動(dòng)物病原學(xué)實(shí)驗(yàn)(動(dòng)藥專(zhuān)業(yè))課件

1、動(dòng)物病原學(xué)實(shí)驗(yàn)潘子豪進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的注意事項(xiàng)1 穿工作服2 書(shū)本等物品放入抽屜3 樹(shù)立無(wú)菌概念4 不能抽煙、吃零食5 愛(ài)護(hù)公物，注意節(jié)約實(shí)驗(yàn)一顯微鏡的構(gòu)造和使用及細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察一、目的要求：1、了解顯微鏡的簡(jiǎn)單構(gòu)造原理2、學(xué)習(xí)掌握油鏡的使用技術(shù)3、觀察細(xì)菌的基本形態(tài)二、實(shí)驗(yàn)材料：普通光學(xué)顯微鏡 、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、 標(biāo)本玻片:大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌、枯草桿菌、炭疽桿菌 三、普通光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)四、幾種顯微鏡的簡(jiǎn)單原理 1、暗視野2、相差3、熒光4、電子五、油鏡的識(shí)別及使用和原理六、使用完畢顯微鏡及標(biāo)本片的處理七、作業(yè)：1、普通顯微鏡與油鏡使用上有何區(qū)別？2、繪出你所觀察到的

2、細(xì)菌形態(tài)。普通光學(xué)顯微鏡的簡(jiǎn)單原理 分為光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡。 光學(xué)顯微鏡又分為單式和復(fù)式。四、油鏡的識(shí)別及使用原理1 光圈調(diào)最大2 標(biāo)本上滴加香柏油0.5-1滴3 轉(zhuǎn)換油鏡頭浸入油滴中五、使用完畢顯微鏡及標(biāo)本片的處理油鏡用過(guò)后，應(yīng)立即用擦鏡紙將鏡頭和玻片擦拭干凈如油漬已干，須用擦鏡紙蘸少許二甲苯溶液拭去油漬，再用干擦鏡紙拭凈鏡頭作業(yè)1。普通顯微鏡與油鏡使用上有何區(qū)別？2。繪出你所觀察到的細(xì)菌形態(tài)枯草桿菌，革蘭氏染色枯草桿菌，芽胞簡(jiǎn)易染色葡萄球菌，革蘭氏染色大腸桿菌，革蘭氏染色破傷風(fēng)梭菌，芽胞染色實(shí)驗(yàn)二 細(xì)菌抹片的制備方法、染色及顯微鏡觀察 實(shí)驗(yàn)二細(xì)菌抹片的制備方法、染色及顯微鏡觀察 一、

3、目的要求：a) 掌握細(xì)菌抹片的制備方法b) 掌握幾種常用的染色方法和技術(shù)及無(wú)菌操作技術(shù)c) 鞏固顯微鏡的使用，并了解細(xì)菌的染色特性、形態(tài)二、 材料：炭疽桿菌、葡萄球菌、大腸桿菌斜面，大腸桿菌肉湯三、 制片及染色步驟：取干凈玻片抹片干燥固定染色干燥鏡檢四、 常用的幾種染色方法1、 革蘭氏染色法（1） 草酸銨結(jié)晶紫染液1-2分鐘，水洗（2） 革蘭氏碘液媒染1-3分鐘，水洗（3） 95%酒精脫色30秒-1分鐘，水洗（4） 沙黃水溶液復(fù)染10-30秒，水洗（5） 吸干，鏡檢2、 姬姆薩染色法（1） 甲醇固定3分鐘，時(shí)間長(zhǎng)短均可（2） 姬姆薩液足量30分鐘或數(shù)小時(shí)至24小時(shí)，水洗（3） 吸干，鏡檢3、

