ISO15189分析中質(zhì)量控制

1、ISO 15189實驗室認(rèn)可準(zhǔn)則 -介紹15189：2007文件5.5-5.6部分報告人：付紅偉醫(yī)大總醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗科2013.05.285.技術(shù)要求求5.1人員5.2設(shè)施和環(huán)環(huán)境條件件5.3實驗室的的設(shè)備5.4檢驗前程程序5.5檢驗程序序5.6檢驗程序序的質(zhì)量量保證5.7檢驗后程程序5.8結(jié)果報告告25.5檢驗程序序-5.5.1實驗室應(yīng)應(yīng)當(dāng)制定定符合實實驗室工工作要求求和檢驗驗要求的的檢驗程程序，包包括選擇擇和分取取樣品程程序。權(quán)威教科科書、期期刊發(fā)表表的檢驗驗程序，或國際際、國內(nèi)內(nèi)及地區(qū)區(qū)性指南南，是首首選檢驗驗程序。如果采用用實驗室室內(nèi)部程程序，必必須對其其預(yù)期應(yīng)應(yīng)用進行行適當(dāng)驗驗證并完完

2、全文件件化。要點：檢檢驗程序序的要求求3只有經(jīng)過過驗證確確認(rèn)適合合預(yù)期應(yīng)應(yīng)用的檢檢驗程序序，實驗室才才能采用用。驗證證應(yīng)當(dāng)涵涵蓋所有有應(yīng)用范范圍的要要求。實實驗室應(yīng)應(yīng)當(dāng)記錄錄驗證結(jié)結(jié)果和采采用的程程序。在應(yīng)用于于醫(yī)學(xué)檢檢驗之前前，選擇擇的檢驗驗方法和和程序應(yīng)應(yīng)當(dāng)經(jīng)過過驗證并并得到滿滿意的驗驗證結(jié)果果。實驗驗室主任任或其指指定人員員應(yīng)當(dāng)對對檢驗程程序進行行最初的的和定期期的審核核。審核核通常每每年進行行一次。審核應(yīng)應(yīng)當(dāng)記錄錄。理解要點點：檢驗驗程序的的確認(rèn)， 臨床床驗證， 定期期評審45.5檢驗程序序-5.5.25.5檢驗程序序-5.5.3所有程序序應(yīng)當(dāng)采采用實驗驗室人員員能夠普普遍理解解的語種

3、種文件化化且置放放在工作作區(qū)域以以方便相相關(guān)人員員使用。卡片式文文件或類類似的概概述關(guān)鍵鍵信息的的系統(tǒng)，允許作作為一種種在工作作臺面使使用的快快速參考考資料，但是需需有完整整的手冊冊作為參參考。卡卡片式文文件或類類似系統(tǒng)統(tǒng)應(yīng)當(dāng)與與完整手手冊相符符合。作業(yè)程序序應(yīng)當(dāng)全全部或部部分以制制造商的的使用說說明書為為基礎(chǔ)，但是，說明書書需要符符合5.5.1和5.5.2；且采用用實驗室室人員能能夠普遍遍理解的的語言編編寫的實實驗室操操作程序序。任何改動動都需要要進行審審核并記記錄。檢檢驗試劑劑盒的每每一個涉涉及主要要試劑或或作業(yè)程程序的新新改變，都應(yīng)當(dāng)當(dāng)對其性性能和是是否適用用預(yù)期用用途進行行驗證。55.

4、5檢驗程序序-5.5.3具體文件件內(nèi)容-1除了文件件控制識識別外，作業(yè)程程序文件件應(yīng)當(dāng)包包括以下下內(nèi)容：檢驗?zāi)康牡?；檢驗程序序的原理理；性能指標(biāo)標(biāo)（如線線性、精精密度、以測量量不確定定度表示示的準(zhǔn)確確度、檢檢測極限限、測量量區(qū)間、測量可可靠性、敏感性性和特異異性等）；標(biāo)本種類類（如血血漿、血血清、尿尿液）；容器與添添加物；所需的儀儀器和試試劑；校正程序序（測量量的可追追溯性）；程序步驟驟；65.5檢驗程序序-5.5.3具體文件件內(nèi)容-2質(zhì)量控制制程序；干擾（例例如脂血血、溶血血、高膽膽紅素血血）和交交叉反應(yīng)應(yīng)；計算結(jié)果果的原理理，包括括測量不不確定度度；生物參考考區(qū)間；患者檢驗驗結(jié)果的的可報告

