同，可出現(xiàn)凝集、沉淀、細(xì)胞溶解和補體結(jié)合等反應(yīng)。 什么是抗原抗體反應(yīng)？ 抗原與相應(yīng)抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)稱為抗抗原抗體反應(yīng)的

2、基礎(chǔ) 抗原抗體反應(yīng)的基礎(chǔ) 抗原抗體反應(yīng)的特點1. 特異性 Ab 1Ab2Ab3抗原抗體反應(yīng)的特點1. 特異性 Ab 1抗原抗體反應(yīng)的特點2.比例 性抗體過?？乖^剩抗原抗體比例合適抗原抗體反應(yīng)的特點2.比例 性抗體過?？乖^剩抗原抗體比例通過搭橋作用使紅細(xì)胞凝集靜置3分鐘，觀察凝聚現(xiàn)象，判定實驗結(jié)果抗球蛋白可以和IgG反應(yīng)1、對流免疫電泳試驗中如果抗原、抗體的正極和負(fù)極放反了是否會出現(xiàn)沉淀線？為什么？Karl Landsteiner免疫標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)。血型是指紅細(xì)胞的血型，是根據(jù)紅細(xì)胞膜外表面存在的特異性抗原（鑲嵌于紅細(xì)胞膜上的糖蛋白和糖脂）來確定的，這種抗原或凝集原是由遺傳決定的體外抗原

3、抗體反應(yīng)的影響因素第一講抗原抗體反應(yīng)antigen-antibody reaction不同蛋白質(zhì)分子根據(jù)其氨基酸組成及所在溶液的pH值，攜帶的靜電荷不盡相同，致使它們在電場中的遷移率各異，從而達(dá)到分理的目的。ABO血型系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)者-奧地利科學(xué)家Ag Concentration1：載玻片、打孔器、三角燒瓶、移液管、洗耳球、10%的瓊脂、記號筆在兩區(qū)分別滴加一滴抗A定型試劑和抗B定型試劑，立即用牙簽混勻抗原抗體反應(yīng)既可在體內(nèi)作為體液免疫應(yīng)答的效應(yīng)機制自然發(fā)生，也可在體外作為免疫學(xué)實驗的結(jié)果出現(xiàn)。了解血型鑒定實驗的用途。1901年發(fā)現(xiàn)的人類第一個血型系統(tǒng)-ABO血型檢查臨床意義抗原抗體反應(yīng)的特點 3.

4、可逆性 通過搭橋作用使紅細(xì)胞凝集抗原抗體反應(yīng)的特點 3.可逆性 體外抗原抗體反應(yīng)的影響因素電 解 質(zhì) 溫 度 酸 堿 度 作用時間體外抗原抗體反應(yīng)的影響因素電 解 質(zhì) 溫 度 酸 抗原抗體反應(yīng)類型可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合所產(chǎn)生的沉淀反應(yīng)顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合所發(fā)生的凝集反應(yīng)抗原抗體結(jié)合后激活補體所致的細(xì)胞溶解反應(yīng)細(xì)菌外毒素或病毒與相應(yīng)抗體結(jié)合所致的中和反應(yīng)免疫標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)?？乖贵w反應(yīng)類型可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合所產(chǎn)生的沉淀反應(yīng)凝集反應(yīng)-ABO血型的鑒定凝集反應(yīng)-ABO血型的鑒定體外抗原抗體反應(yīng)的影響因素抗原抗體反應(yīng)既可在體內(nèi)作為體液免疫應(yīng)答的效應(yīng)機制自然發(fā)生，也可在體外作為免疫學(xué)實驗