4、瑞氏染色法抹片干燥無(wú)需固定，直接滴加染液13分鐘，再加等量中性蒸餾水，輕輕混勻，續(xù)染15分鐘水洗，吸干鏡檢4、 美蘭染色法：甲醇固定3分鐘，加上足量染液23分鐘，水洗，吸干鏡檢五、作業(yè)：1、 根據(jù)實(shí)驗(yàn)體會(huì)，你認(rèn)為制備染色標(biāo)本時(shí)應(yīng)該注意哪些事項(xiàng)？2、 在你所做的革蘭氏染色片中，大腸桿菌和炭疽桿菌各染成何色？它們是革蘭陽(yáng)性菌還是革蘭陰性菌？3、 作革蘭氏染色時(shí)，涂片為什么不能過(guò)于濃厚？其染色成敗關(guān)鍵一步是什么？一、目的要求1。掌握細(xì)菌抹片的制備方法2。掌握幾種常用的染色方法和技術(shù)及無(wú)菌操作技術(shù)3。鞏固顯微鏡的使用，了解細(xì)菌的染色特性、形態(tài)二、材料1、大腸桿菌：斜面、肉湯金黃色葡萄球菌：斜面炭疽桿菌

5、：斜面2、革蘭染色液、美蘭染色液3、載玻片、接種棒、酒精燈等三、制片及染色步驟取干凈玻片-抹片-干燥-固定-染色-干燥鏡檢 1、玻片的處理：舊玻片有油，用95%酒精擦洗，然后在酒精燈上灼燒 2、細(xì)菌抹片的制備：抹片 根據(jù)所用材料不同，抹片的方法也有差異。 （1）固體培養(yǎng)物 用經(jīng)酒精燈火焰燒過(guò)的接種環(huán)，蘸取生理鹽水1-2環(huán)于清潔無(wú)油脂的載玻片中央，再勾取細(xì)菌的固體培養(yǎng)物少許混于生理鹽水中，涂抹成直徑為1-1.5cm大小的均勻的抹片。 （2）液體培養(yǎng)物 可直接用滅菌接種環(huán)勾取細(xì)菌培養(yǎng)物1-2環(huán)，涂抹于玻片上即可。但要注意將管底沉淀物搖勻，以免影響涂片效果。 （3）組織涂片 用滅菌的剪刀、鑷子取被檢

6、組織一小塊，以其斷面在玻片上壓印或涂抹成適當(dāng)大小的薄片。如為膿汁、血液、乳汁等可直接涂抹于玻片上。 （4）無(wú)論何種方法切忌涂片太厚，否則不利于染色和觀察。 3、固定 （1）目的:1)、除去抹片上的水分，使菌體蛋白附著在載玻片上，以防染色過(guò)程中被水沖掉。2)、使抹片易于著色，變性的蛋白質(zhì)著色力強(qiáng)。 3)、能殺死抹片中的部分微生物。 （2）方法： 1)、火焰固定 將已干燥的抹片菌膜向上，以鐘擺速度在酒精燈火焰上通過(guò)數(shù)次（以不燙手背為宜）。 2)、化學(xué)固定 加數(shù)滴甲醇于玻片上，固定2-3分鐘，自然四、常用的幾種染色方法1、革蘭氏染色法2、姬姆薩染色法3、瑞氏染色法4、美蘭染色法（一）革蘭氏染色法1。

7、草酸銨結(jié)晶紫染色1-2，水洗2。革蘭氏碘液媒染1-2，水洗3。95%酒精脫色約30-1，水洗4。沙黃水溶液復(fù)染10 -30 ，水洗5。吸干，鏡檢（二）姬姆薩染色法1。甲醇固定3 ，時(shí)間長(zhǎng)短均可2。姬姆薩液足量30 或數(shù)小時(shí)至24h，水洗3。吸干鏡檢（三）瑞氏染色法抹片干燥無(wú)需固定，直接滴加染色液 1-3 ，再加等量中性蒸餾水，輕輕混勻，續(xù)染15 ，水洗，吸干鏡檢（四）美蘭染色法1。固定好抹片加上足量染液2-3 2。吸干鏡檢注意事項(xiàng)1、玻片要潔凈無(wú)油，否則菌液涂不開(kāi)2、涂片不宜太厚，涂布時(shí)宜輕不宜重3、保持無(wú)菌操作，試管開(kāi)塞回塞前，管口消毒4、接種棒使用前后一定要在火焰上徹底灼燒滅菌，挑菌前待接

