中藥材摻假染色檢測方法的研究課件

1、中藥材摻假染色檢測方法的研究中國藥品生物制品檢定所中藥室 魯 靜2009-05色彩與人類生活息息相關(guān)“紅心鴨蛋”事件 中藥材摻假染色 中藥材摻假染色檢測方法研究的必要和緊迫性 著色物：色素、染料、顏料等的濫用，嚴(yán)重危害人民身體健康和生命安全；摻偽、造假等現(xiàn)象屢禁不止 ，嚴(yán)重影響中藥的聲譽(yù)和健康發(fā)展。中藥材摻假染色的主要方式和品種增重?fù)郊偃旧?紅花 冬蟲夏草、青黛等劣質(zhì)藥材染色 五味子 蒲黃 延胡索 等造假染色 西紅花 血竭 朱砂 等 著色物的種類食用色素（水溶性色素） 食品添加劑合成染料 可溶于使用介質(zhì) 紡織品著色 被纖維吸附、固著有機(jī)顏料 不溶于使用介質(zhì) 非紡織品著色 靠樹脂、膠黏劑等于著色

2、物結(jié)合 無機(jī)或礦物顏料禁用染料 含有偶氮結(jié)構(gòu)的染料在經(jīng)過裂解后有可能產(chǎn)生以下24種致癌芳香胺的染料是被歐盟和許多國家禁止使用的。 24種致癌芳香胺是： （1）4-氨基聯(lián)苯 （2） 聯(lián)苯胺 （3）4-氯-2-甲基苯胺 （4）2-萘胺 （5）4-氨基-3,2-二甲基偶氮苯 （6）2-氨基-4-硝基甲苯 （7）2,4-二氫基苯甲醚 （8）4-氯苯胺 （9）4,4-二氨基二苯甲烷 （10）3,3-二氯聯(lián)苯氨 （11）3,3-二甲氧基聯(lián)苯胺 （12）3,3-二甲基聯(lián)苯胺 （13）3,3-二甲基-4,4-二氨基二苯甲烷 （14）2-甲氧基-5-甲基苯胺 （15）4,4-亞甲基-二（2-氯苯胺） （16）4

3、,4-二氨基二苯醚 （17）4,4-二氨基二苯硫醚 （18）2-甲基苯胺 （19）2,4-二氫基甲苯 （20）2,4,5-三甲基苯胺 （21）2-甲氧基苯胺 （22）4-氨基偶氮苯 （23）2,4-二甲基苯胺 （24）2,6-二甲基苯胺 食用色素天然食用色素：焦糖色素、紅曲紅、高梁紅、梔子黃、蘿卜紅、葉綠素銅鈉鹽、胡蘿卜素、可可殼色、姜黃等我國食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（GB27601996）列入的合成色素有胭脂紅、莧菜紅、日落黃、赤蘚紅、檸檬黃、新紅、靛藍(lán)、亮藍(lán)、二氧化鈦（白色素）等等。 合成食用色素合成色素具毒性(包括毒性、致瀉性和致癌性)。這些毒性源于合成色素中的砷、鉛、銅、苯酚、苯胺、乙醚

4、、氯化物和硫酸鹽，它們對人體均可造成不同程度的危害。我國食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，其中規(guī)定使用合成色素的種類，并定出了最大使用量。合成色素的純色素含量不得低于8599；砷1ppm; 鉛10ppm; 銅20ppm; 苯酚5ppm，苯胺4ppm; 各種氯化物不應(yīng)超過0.5等，這些規(guī)定是為了限制色素中的雜質(zhì)，以減少對人體的毒害。 三芳基甲烷類金胺O孔雀石綠顏料普通有機(jī)顏料 偶氮類顏料 酞箐顏料無機(jī)顏料 二氧化鈦 鉛鉻綠 等等中藥材摻假染色檢測方法研究的內(nèi)容（1）關(guān)注藥材質(zhì)量，及時發(fā)現(xiàn)問題；（2）確定摻偽物、染色物的種類；明確化學(xué)組成；（3）建立檢測用對照物質(zhì)；（4）建立檢測方法，進(jìn)行必要的方法驗證；（

5、5）按規(guī)定程序申報補(bǔ)充檢驗方法，作為法定檢驗的依據(jù)。中藥材摻假染色檢測的技術(shù)方法經(jīng)驗鑒別、理化鑒別快速篩查薄層色譜法定性鑒別、常規(guī)檢測高效液相色譜法定性鑒別、常規(guī)檢測液-質(zhì)聯(lián)用法結(jié)構(gòu)鑒定、方法驗證中藥材摻假染色檢測方法研究實例 單一色素或染料染色7 34 39 40 42 A B C D E F G H I J K L 對照紅花染色物 金橙II的檢測硅膠G薄層板展開劑：氯仿-甲醇-冰乙酸(7：1：2)金橙II的HPLC檢測色譜柱：Diamonsil C18流動相：乙腈0.025mol/L磷酸二氫鉀溶液（含0.2%三乙胺，并用磷酸調(diào)pH值為3.0）(40：60) 檢測波長：484nmUVES-E

6、S+UVES-ES+金橙II紅花藥材蒲黃摻偽染色的檢驗蒲黃摻偽染色的檢驗 8 20 30 32 34 A B C D E F G 對照金胺O的薄層色譜檢測硅膠G薄層板展開劑：二氯甲烷乙酸乙酯甲醇氨水（4：5：1：1）的下層溶液上：金胺O對照試劑；中34#樣品（陽性樣品）；下：樣品E（陰性樣品）金胺O的HPLC檢測色譜柱：Diamonsil C18流動相：乙腈0.025mol/L磷酸二氫鉀溶液（含0.2%三乙胺，并用磷酸調(diào)pH值3.0）（35：65）檢測波長:432nm 金胺O對照試劑蒲黃藥材中相應(yīng)色譜峰中藥材摻假染色檢測方法研究實例不同來源樣品，多種色素或染料染色1 2 3 4 5 6 7 8