5、告區(qū)間；警戒值臨界值值；實驗室的的結(jié)果解解釋；安全防護護；潛在的誤誤差來源源。7試劑性能能指標(biāo)評評價準(zhǔn)確度驗驗證精密度驗驗證線性范圍圍驗證參考范圍圍制定干擾實驗驗驗證8準(zhǔn)確度驗驗證回收實驗驗準(zhǔn)確度評評估資料料是評價價檢測系系統(tǒng)有效效性的重重要依據(jù)據(jù)。定量量檢測方方法的回回收實驗驗是評估估準(zhǔn)確度度的方法法之一，用于評評估定量量檢測方方法準(zhǔn)確確測定加加入純分分析物的的能力，結(jié)果用用回收率表示。910斤蘋果2斤蘋果？10回收實驗驗具體步步驟回收實驗驗數(shù)據(jù)處處理及結(jié)結(jié)果報告告11實例分析析-112基礎(chǔ)樣本基礎(chǔ)樣本+C.fas基礎(chǔ)樣本+高值質(zhì)控項目第一次第二次第三次均值第一次第二次第三次均值第一次第二次

6、第三次均值TP68706868.67 73737373.00 73727573.33 ALB42444242.67 47474546.33 46464746.33 GLO26262626.00 26262826.67 27262827.00 ALT18191818.33 28282828.00 30313130.67 AST21212020.67 32323131.67 37363636.33 ALP102103102102.33 125125126125.33 124123125124.00 GGT16171716.67 27272827.33 40414140.67 LDH15515615

7、6155.67 183181182182.00 184185186185.00 測定濃度加入濃度回收濃度回收率基本樣本分析樣本1分析樣本2樣本制備備：基本樣本本：自自制基質(zhì)質(zhì)血清0.9mL+超純凈水水0.1mL分析樣本本1：自制基基質(zhì)血清清0.9mL+ C.FAS定標(biāo)液0.1mL分析樣本本2：自制基基質(zhì)血清清0.9mL+高值指控控血清0.1mL分別對上上述三種種樣本連連續(xù)測定定三次求求均值，并將數(shù)數(shù)值填入入下述表表格13生化分析儀準(zhǔn)確度驗證試驗項目：血糖 GLU單位：mmol/L驗證方法：回收實驗儀器Roche 7600試劑批號658081標(biāo)準(zhǔn)液批號161454操作者付紅偉審核者王倩測定濃度加

8、入濃度回收濃度回收率%基礎(chǔ)樣本4.67 分析樣本15.97 1.11 1.30 117.12 分析樣本26.23 1.50 1.56 104.00 平均回收率%110.56 比例系統(tǒng)誤差%10.56 TEa/25%可接受性判斷：比例系統(tǒng)誤差大于CLIA88允許總誤差的1/2日期：2012-08-06生化分析儀準(zhǔn)確度驗證試驗項目：谷丙轉(zhuǎn)氨酶 ALT單位：U/L驗證方法：回收實驗儀器Roche 7600試劑批號660856標(biāo)準(zhǔn)液批號161454操作者付紅偉審核者王倩測定濃度加入濃度回收濃度回收率%基礎(chǔ)樣本18.33分析樣本1288.679.67111.53 分析樣本230.6711.712.341

9、05.47 平均回收率%108.50 比例系統(tǒng)誤差%8.50 TEa/210%可接受性判斷：比例系統(tǒng)誤差小于CLIA88允許總誤差的1/2驗證日期：2012-08-06結(jié)果報告告精密度驗驗證參考EP5-A文件批內(nèi)精密密度評估估對低值質(zhì)質(zhì)控血清清同一天天內(nèi)連續(xù)續(xù)測定20次，排除除離散點點后求其其均值、SD及CV值與試劑劑說明書書比較，看與試試劑盒標(biāo)標(biāo)注的批批內(nèi)精密密度是否否一致；14項目第1次第2次第3次-第19次第20次均值標(biāo)準(zhǔn)差SD95%置信區(qū)間CV%廠商聲稱CV%結(jié)論TP666666-656666.10 0.79 0.59 0.99 1.19 0.50 精密度欠佳ALB485050-494