8、種棒冷卻后才用作業(yè)1。根據(jù)實(shí)驗(yàn)體會(huì)，你認(rèn)為制備染色標(biāo)本時(shí)應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？2。在你所做的革蘭氏染色片中，大腸桿菌和炭疽桿菌各染成何色？它們是革蘭陽(yáng)性還是陰性菌？3。作革蘭氏染色涂片為什么不能過(guò)于濃厚？其染色成敗關(guān)鍵一步是什么？返回實(shí)驗(yàn)三、培養(yǎng)基的制備實(shí)驗(yàn)三、培養(yǎng)基的制備一、 目的要求：1、 掌握基礎(chǔ)培養(yǎng)基制備的原則和要求; 2、 掌握一般培養(yǎng)基的制備過(guò)程及PH的測(cè)定二、實(shí)驗(yàn)材料:（略）三、 操作方法：1、普通肉湯的制備：按量稱(chēng)取加熱溶解調(diào)PH 過(guò)濾分裝滅菌菌檢分別稱(chēng)取牛肉膏5g蛋白胨10gNaCl 5g 磷酸氫二鉀1g蒸餾水1000ml置鋁鍋內(nèi)加熱溶解，取5ml肉湯于試管內(nèi)，用0.1N NaOH

9、校PH至7.4-7.6，并根據(jù)其用量計(jì)算所配培養(yǎng)基需用的1NNaOH量，調(diào)PH，測(cè)好PH后，取500ml肉湯至量筒，余下的倒入大燒杯用濾紙過(guò)濾，分裝10根短試管，余下的裝入鹽水瓶。2、普通瓊脂培養(yǎng)基的制備：稱(chēng)取瓊脂肉湯內(nèi)溶化分裝試管滅菌菌檢將量筒內(nèi)的500ml肉湯倒入鋁鍋，加入10g瓊脂條，加熱溶解，加熱中攪動(dòng)，用紗布棉花過(guò)濾，分裝長(zhǎng)試管10管，余下裝入鹽水瓶。以上培養(yǎng)基分裝完畢，捆扎好，每組做標(biāo)記。3、將分裝好的培養(yǎng)基扎口后高壓滅菌（121，20-30分鐘）。4、菌檢四、作業(yè)：1、 制作培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)注意哪幾點(diǎn)？為什么高壓滅菌前需調(diào)PH稍高些？2、 測(cè)較少量肉湯培養(yǎng)基的酸堿度至PH7.6時(shí)，采用

10、0.1NNaOH溶液，而將全部肉湯培養(yǎng)基調(diào)至PH7.6 時(shí)，卻改用1NNaOH溶液，為什么？3、 普通肉湯與普通瓊脂培養(yǎng)基各有什么用途？一目的要求1、掌握基礎(chǔ)培養(yǎng)基制備的原則和要求2、掌握一般培養(yǎng)基的制備過(guò)程及PH的測(cè)定二培養(yǎng)基的種類(lèi)及用途1、固體培養(yǎng)基：分離培養(yǎng)、純培養(yǎng)、保存菌種2、半固體培養(yǎng)基：細(xì)菌運(yùn)動(dòng)3、液體培養(yǎng)基：觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)狀況、保存菌種三、培養(yǎng)基制作的注意事項(xiàng)1、細(xì)菌生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)2、盛器均需無(wú)菌，不含抑菌物3、必須符合生長(zhǎng)要求PH4、要過(guò)濾，應(yīng)為半透明或透明5、制好后需高壓滅菌四、培養(yǎng)基制備的一般過(guò)程按量稱(chēng)取溶解調(diào)PH過(guò)濾分裝滅菌菌檢五、PH測(cè)定方法1、 以空試管取5ml溶

11、解的肉湯，用1ml滴管吸0.1N NaOH，滴定，邊滴邊測(cè)PH，PH7.6時(shí)，計(jì)量NaOH用量。算出實(shí)際用量。2、改用1N NaOH調(diào)PH7.6?；A(chǔ)培養(yǎng)基制備1、配方：牛肉膏5克蛋白胨10克NaCL5克磷酸氫二鉀1克蒸餾水1000ml2、按量稱(chēng)取溶解調(diào)PH過(guò)濾分裝10根短管滅菌菌檢瓊脂培養(yǎng)基的制備測(cè)好PH后，取500ml肉湯至量筒，余下的倒入大燒杯，把量出的500ml再倒入鍋中，稱(chēng)量10g瓊脂，邊加熱邊攪動(dòng)，看一下水位，補(bǔ)足水分。瓊脂完全溶解后以棉花沙布過(guò)濾，分裝10根長(zhǎng)管。 返回作業(yè)1、制作培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)注意哪幾點(diǎn)？為什么高壓滅菌前需調(diào)PH稍高些？2、測(cè)較少量肉湯培養(yǎng)基的酸堿度至PH7.6時(shí)，

