植物檢疫性病害的檢測及防除研究方法技術完整版課件

1、植物檢疫性病害的檢測及防除研究方法技術完整版課件植物檢疫性病害的檢測及防除研究方法技術完整版課件一 檢疫（QUARANTINE)檢疫Quarantine是拉丁語，原意是40。14世紀，歐洲發(fā)生了一場非常大的鼠疫流行。當時整個歐洲流行鼠疫，死亡了2000萬人，也就是當時歐洲1/4的人口因患鼠疫而死掉了。感染了鼠疫的病人先是淋巴結潰爛，接著是引起肺部的病變，到后期由于缺氧，整個皮膚變黑。到死的時候，整個人是黑的。 黑死病流行非常廣泛，在歐洲的一些港口城市，為防止疫病的侵入，對來往船只采取了限制措施。最早是在1377年的拉古薩共和國（相當于現(xiàn)在的克羅地亞）頒布了對海員的管理規(guī)則，規(guī)定來自疫區(qū)的人員必

2、須在海港以外一定距離的小島上停留30天，然后才能進港。后來意大利的威尼斯港規(guī)定，若有船隊從疫區(qū)來，必須在小島上停留40天。由此 拉丁語“40” “quarantine”一詞就具有英語“檢疫”的意思。一 檢疫（QUARANTINE)檢疫Quarantine是拉人類在社會實踐中逐漸認識到防止外來的動植物有害生物傳播和蔓延也可采取檢疫的措施來達到目的。因此也就有了動植物檢疫。動植物檢疫最初是單純的隔離檢疫，后來人類的認識不斷提高，認識到在人類活動越來越頻繁，地區(qū)間貿(mào)易越來越多的情況下，有害生物已不單單可以通過植物或動物進行傳播，動植物產(chǎn)品、運輸工具和其他物品也可以是有害生物傳播的媒介，單純的隔離檢疫

3、已不能全面防止外來有害生物的傳播和蔓延。動植物檢疫才逐漸演變成現(xiàn)在的模式。并且檢疫的內(nèi)容還在不斷地完善?，F(xiàn)行的動植物檢疫就是通過對進出境貨物、運輸工具、郵寄物、人員攜帶物實施檢疫，防止外來有害生物傳入，保護農(nóng)、林、牧、漁業(yè)生產(chǎn)和人體健康，促進對外經(jīng)濟貿(mào)易的發(fā)展。人類在社會實踐中逐漸認識到防止外來的動植物有害生物傳播和蔓延二、植物檢疫的意義二、植物檢疫的意義外來有害生物的危害外來（有害）生物的傳入對農(nóng)林業(yè)生產(chǎn)和人民身體健康造成危害，還將造成生態(tài)系統(tǒng)多樣性、物種多樣性、生物遺傳資源多樣性的喪失和破壞。外來有害生物的危害外來（有害）生物的傳入對農(nóng)林業(yè)生產(chǎn)和人民身導致外來有害生物大爆發(fā)的因素天敵：自然

4、界存在著一個生物鏈。生物的生存和發(fā)展在當?shù)厥艿礁鞣矫嬉蛩氐闹萍s，處于一個相對平衡的狀態(tài)，有害生物也不例外。但是，一旦有害生物傳入到一個新的地區(qū)，沒有了生物（天敵）的制約，將導致種群的大發(fā)展，大爆發(fā)；環(huán)境：傳入地區(qū)的環(huán)境如果適宜外來有害生物的生存和發(fā)展，將導致外來有害生物的大爆發(fā)和危害；寄主：外來有害生物有了新的食物（寄主）或易感病寄主，導致大爆發(fā)；人為因素：外來有害生物傳入初期由于人們沒有看到它的危害（危害有量變到質變的過程） ，沒有引起人們的足夠重視和防治，沒有防微杜漸，最后導致大爆發(fā)；人們對外來有害生物危害性認識不足，缺乏對其生物學特性的了解，缺乏防治的經(jīng)驗和有效的方法和手段或沒有及時采取

5、防治措施，導致外來有害生物的大爆發(fā)和危害。導致外來有害生物大爆發(fā)的因素天敵：自然界存在著一個生物鏈。生動植物檢疫的目的境外的植物病、蟲、雜草，動物傳染病和寄生蟲病可能隨著進境的貨物（動植物、動植物產(chǎn)品和其他檢疫物）、運輸工具、旅客攜帶物、郵寄物傳入，從而對我國境內(nèi)的動植物、動植物產(chǎn)品，人體健康和環(huán)境造成威脅或潛在的威脅。為防止外來有害生物傳入和危害，必須實施動植物檢疫。動植物檢疫的目的境外的植物病、蟲、雜草，動物傳染病和寄生蟲病三、重大歷史事件及動植物檢疫的起源三、重大歷史事件及馬鈴薯晚疫病 1845年，愛爾蘭由于從美洲傳入馬鈴薯晚疫病，導致病害大流行，使馬鈴薯造受了毀滅性災害。當時，僅800

6、萬人口的愛爾蘭島死于饑荒者達20萬人，外出逃荒者164萬人。引起了全世界的震驚。這就是有名的“愛爾蘭大饑荒”。馬鈴薯晚疫病 葡萄根瘤蚜 1860年，法國從美國引進了葡萄苗，結果也從美國傳入了葡萄的害蟲葡萄根瘤蚜，結果在25年內(nèi)使250萬英畝葡萄園毀滅，經(jīng)濟損失達200萬法郎。葡萄根瘤蚜 地中海實蠅地中海實蠅是一種能危害200多種水果和蔬菜的世界公認的頭號害蟲。1980年美國本土從夏威夷傳入地中海實蠅后，僅1981年就花費了十幾個億的美元來防治地中海實蠅。當年有30多個國家和地區(qū)（包括中國）禁止從美國進口水果和蔬菜，給美國的水果生產(chǎn)商一個沉重的打擊。地中海實蠅地中海實蠅是一種能危害200多種水果

7、和蔬菜的世界公廣肩星天牛光肩星天牛是一種破壞性極大的林木害蟲，生長在中國、日本、朝鮮半島等地區(qū)。1996年以來，美國紐約、芝加哥等地發(fā)生光肩星天牛的危害。據(jù)美國有關方面統(tǒng)計，光肩星天牛一旦在美國傳播開來，將對美國槭糖業(yè)、旅游業(yè)和生態(tài)環(huán)境造成約1380億美元的直接經(jīng)濟損失。因此，美國將光肩星天牛的發(fā)生歸咎于中國輸美貨物木質包裝攜帶入境，并以此為由于1998年9月11日對中國所有輸美貨物木質包裝采取了緊急檢疫措施，要求所有貨物木質包裝在出口前必須經(jīng)過熏蒸等除害處理，否則將被銷毀或連同貨物一并退回。廣肩星天牛光肩星天牛是一種破壞性極大的林木害蟲，生長在中國、繼美國之后，歐盟、加拿大等國家和地區(qū)也相繼

