脈絡通(省稿)課件

1、研究脈絡通顆粒中大孔吸附樹脂殘留量測定的新方法護佑QC小組 武美蓉求索進取護佑眾生質量檢測中心產品概況 脈絡通顆粒是我公司獨家生產的中藥保護品種之一，該方為純中藥制劑 。生產工藝采用了大孔吸附樹脂分離純化技術，這一技術的應用雖增強了該產品的治療效果，但也可能對人體健康產生危害。本次QC活動就緊緊圍繞“研究脈絡通顆粒中大孔吸附樹脂殘留量測定的新方法”展開研究工作 。小 組類 型創(chuàng)新型小 組人 數8人活 動周 期07 .10-08 .03活 動次 數21次活 動出勤率97.6%護佑QC小組注 冊編 號YZJ2007058小組概況小組成員簡介序號姓名性別受教育情況職務組內分工1石晶萍女本科、工程師Q

2、C主管組長、技術指導 2解加揚男碩士研究生質管部長工作協(xié)調、技術指導 3趙沈娟女本科、質量工程師標準研究員副組長、方案實施，資料整理 4武美蓉女本科標準研究員方案實施，論文發(fā)表 5李雪蘭女大專、質量工程師儀器分析員方案實施 6馬軍男大專GMP提升員方案實施 7祖若玉女本科儀器分析員方案實施 8李明男碩士研究生標準研究員方案實施活 動 過 程DCPA研究脈絡通顆粒中大孔吸附樹脂殘留量測定的新方法裂解產物對人體可能產生的危害正己烷抑制中樞神經、刺激皮膚粘膜。致多發(fā)性周圍神經病變。苯強烈的致癌物質，破壞人體的循環(huán)系統(tǒng)和造血機能，導致白血病。甲苯刺激皮膚和粘膜，麻醉中樞神經系統(tǒng)。 二甲苯刺激眼，麻醉中

3、樞神經系統(tǒng)。 苯乙烯刺激和麻醉眼、上呼吸道粘膜。引起阻塞性肺部病變。 二乙基苯刺激眼、粘膜、上呼吸道和皮膚。注：甲苯、二乙基苯：包括鄰、間、對三種P-1確定課題理由一苯乙烯骨架型裂解產物成分復雜，超標的成分會影響藥品質量，危害人體的健康。P-1確定課題理由三 國家“大孔吸附樹脂分離純化中藥提取液的技術要求 ”中僅規(guī)定了苯乙烯骨架型樹脂裂解產物種類和限度，但沒有規(guī)定檢測方法，且文獻也較少有報導。須采用有效、可靠的方法進行檢驗。理由二為了使該產品載入中國藥典、走向國際市場，增加該產品的大孔吸附樹脂裂解產物檢測勢在必行。有效可靠裂解產物檢測方法的目標值裂解產物峰的分離度R 3.0重復性試驗的RSD5

4、.0%準確度(方法的回收率)80%110%P-2確定目標頂空進樣示意圖1.術語解釋P-3提出方案并確定最佳方案高靈敏度地分析揮發(fā)成分不揮發(fā)成分不導入GC，GC的污染降至最小限度，便于維護。高沸點成分不導入氣相色譜儀(GC)，分析時間縮短2頂空進樣法優(yōu)點P-3提出方案并確定最佳方案4. 方案的分析與評估序號方案內容分析評估人評 估綜合得分有效性（40）難易度(30)經濟性(30)1溶液直接進樣GC法適合低沸點、組分少、揮發(fā)性成少的溶液型供試品石晶萍16192156解加揚172218趙沈娟131519武美蓉141822李雪蘭162115馬 軍152520祖若玉182025李 明1920204. 方