12、采用0.1NNaOH溶液，而將全部肉湯培養(yǎng)基調(diào)至PH7.6時(shí)，卻改用1NNaOH溶液，為什么？3、普通肉湯與普通瓊脂培養(yǎng)基各有什么用途？實(shí)驗(yàn)四細(xì)菌的分離培養(yǎng)及移植 一、目的要求1、 掌握細(xì)菌分離培養(yǎng)的基本要領(lǐng)和常用方法2、 使被檢材料適當(dāng)稀釋?zhuān)郧螳@得獨(dú)立單在菌落二、實(shí)驗(yàn)材料1、培養(yǎng)基：普通瓊脂平板 每人2塊 普通瓊脂斜面、普通肉湯 每人各1支2、菌種：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌斜面、大金混合肉湯、感染大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的小白鼠3、酒精燈、接種棒、剪刀、鑷子、記號(hào)筆三、需氧分離培養(yǎng)方法：1、 平板分離培養(yǎng)法：平板劃線法、傾注培養(yǎng)法（不常用）2、 芽胞需氧分離培養(yǎng)法：801520分鐘殺死不耐

13、熱細(xì)菌3、 化學(xué)藥品分離培養(yǎng)法4、 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分離培養(yǎng)法四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1、 平板劃線法（組織平板）、（金+大）肉湯平板，每人二塊2、 肉湯培養(yǎng)（斜面肉湯），每人一支，（大）斜面肉湯3、 斜面移植（斜面斜面），每人一支，（金）斜面斜面接種完標(biāo)明細(xì)菌、日期、自己的記號(hào)，置37，恒溫箱培養(yǎng)24小時(shí)（平板倒置），第二天抽時(shí)間看培養(yǎng)結(jié)果。五、作業(yè)1、 何謂純培養(yǎng)？分離純培養(yǎng)的目的何在？2、 在挑取固體培養(yǎng)物上的細(xì)菌作平板劃線時(shí)，為什么每次都要將接種環(huán)上剩余的細(xì)菌燒掉？3、 為什么要把培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)？1、 平板劃線法（組織平板）、（金+大）肉湯平板，每人二塊2、 肉湯培養(yǎng)（斜面肉湯），每人一支，（大）斜面肉

14、湯3、 斜面移植（斜面斜面），每人一支，（金）斜面斜面一、目的要求1、掌握細(xì)菌分離培養(yǎng)的基本要領(lǐng)和常用方法2、使被檢材料適當(dāng)稀釋?zhuān)郧螳@得獨(dú)立單在菌落實(shí)驗(yàn)材料菌種：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌斜面 大腸桿菌金黃色葡萄球菌混合肉湯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：感染了大腸桿菌金黃色葡萄球菌的小白鼠培養(yǎng)基：普通瓊脂平板、斜面、二、需氧分離培養(yǎng)方法 1、平板劃線分離培養(yǎng)法：平板劃線法、傾注培養(yǎng)法（不常用） 2、芽胞需氧分離培養(yǎng)法：801520分鐘殺死不耐熱細(xì)菌，再接種至平板 3、化學(xué)藥品分離培養(yǎng)法：抑菌作用 殺菌作用 鑒別作用 4、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分離培養(yǎng)法：本種動(dòng)物或小鼠三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1、平板劃線法（金黃色葡萄球菌+大腸桿菌肉湯平板

15、），每人一塊，小鼠肝臟平板，每人一塊2、肉湯培養(yǎng)（斜面肉湯），每人一支，大腸桿菌斜面肉湯3、斜面移植（斜面斜面），每人一支，金黃色葡萄球菌斜面斜面標(biāo)記接種完畢標(biāo)明細(xì)菌、日期、自己的記號(hào)，試管置37，恒溫箱培養(yǎng)24小時(shí)（平板倒置），第二天下午抽時(shí)間看培養(yǎng)結(jié)果。作業(yè)1、何謂純培養(yǎng)？分離純培養(yǎng)的目的何在？2、在挑取固體培養(yǎng)物上的細(xì)菌作平板劃線時(shí)，為什么每次都要將接種環(huán)上剩余的細(xì)菌燒掉？3、為什么要把培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)？實(shí)驗(yàn)五 細(xì)菌的 生化試驗(yàn)一、 目的要求：1、了解細(xì)菌生化試驗(yàn)在細(xì)菌學(xué)診斷上的重要意義 2、掌握幾種生化試驗(yàn)的方法二、實(shí)驗(yàn)材料大腸桿菌產(chǎn)氣桿菌變形桿菌兔沙門(mén)氏菌微量發(fā)酵管試劑等三實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操