8、對我國出口木質包裝提出了嚴格的檢疫要求，嚴重阻礙了我國具木質包裝貨物的出口，一是大大增加了出口成本，二是延遲了出口的時間。無論在主觀和客觀上都起到了技術性貿(mào)易壁壘的作用。一場世界性的蔓延大戰(zhàn)就此拉開了序幕。繼美國之后，歐盟、加拿大等國家和地區(qū)也相繼對我國出口木質包裝松材線蟲松材線蟲是一種能夠導致針葉樹致病和死亡的植物有害生物，原產(chǎn)于北美。二戰(zhàn)結束后通過日本被美國占領，松材線蟲也隨著木質包裝（包裝軍需品）等傳到日本。我國于1982 年首次在江蘇南京中山陵發(fā)現(xiàn)了松材線蟲病。當時發(fā)病死亡的松材線蟲僅265株?，F(xiàn)在此病已在全國十二個省市、自治區(qū)、特別行政區(qū)迅速蔓延。發(fā)生面積已超過8萬公頃，死亡的寄主樹

9、木2000萬株以上，累計給中國造成直接經(jīng)濟損失近50億元、對社會和生態(tài)等產(chǎn)生的間接損失上百億元。在重點發(fā)生區(qū)，部分林地已退化為荒山，疫區(qū)相關農(nóng)副產(chǎn)品和林產(chǎn)品的流通和出口也直接受到影響。松材線蟲松材線蟲是一種能夠導致針葉樹致病和死亡的植物有害生物為防止松材線蟲的傳入，中國政府于2000年1月1日開始對美、日進口的貨物木質包裝實施檢疫。2001年10月1日起，歐盟因中國部分地區(qū)有松材線蟲的危害，也針對中國出口歐盟的貨物木質包裝采取了檢疫措施。為防止松材線蟲的傳入，中國政府于2000年1月1日開始對美、植物檢疫的起源據(jù)資料記載，法國里昂地區(qū)在1660年首先制定了鏟除小蘗并禁止其傳入，以防止小麥桿銹病

10、的法令。法國在從美國引進葡萄苗時導致葡萄根瘤蚜蔓延，約1/3（10萬ha）的葡萄園絕收，造成重大損失。為此法國政府于1872年頒布了禁止從國外輸入葡萄枝條的法令。為避免引起國際貿(mào)易糾紛，防止此類事件的發(fā)生， 1881年在瑞士簽約了葡萄根瘤蚜（芽）公約，這是世界上第一個防止植物危險性病蟲害的國際條約。該公約在防止葡萄根瘤蚜的傳播方面起到積極的作用。植物檢疫的起源據(jù)資料記載，法國里昂地區(qū)在1660年首先制定了美國的葡萄根瘤蚜傳入法國并造成了嚴重災害后，美國農(nóng)業(yè)部于1912年頒布了國家植物檢疫法令，以防止植物病蟲害在國際間的傳播。1912年，美國佛羅里達的柑橘潰瘍病大發(fā)生，造成了嚴重的危害，美國花費

11、了巨資進行防治，因此，美國植物檢疫法 把柑橘潰瘍病為主的柑橘病蟲害列為嚴格禁止進境的對象。美國的葡萄根瘤蚜傳入法國并造成了嚴重災害后，美國農(nóng)業(yè)部于19國際植物保護公約的產(chǎn)生為了進一步發(fā)揮國際植物檢疫的作用，在葡萄根瘤蚜（芽）公約的基礎上，于 1929年在羅馬將其修改為國際植物保護公約，并成立了國際植物保護公約組織（IPPC）。國際植物保護公約的產(chǎn)生為了進一步發(fā)揮國際植物檢疫的作用，在國際動物衛(wèi)生組織的產(chǎn)生國際動物衛(wèi)生組織（OIE）成立于1924年。國際動物衛(wèi)生法典由 OIE在1961年制定并通過。 國際動物衛(wèi)生組織的產(chǎn)生國際動物衛(wèi)生組織（OIE）成立于1922001年4月中國檢驗檢疫的產(chǎn)生：國

12、家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局主權的體現(xiàn)管理職能的體現(xiàn)2001年4月中國檢驗檢疫的產(chǎn)生：四、進出口商品檢驗（食用性植物產(chǎn)品）四、進出口商品檢驗（食用性植物產(chǎn)品）進出口商品檢驗（INSPECTION) 通過對進出口商品的檢驗，達到保護人類健康和安全、保護動物或植物的生命健康、保護環(huán)境、防止欺詐行為、維護國家安全的目的。 進出口商品檢驗（INSPECTION) 食用性植物產(chǎn)品檢驗食用性植物產(chǎn)品檢驗由于科學的發(fā)達和人類對健康的重視，發(fā)達國家和一些發(fā)展中國家不僅對致病微生物十分關注，而且越來越重視藥物殘留和重金屬超標的問題，限量的要求也越來越高。已苛刻到無法接受的程度，這就是所謂的技術性貿(mào)易壁壘措施。由于科學

13、的發(fā)達和人類對健康的重視，發(fā)達國家和一些發(fā)展中國家不對食用性動植物產(chǎn)品實施檢驗就是要檢驗這些產(chǎn)品是否含有致人生病的微生物，農(nóng)、獸藥和重金屬殘留是否超標，以保證人類食用安全。對進出口供人類食用的動植物產(chǎn)品實施檢驗就是要使進出口的產(chǎn)品符合我國或進口國的衛(wèi)生要求，符合食用標準，促進外貿(mào)的發(fā)展。對食用性動植物產(chǎn)品實施檢驗就是要檢驗這些產(chǎn)品是否含有致人生病致病微生物 動植物、動植物產(chǎn)品在養(yǎng)殖、生產(chǎn)、加工、儲藏和運輸過程中都有可能感染致人生病的微生物，人類接觸或食用后將導致感病，危害健康，嚴重的將導致死亡。高致病性禽流感H5N1： O157大腸感菌：日本（死亡7萬）李斯特菌：法國金色葡萄球菌腸毒素：日本雪

14、牌牛奶（死亡14500人）致病微生物 動植物、動植物產(chǎn)品在養(yǎng)殖、生產(chǎn)、加工、儲藏和分子信標(Molecular beacon)PCR檢測技術是利用相應的引物，在DNA聚合酶催化下對目標DNA進行體外擴增，根據(jù)預期DNA條帶的有無來判斷檢測的結果。煙草環(huán)斑病毒的檢疫檢測方法梨火疫病菌噬菌體的初步研究當時整個歐洲流行鼠疫，死亡了2000萬人，也就是當時歐洲1/4的人口因患鼠疫而死掉了。人為因素：外來有害生物傳入初期由于人們沒有看到它的危害（危害有量變到質變的過程） ，沒有引起人們的足夠重視和防治，沒有防微杜漸，最后導致大爆發(fā)；PCR的快速檢測，引物尤其重要，通常有下列特異性基因和DNA序列供設計P

