膠體金免疫層析技術(shù)實驗培訓(xùn)課件

1、膠體金免疫層析技術(shù)實驗培訓(xùn)課件實驗?zāi)康恼莆漳z體金試紙條診斷技術(shù)的原理、使用方法及結(jié)果的判定2膠體金免疫層析技術(shù)實驗實驗?zāi)康恼莆漳z體金試紙條診斷技術(shù)的原理、使用方法及結(jié)果的判定簡 介 膠體金試紙條診斷是采用膠體金免疫層析技術(shù)研制而成，該技術(shù)是90年代初在免疫滲濾技術(shù)的基礎(chǔ)上建立的一種簡易快速的免疫學(xué)檢測技術(shù)，最先用于人絨毛膜促性腺激素（HCG）的測定和乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）等檢測。3膠體金免疫層析技術(shù)實驗簡 介 膠體金試紙條診斷是采用膠體金免疫層析技術(shù)研膠體金（Colloidal gold）是氯金酸（HAuCl4）的水溶膠，利用HAuCl4在還原劑（檸檬酸鈉）的作用下，聚合成特定大小

2、的金顆粒，形成帶負電的疏水膠溶液，由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱膠體金。簡 介4膠體金免疫層析技術(shù)實驗?zāi)z體金（Colloidal gold）是氯金酸（HAuCl4質(zhì)量好的膠體金：溶液呈紅色，膠體金顆粒為球形，大小均一，無棱角。質(zhì)量差的膠體金：溶液呈紫色，大小不一，形狀各異。膠體金的質(zhì)量判定標準簡 介5膠體金免疫層析技術(shù)實驗質(zhì)量好的膠體金：溶液呈紅色，膠體金顆粒為球形，大小均一，無棱膠體金標記的原理：膠體金在堿性條件下帶負電荷，與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團藉靜電吸引而形成牢固結(jié)合。膠體金標記技術(shù)（Immunogold labeling technique）是以膠體金作為示蹤標記物應(yīng)用于抗原

3、抗體反應(yīng)的一種新型免疫標記技術(shù)。簡 介6膠體金免疫層析技術(shù)實驗?zāi)z體金標記的原理：膠體金在堿性條件下帶負電荷，與蛋白質(zhì)分子的膠體金試紙條診斷技術(shù)的原理 以硝酸纖維素膜為載體，利用了微孔膜的毛細作用，滴加在膜條一端的液體慢慢向另一端滲移，通過抗原抗體結(jié)合，并利用膠體金呈現(xiàn)顏色（紅色）反應(yīng)，檢測抗原/抗體。最常用的是雙抗夾心法檢測抗原7膠體金免疫層析技術(shù)實驗?zāi)z體金試紙條診斷技術(shù)的原理 以硝酸纖維素膜為載體，利用膠體金試紙條示意圖檢測線質(zhì)檢線吸收墊樣品墊硝酸纖維素膜連接墊（膠體金墊）背襯（底板）8膠體金免疫層析技術(shù)實驗?zāi)z體金試紙條示意圖檢測線質(zhì)檢線吸收墊樣品墊硝酸纖維素膜連接墊測定時將試紙條下端浸入液

4、體標本中，下端吸水材料即吸取液體向上端移動，流經(jīng)C處時使干片上的免疫金復(fù)合物復(fù)溶，并帶動其向膜條滲移。測 定9膠體金免疫層析技術(shù)實驗測定時將試紙條下端浸入液體標本中，下端吸水材料即吸取液體向上若標本中有待測特異抗原，即可與免疫金復(fù)合物中的抗體結(jié)合，此抗原抗體復(fù)合物流至測試區(qū)即被固相抗體捕獲，在膜上顯出紅色反應(yīng)線條（T）。測 定10膠體金免疫層析技術(shù)實驗若標本中有待測特異抗原，即可與免疫金復(fù)合物中的抗體結(jié)合，此抗過剩的免疫金復(fù)合物繼續(xù)前行，至參照區(qū)與固相抗小鼠IgG結(jié)合（免疫金復(fù)合物中的單克隆抗體為小鼠IgG），而顯出紅色質(zhì)控線條（R）。測 定11膠體金免疫層析技術(shù)實驗過剩的免疫金復(fù)合物繼續(xù)前行

5、，至參照區(qū)與固相抗小鼠IgG結(jié)合（陰性標本則無反應(yīng)線條，而僅顯示質(zhì)控線條。測 定12膠體金免疫層析技術(shù)實驗陰性標本則無反應(yīng)線條，而僅顯示質(zhì)控線條。測 定12膠體金免膠體金快速診斷技術(shù)的特點 簡捷快速：操作簡單，一般只要5-10min 就會出結(jié)果，而其它方法如ELISA需要1-2h，PCR 需要時間更長。結(jié)果易于判定：陰、陽性呈色很明顯，肉眼很容易判斷。特異性好：因為該技術(shù)大多用單克隆抗體標記，這決定了它具有很好的特異性。13膠體金免疫層析技術(shù)實驗?zāi)z體金快速診斷技術(shù)的特點 簡捷快速：操作簡單，一般只要5-1病毒性疾?。簜魅拘苑ㄊ夏也　⑶萘鞲?、新城疫、犬細小病毒、豬瘟等。寄生蟲疾病：血吸蟲病、旋毛蟲病、囊蟲病、恙蟲病。細菌性疾?。夯魜y弧菌、類鼻疽。膠體金快速診斷技術(shù)的應(yīng)用14膠體金免疫層析技術(shù)實驗病毒性疾病：傳染性法氏囊病、禽流感、新城疫、犬細小病毒、豬瘟H5亞型AIV尿囊液陽性結(jié)果陰性對照陰性對照H5IV細胞毒陽性結(jié)果15膠體金免疫層析技術(shù)實驗H5亞型AIV尿囊液陽性結(jié)果陰性