微生物的培養(yǎng)基一

1、關(guān)于微生物的培養(yǎng)基一第1頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三微生物包括哪五類：病毒細(xì)菌放線菌真菌原生動物特點：結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡單,多數(shù)個體十分微小(o.1mm)的生物的總稱。 通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu).且體內(nèi)一般不含有葉綠素.不能進(jìn)行光合作用. 原核 原生生物界真菌界病毒界真核第2頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三第3頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三病毒 第4頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三SARS病毒 禽流感病毒第5頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三

2、朊病毒（蛋白質(zhì)病毒）第6頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三真菌第7頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三如圖是酵母菌電子顯微鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu)酵母菌和霉菌青霉第8頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三 了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識，進(jìn)行無菌技術(shù)的操作，進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。 一、課題目標(biāo)： 掌握培養(yǎng)基的制備、高壓蒸氣滅菌和平板劃線法等基本操作技術(shù)，熟練、規(guī)范地進(jìn)行無菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。無菌技術(shù)的操作。二、課題重點和難點：三、技能目標(biāo)：第9頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三（2）按培養(yǎng)基的物理形態(tài)分：液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基

3、固體培養(yǎng)基一 基礎(chǔ)知識:（3）按培養(yǎng)基的功能分： P12基礎(chǔ)培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基（1）按培養(yǎng)基的化學(xué)成分分：天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基半合成培養(yǎng)基閱讀課本P8第三段分別說出它們的優(yōu)點、缺點。第10頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都包括哪些成分？答：不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、和氮源、 無機(jī)鹽等營養(yǎng)物質(zhì)。 注： 另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì),例如:生長因子(即細(xì)菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。 第11頁，共40頁，2022年，5月20日，15點

4、3分，星期三第12頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三二 無菌技術(shù)：無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。閱讀P8-P9說出消毒和滅菌有何不同？1、煮沸消毒法:100煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75 下煮30min或 80 下煮15min3、化學(xué)藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒;氯氣消毒水源4、紫外線消毒(1)常用消毒的方法：第13頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三1、灼燒滅菌:2、干熱滅菌：160-170 下加熱1-2h。3、高壓蒸氣滅菌：100kPa、121 下維持15-30min.(2)常用滅菌的方法

5、：第14頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三分類定義方法滅菌法殺滅一切微生物物理法：熱力、輻射、微波、等離子體化學(xué)法：醛類、烷化劑高效消毒法殺滅一切致病微生物紫外線、含氯劑、臭氧、復(fù)配劑等中效消毒法殺滅除芽孢外的致病微生物超聲波、碘類、醇類、酚類低效消毒法殺滅細(xì)菌繁殖體、親脂病毒單鏈季胺鹽、雙胍類、中草藥、金屬離子無菌技術(shù)：第15頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三常識1 無菌技術(shù)包括：（1）對實驗操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行 清潔和消毒 ；（2）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行 滅菌 ；（3）為避免周圍微生物污染，實驗操作應(yīng)在 酒精燈火焰附近

6、旁進(jìn)行；（4）避免已滅菌處理的材料用具與 周圍物品 相接觸。2 消毒方法：（1）日常生活經(jīng)常用到的是 煮沸 消毒法；（2）對一些不耐高溫的液體，則使用 巴氏 消毒法（作簡要介紹）；（3）對接種室、接種箱或超凈工作臺首先噴灑 石炭酸或煤酚皂 等溶液以增強(qiáng)消毒效果，然后使用 紫外線 進(jìn)行物理消毒。（4）實驗操作者的雙手使用 酒精 進(jìn)行消毒；（5）飲水水源用 氯氣 進(jìn)行消毒。3滅菌方法：（1）接種環(huán)、接種針、試管口等使用 灼燒 滅菌法；（2）玻璃器皿、金屬用具等使用 干熱 滅菌法，所用器械是 干熱滅菌箱 ；（3）培養(yǎng)基、無菌水等使用 高壓蒸汽 滅菌法，所用器械是 高壓蒸汽滅菌鍋 。（4）表面滅菌和空

7、氣滅菌等使用 紫外線 滅菌法，所用器械是 紫外燈 。第16頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三三、實驗操作 1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）第17頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三【補充】培養(yǎng)基的配制原則：目的要明確：根據(jù)培養(yǎng)的微生物種類、培養(yǎng)的目的等確定培養(yǎng)基的類型和配制量。營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例要適宜。例如：碳氮比41時，谷氨酸棒狀桿菌大量繁殖而產(chǎn)生谷氨酸少；碳氮比為31時，菌體繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。pH要適宜：細(xì)菌培養(yǎng)基pH中性或偏堿性，霉菌培養(yǎng)基呈酸性。第18頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3

8、分，星期三1配制：計算、稱量、熔化2調(diào)節(jié)pH：用3%的HCI/NaOH調(diào)節(jié) pH 70- 723分裝：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾 在 管口或瓶口上，以免沾污棉塞 而引起污染。分裝三角燒瓶的量 以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。4包扎：操作步驟:第19頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三 5滅菌: 將50ml培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121，滅菌1530min。 將培養(yǎng)皿用舊報紙包裹，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160170 下滅菌2h。 6倒平板: 待培養(yǎng)基冷卻到50 左右時，在酒精燈附近倒平板。2d后觀