15、CR引物用于檢測和鑒定病原菌。當時整個歐洲流行鼠疫，死亡了2000萬人，也就是當時歐洲1/4的人口因患鼠疫而死掉了。種子過篩后可檢出夾雜的菌癭、菌核、病株殘屑和土壤，都需仔細鑒別。其優(yōu)點是可檢測同種病毒的不同株系， 還可檢測類病毒、衛(wèi)星 以及某些不能形成病毒粒體蛋白的病毒分離物；操作不規(guī)范，不嚴格 。第三節(jié) 植物病毒檢驗檢疫技術其原理是把待測病毒的抗體吸附在乳膠顆粒上，通過大顆粒乳膠間接反應小顆粒病毒的存在，所不同的是RIPA使用了一種紅色乳膠，從而使檢測更加簡單和直觀，RIPA測檢測提純TMV的靈敏度分別可達5ngPml/50ngPml其特異性取決于引物和擴增反應條件;必要時挑取培養(yǎng)物制片，

16、用藥物殘留動物、植物在飼養(yǎng)和種植過程由于生病、生蟲或外部環(huán)境的影響，需要使用相應的農(nóng)藥、獸藥或飼料添加劑等農(nóng)藥類化學品來進行預防和治療。因此在動物、植物及其產(chǎn)品中有可能存在一定的藥物殘留。動植物生長期間在吸取養(yǎng)分和水分的同時有可能吸取了污染于其中的重金屬，導致體內(nèi)重金屬含量超標。分子信標(Molecular beacon)藥物殘留動物、植人類食用農(nóng)、獸殘或重金屬超標的食品后會受到危害。以含抗生素的牛奶為例，人類食用含抗生素超標的牛奶后，不僅會增加人體內(nèi)細菌的耐藥性，一旦患病，很可能無藥可治，而且會抑制和殺死人體內(nèi)正常的寄生的菌落，破壞腸道內(nèi)細菌的平衡，降低人體的免疫力，引起感染性疾病。長期飲用

17、“有抗奶”相當于經(jīng)常低劑量服用抗生素，會增加人體耐藥性，對于過敏體質的消費者而言，還可能會引起皮疹、過敏性休克等反應。人類食用農(nóng)、獸殘或重金屬超標的食品后會受到危害。生鮮牛乳收購標準國家標準委員會相關專家委員會已通過對生鮮牛乳收購標準的審核，有望在近期正式出臺，屆時“有抗奶”將被叫停。生鮮牛乳收購標準農(nóng)作物農(nóng)藥殘留 有機磷殺蟲劑：甲胺磷、對硫磷、甲基對硫磷、久效磷和磷胺（2007年1月1日禁用），甲拌磷、乙拌磷、甲基異硫磷、氧化樂果等；有機氯殺蟲劑：六六六、滴滴涕、硫丹、林丹和七氯等； 除蟲菊酯 ：聯(lián)苯菊酯、氯氰菊酯、氯氰菊脂、氰戊菊脂等； 殺菌劑：惡醚唑等。 農(nóng)作物農(nóng)藥殘留 有機磷殺蟲劑：甲

18、胺磷、對硫磷、甲基對硫磷、久國際航機、輪船、車輛的垃圾、動植物性廢棄物、鋪墊物等均應用焚化爐銷毀。PCR檢測技術是利用相應的引物，在DNA聚合酶催化下對目標DNA進行體外擴增，根據(jù)預期DNA條帶的有無來判斷檢測的結果。在25和無光照條件下培養(yǎng)3d后是用于檢驗檢疫具有明顯癥狀的植物材料，可作初步的診斷噬菌體法的主要優(yōu)點是簡便、快速，能直接用種子提取液測定。淺盤法20目和300目的網(wǎng)篩各一個，材料放入鋪有線蟲濾紙的不銹鋼盆內(nèi)，25度左右浸泡1d，過篩收集線蟲。主要特征：結構簡單的（核酸+蛋白或脂蛋白衣殼）；14世紀，歐洲發(fā)生了一場非常大的鼠疫流行。是用于檢驗檢疫具有明顯癥狀的植物材料，可作初步的診

19、斷在重點發(fā)生區(qū)，部分林地已退化為荒山，疫區(qū)相關農(nóng)副產(chǎn)品和林產(chǎn)品的流通和出口也直接受到影響。當時發(fā)病死亡的松材線蟲僅265株。用常規(guī)孢子萌發(fā)測定法、分離培養(yǎng)法或紅四氯唑（TTC）試管幼苗癥狀測定 在試管中水瓊脂培養(yǎng)基斜面上播種種子，在適宜條件下培養(yǎng)，根據(jù)幼苗癥狀、結合病原菌檢查，確定種傳真菌種類。據(jù)美國有關方面統(tǒng)計，光肩星天牛一旦在美國傳播開來，將對美國槭糖業(yè)、旅游業(yè)和生態(tài)環(huán)境造成約1380億美元的直接經(jīng)濟損失。其優(yōu)點是可檢測同種病毒的不同株系， 還可檢測類病毒、衛(wèi)星 以及某些不能形成病毒粒體蛋白的病毒分離物；因此在動物、植物及其產(chǎn)品中有可能存在一定的藥物殘留。出口盆栽植物栽培土的線蟲分離方法的

20、比較可樂風波可口可樂公司和百事可樂公司在印度12個邦生產(chǎn)的11種軟飲料的57份樣本中，林丹、毒死蜱和七氯等殺蟲劑的平均含量為10億分之1185，比印官方規(guī)定的10億分之05高出20多倍。而在加爾各答銷售的可口可樂中林丹含量是規(guī)定標準的140倍，而孟買附近生產(chǎn)的可口可樂中毒死蜱的含量是規(guī)定標準的200倍！ 印度的一個地方法院要求可口可樂和百事可樂公司公布可樂的配方?？蓸饭緵]有過濾地下水，所以認為水源污染是最大的可能。由于印度對農(nóng)藥使用管理很不嚴格，濫用殺蟲劑，結果使大部分地下水都受到了污染，可樂罐裝廠抽取地下水制造可樂，自然也受到了污染。兩大美國可樂巨頭沒有對取自印度的地下水做足夠的過濾，沒有

21、應用有效的凈化水源技術。國際航機、輪船、車輛的垃圾、動植物性廢棄物、鋪墊物等均應用焚獸藥殘留漁藥殘留添加劑藥殘獸藥殘留綠霉素出口蝦仁、小龍蝦出口蜂蜜飼料添加劑綠霉素出口蝦仁、小龍蝦Biolog系統(tǒng)和16SrDNA序列分析方法在植物病原細菌鑒定中的應用某些植物或植物器官被病原感染后，或某些病原菌本身，常可用特殊的化學藥品處理，使其染上特有顏色，利于檢出和區(qū)分病蟲種類松材線蟲是一種能夠導致針葉樹致病和死亡的植物有害生物，原產(chǎn)于北美。測試時A端滴加待測標本，通過層析作用，待測標本向B端移動，流經(jīng)G處時將金標抗體復溶，若待測標本中含待測抗原，即形成金標抗體-抗原復合物，移至T區(qū)時，形成金標抗體-抗原-

