培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用(上課用)

1、葡萄美酒第一頁(yè)，共五十一頁(yè)。啤酒、果酒、食醋等第二頁(yè)，共五十一頁(yè)。谷氨酸鈉是味精的主要成分第三頁(yè)，共五十一頁(yè)。疫苗卡介苗百白破第四頁(yè)，共五十一頁(yè)。青霉素頭孢霉素紅霉素四環(huán)素第五頁(yè)，共五十一頁(yè)。如何檢測(cè)飲用水、牛奶中的細(xì)菌數(shù)第六頁(yè)，共五十一頁(yè)。微生物技術(shù)微生物：是一切肉眼看不見(jiàn)或看不清楚的微小生物的總稱(chēng)。分類(lèi)微生物病毒細(xì)菌放線菌真菌原生動(dòng)物病毒界原核生物界真菌界原生生物界第七頁(yè)，共五十一頁(yè)。一、培養(yǎng)基的制備 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工配制而成的適合微生物生長(zhǎng)繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。怎么制備培養(yǎng)基 ？作用：用以培養(yǎng)、分離、鑒定和保存各種微生物第八頁(yè)，共五十一頁(yè)。培養(yǎng)基的制備包括滅菌培養(yǎng)基的配制

2、培養(yǎng)基的制備是研究和利用微生物的最基本技術(shù)之一關(guān)鍵：準(zhǔn)確稱(chēng)量、調(diào)準(zhǔn)PH、規(guī)范制作棉塞、徹底滅菌第九頁(yè)，共五十一頁(yè)。 一般（基本）成分：碳源、氮源、水、微量元素、無(wú)機(jī)鹽特殊成分：生長(zhǎng)因子（包括維生素、氨基酸、嘌呤、 嘧啶等,牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）2.pH、滲透壓的需求: 1.培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分 細(xì) 菌： pH 7.08.0 放線菌：pH 7.58.5 酵母菌： pH 3.86.0 霉 菌：pH 4.05.8 藻 類(lèi)： pH 6.07.0 原生動(dòng)物： pH 6.08.0初始pH第十頁(yè)，共五十一頁(yè)。 （1）按物理狀態(tài)分：固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。 （2）按功能分：選擇培養(yǎng)基和鑒別培

3、養(yǎng)基。 （3）按成分分：天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。3.種 類(lèi)：第十一頁(yè)，共五十一頁(yè)。 不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方 不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、氮源、 無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子（特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)）等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿(mǎn)足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、以及滲透壓等要求。第十二頁(yè)，共五十一頁(yè)。1.無(wú)菌技術(shù)的概念 無(wú)菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。成功地培養(yǎng)微生物的關(guān)鍵。 二、滅菌第十三頁(yè)，共五十一頁(yè)。為什么要滅菌？配制培養(yǎng)的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和容器等中含有不同的生物，所以配置好后必須立即滅菌，及時(shí)殺死培養(yǎng)基中的微生物，同時(shí)防止微生物大量繁殖造成的培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分的改變第十四頁(yè)，共五十一

4、頁(yè)。（1）消毒定義：用較溫和的物理或化學(xué)的方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包括芽孢）2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別 （2）滅菌的定義：用較強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外的所有微生物，包括芽孢第十五頁(yè)，共五十一頁(yè)。1.灼燒滅菌滅菌的方法：高溫滅菌第十六頁(yè)，共五十一頁(yè)。（2 ）干熱滅菌：160-170 下加熱1-2h。（3）高壓蒸氣滅菌0.11MPa、121 下維持20-30min.第十七頁(yè)，共五十一頁(yè)。 1.無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？思考第十八頁(yè)，共五十一頁(yè)。 1.無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？ 答：無(wú)菌

5、技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。思考第十九頁(yè)，共五十一頁(yè)。 2.請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。 （1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿 （2） 玻璃棒、試管、燒瓶和吸管 （3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手第二十頁(yè)，共五十一頁(yè)。 2.請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。 （1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿 （2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管 （3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手 答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。第二十一頁(yè)，共五十一頁(yè)。（三）實(shí)驗(yàn)操作（1）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用以培養(yǎng)細(xì)菌）第二十二頁(yè)，共五十一頁(yè)。（三）實(shí)驗(yàn)操作（一

6、）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用以培養(yǎng)細(xì)菌）第二十三頁(yè)，共五十一頁(yè)。1計(jì)算、稱(chēng)量2溶化3調(diào)pH： pH7.4 pH7.64分裝：分裝過(guò)程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角燒瓶的量均為其容積的1/5（不超過(guò)三角燒瓶容積的一半為宜。）5加塞6包扎操作步驟第二十四頁(yè)，共五十一頁(yè)。7滅菌: 將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中或試管內(nèi)，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為0.11MPa、溫度為121.第二十五頁(yè)，共五十一頁(yè)。 8倒平板: 待培養(yǎng)基冷卻到50 -60 左右時(shí)，在酒精燈附近倒平板或制成斜面。（操作見(jiàn)課本第6頁(yè)）2d后觀察平板，無(wú)雜菌污染才可用來(lái)接種。第二