5、的結(jié)果出現(xiàn)。1901年發(fā)現(xiàn)的人類第一個血型系統(tǒng)-不同蛋白質(zhì)分子根據(jù)其氨基酸組成及所在溶液的pH值，攜帶的靜電荷不盡相同，致使它們在電場中的遷移率各異，從而達(dá)到分理的目的。對流免疫電泳實質(zhì)上是由電泳定向加速的雙向擴散抗原在電泳時從負(fù)極向正極移動抗原抗體反應(yīng)的基礎(chǔ)抗原抗體結(jié)合后激活補體所致的細(xì)胞溶解反應(yīng)血型是指紅細(xì)胞的血型，是根據(jù)紅細(xì)胞膜外表面存在的特異性抗原（鑲嵌于紅細(xì)胞膜上的糖蛋白和糖脂）來確定的，這種抗原或凝集原是由遺傳決定的抗球蛋白法檢測IgG抗體的原理1：載玻片、打孔器、三角燒瓶、移液管、洗耳球、10%的瓊脂、記號筆在形成白色沉淀線。了解血型鑒定實驗的用途?？傠娏?mA/cm x 2.通

6、過搭橋作用使紅細(xì)胞凝集母嬰ABO血型不合引起的新生兒溶血病，主要是依靠血型血清學(xué)檢查來診斷。實 驗 目 的熟悉凝集反應(yīng)的定義及血型鑒定實驗的原理。掌握血型鑒定實驗的操作及結(jié)果的正確觀察與判斷。了解血型鑒定實驗的用途。體外抗原抗體反應(yīng)的影響因素實 驗 目 的熟悉凝集反應(yīng)的定義及凝集反應(yīng)定義：在一定濃度的電解質(zhì)環(huán)境中，顆粒性抗原（紅細(xì)胞、細(xì)菌、 乳膠顆粒等）和相應(yīng)抗體反應(yīng)能夠產(chǎn)生肉眼可見的凝集塊直接凝集間接凝集間接凝集抑制試驗 抗球蛋白試驗?zāi)磻?yīng)定義：在一定濃度的電解質(zhì)環(huán)境中，顆粒性抗原（紅細(xì)胞、直接凝集反應(yīng)直接凝集反應(yīng)間接凝集反應(yīng)間接凝集反應(yīng)間接凝集抑制間接凝集抑制抗球蛋白法檢測IgG抗體的原

7、理抗球蛋白可以和IgG反應(yīng)通過搭橋作用使紅細(xì)胞凝集抗球蛋白法檢測IgG抗體的原理抗球蛋白可以和IgG反應(yīng)通過搭概 述 血型系統(tǒng) Blood group system 概 述 血型系統(tǒng) 1901年發(fā)現(xiàn)的人類第一個血型系統(tǒng)- ABO血型系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)者-奧地利科學(xué)家 Karl LandsteinerABO血型系統(tǒng)的發(fā)現(xiàn) 1901年發(fā)現(xiàn)的人類第一個血型系統(tǒng)-ABO血型系【實驗原理】血型是指紅細(xì)胞的血型，是根據(jù)紅細(xì)胞膜外表面存在的特異性抗原（鑲嵌于紅細(xì)胞膜上的糖蛋白和糖脂）來確定的，這種抗原或凝集原是由遺傳決定的YYY+【實驗原理】血型是指紅細(xì)胞的血型，是根據(jù)紅細(xì)胞膜外表面存在的實驗器材1：載玻片、采血針、

8、牙簽等2：A型和B型標(biāo)準(zhǔn)血清、酒精棉球?qū)嶒炂鞑?：載玻片、采血針、牙簽等2：A型和B型標(biāo)準(zhǔn)血清、酒操作步驟1.取載玻片，酒精消毒正面，在背面標(biāo)記A和B兩區(qū)2.酒精消毒指端皮膚和采血針后，用采血針刺破皮膚，擠出少量血液，涂在玻片A、B兩區(qū)，并立即用無菌干棉球壓迫止血3.在兩區(qū)分別滴加一滴抗A定型試劑和抗B定型試劑，立即用牙簽混勻4.靜置3分鐘，觀察凝聚現(xiàn)象，判定實驗結(jié)果操作步驟1.取載玻片，酒精消毒正面，在背面標(biāo)記A和B兩區(qū)實驗結(jié)果實驗結(jié)果 ABO血型檢查臨床意義 1.輸血：輸血前必須檢查血型，選擇血型相同的供血者，進(jìn)行交叉配血完全相合才能輸血。 2.母嬰ABO血型不合引起的新生兒溶血病，主要是