22、抗體復合物，金標抗體被固定下來，在T區(qū)顯示紅色線條，呈陽性反應，多余的金標記抗體移至C區(qū)被抗金標抗體捕獲，呈現(xiàn)紅色質控線條。懸浮土壤靜置過篩，由大到小。特異性基因或DNA序列用于檢測病原菌寄主：外來有害生物有了新的食物（寄主）或易感病寄主，導致大爆發(fā)；優(yōu)點設備簡單、操作方便、花費少、快速準確; 缺點某些菌絲生長不旺盛和產(chǎn)孢少，雜菌已影響樣品數(shù)量（容量）大小依據(jù)色、疏密程度和生長特點、真菌第二節(jié) 病原細菌的檢疫檢驗技術edu/RDP/)和核糖體基因擴增產(chǎn)物的序列分析，選擇病菌?；蛄校O計?；?，可以用來?；瘷z測病原細菌。人為因素：外來有害生物傳入初期由于人們沒有看到它的危害（危害有量變到質變

23、的過程） ，沒有引起人們的足夠重視和防治，沒有防微杜漸，最后導致大爆發(fā)；硝基呋喃硝基呋喃類（Nitrofurans）是一類合成的抗菌藥物，它們作用于微生物酶系統(tǒng)，抑制乙酰輔酶A，干擾微生物糖類的代謝，從而起抑菌作用。 水生動物：出口活鰻、烤鰻、河豚和小龍蝦；牲畜：出口腸衣。Biolog系統(tǒng)和16SrDNA序列分析方法在植物病原細菌鑒鹽酸克倫特羅俗稱瘦肉精食用豬肉內(nèi)臟后出現(xiàn)心慌、手腳不由自主抖動、頭暈、乏力，心率加速、肌肉顫動、頭痛、惡心、發(fā)熱及寒戰(zhàn)。鹽酸克倫特羅俗稱瘦肉精孔雀石綠孔雀石綠是一種帶有金屬光澤的綠色結晶體，其既是殺真菌劑，又是染料，長期以來，漁民都用它來預防魚的水霉病、鰓霉病、小瓜

24、蟲病等，而且為了使鱗受損的魚延長生命，在運輸過程中和存放池內(nèi)，也常使用孔雀石綠 ?？兹甘G是一種具有高毒、高殘留及“三致”（致畸、致癌、致突變）的殺菌劑。 出口日本的活鰻?？兹甘G孔雀石綠是一種帶有金屬光澤的綠色結晶體，其既是殺真菌硫丹對人有致突變作用。對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有損害。主要損害中樞神經(jīng)系統(tǒng)的運動中樞、小腦、腦干和肝、腎、生殖系統(tǒng)，為致腫瘤物?？梢痼@厥。一般表現(xiàn)為頭痛、痙攣、口吐泡沫，嗜睡，震顫。 硫丹是一種農(nóng)藥，用于防治螨等有害生物，一般用于農(nóng)作物的防治在出口日本的泥鰍，活鰻等檢測殘留超標。硫丹對人有致突變作用。對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有損害。主要損害中樞神經(jīng)蘇丹紅1號蘇丹紅1號是一種紅色染料。

25、蘇丹紅1號具有致癌性，我國和歐盟都禁止其用于食品生產(chǎn)。 2005年2月18日，英國食品標準署就食用含有添加蘇丹紅色素的食品向消費者發(fā)出警告，并在其網(wǎng)站上公布了亨氏、聯(lián)合利華等30家企業(yè)生產(chǎn)的可能含有蘇丹紅1號的產(chǎn)品清單。 由于發(fā)現(xiàn)含有蘇丹紅1號成分，全國所有肯德基餐廳停止售賣新奧爾良烤翅和新奧爾良烤雞腿堡兩種產(chǎn)品，同時銷毀所有剩余調料。 蘇丹紅1號蘇丹紅1號是一種紅色染料。蘇丹紅1號具有致癌性，我重金屬超標動植物、動植物產(chǎn)品在飼養(yǎng)、種植和生產(chǎn)加工過程中會受到環(huán)境（土壤、水）的污染，造成重金屬超標，人類食用后危害嚴重。重金屬：鉻、鎘、汞、砷、鉛、氟等重金屬超標檢疫對象出入境的植物，植物產(chǎn)品交通運

26、輸工具人員攜帶物 快件檢疫對象出入境的植物，植物產(chǎn)品第二章 植物檢疫程序法定檢驗檢疫 目錄列入目錄內(nèi)的商品通過評定程序：抽樣，檢驗和檢查，評估，驗證和合格保證；注冊認可和批準另外一些必須進行檢驗的入境貨物：廢舊物品，出口紡織品非必須檢驗檢疫的進出口商品進行抽查檢驗，有關機構公布檢驗結果檢驗合格加施檢疫標志第二章 植物檢疫程序法定檢驗檢疫 目錄進境，出境，過境的植物，植物產(chǎn)品和其他檢疫物（臘腸非洲不容許進口）裝載動植物檢疫物的裝載容器，包裝物，鋪墊材料來自植物疫區(qū)的運輸工具（禽流感）進境拆解的廢舊船舶法律法規(guī)國際條約的植物退回或銷毀處理：檢疫監(jiān)管；消毒處理進境，出境，過境的植物，植物產(chǎn)品和其他檢

27、疫物（臘腸非洲不容許入境植物檢疫程序入境植物檢疫程序植物檢疫性病害的檢測及防除研究方法技術完整版課件植物檢疫性病害的檢測及防除研究方法技術完整版課件植物檢疫性病害的檢測及防除研究方法技術完整版課件植物檢疫性病害的檢測及防除研究方法技術完整版課件植物檢疫性病害的檢測及防除研究方法技術完整版課件植物檢疫性病害的檢測及防除研究方法技術完整版課件植物檢疫性病害的檢測及防除研究方法技術完整版課件植物檢疫性病害的檢測及防除研究方法技術完整版課件出境植物檢疫程序出境植物檢疫程序 出入境集裝箱檢疫 出入境集裝箱檢疫交通工具和人員檢疫交通工具和人員檢疫植物檢疫工作流程報檢申報（報檢員提交單證，資料）計收費抽樣采