5、案的分析與評估序號方案內容分析評估人評 估綜合得分有效性（40）難易度(30)經濟性(30)2靜態(tài)頂空GC法 A.液體或固體樣品于頂空瓶中，使其中的揮發(fā)性成分逸出，在達到氣-液或氣-固平衡后采集蒸汽相進行氣相色譜分析B.可用于沸點、極性相差大、多組分分析石晶萍37292790解加揚332827趙沈娟352830武美蓉332728李雪蘭352625馬 軍313129祖若玉372524李 明3930265.確定方案的采用順序 2 靜態(tài)頂空GC法 3 動態(tài)頂空GC法 1 溶液直接進樣GC法 No問題點對策目標措施負責人完成時間1色譜條件查閱資料，聯系實際,總結近幾年的工作經驗確定檢測所用的色譜柱、流

6、速、柱溫、處理方法等基本色譜條件專人負責,集體討論 趙沈娟武美蓉 07.11 2單因素試驗對比試驗確定分離效果好的柱溫、性質穩(wěn)定的平衡溫度及氣液平衡達到穩(wěn)態(tài)的最佳平衡時間選擇各因素的若干個水平進行測試,選擇最佳值馬 軍祖若玉07.113條件組合試驗正交試驗在單因素試驗的基礎上尋找優(yōu)化組合選用4因素3水平正交表,綜合評價 李 明李雪蘭07.12P-4 制定對策表No問題點對策目標措施負責人完成時間4系統(tǒng)適用性系統(tǒng)適用性試驗分離度R 3.0對照品溶液連續(xù)進樣至少6次，考查R值趙沈娟李雪蘭07.125方法學考察精密度試驗對照品峰面積的相對標準偏差RSD 5.0同一供試品至少連續(xù)進樣5次，考查色譜峰面

7、積的相對標準偏差（RSD）祖若玉武美蓉078.01P-4 制定對策表No問題點對策目標措施負責人完成時間6方法學考察重復性試驗供試品各裂解物結果的RSD均 5.0同一批號的供試品同一人同一儀器平行操作6份，考查裂解產物測定結果的RSD李 明馬 軍08.017確定線性范圍及方程相關系數R不小于0.990配制6個系列濃度對照品溶液，選擇適當的曲線擬和類型進行確定馬 軍趙沈娟08.028準確度加樣加收率應為80%110%已知檢測結果的供試品加入適量的對照品溶液平行操作6份，考查方法回收率馬 軍趙沈娟08.02P-4 制定對策表過程決策設計圖P-4 制定對策表按藥典及ICH等規(guī)定試驗確定基本色譜條件色

8、譜柱單因素試驗條件組合試驗柱溫A平衡溫度B平衡時間C準確度Y%分離度R%柱溫模式查閱資料、結合經驗確定研究脈絡通顆粒中大孔吸附樹脂殘留量測定的新方法確定影響色譜分離效果及檢測量的參數及組合系統(tǒng)適用性（分離度R）方法學驗證（精密度、線性、重復性、回收率穩(wěn)定性）護佑QC小組6.確認 效果C7.鞏固措施8.總結與今后打算A目錄1.確定課題2.設定目標3.提出方案并確定最佳方案4.制定對策表P5.按對策表實施D多組分的裂解產物，極性不同D -1查閱資料正己烷極 性苯甲苯二甲苯苯乙烯二乙基苯裂解產物沸點差距大：D -1查閱資料注：甲苯、二乙基苯以鄰、間、對和計算1. 柱溫的選擇取混合對照品溶液和正丙醇內

9、標溶液各1.0 ml置于10 ml頂空瓶中，制成對照品溶液，密封，混勻。于瓶溫90平衡30min，頂空進樣量1 ml，分別用下述條件檢測：色譜條件初始T維持時間升溫速率維持時間升溫速率維持時間程序升溫一60 2min2 /min85 2min 2 0 /min220 5min程序升溫二601min 2 /min92 0.5min10 /min200 6min程序升溫三700.5min2 /min90 1min 10 /min200 5minD -2單因素試驗1.正己烷2.苯3.正丙醇4.甲苯5.二甲苯6.苯乙烯7.二乙基苯 未分離D -2單因素試驗123456712345671234567程序