10、950.10 1.17 0.87 1.46 2.33 0.90 精密度欠佳ALT414141-403940.60 0.82 0.62 1.03 2.02 2.90 精密度良好AST686968-696967.90 0.79 0.59 0.99 1.16 2.10 精密度良好ALP868686-858686.35 0.99 0.74 1.24 1.14 0.70 精密度欠佳GGT444444-434343.15 0.67 0.50 0.84 1.55 0.50 精密度欠佳LDH165162164-163162162.60 1.23 0.92 1.54 0.76 1.30 精密度良好TBIL23.

11、520.220.6-20.420.420.59 0.73 0.55 0.92 3.57 3.10 精密度良好DBIL14.414.214.6-1414.214.19 0.38 0.29 0.48 2.70 0.85 精密度欠佳批間精密密度驗證證15方法：參考EP5-A文件，對質(zhì)控血清連續(xù)測定5日，每日測定2批次，每批次重復(fù)測定8次，得到80個數(shù)據(jù)，排除離散點后，求其均值、SD及CV值與試劑說明書比較，看與試劑盒標(biāo)注的批間精密度是否一致；項目日期/批次批1-1批1-2批1-8批2-1批2-2批2-7批2-8均值標(biāo)準(zhǔn)差SD 95%置信區(qū)間CV%廠商聲明CV%結(jié)論ALT第一天414240404041

12、4240.73 0.81 0.61 1.01 1.99 3.7精密度良好第二天41414042404139第三天40404042404041第四天42414140414142第五天41414041404241項目日期/批次批1-1批1-2批1-8批2-1批2-2批2-7批2-8均值標(biāo)準(zhǔn)差SD 95%置信區(qū)間CV%廠商聲明CV%結(jié)論AST第一天6463656564646466.46 1.81 1.36 2.26 2.72 3.2精密度良好第二天68696767686967第三天68676868676668第四天65656564636564第五天68696868676668項目日期/批次批1-1批

13、1-2批1-8批2-1批2-2批2-7批2-8均值標(biāo)準(zhǔn)差SD 95%置信區(qū)間CV%廠商聲明CV%結(jié)論ALP 第一天8888888888878787.34 1.05 0.79 1.32 1.21 0.5精密度欠佳第二天86868888878786第三天85858888888786第四天88878889888787第五天85868887878988線性范圍圍驗證-參考EP6-A16樣本號123456低值血清mL1.000.800.600.400.200.00高值血清mL0.000.200.400.600.801.00實例分析析-117方法：參考EP6-A文件要求，選取高濃度和低濃度人血清標(biāo)本，通過

14、倍比稀釋的方式得到6份梯度濃度待測樣本，每樣本重復(fù)測定4次，進行該項目的線性范圍評估項目總膽固醇 TC日期2010/8/7儀器Roche 7600試劑批號標(biāo)準(zhǔn)液批號操作者付紅偉審核者王倩標(biāo)本號測定1測定2測定3測定4均值19.17 9.03 9.06 9.10 9.09 28.02 7.95 7.97 8.00 7.99 36.45 6.65 6.50 6.60 6.55 45.44 5.27 5.31 5.41 5.36 54.03 4.04 4.03 3.98 4.02 62.50 2.46 2.47 2.49 2.48 結(jié)論：本實驗室TC檢測系統(tǒng)在常用醫(yī)學(xué)決定水平區(qū)間內(nèi)具有很好的線性，與