28、樣（形式實驗，處理加工）檢驗檢疫衛(wèi)生除害處理（木質包裝）簽證放行（檢驗檢疫處理證，合格證書，通行證）植物檢疫工作流程報檢申報（報檢員提交單證，資料）報檢員報檢員自理報檢單位自理報檢單位植物檢疫性病害的檢測及防除研究方法技術完整版課件植物檢疫性病害的檢測及防除研究方法技術完整版課件代理報檢單位代理報檢單位報檢員資格考試合格人員取得報考員資格證，兩年內(nèi)未從事報檢業(yè)務的，自動失效報檢員資格報檢員資格報檢員資格植物檢疫性病害的檢測及防除研究方法技術完整版課件植物檢疫性病害的檢測及防除研究方法技術完整版課件植物檢疫性病害的檢測及防除研究方法技術完整版課件植物檢疫性病害的檢測及防除研究方法技術完整版課件對

29、檢疫檢驗技術的要求準確可靠，靈敏高度，能檢出低量有害生物；快速、簡單、方便易行；有標準化的操作規(guī)程，檢驗結果重復性好安全，不擴散有害生物。對檢疫檢驗技術的要求準確可靠，靈敏高度，能檢出低量有害生物檢驗檢疫的樣品同一國家和地區(qū)來源，同一運輸工具，同一品名（種苗則為同一品種）的貨物統(tǒng)稱為一批，按批進行檢驗、放行或處理。通常一批貨物的數(shù)量很大，不可能全部檢驗，必須按規(guī)定的方法從批的總體中抽取適當數(shù)量的代表性部分，稱為樣品，用以檢驗。每份送檢樣品量的規(guī)定：谷物、棉籽、瓜子、飼料類為1000g；大粒種子（玉米、蠶豆等）10001500g；小粒種子（芝麻）500g；蔬菜、煙草：10100g；蔥頭、紅棗、馬

30、鈴薯等：20005000g。檢驗檢疫的樣品同一國家和地區(qū)來源，同一運輸工具，同一品名（種取樣方法的依據(jù)有害生物的分布規(guī)律貨物的數(shù)量裝載方式等因素確定取樣方法的依據(jù)有害生物的分布規(guī)律樣品數(shù)量（容量）大小依據(jù)有害生物的帶有率;檢驗方法的靈敏度;檢驗所要求的精度;貨物種類與特點;檢驗所允許的時間和花費等許多因素確定。有害生物的帶有率越低，檢驗方法的靈敏度越低，檢驗精度要求越高，所需樣品數(shù)量就越多。樣品數(shù)量（容量）大小依據(jù)有害生物的帶有率;檢驗檢疫的方法真菌主要由培養(yǎng)方法檢出，根據(jù)形態(tài)特征鑒定；細菌、病毒及與之類似的有害生物則需應用多種生物學的、生理生化的和免疫學的技術檢驗；線蟲和雜草種子主要由直接檢

31、驗和機械分離而檢出，根據(jù)形態(tài)特征鑒定。檢驗檢疫的方法真菌主要由培養(yǎng)方法檢出，根據(jù)形態(tài)特征鑒定；植物檢疫性病害的檢測及防除研究方法技術完整版課件植物檢疫性病害的檢測及防除研究方法技術完整版課件植物檢疫性病害的檢測及防除研究方法技術完整版課件第一節(jié) 植物病原真菌的檢驗檢疫技術病原真菌的屬、種主要依據(jù)其形態(tài)特征鑒定，有時形態(tài)相似的近似種類需接種寄主，測定其致病性。鑒定病原真菌專化型和小種，也需接種鑒別寄主。除洗滌檢驗法的檢驗結果用單位重量種子的孢子負載量表示外，其它檢驗方法都能獲得帶菌百分率或發(fā)病百分率。第一節(jié) 植物病原真菌的檢驗檢疫技術病原真菌的屬、種主要依據(jù)其一、直接檢驗 是用于檢驗檢疫具有明顯

32、癥狀的植物材料，可作初步的診斷 現(xiàn)場快速檢查肉眼，放大鏡或實體顯微鏡。 一、直接檢驗 是用于檢驗檢疫具有明顯癥狀的植物材料，可作初步二、過篩檢驗 檢驗糧谷、種子、油料、干果和生藥材，檢驗病粒，菌嬰、菌核、病殘體等 種子過篩后可檢出夾雜的菌癭、菌核、病株殘屑和土壤，都需仔細鑒別。小麥矮腥黑穗病的菌嬰二、過篩檢驗 檢驗糧谷、種子、油料、干果和生藥材，檢驗病粒，三、比重檢驗法原理：菌嬰、菌核和病秕籽粒都要比健康的籽粒輕。用于種子、糧谷、豆類中的菌嬰、菌核和病秕籽粒。 三、比重檢驗法原理：菌嬰、菌核和病秕籽粒都要比健康的籽粒輕。四、染色檢驗法 某些植物或植物器官被病原感染后，或某些病原菌本身，?？捎锰?/p>

33、殊的化學藥品處理，使其染上特有顏色，利于檢出和區(qū)分病蟲種類 四、染色檢驗法 某些植物或植物器官被病原感染后，或某些病原菌洗滌檢驗法用于檢測種子表面附著的真菌孢子，包括黑粉菌的厚垣孢子、霜霉菌的卵孢子、銹菌的夏孢子以及多種半知菌的分生孢子等。洗滌檢驗法用于檢測種子表面附著的真菌孢子，包括黑粉菌的厚垣孢洗滌檢驗的操作程序一定數(shù)量的種子樣品放入容器并加入定量蒸餾水或其它洗滌液，振蕩5-10 min，使孢子脫離種子，轉移到洗滌液中。洗脫孢子將孢子洗滌液移入離心管，低速離心（2500-3000rmin）10-15min，使孢子沉集在離心管底部。離心富集棄去離心管內(nèi)的上清液，加入一定量蒸餾水或其它浮載液，

34、重新懸浮沉集在離心管底部孢子，取懸浮液。滴加在血球計數(shù)板上，用高倍顯微鏡檢查孢子種類并計數(shù)，據(jù)此可計算出種子的帶菌量。鏡檢計數(shù)用常規(guī)孢子萌發(fā)測定法、分離培養(yǎng)法或紅四氯唑（TTC）染色法判定孢子死活。孢子生活力測定洗滌檢驗的操作程序一定數(shù)量的種子樣品放入容器并加入定量蒸餾水影響洗滌檢驗的因素種子或其他糧谷類產(chǎn)品表面所黏附的病菌孢子不一定能完全洗滌下來;離心管內(nèi)容已形成一層極難沉降的孢子薄膜。管壁也可能黏附孢子;視野內(nèi)孢子分布不均勻;操作不規(guī)范，不嚴格 。 影響洗滌檢驗的因素種子或其他糧谷類產(chǎn)品表面所黏附的病菌孢子不保濕萌芽檢驗法 適用于病菌隨種子萌發(fā)或幼苗生長階段就開始侵然危害，并表現(xiàn)癥狀的病原