7、 9 10 11 12 13 14 15硅膠G薄層板展開劑：乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-氨水-水(1：3：3：1：1)五味子染色物的HPLC色譜圖柱：Diamonsil C18，4.6 x 250mm 流動相：以甲醇-0.05mol/L醋酸銨梯度洗脫；檢測波長為508nm 復(fù)合色素染色烏梅染色物： 莧菜紅 亮藍(lán) 日落黃 硅膠GF254板，展開劑：乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-氨水-水（1：3：3：1：1）可見光檢視 烏梅染色物HPLC檢測Waters C18，5m，250 x 4.6mm；甲醇-0.02mol/L乙酸銨（冰乙酸調(diào)pH4.0），梯度洗脫500nm檢測莧菜紅和日落黃，630nm檢測亮藍(lán)。 染

8、色物、摻偽物同時檢測血竭偽品血竭樣品 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9顯色前，可見光檢視 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9顯色前，紫外光燈（254nm）檢視 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9顯色后，可見光檢視 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9顯色后，紫外光燈（365nm）檢視TLC檢查偽品血竭中松香酸、808猩紅和蘇丹紅 血竭偽品藥材HPLC分析檢測Agilent C18 (4.6 X 250mm)；流動相：乙腈水（95

9、5） 陽性樣品中相應(yīng)色素成分峰的DAD吸收光譜 檢出成分的確證樣品#色譜峰保留時間吸收峰1吸收峰2檢出大紅粉的樣品18.1549751968.05496519大紅粉對照 8.03496517檢出蘇丹紅IV的樣品 21918350518 4 1920350518蘇丹紅對照19.13350518血竭偽品（大紅粉）HPLC/MS/MS圖2-羥基-3-苯胺羰基-1-偶氮苯基-萘m/z 368.1394808 猩紅(808 Scarlet)蘇丹紅IV峰的二級質(zhì)譜 偽品血竭中松香酸的HPLC/MS/MS圖 松香酸偽品血竭檢測情況樣品編號樣品提供或購買地點

10、TLCHPLC808猩紅蘇丹紅松香酸808猩紅蘇丹紅松香酸1安徽亳州中藥材市場+-+-+2安徽亳州中藥材市場-+-+-3安徽亳州中藥材市場-+-+4重慶解放碑中藥材市場-+-+5成都荷花池中藥材市場-+-+6澳門藥店+-+-+已批復(fù)的中藥材染色補(bǔ)充檢驗項目和檢驗方法品種批準(zhǔn)件編號檢測指標(biāo)和方法蒲黃2007007金胺O薄層色譜和HPLC檢查黃芩片（飲片）2007008金胺O薄層色譜和HPLC檢查紅花2007009金橙II薄層色譜和HPLC檢查五味子2007014胭脂紅、赤蘚紅和酸性紅73薄層色譜和HPLC檢查朱砂2008003808猩紅薄層色譜和HPLC檢查血竭2008004808猩紅、蘇丹紅I

11、V和松香酸薄層色譜和HPLC檢查烏梅(炙烏梅)2009001莧菜紅、亮藍(lán)、日落黃薄層色譜和HPLC檢查其它已批復(fù)的有關(guān)中藥材摻偽等的檢測方法 沉香 穿山甲 膽南星 海金沙 細(xì)辛 桔梗關(guān)于中藥材補(bǔ)充檢驗方法研究和建立原則的幾點思考根據(jù)中藥材的質(zhì)量問題，結(jié)合監(jiān)管需要；建立針對性檢測指標(biāo)；檢測方法適用性強(qiáng)：快速、簡便、準(zhǔn)確；研究樣品有代表性，覆蓋面廣；格式完整規(guī)范方法驗證的內(nèi)容專屬性 正常藥材樣品的比較 HPLC/MS驗證檢測限 檢測成分的結(jié)構(gòu)確證 對照物對照 質(zhì)譜等光譜數(shù)據(jù)比較等陽性樣品的HPLC/MS驗證補(bǔ)充檢驗方法格式項目 檢查 檢測成分方法描述 供試品溶液制備 對照品溶液制備 分析檢測條件

12、結(jié)果判斷 “應(yīng)不得檢出.” “若檢出., 按方法試驗” 烏梅（炙烏梅）WumeiFRUCTUS MUME檢查 （1）取本品2粒，加70%乙醇20ml，超聲提取20分鐘，溶液顏色不得顯墨綠色。若溶液呈墨綠色，則采用下列方法檢查。（2）莧菜紅、亮藍(lán)、日落黃 薄層色譜法 取本品2粒，加70%乙醇20ml，超聲提取20分鐘，取上清液離心，作為供試品溶液。另取莧菜紅、亮藍(lán)、日落黃溶液（國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，標(biāo)示濃度0.5mg/ml，國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心）各1ml，分別加70%乙醇稀釋至5ml，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2005年版一部附錄VI D）試驗，吸取供試品溶液5l，對照品溶液各2l，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-氨水-水（1：3：3：1：1）為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照品色譜的相應(yīng)位置應(yīng)不得檢出相同顏色的斑點。若檢出相同顏色的斑點，則采用下列高效液相色譜法進(jìn)一步檢查。（3）高效液相色譜法 照高效液相色譜法（中國藥典2005年版一部附錄VI B）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相A為甲醇，流動相B為0.02mol/L醋酸銨（冰乙酸調(diào)pH4.0），梯度洗脫程序為：0-45分鐘，流動相A 20%50%；流動相B，8