15、試劑盒聲明相符。5.5檢驗程序序-5.5.4檢驗中的的每一個個步驟的的性能指指標(biāo)，應(yīng)應(yīng)當(dāng)與該該作業(yè)程程序的預(yù)預(yù)期用途途相關(guān)。理解要點點：性能參數(shù)數(shù)應(yīng)滿足足和符合合所規(guī)定定的要求求為前提提185.5檢驗程序序-5.5.5生物參考考區(qū)間應(yīng)應(yīng)當(dāng)定期期審核。如果實驗驗室有理理由相信信某個特特定的生生物參考考區(qū)間不不再適合合參考人人群，應(yīng)應(yīng)當(dāng)進行行調(diào)查研研究，如如果需要要的話，采取糾糾正措施施。當(dāng)實驗室室改變檢檢驗程序序或檢驗驗前程序序時，適適當(dāng)時，同樣應(yīng)應(yīng)當(dāng)審核核生物參參考區(qū)間間。理解要點點：必須須驗證；必須定定期審核核195.5檢驗程序序-5.5.6實驗室應(yīng)應(yīng)當(dāng)提供供現(xiàn)有檢檢驗項目目清單，包括相相關(guān)

16、的性性能指標(biāo)標(biāo)，以供供申請檢檢驗者索索取。理解要點點：檢驗驗程序文文件可供供服務(wù)對對象使用用（知情情權(quán)）205.5檢驗程序序-5.5.7如果實驗驗室計劃劃改變某某個檢驗驗程序，其結(jié)果果或結(jié)果果解釋可可能明顯顯不同，在引入入改變之之前，應(yīng)應(yīng)當(dāng)以書書面方式式向申請請檢驗者者解釋含含義。理解要點點：書面面告知；解釋其其含義215.6檢驗程序序的質(zhì)量量保證 5.6.1實驗室應(yīng)應(yīng)當(dāng)設(shè)計計內(nèi)部質(zhì)質(zhì)量控制制系統(tǒng)，以確認(rèn)認(rèn)達到預(yù)預(yù)期的檢檢驗結(jié)果果質(zhì)量。重要的的是，質(zhì)質(zhì)量控制制系統(tǒng)向向?qū)嶒炇沂胰藛T提提供清楚楚、易懂懂的信息息，作為為技術(shù)和和醫(yī)學(xué)決決定的基基礎(chǔ)。理解要點點：實驗驗室應(yīng)建建立內(nèi)部部質(zhì)量控控制體系系2

17、25.6檢驗程序序的質(zhì)量量保證 5.6.2實驗室應(yīng)應(yīng)確定檢檢驗結(jié)果果的不確確定度。應(yīng)當(dāng)考考慮測量量不確定定度的重重要影響響因素，如標(biāo)本本采集、標(biāo)本制制備、標(biāo)標(biāo)本分部部收集、校準(zhǔn)、參考品品、加樣樣量、儀儀器使用用、環(huán)境境條件、標(biāo)本條條件以及及操作者更更換等。理解要點點：建立不確確定度評評價的程程序文件件嘗試進行行關(guān)鍵項項目的不不確定度度評價235.6檢驗程序序的質(zhì)量量保證 5.6.3實驗室應(yīng)應(yīng)當(dāng)設(shè)計計并執(zhí)行行測量系系統(tǒng)校準(zhǔn)準(zhǔn)計劃和和可信度度驗證計計劃，以以確保檢檢驗結(jié)果果可以追追溯到SI單位，或或以一個個自然常常數(shù)或其其他規(guī)定定的標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)作為參參考。如如果以上上都無法法實現(xiàn)，應(yīng)當(dāng)采采用其他他方法驗

18、驗證可信信度，包包括但不不限于以以下方法法：參加適當(dāng)當(dāng)?shù)氖议g間比對計計劃；使用適當(dāng)當(dāng)?shù)?、已已被證明明指示物物質(zhì)特性性的參考考品；以其他程程序檢查查或校準(zhǔn)準(zhǔn)；采用比率率法或相相互測量量法采用相關(guān)關(guān)專業(yè)制制定、規(guī)規(guī)定、證證明的、一致認(rèn)認(rèn)可的標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)或方方法；當(dāng)可追溯溯性由供供應(yīng)商或或制造商商提供時時，將試試劑、程程序或檢檢驗系統(tǒng)統(tǒng)相關(guān)的的可追溯溯性聲明明文件化化。242526275.6檢驗程序序的質(zhì)量量保證 5.6.4實驗室應(yīng)應(yīng)當(dāng)參加加室間質(zhì)質(zhì)量比對對。實驗驗室管理理層應(yīng)當(dāng)當(dāng)監(jiān)控外外部質(zhì)量量評價的的結(jié)果，當(dāng)質(zhì)量控控制標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)沒有實實現(xiàn)時，應(yīng)當(dāng)參參加糾正正措施的的實施。室間比對對計劃應(yīng)應(yīng)當(dāng)真正正符合IS