35、菌。優(yōu)點：容易檢查根部和綠色部分，也可避免相互傳染。缺點：腐生菌干擾；病菌之間干擾。 保濕萌芽檢驗法 適用于病菌隨種子萌發(fā)或幼苗生長階段就開始侵然沙內(nèi)萌芽檢驗 主要用于植物繁殖材料的入境后隔離檢疫。供試材料種植在經(jīng)過高壓蒸汽滅菌處理或干熱滅菌的沙礫、石英砂中，在隔離場所和適宜條件下栽培，根據(jù)幼苗和成株的癥狀鑒定。土內(nèi)萌芽檢驗試管幼苗癥狀測定 在試管中水瓊脂培養(yǎng)基斜面上播種種子，在適宜條件下培養(yǎng)，根據(jù)幼苗癥狀、結合病原菌檢查，確定種傳真菌種類。生長檢驗花費時間長，使其應用受到限制。沙內(nèi)萌芽檢驗 主要用于植物繁殖材料的入境后隔離檢疫。供試材保濕培養(yǎng)檢驗 優(yōu)點設備簡單、操作方便、花費少、快速準確;

36、缺點某些菌絲生長不旺盛和產(chǎn)孢少，雜菌已影響 有利于病原菌形成孢子，同時又避免因種子萌芽伸長過快造成相互覆蓋，便于檢查冰凍吸水法：含水量均勻一致，有利于病菌生長，皿內(nèi)潔凈，雜菌少。 瓊脂平皿法： 吸水紙法：保濕培養(yǎng)檢驗 優(yōu)點設備簡單、操作方便、花費少、快速準確; 培養(yǎng)皿 培養(yǎng)皿 吸水紙 培養(yǎng)皿 蒸餾水種子 培養(yǎng)皿 日光或紫外燈 20-257-10d 實體顯微鏡下逐粒種子檢查 特別注意觀察種子上菌絲體的顏色、疏密程度和生長特點、真菌繁殖結構的類型和特征。 培養(yǎng)皿 培養(yǎng)皿 培養(yǎng)皿 吸水紙 培養(yǎng)皿 蒸餾水種子 培養(yǎng)皿 日光或吸水紙培養(yǎng)檢驗法實例吸水紙培養(yǎng)檢驗法實例種子 1-2次氯酸鈉溶液和抗菌素表面消

37、毒5-10 min植床于培養(yǎng)基平板上，在適宜溫度和光照下培養(yǎng)7-10d手持放大鏡從培養(yǎng)皿兩面觀察，依據(jù)菌落形態(tài)、色澤來鑒別真菌種類必要時挑取培養(yǎng)物制片，用高倍顯微鏡檢查瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)檢驗種子 1-2次氯酸鈉溶液和抗菌植床于培養(yǎng)基平板上，在適宜七、分離培養(yǎng)檢驗主要應用于檢驗潛伏于種子、苗木或其他之物產(chǎn)品內(nèi)部，不易發(fā)現(xiàn)和鑒定的病原菌；當種子、苗木或其他植物產(chǎn)品上雖有病斑，但無特殊的病原菌可供鑒定的場合。 七、分離培養(yǎng)檢驗主要應用于檢驗潛伏于種子、苗木或其他之物產(chǎn)品分離培養(yǎng)檢驗方法根據(jù)不同的目的分為5種：種子表面或深層的病菌檢測病菌的潛伏部位了解種子外部附著的病菌種群檢驗病菌種類、菌落類型和萌發(fā)率分

38、離塊莖、塊根和苗木、接穗等繁殖材料所帶的病菌分離培養(yǎng)檢驗方法根據(jù)不同的目的分為5種：分離培養(yǎng)檢驗步驟 消毒 接種培養(yǎng)分離培養(yǎng)檢驗步驟 消毒 接種培養(yǎng)研究方法進境美國小麥中黑麥草腥黑穗病菌的檢測和鑒定（洗滌檢測和熒光PCR）水稻腥黑粉病菌的單孢檢測（分離培養(yǎng)）大豆疫病的田間鑒定與防治研究方法進境美國小麥中黑麥草腥黑穗病菌的檢測和鑒定（洗滌檢測第二節(jié) 病原細菌的檢疫檢驗技術 植物細菌病害有軟腐、環(huán)腐、萎蔫、潰瘍、瘡痂、枝枯、葉斑、組織增生（癭瘤、發(fā)根）等多種癥狀。葉片上病斑常呈水漬狀，上有細菌溢膿。病部切片鏡檢可見細菌溢。第二節(jié) 病原細菌的檢疫檢驗技術 植物細菌病害有軟腐、環(huán)腐、萎田間診斷了解病害

39、和寄主的群體特征，即病害在田間發(fā)生的情況，以及當?shù)氐淖魑镌耘嗉案髑闆r 。初步診斷通過肉眼觀察植株的癥狀、病原分泌物以及鏡檢觀察。 例如 水稻細菌性條斑病取一小塊病葉組織，低倍鏡下觀察，微管束有噴菌現(xiàn)象。 田間診斷了解病害和寄主的群體特征，即病害在田間發(fā)生的情況進一步診斷 分離培養(yǎng)：選擇新鮮的病斑或病鍵組織交界處表面消毒清水洗凈碾碎稀釋劃線培養(yǎng)觀察進一步診斷 分離培養(yǎng)：選擇新鮮的病斑或病鍵組織交界處表面提取液系列稀釋在金氏B（KB）培養(yǎng)基平板上涂布在25和無光照條件下培養(yǎng)3d后紫外光或近紫外光照射下有藍色熒光的菌落，為假單胞桿菌，可能是暈蔫病菌選擇典型菌落作進一步的鑒定菜豆種傳暈蔫病菌的分離提

40、取液系列稀釋在金氏B（KB）培養(yǎng)基平板上涂布在25和無光致病性測定：目的是區(qū)分致病性細菌和腐生菌。 過敏性反應(Hypersensitive reaction, HR)是指病原細菌在非寄主植物上引起枯斑反應的現(xiàn)象，腐生性細菌則不表現(xiàn)典型的枯斑。大部分病原細菌，特別是 Pseudomonas屬的病原細菌注射到煙草葉片上，能在24小時內(nèi)產(chǎn)生枯斑反應。致病性測定：目的是區(qū)分致病性細菌和腐生菌。大部分病原細菌，特接種方法 按照柯赫氏法則，從發(fā)病植物上得到的分離物，在健康的寄主植物上接種發(fā)病并與先前癥狀一致，然后再次從發(fā)病部位分離到與先前相同的分離物，才能證明該分離物是引致這種病害的病原物。常用的接種方

