羅氏試劑盒說(shuō)明書(shū) Anti-HAV

1、0485501900V7Anti-HAV甲肝病毒抗體PAGE 2 Elecsys 和cobas e 分析儀04854977 190 100測(cè)試 試劑盒適用于以下分析儀Elecsys 2010MODULARANALYTICS E170cobas e 411cobas e 601cobas e 602主要用途：用免疫學(xué)方法體外定量測(cè)定人血清或血漿中的甲型肝炎病毒的總抗體?？?HAV檢測(cè)用來(lái)檢測(cè)過(guò)去的或目前存在的甲型肝炎感染,以及觀察接種HAV疫苗之后的免疫反應(yīng)。電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定試劑，適用于羅氏Elecsys和cobas e免疫測(cè)定分析儀。臨床應(yīng)用: 甲型肝炎病毒是一種無(wú)包膜RNA病毒,屬于小RN

2、A病毒科。目前只發(fā)現(xiàn)了一種人類血清型和7種基因型。病毒外殼體包含3種蛋白質(zhì)(VP1-VP3),構(gòu)成病毒顆粒表面免疫顯性的結(jié)構(gòu),此結(jié)構(gòu)在所有基因型中高度保守。1在接種疫苗或自然感染后,會(huì)發(fā)生針對(duì)該結(jié)構(gòu)的免疫反應(yīng)。甲型肝炎是急性病毒性肝炎中最常見(jiàn)的類型,經(jīng)由糞-口途徑傳播,此病并不會(huì)轉(zhuǎn)成慢性,病毒也不會(huì)持續(xù)存在肝中。2甲型肝炎病毒是爆發(fā)性肝炎最常見(jiàn)的原因之一(10-20%)。3感染甲型肝炎一旦發(fā)病,HAV總抗體即為陽(yáng)性(IgM),在自然感染之后,通常終其一生都可以測(cè)到HAVIgG抗體并且可以在再次感染時(shí)使機(jī)體免于感染。4現(xiàn)今可以采用甲肝疫苗以及甲乙肝混合疫苗。5在接種甲肝疫苗二周之后可以測(cè)得HAV

3、IgG抗體陽(yáng)性。在完全免疫的病例中,抗體的保護(hù)功效通?？梢猿掷m(xù)好幾年。一般沒(méi)有定義免疫保護(hù)的限定值,但通常認(rèn)為1020 IU/l以上水平的HAV抗體才能夠使機(jī)體免于感染。HAV抗體檢測(cè)用于診斷過(guò)去或目前存在的甲型肝炎感染,以及觀察接種HAV疫苗之后的免疫反應(yīng)。原理：競(jìng)爭(zhēng)原理:總檢測(cè)時(shí)間:18分鐘第1步 ：50 l的標(biāo)本;標(biāo)本中的HAV抗體和加入的HAV抗原相結(jié)合。第2步 ：加入生物素化的抗體和釕復(fù)合物a標(biāo)記的HAV抗原特異性抗體以及鏈霉親和素包被的磁珠微粒，HAV抗原上仍然游離的結(jié)合位點(diǎn)被占據(jù)。形成的免疫復(fù)合物通過(guò)生物素與鏈霉親和素間的反應(yīng)結(jié)合到微粒上。將反應(yīng)液吸入測(cè)量池中，通過(guò)電磁作用將磁珠

4、吸附在電極表面。未與磁珠結(jié)合的物質(zhì)通過(guò)ProCell被去除。給電極加以一定的電壓，使復(fù)合體化學(xué)發(fā)光，并通過(guò)光電倍增器測(cè)量發(fā)光強(qiáng)度。通過(guò)由2點(diǎn)校準(zhǔn)生成的分析儀專有的校準(zhǔn)曲線和通過(guò)試劑條碼提供的主曲線來(lái)確定結(jié)果。a) 三羥甲基氨基甲烷(2,2-聯(lián)吡啶) 釕(II)-化合物(Ru(bpy)2+3 試劑：M 鏈霉親和素包被的磁珠微粒(透明蓋),1瓶,6.5 ml:鏈霉親和素包被的磁珠微粒, 0.72 mg/ml; 含防腐劑。R1HAV抗原 (灰蓋),1瓶,10 ml:HAV抗原(人類) 40 U/ml(羅氏單位);HEPESb緩沖液 50 mmol/l, pH 7.2;含防腐劑R2生物素化的抗HAV抗