19、O/IEC Guide 43-1要求。外外部質(zhì)量量評價計計劃應(yīng)當(dāng)當(dāng)盡可能能地提供供模擬患患者標(biāo)本本的臨床床相關(guān)的的質(zhì)控物物，具有有驗證整整個檢驗驗過程（包括檢檢驗前和和檢驗后后程序）的效果果。理解要點點：實驗驗室應(yīng)參參加室間間質(zhì)評285.6檢驗程序序的質(zhì)量量保證 5.6.5如果不能能參加正正式的室室間質(zhì)量量比對計計劃，實實驗室應(yīng)應(yīng)當(dāng)建立立確定（而非評評估）檢檢驗程序序可接受受性的機機制。如如果可行行，該機機制應(yīng)當(dāng)當(dāng)應(yīng)用外外部的質(zhì)質(zhì)控物，例如與與其他實實驗室交交換標(biāo)本本。實驗驗室管理理層應(yīng)當(dāng)當(dāng)監(jiān)控室室間比對對機制的的結(jié)果，參加糾糾正措施施的實施施和記錄錄。理解要點點：無室室間質(zhì)評評，應(yīng)與與其他實

20、實驗室進進行比對對295.6檢驗程序序的質(zhì)量量保證 5.6.6對于采用用不同程程序或儀儀器或在在不同地地點進行行的檢驗驗，應(yīng)當(dāng)當(dāng)明確規(guī)規(guī)定驗證證結(jié)果可可比性的的機制。應(yīng)當(dāng)根根據(jù)檢驗驗程序或或儀器的的特性明明確規(guī)定定驗證的的周期并并實施驗驗證。理解要點點：同一檢測測項目的的不同檢檢測系統(tǒng)統(tǒng)的比對對比對周期期305.6檢驗程序序的質(zhì)量量保證 5.6.7對于參加加室間比比對的結(jié)結(jié)果，實實驗室應(yīng)應(yīng)當(dāng)文件件化、記記錄，適適當(dāng)時，及時采采取措施施。對于于發(fā)現(xiàn)的的問題和和缺陷，應(yīng)當(dāng)采采取措施施并保持持記錄。理解要點點：實驗室應(yīng)應(yīng)文件化化并記錄錄比對活活動對存在的的問題要要求采取取措施并并記錄31方法學(xué)比比對

21、具體體流程321儀器熟悉悉階段2.質(zhì)量控制制分析3方法比對對試驗3.1實驗樣本本的選擇擇3.2實驗樣本本的測定定4初步數(shù)據(jù)據(jù)檢查4.1方法內(nèi)雙雙份數(shù)據(jù)據(jù)的離群群值檢驗驗4.2數(shù)據(jù)作圖圖4.3線性相關(guān)關(guān)的目測測檢查4.4方法間離離群值的的目測檢檢查4.5X值合適范范圍的檢檢驗5線性回歸歸5.1計算5.2分散均勻勻性的目目測檢查查6計算預(yù)期期偏倚及及其可信信區(qū)間6.1線性回歸歸法（當(dāng)當(dāng)數(shù)據(jù)通通過合適適范圍及及均勻離離散度檢檢查時）6.2當(dāng)數(shù)據(jù)未未通過合合適范圍圍及均勻勻離散度度檢查時時，使用用分部偏偏倚法6.3當(dāng)數(shù)據(jù)有有不恒定定（可變變的）精精密度時時，用分分部殘差差計算預(yù)預(yù)期偏倚倚7結(jié)果解釋釋以