41、法有噴霧、注射、針刺和浸泡等。接種方法 按照柯赫氏法則，從發(fā)病植物上得到的分離物，在健康的操作：細菌溢膿或分離純化細菌自然或人工接種觀察針刺接種法接種甘藍葉片中肋如確系該菌，則接種部位軟腐、維管束褐變切片置于1.5水瓊脂平板上，在28和黑暗條件下培養(yǎng)3d操作：細菌溢膿或分離純化細菌自然或人工接種觀察針刺接生理生化及快速測定法生化測定試劑盒：鑒定某一類細菌的關鍵碳源、氮源、特殊酶和有機酸等并附有比較和檢索用的計算機數(shù)據(jù)庫。Biolog 測定：美國Biolog 公司研制的專門鑒定細菌的專家系統(tǒng)。將大量的細菌生理生化測定參數(shù)與先進的計算機技術有機的結合起來。生理生化及快速測定法生化測定試劑盒：鑒定某

42、一類細菌的關鍵碳源噬菌體檢測噬菌體是感染細菌的病毒，能在活細菌細胞中寄生繁殖，破壞和裂解寄主細胞，在液體培養(yǎng)時，使混濁的細菌懸浮液變得澄清，在固體平板上培養(yǎng)時，則出現(xiàn)許多邊緣整齊，透明光亮的圓形無菌空斑，稱為“噬菌斑”，肉眼即可分辯。噬菌體檢測噬菌體是感染細菌的病毒，能在活細菌細胞中寄生繁殖，噬菌體法的主要優(yōu)點是簡便、快速，能直接用種子提取液測定。缺點是非目標菌多量存在時敏感性較差，噬菌體的寄生?；院图毦鷮κ删w的抵抗性都可能影響檢驗的準確性。 噬菌體法的主要優(yōu)點是簡便、快速，能直接用種子提取液測定。取10g稻種，脫下谷殼，剪碎或磨碎，放入已滅菌處理的燒杯中取10g稻種，脫下谷殼，剪碎或磨碎

43、，放入已滅菌處理的燒杯中混勻后加入10ml融化的肉汁胨瓊脂培養(yǎng)基，搖勻凝成平板在25-28溫箱中，培養(yǎng)10-12h記載各培養(yǎng)皿中的噬菌斑數(shù)，然后再換算成每克種子的噬菌斑數(shù)細菌的?；允删w測定取10g稻種，脫下谷殼，剪碎或磨碎，取10g稻種，脫下谷殼，酶聯(lián)免疫吸附技術(ELISA)- 酶聯(lián)免疫吸附測定(Enzyme linked immunology assay, ELISA)是把抗原、抗體的免疫反應和酶的高效催化反應有機結合而發(fā)展起來的一種綜合技術。血清學檢測技術酶聯(lián)免疫吸附技術(ELISA)- 酶聯(lián)免疫吸附測定(Enz血清學檢測技術ELISA的測定方法:直接法、間接法、競爭法、酶抗酶法、雙

44、夾心法、雙抗體夾心法等6種。ELISA的特征:靈敏度高，特異性強，安全、快速并易觀察。它可進行定性定量測定，適于大批量樣品的檢查、可用于病害普查，口岸檢疫和產(chǎn)地檢疫等。血清學檢測技術ELISA的測定方法:直接法、間接法、競爭法、雙抗體夾心法雙抗體夾心法間接法 間接法 競爭法競爭法免疫熒光技術原理-將熒光物與微生物抗體結合得到熒光抗體，熒光抗體與相應的抗原結合，在熒光顯微鏡下發(fā)生熒光，以此來檢測抗原。免疫熒光技術有直接法和間接法兩種，在實踐中常用間接法，一抗與結合有熒光色素的二抗結合，通過免疫熒光顯微鏡來檢測所發(fā)出的熒光。免疫熒光技術原理-將熒光物與微生物抗體結合得到熒光抗體，熒免疫熒光技術免疫

45、熒光技術診斷試劑盒診斷試劑盒分子檢測技術PCR檢測技術是利用相應的引物，在DNA聚合酶催化下對目標DNA進行體外擴增，根據(jù)預期DNA條帶的有無來判斷檢測的結果。分子檢測技術PCR檢測技術是利用相應的引物，在DNA聚合酶催分子檢測技術其特異性取決于引物和擴增反應條件;靈敏度取決于每次分析樣品中目標病原菌的最低劑量，以及樣品制備方法對PCR反應的影響。PCR的快速檢測，引物尤其重要，通常有下列特異性基因和DNA序列供設計PCR引物用于檢測和鑒定病原菌。分子檢測技術其特異性取決于引物和擴增反應條件;特異性基因或DNA序列用于檢測病原菌利用病原菌的致病基因- 以病原菌的致病基因為目標，設計特異性引物，

46、通過PCR擴增進行病原菌特異性檢測例如土壤桿菌Agrobacterium的菌株，所有致病菌株都有介導DNA在細菌和寄主間轉導的毒性基因(Vir基因)，詳細了解致病機制后，可以設計出許多針對該致病性基因序列的DNA引物。特異性基因或DNA序列用于檢測病原菌利用病原菌的致病基因-核糖體DNA基礎的PCR策略細菌核糖體DNA的操縱子由3個有功能的保守序列16SrDNA, 23SrDNA和5SrDNA組成，由可變異的轉錄間隔區(qū)(Internally Transcribed Spacer, ITS)分隔。擴增DNA保守區(qū)域的引物通常稱做通用引物，己經(jīng)在廣泛的系統(tǒng)進化變異細菌中應用，來擴增核糖體基因片段。

47、通過核糖體基因庫(ht tp : /www. cme. msu. edu/RDP/)和核糖體基因擴增產(chǎn)物的序列分析，選擇病菌專化序列，設計?；?，可以用來?；瘷z測病原細菌。核糖體DNA基礎的PCR策略細菌核糖體DNA的操縱子由3個有分子檢測試劑盒分子檢測試劑盒研究方法河北鴨梨黑斑病病原菌的鑒定番茄上兩種細菌性病害的診斷與防治梨火疫病菌噬菌體的初步研究Biolog系統(tǒng)和16SrDNA序列分析方法在植物病原細菌鑒定中的應用研究方法河北鴨梨黑斑病病原菌的鑒定第三節(jié) 植物病毒檢驗檢疫技術病毒（virus）是一組（一種或一種以上）DNA或RNA核酸分子，包圍在蛋白或脂蛋白外殼內(nèi)，在合適的寄主細胞借助于

48、寄主蛋白合成體系、物質和能量完成復制 ，伴隨核酸突變發(fā)生變異。主要特征：結構簡單的（核酸+蛋白或脂蛋白衣殼）；嚴格專性寄生的（依賴寄主的核酸和蛋白質合成系統(tǒng)）；非細胞生物（分子寄生物）。第三節(jié) 植物病毒檢驗檢疫技術病毒（virus）是一組（一種或非典型肺炎”元兇冠狀病毒非典型肺炎”元兇冠狀病毒生物學檢測技術 鑒別寄主檢測-以鑒別寄主反應或指示植物為依據(jù)的方法。曾廣泛運用，目前卻由于其檢測速度慢、受環(huán)境和季節(jié)影響較大等諸多因素限制，而運用較少。生物學檢測技術 鑒別寄主檢測-以鑒別寄主反應或指示植物為依電子顯微鏡觀察目前通常認為運用負染和超薄切片電鏡觀察能診斷和鑒別植物病毒，一般可診斷到屬的水平。