9、察平板，無雜菌污染才可用來接種. 7無菌檢查： 將滅菌的培養(yǎng)基放入37的溫室中培養(yǎng)2448小時，以檢查滅菌是否徹底。第20頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三倒平板:第21頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三菌種的保存 1、臨時保藏：接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于4冰箱保存。 2、長期保存：甘油冷凍管藏法第22頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？問題討論 答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進(jìn)行倒平

10、板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。注意:第23頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。第24頁，共40頁，2022年，5月20日，15

11、點3分，星期三選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基: 分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基: 分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基: 分離固氮菌 不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基: 分離自養(yǎng)型微生物 加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基: 分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞 加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培養(yǎng)基: 分離雜交瘤細(xì)胞第25頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三2、純化大腸桿菌:接種方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法 平板劃線法:通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作,將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面. 在數(shù)次畫線后,可以分離到由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群

12、體,這就是菌落.微生物的接種技術(shù)第26頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三第27頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三劃線后 培養(yǎng)一段時間后第28頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三微生物的恒溫培養(yǎng)第29頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三微生物的恒溫培養(yǎng)第30頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三問題討論 1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接

13、種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。第31頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三 2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。 3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？ 答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步

14、減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。第32頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三四、課題成果評價 （一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12 d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。 （二）接種操作是否符合無菌要求 如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。 （三）是否進(jìn)行了及時細(xì)致的觀察與記錄 培養(yǎng)12 h與24 h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同，及時觀察記錄的同學(xué)會發(fā)現(xiàn)

15、這一點，并能觀察到其他一些細(xì)微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。第33頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三本課題知識小結(jié):第34頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三【典例解析】 例1關(guān)微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是:A.是碳源的物質(zhì)不可能同時是氮源 B.凡碳源都提供能量C.除水以外的無機(jī)物只提供無機(jī)鹽 D.無機(jī)氮源也能提供能量 解析：不同的微生物，所需營養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要針對微生物的具體情況分析。對于A、B選項，它的表達(dá)是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同時是能源，如葡萄

16、糖；有的碳源同時是氮源，也是能源，如蛋白胨。對于C選項，除水以外的無機(jī)物種類繁多，功能也多樣。如二氧化碳，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；NaHCO3，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無機(jī)鹽；而NaCl則只能提供無機(jī)鹽。對于D選項，無機(jī)氮源提供能量的情況還是存在的，如NH3可為硝化細(xì)菌提供能量和氮源。答案：D第35頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三例2下面對發(fā)酵工程中滅菌的理解不正確的是:A.防止雜菌污染 B.消滅雜菌C.培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌 D.滅菌必須在接種前答案：B 解析：滅菌是微生物發(fā)酵過程的一個重要環(huán)節(jié)。A說的是滅菌的目的，因為發(fā)酵所用的菌種大多是單一的純種，整個發(fā)酵

17、過程不能混入其他微生物（雜菌），所以是正確的；B是錯誤的，因為滅菌的目的是防止雜菌污染，但實際操作中不可能只消滅雜菌，而是消滅全部微生物。C是正確的，因為與發(fā)酵有關(guān)的所有設(shè)備和物質(zhì)都要滅菌；發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專門接種的，滅菌必須在接種前，如果接種后再滅菌就會把所接菌種也殺死。第36頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三編號成分含量粉狀硫10g（NH4）2SO40.4gK2HPO44.0gMgSO49.25gFeSO40.5gCaCl20.5gH2O100ml例3右表是某微生物培養(yǎng)基成分，請據(jù)此回答：（1）右表培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物類型是 （2）若不慎將過量NaCl加入培養(yǎng)

18、基中。如不想浪費此培養(yǎng)基，可再加入 .用于培養(yǎng) 金黃色葡萄球菌. 自養(yǎng)型微生物 含碳有機(jī)物 第37頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三（3）若除去成分，加入（CH2O），該培養(yǎng)基可用于培養(yǎng) 。（4）表中營養(yǎng)成分共有 類。（5）不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化后分裝前，要進(jìn)行的是 。（6）右表中各成分重量確定的原則是 。（7）若右表培養(yǎng)基用于菌種鑒定，應(yīng)該增加的成分是 。固氮微生物 3 調(diào)整pH 依微生物的生長需要確定 瓊脂（或凝固劑） 第38頁，共40頁，2022年，5月20日，15點3分，星期三解析： 對于一個培養(yǎng)基，它能培養(yǎng)何種微生物，要看它的化學(xué)成分。當(dāng)然這只適用于合成培養(yǎng)基，如果是一個天然培養(yǎng)基就不能從培養(yǎng)基的成分上區(qū)分它是培養(yǎng)何種微生物的。分析化學(xué)成分要從營養(yǎng)物質(zhì)的類型出發(fā)。右表中的營養(yǎng)物質(zhì)有水、無機(jī)鹽、氮源三類，缺乏碳源和特殊營養(yǎng)物質(zhì)。對特殊營養(yǎng)物質(zhì)，有的微生物是不需要的，但沒