22、及內(nèi)內(nèi)部性能能標(biāo)準(zhǔn)比比較33工作組建建議在至至少5個工作日日內(nèi)最少少要分析析完40個患者樣樣本。增增加測定定樣本數(shù)數(shù)及測定定天數(shù)，可以提提高實驗驗的可靠靠性及有有效性。應(yīng)盡可能能使至少少50樣本的的測定結(jié)結(jié)果處于于實驗室室的參考考區(qū)間之之外。如果從一一個患者者得不到到所需的的樣本量量，可以以將兩個個（但不不能多于于兩個）病史相相同，被被測物濃濃度也大大致相近近的患者者標(biāo)本混混合使用用，成為為“微混混合樣本本”。3.1實驗樣本本的選擇擇34分別用兩兩種方法法對待測測標(biāo)本進進行雙份份重復(fù)測測定。指定第一一次測定定順序，按反向向順序檢檢測第二二次（雙雙份）。即：樣樣品可以以按下述述順序進進行，1、2

23、、3、4、5、6、7、8和8、7、6、5、4、3、2、1。對于全部部標(biāo)本，均應(yīng)在在兩小時時內(nèi)測定定完畢。如果可可能，最最好使用用測定當(dāng)當(dāng)天的標(biāo)標(biāo)本。如如果使用用儲存標(biāo)標(biāo)本，儲儲存方式式必須能能確保樣樣本的穩(wěn)穩(wěn)定性，以滿足足參比方方法和待待評方法法的要求求。3.2實驗樣本本的測定定354初步數(shù)據(jù)據(jù)檢查4.1方法內(nèi)雙雙份數(shù)據(jù)據(jù)的離群群值檢驗驗計算每個個方法雙雙份測定定的差值值絕對值值的均值值，取各方法法的平均均絕對差差值的四四倍作為為每個方方法的“可接受受”限如果刪除除的數(shù)據(jù)據(jù)超出一一個，則則需擴大大調(diào)查范范圍，查查找出現(xiàn)現(xiàn)偏差的的原因。如果能能夠找到到問題所所在并能能追蹤到到引起偏偏差的樣樣品，

24、則則應(yīng)替換換這些樣樣品，且且將問題題記錄在在案。判斷有4.2數(shù)據(jù)作圖圖36圖1：重復(fù)檢檢測均值值散點圖圖（試驗驗方法均均值對比比較方法法均值）4.3線性相關(guān)關(guān)目測檢檢測4.4方法間離離群值目目測檢測測374.2數(shù)據(jù)作圖圖4.4方法間離離群值目目測檢測測圖2：均值差差異與二二種方法法的均值值的偏倚倚圖（試驗方方法均值值比較方法法均值）對（試試驗方法法均值+比較方法法均值）/25.2分散均勻勻性的目目測檢查查一般情況況下，如如果r0.975（或r20.95），則可可認(rèn)為X值取值范范圍合適適。如果果根據(jù)測測定數(shù)據(jù)據(jù)算出的的r能滿足上上述要求求，則可可認(rèn)為X的誤差已已被數(shù)據(jù)據(jù)范圍所所抵消。這時就就可用簡簡單的直直線回歸歸來估計計斜率和和截距。如果r20.95，則必須須分析更更多的樣樣品以擴擴大數(shù)據(jù)據(jù)濃度分分布范圍圍，然后后再重新新分析全全部數(shù)據(jù)據(jù)。如果果X的取值范范圍無法法擴大，則可采采用6.2節(jié)中描述述的分部部偏倚法法代替回回歸方法法來評價價平均偏偏倚。384.2X值合適范范圍的檢檢驗395線性回歸歸分析平均Y對平均X值斜率b和截距a的計算公公式如下下：可用以下下方程表表示：其中：6計算預(yù)期期偏倚及及其可信信區(qū)間6.1線性回歸歸法（當(dāng)當(dāng)數(shù)據(jù)通通過適合合范圍和和均勻離離散度的的檢查）40在給定的的醫(yī)學(xué)決決定水平平Xc處的預(yù)期期偏倚（Bc）的估計計值，按按以下公公式計算算：Bc的95%