16、作1、 糖或醇發(fā)酵試驗(yàn)2、靛基質(zhì)（吲哚）試驗(yàn)：將細(xì)菌接種于蛋白胨水的試管中置溫箱中，37培養(yǎng)24-48h取出試管加乙醚1ml，振蕩沿壁加45滴對(duì)二甲基氨基苯甲醛，觀察結(jié)果。3、甲基紅（MR）試驗(yàn)：將細(xì)菌接種于葡萄糖蛋白胨水的試管中置溫箱中，37培養(yǎng)24-48h取出試管加甲基紅45滴，搖勻。4、VP試驗(yàn)：將細(xì)菌接種于葡萄糖蛋白胨水的試管中置溫箱中，37培養(yǎng)24-48h取出試管加VP甲液0.6ml搖勻加VP乙液0.2ml，5min 之內(nèi)看結(jié)果。5、 枸椽酸鹽利用實(shí)驗(yàn)6、 硫化氫實(shí)驗(yàn)7、 尿素實(shí)驗(yàn)8、 細(xì)菌運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)四作業(yè)：1、 生化反應(yīng)記錄表2、 解說(shuō)你所做的生化反應(yīng)各種原理3、 以上生化反應(yīng)試驗(yàn)?zāi)?/p>

17、幾個(gè)是分解糖？哪幾種是分解蛋白質(zhì)？糖發(fā)酵試驗(yàn)原理 多糖單糖丙酮酸酸性產(chǎn)物(或產(chǎn)酸產(chǎn)氣)pH 指示劑呈酸性變色(若產(chǎn)氣者有氣泡出現(xiàn))培養(yǎng)基：微量發(fā)酵管試劑：溴甲酚紫(pH7.0紫色- pH5.4黃色）結(jié)果:培養(yǎng)基是否有酸性變色(變黃)應(yīng)用：觀察細(xì)菌對(duì)糖度的 分解情況，常用于腸道桿菌的鑒定糖發(fā)酵試驗(yàn)結(jié)果判斷反應(yīng)現(xiàn)象結(jié)果描述酸性變色、有氣泡分解糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣用“”表示酸性變色、無(wú)氣泡分解糖產(chǎn)酸、不產(chǎn)氣用“+”表示培養(yǎng)基不變色不分解糖用“-”表示糖發(fā)酵試驗(yàn)枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)原理：某些細(xì)菌能利用培養(yǎng)基中的枸櫞酸鹽作為唯一的碳源，也能利用其中的銨鹽 作為唯一碳源，細(xì)菌生長(zhǎng)過(guò)程中分解枸櫞酸鹽產(chǎn)生碳酸鹽和分解銨鹽

18、生成的氨，使培養(yǎng)基變堿，是指示劑呈堿性反應(yīng)。培養(yǎng)基：枸鹽酸鹽微量生化管(草綠色)試劑：溴麝香草酚藍(lán)（pH6.0以下呈黃色，pH7.6以上呈藍(lán)色）結(jié)果：培養(yǎng)基變藍(lán)：+ 培養(yǎng)基不變色：應(yīng)用：腸桿菌科屬間鑒別枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)結(jié)果判定 陰性(-) 陽(yáng)性(+)硫化氫試驗(yàn)原理：細(xì)菌分解蛋白質(zhì)中的含硫氨基酸，生成硫化氫，硫化氫與培養(yǎng)基中的鐵鹽或鉛鹽結(jié)合生成黑色的硫化鉛或硫化亞鐵。培養(yǎng)基：含硫酸亞鐵或醋酸鉛的培養(yǎng)基結(jié)果：培養(yǎng)基 變黑 + 為陽(yáng)性， 不變黑 - 為陰性應(yīng)用：常用于腸道桿菌的鑒定硫化氫試驗(yàn)結(jié)果判定 陰性(-) 陽(yáng)性(+)尿素酶試驗(yàn)原理：產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌，能水解尿素生成氨和CO2，氨使培養(yǎng)基呈堿性變色