49、電子顯微鏡觀察目前通常認為運用負染和超薄切片電鏡觀察能診斷和免疫學檢測法酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA) 快速免疫濾紙測定法(Rapidimmuno afterpaperassay,RIPA)免疫膠體金技術(Immunecolloidalgoldtechnique) 免疫印跡法 -Western印跡(Western blot)；斑點免疫結合技術(Dot immunobinding assay, DIBA ) 組織免疫印跡(Tissue-blot immunoassay, TBIA ) 免疫學檢測法酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA) 快速免疫濾紙測定法(Rapidimmuno afterpaperas

50、say,RIPA)快速免疫濾紙測定類似乳膠凝集反應。其原理是把待測病毒的抗體吸附在乳膠顆粒上，通過大顆粒乳膠間接反應小顆粒病毒的存在，所不同的是RIPA使用了一種紅色乳膠，從而使檢測更加簡單和直觀，RIPA測檢測提純TMV的靈敏度分別可達5ngPml/50ngPml快速免疫濾紙測定法(Rapidimmuno afterpap免疫膠體金技術(Immunecolloidalgoldtechnique)G處為金標抗體(免疫金)，T處包被抗體，C處包被抗金標抗體，B處為吸水紙。測試時A端滴加待測標本，通過層析作用，待測標本向B端移動，流經(jīng)G處時將金標抗體復溶，若待測標本中含待測抗原，即形成金標抗體-抗

51、原復合物，移至T區(qū)時，形成金標抗體-抗原-抗體復合物，金標抗體被固定下來，在T區(qū)顯示紅色線條，呈陽性反應，多余的金標記抗體移至C區(qū)被抗金標抗體捕獲，呈現(xiàn)紅色質控線條。 免疫膠體金技術(Immunecolloidalgold免疫用抗原來源提純病毒粒子；原核或真核表達外殼蛋白免疫用抗原來源提純病毒粒子；單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備多克隆抗體的制備抗 原多克隆抗體的制備抗 原分子生物學檢測方法 多聚酶鏈式反應(PCR) 分子信標(Molecular beacon)TaqMan實時RT-PCR (Real-time RT-PCR)核酸雜交技術(Nucleic acid hybridization)

52、分子生物學檢測方法 多聚酶鏈式反應(PCR) 多聚酶鏈式反應(PCR)RT-PCR嵌套PCR雙重PCR多重PCR雜交誘捕PCR-ELISA實時熒光PCR多聚酶鏈式反應(PCR)RT-PCR反應前：“分子信標”為一發(fā)夾型探針，探針的柄部兩端序列互補，使其呈發(fā)夾狀，環(huán)與靶序列互補。位于柄部的和端分別標記熒光染料和猝火劑。在發(fā)夾關閉時，熒光染料和猝滅劑極端靠近，熒光幾乎完全被猝滅分子信標(Molecular beacon)反應前：“分子信標”為一發(fā)夾型探針，探針的柄部兩端序列互補，變性：“分子信標”柄部因高溫變性而呈卷曲狀，熒光染料遠離淬滅劑，發(fā)出熒光分子信標(Molecular beacon)變性

53、：“分子信標”柄部因高溫變性而呈卷曲狀，熒光染料遠離淬滅退火：“分子信標”發(fā)夾環(huán)部因與靶序列互補而雜交，“分子信標”發(fā)夾完全展開，發(fā)出熒光：如無靶序列存在“分子信標”因柄部序列互補回復發(fā)夾，無熒光分子信標(Molecular beacon)退火：“分子信標”發(fā)夾環(huán)部因與靶序列互補而雜交，“分子信標”延伸：“分子信標”因升溫與靶序列脫離，延伸反應順利進行分子信標(Molecular beacon)延伸：“分子信標”因升溫與靶序列脫離，延伸反應順利進行分子信反應結束：“分子信標”與擴增產(chǎn)物雜交發(fā)出熒光，熒光強度與擴增產(chǎn)物量成正比分子信標(Molecular beacon)反應結束：“分子信標”與擴

54、增產(chǎn)物雜交發(fā)出熒光，熒光強度與擴增雜交誘捕PCR-ELISA原理雜交誘捕PCR-ELISA原理實時熒光PCR原理 實時熒光PCR原理 核酸斑點雜交技術原理：采用帶有放射性或非放射性物質標記的已知序列核酸單鏈作為探針， 在一定條件下與靶病毒的核酸單鏈退火形成雜交雙鏈。通過雜交信號的檢測， 檢測出樣本中病毒的基因組份。其優(yōu)點是可檢測同種病毒的不同株系， 還可檢測類病毒、衛(wèi)星 以及某些不能形成病毒粒體蛋白的病毒分離物； 缺點是同位素標記有放射性污染及安全問題。核酸斑點雜交技術原理：采用帶有放射性或非放射性物質標記的已知分子生物學和免疫學相結合檢測方法免疫捕獲反轉錄PCR（Immunocapture

55、reverse transcript PCR, IC-RT-PCR）反轉錄PCR擴增分子生物學和免疫學相結合檢測方法免疫捕獲反轉錄PCR（Imm研究方法日本進口南瓜的病毒隔離檢疫和田間疫情監(jiān)測煙草環(huán)斑病毒的檢疫檢測方法番茄斑萎病毒的檢疫技術侵染觀賞南瓜的黃瓜綠斑駁花葉病毒的初步鑒定研究方法日本進口南瓜的病毒隔離檢疫和田間疫情監(jiān)測第四節(jié) 植物病原線蟲的檢疫檢驗技術植物病原線蟲是軀體很小，而內(nèi)部又有各種較復雜器官的低等動物，再加上其一些特殊的分布和生物學習性等，檢測方法有所不同。第四節(jié) 植物病原線蟲的檢疫檢驗技術植物病原線蟲是軀體很小，而罹病樣品的采集及保存方法罹病植物采集有明顯癥狀的地上或地下部分土壤樣本2030cm耕作層的土壤，定點或棋 盤式多點采樣。 保存方法所有材料均應裝入塑料袋中保濕，及時分離或4度低溫保存。罹病樣品的采集及保存方法罹病植物采集有明顯癥狀的地上或地植物寄生線蟲的各種分離方法 直接解剖法- 內(nèi)生線蟲在體視顯微鏡下用解剖針直接解剖病組織植物寄生線蟲的各種分離方法 直接解剖法- 內(nèi)生線蟲簡易貝爾曼漏斗法:分離少量植物材料中有活動能力的線蟲。浸入漏斗12h清洗材料切成小段收集線蟲裹紗布浸入漏斗12h清洗