5、體;Ru(bpy)32+標(biāo)記的抗HAV抗體（黑蓋），1瓶，10ml；生物素化的單克隆抗HAV抗體(老鼠) 0.25 g/ml; 以釕復(fù)合物標(biāo)記的單克隆抗HAV抗體 (老鼠) 0.15 g/ml; HEPES 緩沖液 50 mmol/l, pH 7.2; 含防腐劑Cal 1 陰性定標(biāo)液（白蓋），2瓶（凍干品），1.0ml/瓶 ：HAV抗體為陰性的人血清, 含防腐劑Cal 2 陽(yáng)性定標(biāo)液（黑蓋），2瓶，1.0ml/瓶：含HAV抗體(人類)約46 IU/l的人血清,含防腐劑。警告和注意事項(xiàng)僅用于體外診斷。在使用本試劑盒時(shí)必需遵循所有試驗(yàn)室試劑操作的注意事項(xiàng)。所有廢棄物必需按照當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)進(jìn)行處置。專業(yè)人

6、員可要求獲得安全數(shù)據(jù)單。所有人來(lái)源材料必須視為有潛在感染性的物質(zhì)。定標(biāo)液(Cal1 and Cal2)由捐贈(zèng)者血液?jiǎn)为?dú)特殊制備而成，并經(jīng)檢測(cè)HBSAg、HCV抗體、HIV抗體，均為陰性。所應(yīng)用的檢測(cè)方法經(jīng)FDA認(rèn)可或符合歐洲法令98/79/EC附件II列表A。含有HAV抗體的血清 (Cal2)和HAV抗原的血清(人類,R1)以-丙內(nèi)酯和紫外線殺菌。但由于任何滅活方法和實(shí)驗(yàn)方法都不能絕對(duì)地排除潛在感染的危險(xiǎn)，故該產(chǎn)品仍需視作病人標(biāo)本一樣仔細(xì)處理。接觸者必須遵循健康專業(yè)機(jī)構(gòu)相應(yīng)的法規(guī)9.10。若試劑超過(guò)保質(zhì)期，則不能再使用。避免試劑和標(biāo)本（標(biāo)本、校準(zhǔn)液和質(zhì)控液）產(chǎn)生泡沫。試劑處理試劑盒為即用型（除

7、外Cal1和Cal2），專用于配套系統(tǒng)。Elecsys HAV 抗體定標(biāo)液1和2: 通過(guò)精確加入1.0mL的蒸餾水或去離子水小心溶解一個(gè)試劑瓶中的內(nèi)容物，并封閉靜置15分鐘復(fù)溶。小心混合，避免起泡。將復(fù)溶定標(biāo)液轉(zhuǎn)移至提供的帶拉環(huán)蓋的空標(biāo)記試劑瓶中。Elecsys 2010和cobas e分析儀:在2025C定標(biāo)過(guò)程中，復(fù)溶的定標(biāo)液Cal1和Cal2應(yīng)放在分析儀上。使用后，應(yīng)立即關(guān)閉瓶蓋，并將其儲(chǔ)存在28C。確保開(kāi)啟的帶拉環(huán)蓋上沒(méi)有定標(biāo)液。因?yàn)榭赡軙?huì)發(fā)生蒸發(fā)，每瓶定標(biāo)液定標(biāo)次數(shù)不宜超過(guò)5次。MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601和cobase 602分析儀：除非需要

8、在分析儀上使用總量定標(biāo)液定標(biāo)，將分裝即用型定標(biāo)液轉(zhuǎn)移至帶拉環(huán)蓋的空試劑瓶（定標(biāo)液組小瓶）中。將提供的標(biāo)簽粘貼在這些額外的試劑瓶上。將這些分裝定標(biāo)液儲(chǔ)存在28條件下備用每瓶分裝定標(biāo)液只可用一次?？赏ㄟ^(guò)各試劑條形碼讀入正確操作所需的全部信息。儲(chǔ)存和穩(wěn)定性：存放在2-8 C。請(qǐng)垂直擺放Elecsys HAV 抗體試劑盒(M, R1, R2)，以確保使用前儀器通過(guò)自動(dòng)攪拌能夠完全混勻磁珠微粒。穩(wěn)定性：未開(kāi)封試劑，28有效期內(nèi)均可使用M、R1、R2開(kāi)封試劑，288周放置分析儀上MODULAR ANALYTICS E170、cobas e 601和cobas e 602上，20258周放置分析儀Elecs