19、。培養(yǎng)基：尿素培養(yǎng)基試劑：酚紅指示劑結(jié)果：培養(yǎng)基變紅：+ 培養(yǎng)基不變色：應(yīng)用：腸桿菌科屬間鑒定尿素酶試驗(yàn)結(jié)果判定 陽(yáng)性(+) 陰性(-)靛基質(zhì)試驗(yàn)(吲哚試驗(yàn))原理：細(xì)菌若含有色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基質(zhì)（吲哚），靛基質(zhì)與試劑對(duì)二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基質(zhì)。培養(yǎng)基：蛋白胨水試劑：靛基質(zhì)試劑（含對(duì)二甲基氨基苯甲醛）結(jié)果：加入試劑后，培養(yǎng)基出現(xiàn)紅色液面：+ 培養(yǎng)基液面為黃色： 應(yīng)用：用于腸道桿菌的鑒定靛基質(zhì)試驗(yàn)甲基紅試驗(yàn)原理：細(xì)菌分解糖，產(chǎn)生丙酮酸，進(jìn)一步生成大量混合酸，使培養(yǎng)基pH維持在4.4以下，加入甲基紅后，使甲基紅呈現(xiàn)紅色反應(yīng)。此為甲基紅試驗(yàn)陽(yáng)性。培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨

20、水試劑：甲基紅試劑(pH4.2紅色- pH6.3黃色）結(jié)果：加入試劑后，培養(yǎng)基呈現(xiàn)紅色：+ 培養(yǎng)基不變色： 應(yīng)用：是腸道桿菌常用的生化反應(yīng)試驗(yàn)，主要用于區(qū)別大腸肝菌和產(chǎn)氣腸桿菌甲基紅試驗(yàn)V-P試驗(yàn)原理：細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸脫羧生成乙酰甲基甲醇，在堿性環(huán)境中乙酰甲基甲醇被氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白胨中的精氨酸所含的胍基結(jié)合，生成紅色化合物。培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水結(jié)果：加入試劑后，培養(yǎng)基呈現(xiàn)紅色：+ 培養(yǎng)基不變色： 應(yīng)用：是腸道桿菌常用的生化反應(yīng)試驗(yàn)，主要用于區(qū)別大腸肝菌和產(chǎn)氣腸桿菌運(yùn)動(dòng)性試驗(yàn)原理：有的細(xì)菌有鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，可在半固體培養(yǎng)基中觀察其運(yùn)動(dòng)性培養(yǎng)基：半固體培養(yǎng)基結(jié)果:只在穿

21、刺線上生長(zhǎng)，周?chē)该鳎f(shuō)明無(wú)鞭毛；穿刺線四周模糊，有鞭毛。結(jié)果判定與記錄1靛基質(zhì)試驗(yàn)（吲哚試驗(yàn)）取出試管（蛋白胨水）乙醚1ml，振蕩，靜置，待分層后沿管壁加入對(duì)二甲基氨基苯甲醛2-3滴，靜置，在分界處出現(xiàn)紅色玫瑰吲哚為陽(yáng)性。2葡萄糖蛋白胨水一分為二（1）甲基紅（MR）試驗(yàn)：取出試管加入甲基紅3-5滴，搖勻，培養(yǎng)基變紅色為陽(yáng)性，不變色為陰性（2）VP試驗(yàn)：取出試管VP甲液0.6ml，搖勻再加VP乙液0.2ml，搖勻，15min后看結(jié)果，變紅為陽(yáng)性，不變?yōu)殛幮?，橙色為結(jié)果不可信，需重做。生化反應(yīng)記錄表葡乳麥甘蔗H2S尿素枸椽MRVP吲哚運(yùn)動(dòng)性大腸桿菌產(chǎn)氣桿菌變形桿菌兔沙門(mén)氏菌實(shí)驗(yàn)六 藥敏試驗(yàn)一目的