7、十六頁(yè)，共五十一頁(yè)。倒平板技術(shù)將滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手撥出棉塞。1234第二十七頁(yè)，共五十一頁(yè)。倒平板技術(shù)右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通過(guò)火焰。1234第二十八頁(yè)，共五十一頁(yè)。倒平板技術(shù)1234用左手拇指和食指將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。第二十九頁(yè)，共五十一頁(yè)。倒平板技術(shù)1234等待平板冷卻凝固，大約需510min。然后，將平板倒過(guò)來(lái)放置，使皿蓋在下，皿底在上。第三十頁(yè)，共五十一頁(yè)。9無(wú)菌檢查： 將滅菌的培養(yǎng)基放入37的溫室中培養(yǎng)2448小時(shí)，以檢查滅菌是否徹底。第三十一頁(yè)，共五十一頁(yè)。 1

8、.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？問(wèn)題討論第三十二頁(yè)，共五十一頁(yè)。 1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？ 答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。問(wèn)題討論第三十三頁(yè)，共五十一頁(yè)。 2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？第三十四頁(yè)，共五十一頁(yè)。 2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？ 答：通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。第三十五頁(yè)，共五十一頁(yè)。3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？第三十六頁(yè)，共五十一頁(yè)。3.平板冷凝后，為什么要將

9、平板倒置？ 答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。第三十七頁(yè)，共五十一頁(yè)。 4.在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？第三十八頁(yè)，共五十一頁(yè)。 4.在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。第三十九頁(yè)，共五十一頁(yè)。根據(jù)物理性質(zhì)分固體培養(yǎng)基用于微生物的分離、純化、培養(yǎng)、

10、保存、計(jì)數(shù)半固體培養(yǎng)基觀察微生物的運(yùn)動(dòng)液體培養(yǎng)基常用于工業(yè)生產(chǎn)、各種生理、代謝研究和獲得大量菌體。根據(jù)化學(xué)成分分合成培養(yǎng)基成分明確,常用于分類(lèi),鑒定天然培養(yǎng)基成分不明確,常用于工業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基的種類(lèi)第四十頁(yè)，共五十一頁(yè)。根據(jù)用途分選擇培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng),促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng),如：加高濃度的食鹽,抑制多種細(xì)菌生長(zhǎng),分離到金黃色葡萄球菌鑒別培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品,用以鑒別不同種類(lèi)的微生物,如：伊紅和美藍(lán),和大腸桿菌的代謝產(chǎn)物結(jié)合,使菌落呈深紫色,并帶有金屬光澤,可以用來(lái)鑒別大腸桿菌第四十一頁(yè)，共五十一頁(yè)。選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基 分

11、離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基 分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無(wú)氮培養(yǎng)基 分離固氮菌不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基 分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基 分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞 加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培 養(yǎng)基 分離雜交瘤細(xì)胞第四十二頁(yè)，共五十一頁(yè)。在配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)該盡量利用廉價(jià)且易于獲得的原料酵母菌單細(xì)胞蛋白（工業(yè)生產(chǎn)）酵母菌單細(xì)胞蛋白是一種蛋白質(zhì)還是菌體本身？是酵母菌第四十三頁(yè)，共五十一頁(yè)。培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用實(shí)驗(yàn)：探究不同培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的 優(yōu)勢(shì)菌群第四十四頁(yè)，共五十一頁(yè)。不同微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)要求不一樣，在相應(yīng)的培養(yǎng)基上可形成大小、形態(tài)各異的菌落菌落：?jiǎn)蝹€(gè)的菌體或孢子在固體培養(yǎng)基上大量繁殖會(huì)形成一個(gè)肉眼可見(jiàn)的、具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的細(xì)胞群體第四十五頁(yè)，共五十一頁(yè)。細(xì)菌菌落第四十六頁(yè)，共五十一頁(yè)。大腸桿菌菌落第四十七頁(yè)，共五十一頁(yè)。菌落的特征濕潤(rùn)、粘稠、易用接種環(huán)挑起，菌落各部位顏色一致，如： 霉菌菌落比較較疏松，唱呈絨毛狀、絮狀或者蜘蛛網(wǎng)狀，一般比細(xì)菌菌落大幾倍甚至是幾十倍。第四十八頁(yè)，共五十一頁(yè)。微生物的篩選C：N=1