10、升溫一色譜圖D -2單因素試驗1.正己烷2.苯3.正丙醇4.甲苯5.二甲苯6.苯乙烯7.二乙基苯 程序升溫二色譜圖3124567D -2單因素試驗程序升溫三色譜圖1.正己烷2.苯3.正丙醇4.甲苯5.二甲苯6.苯乙烯7.二乙基苯 1234567低準確度 因此，可以選擇程序升溫二:初始溫度為60 ，保持1 min，以每分鐘2 的速度升溫至92 ，保持0.5 min，再以每分鐘10 的速度升溫至200 ，保持6 min。為色譜柱溫條件。2. 氣液平衡溫度選擇 在頂空分析法中，被測物質的色譜峰與其蒸氣壓成正式比，一般情況下，平衡溫度越高，被測物質的蒸氣壓越高，頂空氣體的濃度越高，分析靈敏度也越高。然

11、而，過高的溫度會造成頂空氣體壓力過高，進樣針離開樣品瓶的瞬間針尖的壓力降為大氣壓，勢必會造成一部分樣品從針尖逸失，反而使靈敏度下降，且增大了分析誤差。 本實驗選擇了85 、90 、100 、110 四個溫度進行實驗，每個條件下平行進樣三次。結果見下表D -2單因素試驗2. 氣液平衡溫度選擇T 對照品與內標物峰面積比值正己烷苯甲苯二甲苯苯乙烯二乙基苯 850.45 0.321.581.651.461.70900.42 0.331.631.731.531.881000.21 0.261.641.641.561.921100.15 0.221.621.701.541.95 3. 氣液平衡時間的選擇取

12、對照品溶液，密封，混勻。于瓶溫90分別平衡15、20、25、30、35、40min，頂空進樣量1 ml，結果各裂解產物在15 min 25min時峰面積與內標物峰面積比值隨時間增大而增大，30 min后基本保持不變，即30min以后氣液基本達到平衡。（見圖） D -2單因素試驗在既定的色譜柱、流速條件下,上面3個因素單獨試驗找出了相對最優(yōu)的水平(位級)值,但因裂解產物成分復雜，組合起來互相影響較大。D -3條件組合試驗運用正交表尋找最佳色譜條件苯準確度苯乙烯二乙基苯分離度最佳組合A2B2C2L9(34)因素試驗結果A柱溫B平衡溫度C平衡時間min準確度Y 望大分離度R望大水平1程序升溫一852

13、52程序升溫二90303程序升溫三10035試驗編號111178.6 2212295.3 2313391.9 2421392.4 12522198.8 12623285.4 12731282.8 6832381.3 6933185.4 6Y水平和K1265.8 253.8 262.8 K2276.6 275.4 276.9 791.9 60K3249.5 258.6 265.6 此值為關鍵指標,在滿足Y盡可能選優(yōu)的基礎上選R此值雖望大,實際上大于3以是差異不大(即三次合計大于9)Y平均K1/388.684.687.6 K2/392.291.892.3K3/383.2 86.2 88.5 優(yōu)水平

14、2 2 2 極差R9.0 7.2 4.7 R水平和K16.0 20.0 20.0 K236.0 20.0 20.0 K318.0 20.0 20.0 Y平均K1/326.7 6.7 K2/3126.7 6.7 K3/36.0 6.7 6.7 優(yōu)水平2 極差R10.000柱溫：程序升溫二，初始溫度為60 ，保持1 min，以每分鐘2 的速度升溫至92 ，保持0.5 min，再以每分鐘10 的速度升溫至200 ，保持6 min。 平衡溫度：90 平衡時間：30min 綜合評價指標D -3條件組合試驗取對照品溶液及含對照品、內標物的供試品溶液，分別頂空進樣測定R值。D -4系統(tǒng)適用性RetTime