9、依靠血型血清學(xué)檢查來診斷。 3.器官移植時受者與供者也必須ABO血型相符合才能移植，血型不符極易引起急性排異反應(yīng)、導(dǎo)致移植失敗。 4.ABO血型與疾病之間的聯(lián)系也有一些報道，某些看來造血系統(tǒng)無關(guān)的疾病實際上可能與紅細(xì)胞血型抗原有關(guān)。 ABO血型檢查臨床意義 1.輸血：輸血前必須沉淀反應(yīng)-對流免疫電泳沉淀反應(yīng)-對流免疫電泳沉淀反應(yīng)可溶性抗原在有適量電解質(zhì)存在的條件下與相應(yīng)的抗體結(jié)合，形成肉眼可見的沉淀物，稱為沉淀反應(yīng)類型： 沉淀反應(yīng)環(huán)狀沉淀反應(yīng)絮狀反應(yīng)瓊脂擴散單向擴散雙向擴散電泳火箭電泳對流免疫電泳沉淀反應(yīng)可溶性抗原在有適量電解質(zhì)存在的條件下與相應(yīng)的抗體結(jié)合單向擴散Ag Concentratio

10、nDiameter2AgAgAgAgAb in gel單向擴散Ag ConcentrationDiameter2A單向擴散單向擴散雙向擴散即將抗原和抗體分別加入瓊脂對應(yīng)的孔中，二者會向四周擴散， 在形成白色沉淀線。二者比例合適處雙向擴散即將抗原和抗體分別加入瓊脂對應(yīng)的孔中，二者會向四周擴雙向擴散雙向擴散教學(xué)培訓(xùn)_醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實驗抗原抗體反應(yīng)課件電 泳 定義：即帶電顆粒在電場的作用下向著相反的電極移動，稱為電泳。原理：蛋白質(zhì)分子在溶液中由于其末端氨基、末端羧基及側(cè)鏈的游離基團而成為帶電顆粒，并可在電場內(nèi)移動，其移動方向取決于蛋白質(zhì)分子所帶靜電荷。不同蛋白質(zhì)分子根據(jù)其氨基酸組成及所在溶液的pH值，攜

11、帶的靜電荷不盡相同，致使它們在電場中的遷移率各異，從而達(dá)到分理的目的。電 泳 定義：即帶電顆粒在電場的作用下向著相反的電極移動，火箭免疫電泳火箭免疫電泳火箭免疫電泳火箭免疫電泳對流免疫電泳對流免疫電泳實質(zhì)上是由電泳定向加速的雙向擴散抗原在電泳時從負(fù)極向正極移動抗體由正極向負(fù)極移動對流免疫電泳對流免疫電泳實質(zhì)上是由電泳定向加速的雙向擴散實驗器材1：載玻片、打孔器、三角燒瓶、移液管、洗耳球、10%的瓊脂、記號筆2：酒精燈、火柴、電爐、電泳儀、電泳槽3：微量加樣器、抗原及抗體樣品實驗器材1：載玻片、打孔器、三角燒瓶、移液管、洗耳球、10%操作步驟制板打孔封底加樣電泳34ml瓊脂孔間距3mm約7ul切割火焰23次總電流4mA/cm x 2.5cm(板寬) x N(板數(shù)）30分鐘 抗原 抗體操作步驟制板打孔封底加樣電泳34ml瓊脂孔間距3mm約7u對流免疫電泳實驗結(jié)果對流免疫電泳實驗結(jié)果對流免疫