22、要求學(xué)會(huì)藥敏試驗(yàn)的操作方法及觀察抑菌的范圍二實(shí)驗(yàn)材料1、菌種：金黃色葡萄球菌大腸桿菌炭疽桿菌2、藥敏紙片：青霉素鏈霉素慶大霉素氯霉素呋喃妥因羅紅霉素復(fù)方新諾明 3、95%酒精缸、小鑷子、普通瓊脂平板三每人兩塊平板接種某種細(xì)菌，致密劃線四結(jié)果判斷:根據(jù)藥敏紙片周?chē)袩o(wú)抑菌圈及其大小來(lái)判斷五作業(yè)1、 什么叫細(xì)菌對(duì)抗菌藥物的敏感度，了解它有何實(shí)際意義？2、 就你所做的藥敏試驗(yàn)中，何種抗菌藥對(duì)何種菌種最敏感？操作步驟1、每人取兩塊平板，接種某種細(xì)菌，致密劃線2、用小鑷子取藥敏紙片貼于培養(yǎng)基上3、置37培養(yǎng)24小時(shí)觀察結(jié)果結(jié)果觀察根據(jù)抑菌圈的大小判斷細(xì)菌對(duì)藥物的敏感程度：高敏、中敏、低敏和不敏感實(shí)驗(yàn)七

23、病毒雞胚培養(yǎng)一、目的要求掌握雞胚接種技術(shù)和收獲病毒方法。二、實(shí)驗(yàn)材料9-11日齡白殼雞胚，ND病毒，滅菌注射器，棉球(酒精、碘酊)。三、內(nèi)容及操作1 尿囊腔接種(絨毛尿囊腔)：選9-11日齡雞胚 先觀察雞胚發(fā)育情況：照蛋，取血管豐滿(mǎn)者 劃出氣室位置， 離氣室邊緣下部5mm避開(kāi)大血管作一記號(hào)，定為注射入口。 消毒打孔：記號(hào)處和氣室頂端各打一孔，先用碘酊再用酒精消毒，由頂部由里至外。 吸取病料(ND病毒)，由注射入口小孔刺入3-5mm，注射0.1-0.2ml病毒，拔出針頭，以棉花蘸取石蠟涂布注射孔，石蠟封閉兩孔(先封下面，再封上面) 蛋殼注明日期，學(xué)號(hào)以及病毒名稱(chēng) 置37溫箱中孵育（相對(duì)濕度保持在

24、45%60% ）24h內(nèi)死亡或血管不清者(病料未增殖)棄去，以后每日照蛋兩次，死胚置4冰箱保存，96h不死者將其凍死。血管凍后會(huì)收縮。 冷凍后收獲尿囊液檢查。2 絨毛尿囊膜接種法：9-13日齡雞胚3 羊膜腔接種法：11-12日齡雞胚4 卵黃囊接種法：6-7日齡雞胚尿囊液的收取氣室消毒擊破氣室卵殼并棄去無(wú)菌小鑷撕去殼膜再撕絨毛尿膜(不撕破羊膜）用鑷子輕輕按住胚胎，無(wú)菌吸管吸取尿囊液置無(wú)菌青霉素瓶中待檢測(cè)。寫(xiě)上學(xué)號(hào) 姓名 ND尿囊液實(shí)驗(yàn)八 病毒的血凝試驗(yàn)（HA）及血凝抑制試驗(yàn)(HI)一、目的要求 掌握HA和HI試驗(yàn)的基本操作技術(shù)，了解其實(shí)用價(jià)值。二、實(shí)驗(yàn)材料 1、新城疫病毒 2、1%雞紅細(xì)胞 3、生理鹽水 4、新城疫陽(yáng)性血清 5、96孔“V”型微量反應(yīng)板三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1、HA試驗(yàn)術(shù)式表： 2、HI試驗(yàn)術(shù)式表：四、作業(yè) 1、病毒凝集紅細(xì)胞是不是一種特異的抗原抗體反應(yīng)？為什么？ 2、HI試驗(yàn)是不是特異的抗原抗體反應(yīng)？為什么病毒的紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)（HA）一、 概念病毒的紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象：許多病毒表面有血凝素，能與各種動(dòng)物的紅細(xì)胞表面受體結(jié)合，而出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象，簡(jiǎn)稱(chēng)為病毒的血凝現(xiàn)象。二、應(yīng)用當(dāng)動(dòng)物感染某病毒而發(fā)病時(shí)，可