15、k Area Height Symm. Width Plates Resol Select min pA*s pA min ution ivity -|-|-|-|-|-|-|-|- 7.691 1.48 6.29829 6.20662e-1 0.75 0.1467 15233 - - 8.268 1.67 44.22839 8.62858 0.88 0.0767 64429 3.04 1.13 正己烷 13.045 3.21 24.44970 3.22187 0.94 0.1175 68281 28.91 1.92 13.790 3.45 35.48837 5.03207 0.99 0.10

16、92 88401 3.86 1.07 苯 16.561 4.35 108.28754 13.81196 0.93 0.1217 102646 14.11 1.26 正丙醇（內標） 17.284 4.58 176.36856 32.17123 0.99 0.0850 229055 4.11 1.05甲苯 20.546 5.63 187.77402 15.24329 0.00 0.5333 8222 6.20 1.23 二甲苯 21.989 6.10 9.09254 2.05657 0.96 0.0675 587913 2.82 1.08 23.590 6.62 165.84439 43.1283

17、5 1.03 0.0583 905987 14.95 1.08 苯乙烯 24.620 6.95 209.43953 36.64619 0.00 0.0533 1180528 10.84 1.05 二乙基苯對照品色譜圖R3.0RetTime k Area Height Symm. Width Plates Resol Select min pA*s pA min ution ivity -|-|-|-|-|-|-|-|- 7.612 1.46 20.29181 2.61222 0.80 0.1158 23927 - - 8.202 1.65 18.16790 3.87212 0.95 0.070

18、8 74289 3.71 1.13 正己烷 12.990 3.19 882.74316 106.11767 0.00 0.1133 72778 30.54 1.94 13.696 3.42 28.84378 4.10805 0.95 0.1092 87205 3.73 1.07 苯 16.474 4.32 70.48396 8.93215 0.93 0.1217 101564 14.14 1.26 正丙醇（內標） 17.194 4.55 138.14931 25.00896 0.98 0.0858 222316 4.08 1.05 甲苯 20.546 5.63 129.79469 10.137

19、06 0.00 0.5467 7826 6.23 1.24 二甲苯 21.938 6.08 5.95435 1.30555 0.95 0.0692 557319 2.65 1.08 23.552 6.60 112.18333 29.31713 1.04 0.0575 929496 14.98 1.09 苯乙烯 24.620 6.95 119.61139 20.91699 0.00 0.0533 1180544 11.32 1.0二乙基苯含對照品與內標物的供試品色譜圖R3.0D -4系統(tǒng)適用性1.精密度試驗 取對照品溶液，進樣6次，測定色譜峰面積，計算各對照品峰面積與內標物峰面積比值的RSD。名

20、稱對照品與內標物峰面積比值平均RSD%123456正己烷0.40840.41090.40870.40290.40470.41260.40800.9苯0.32820.32820.32830.33540.33440.32820.33041.0甲苯1.62871.62431.62131.67081.65421.62421.63732.3二甲苯1.69111.68691.67981.73141.71841.67491.69711.3苯乙烯1.53151.51981.51671.56031.55221.51861.53321.2二乙基苯1.87951.86631.84921.88021.88931.82

21、941.86561.2D -5方法學考察RSD5.0，表明儀器的精密度良好。 2.重復性試驗隨機抽取一批樣品，連續(xù)進樣6次，按上述色譜條件進行檢測分析，除未檢出正己烷、苯、二甲苯外，共余裂解產物結果如下：名稱對照品與內標物峰面積比值(10-6%) 平均RSD%123456甲苯8.889.289.809.439.769.589.463.6苯乙烯9.8910.99.889.8510.29.6910.14.4二乙基苯33.330.431.932.831.330.831.83.6RSD5.0%,表明方法的重復性良好。 D -5方法學考察3.線性關系考察取各對照品，制成6個系列濃度，頂空進樣，以各對照品

