PCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的規(guī)范化設(shè)置

1、PCR 基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的規(guī)矩化設(shè)置為避免污染，必需嚴(yán)格遵循臨床基因擴(kuò)增試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置臨床基因擴(kuò)增試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室。 臨床基因擴(kuò)增試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室四個(gè)隔開的工作區(qū)域中每一區(qū)域都須有專用的儀器設(shè)備。各區(qū)域都必需有明確的標(biāo)記，以避免設(shè)備物品如加樣器或試劑等從其各自的區(qū)域內(nèi)移出從而造成不同的工作區(qū)域間設(shè)備物品發(fā)生混淆。進(jìn)入各個(gè)工作區(qū)域必需嚴(yán)格遵循單一方向順序，即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增反映混合物配制和擴(kuò)增區(qū)（簡(jiǎn)稱擴(kuò)增區(qū)）至產(chǎn)物分析區(qū)，避免發(fā)生交叉污染。在不同的工作區(qū)域應(yīng)使用不同顏色或有鮮明區(qū)別標(biāo)志的工作服，以便于辨別。此外，當(dāng)工作者離開工作區(qū)時(shí)，不得將各區(qū)特定的工作服帶出。 清潔方法不當(dāng)也

2、是污染發(fā)生的一個(gè)主要原因，因此實(shí)驗(yàn)室的清潔應(yīng)按試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)至擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進(jìn)行。不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)域應(yīng)有其各自的清潔用具以防止交叉污染。（一）試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)下述操作在該區(qū)進(jìn)行：貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反映混合液的制備。貯存試劑和用于標(biāo)本制備的材料應(yīng)直接運(yùn)送至試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)，不能經(jīng)過(guò)產(chǎn)物分析區(qū)。在打開含有反映混合液的離心管或試管前，應(yīng)將其快速離心數(shù)秒。試劑原材料必需貯存在本區(qū)內(nèi)，并且在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。當(dāng)貯存試劑溶液經(jīng)檢查可用后，應(yīng)將其分裝貯存?zhèn)溆?，避免由于?jīng)常打開反映管吸液而造成污染。含反映混合液的離心管或試管在冰凍前都應(yīng)快速離心數(shù)秒。大多數(shù)用于擴(kuò)增的試劑都應(yīng)冰凍貯存。

3、為避免因單次反映取液而頻繁的凍融主貯存試劑，應(yīng)分裝冰凍貯存試劑溶液。貯存試劑的分裝體積根據(jù)通常在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)一次測(cè)定所需的擴(kuò)增反映數(shù)來(lái)決定。主反映混合液的組成成份尤其是聚合酶的適用性和穩(wěn)定性經(jīng)過(guò)預(yù)試驗(yàn)來(lái)檢查，評(píng)判結(jié)果必需有書面報(bào)告。關(guān)于于熱啟動(dòng)技術(shù)（在第一個(gè)高溫變性步驟后加入酶），聚合酶也可不包含在主反映混合液中。在整個(gè)本區(qū)的實(shí)驗(yàn)操作進(jìn)程中，操作者必需戴手套，并且經(jīng)常更換。此外， 操作中使用一次性帽子也是一個(gè)有效地防止污染的措施。 嚴(yán)禁用嘴吸取液體， 加樣器和吸頭等必需經(jīng)高壓處理。工作結(jié)束后必需立即關(guān)于工作區(qū)進(jìn)行清潔。本工作區(qū)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)表面應(yīng)可耐受 由于紫外照射的距離和能量關(guān)于去污染的效果非常關(guān)鍵，

4、因此可使用可移動(dòng)紫外 燈（254nm），6090cmbp，關(guān)于紫外線損傷不敏感，因此紫外照射擴(kuò)增片段必需延長(zhǎng)照射時(shí)間，最好是照射過(guò)夜。實(shí)驗(yàn)室及其設(shè)備的使用必需有日常記錄。（二）標(biāo)本制備區(qū)下述操作在該區(qū)進(jìn)行：臨床標(biāo)本的保存，核酸（RNA、NA）提取、貯存RNAcNA）線管燈可用來(lái)確保工作后關(guān)于實(shí)驗(yàn)臺(tái)面的充分照射。 樣本處理關(guān)于核酸擴(kuò)增有很大影響，必需使用有效的核酸提取方法，可在開展臨床標(biāo)本檢測(cè)前關(guān)于提取方法進(jìn)RNAcNARNAcNANAcNARNAcNA制備區(qū)，不得在本區(qū)關(guān)于樣本進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增。（三）擴(kuò)增區(qū)下述工作在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行：NAcNANAcNA（來(lái)自樣本制備區(qū)）的加入和主反映混合液（來(lái)自

5、試劑貯存和制備區(qū)）PCR但必需注意的是，礦物油本身也可能成為一種持續(xù)性的污染源。用過(guò)的加樣器 必需注意清潔消毒。 完成操作及每天工作后都必需關(guān)于實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面進(jìn)行清潔和消毒，紫外照射方法與前面區(qū)域相同。如有溶液濺出，必需處理并且作出記錄。（四）擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)下述操作在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行：擴(kuò)增片段的測(cè)定。 核酸擴(kuò)增后產(chǎn)物的分析方法多種多樣，如膜上或微孔板上探針雜交方法（同位素標(biāo)記或非同位素標(biāo)記）、瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、SouthernPCR-ELISAHC1PCR掉。用過(guò)的吸頭也必需放至 1mol/L HCl如焚燒。由于本區(qū)有可能會(huì)用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)如溴化乙錠、丙烯酰胺、甲醛或同位素等，故