22、的峰面積與內標物正丙醇峰面積之比F為縱坐標Y，各對照品濃度C為橫坐標，分別進行線性回歸，結果如下：名稱回歸方程r濃度范圍/gmL-1正己烷Y=1.6357X-0.043310.99930.30480.6858苯Y=3.9004X+0.020780.99470.071120.1600甲苯Y=3.8555X+0.096270.99590.33590.7558二甲苯Y=3.8270X+0.091180.99620.32260.7258苯乙稀Y=3.1941X+0.30910.99580.35170.7913二乙基苯Y=4.4081X+0.20770.99280.32340.7276注：二甲苯、二乙基

23、苯為鄰、間、對3峰，以峰面積和計算。相關系數r0.99，表明各對照品溶液線性關系良好。 D -5方法學考察名稱回收率平均RSD%123456正己烷91.395.489.793.294.896.293.42.7苯104.099.8102.0101.7101.797.1101.02.3甲苯97.399.297.494.194.290.495.43.3二甲苯92.393.992.790.090.186.590.92.9苯乙烯90.591.495.896.193.291.093.02.6二乙基苯85.684.286.182.188.586.585.52.54.回收率試驗取已知檢測結果的本品約0.2g，

24、精密稱定，置10ml頂空瓶中，精密加入對照品溶液與內標溶液1ml，制成所需溶液，測得目標物峰面積與內標物峰面積比值，計算回收率：D -5方法學考察回收率82105，表明方法的準確性良好。D -5方法學考察回收率試驗%管狀圖分離度R3.0重復性試驗RSD5.0%回收率試驗85%102%驗證結論我們達到目標了！護佑QC小組7.鞏固措施8.總結與今后打算A目錄1.確定課題2.設定目標3.提出方案并確定最佳方案4.制定對策表P5.按對策表實施D6.確認 效果C1.重復性試驗效果檢查采用新方法測定3批樣品的裂解產物含量，測得量如下： 效果確認效果檢查批號名稱結果(10-5%)平均(10-5%)RSD%0

25、6012001正己烷00000/苯0.130.130.120.130.133.9甲苯1.21.31.21.21.24.1二甲苯0.180.160.170.170.174.8苯乙稀2.62.42.62.62.63.9二乙基苯2.93.13.0 2.93.0 3.206011901正己烷0.180.170.2 0.180.2 2.8苯000.0 00.0 /甲苯0.670.680.630.650.663.4二甲苯0.670.680.630.650.663.4苯乙稀1.21.11.21.21.24.3二乙基苯4.84.64.34.54.64.606041401正己烷4.84.74.84.84.81苯

26、0.450.450.440.420.443.2甲苯1.11.11.21.11.14.4二甲苯0.840.850.790.850.833.5苯乙稀1.11.0 1.0 1.0 1.0 4.9 二乙基苯3.12.9 3.1 3.0 3.0 3.2 重復性試驗效果檢查錐形圖RSD5.0%RSD%2.回收率試驗效果檢查 采用新方法對3批樣品進行回收率計算,結果如下： 效果確認效果檢查批號名稱結果%平均%12345606012001正己烷96.391.593.489.998.596.294.3苯102.1 100.498.5 102.597.695.899.5甲苯90.594.89894.795.691

27、.494.2二甲苯92.393.992.790.0 90.186.590.9苯乙烯90.591.496.192.593.296.4 93.4二乙基苯87.884.298.582.186.986.587.706011901正己烷97.692.888.890.195.492.692.9苯104.0 100.4 105.1 101.7 101.7 97.1 101.7甲苯97.3 90.9 97.4 94.1 94.4 98.1 95.4二甲苯89.6 93.9 92.7 90.4 93.8 86.5 91.2苯乙烯92.7 93.5 88.8 89.7 90.0 88.3 90.5二乙基苯84.0 86.4 84.6 85.5 85.2 82.4 84.706041401正己烷87.692.898.894.885.493.192.1苯101.1 99.4 103.4 100.