9、ys 2010 和 cobas e 411上，20258周凍干校準(zhǔn)品保存至有限期末復(fù)溶校準(zhǔn)品，286周放置分析儀Elecsys 2010 和 cobas e 411上，2025最多5小時(shí)放置分析儀上MODULAR ANALYTICS E170、cobas e 601和cobas e 602上僅使用一次注意:請(qǐng)垂直擺放定標(biāo)品！請(qǐng)確保開(kāi)啟的帶拉環(huán)蓋上沒(méi)有定標(biāo)液。標(biāo)本采集和準(zhǔn)備：只有下列標(biāo)本可以用來(lái)檢測(cè)血清：使用標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)本管或含分離膠管采集。血漿：肝素鋰、肝素鈉、EDTA-K3、枸櫞酸鈉抗凝。標(biāo)準(zhǔn):血清測(cè)量值的回收率在90-110%之內(nèi)或斜率0.9-1.1+截距0.95。標(biāo)本在28度可穩(wěn)定7天，-20

10、度可穩(wěn)定3個(gè)月。標(biāo)本可凍融6次。選擇合適的試管進(jìn)行不同類型樣本的采集，不是所有的試管均可用于檢測(cè)。不同廠商的樣本采集系統(tǒng)可能含有不同的物質(zhì)，某些情況下會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。如果使用原始管進(jìn)行檢測(cè)（樣本前處理系統(tǒng)）時(shí)，應(yīng)遵循生產(chǎn)商所提供的指導(dǎo)。注意：有沉淀的樣本和冰凍樣本檢測(cè)前必須先作離心處理。不要使用加熱滅活的標(biāo)本。請(qǐng)勿使用疊氮化物穩(wěn)定的標(biāo)本或和質(zhì)控品。確保患者標(biāo)本、定標(biāo)液和質(zhì)控品在測(cè)定前預(yù)溫至室溫2025C。因?yàn)榭赡軙?huì)發(fā)生蒸發(fā)，標(biāo)本和定標(biāo)液和質(zhì)控品需在2小時(shí)內(nèi)完成測(cè)定。提供的材料：參見(jiàn)“試劑工作液”章節(jié) 2 x 6 瓶標(biāo)簽 4 個(gè)空的帶標(biāo)簽的有蓋小瓶未提供的材料：貨號(hào) 04855043190, P

11、reciControl Anti-HAV 規(guī)格 2x 4.0 ml, 各含PreciControl Anti-HAV 1和 2貨號(hào)11361252122，稀釋的甲肝病毒，2 x 15 mL樣本稀釋液貨號(hào)11776576322，CalSet Vials，2 x 56空的帶蓋試劑瓶實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)設(shè)備Elecsys 2010 、MODULAR ANALYTICS E170或cobas e分析儀蒸餾水或去離子水Elecsys 2010和cobas e 411分析儀所需材料：貨號(hào)11662988122,，ProCell, 6 x 380 mL系統(tǒng)緩沖液貨號(hào)11662970122, CleanCell, 6

12、x 380 mL測(cè)量池洗液 貨號(hào)11930346122, Elecsys SysWash, 1 x 500 mL 附加洗液貨號(hào)11933159001, SysClean 適配器 貨號(hào)11706802001, Elecsys 2010 分析杯, 60 x 60 反應(yīng)管貨號(hào)11706799001, Elecsys 2010 分析吸頭, 30 x 120 移液管吸頭 MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析儀和cobas e 602分析儀所需材料：貨號(hào)04880340190,ProCell M, 2 x 2 L 系統(tǒng)緩沖液貨號(hào)04880293190, CleanCel

13、l M, 2 x 2 L測(cè)量池洗液 貨號(hào)03023141001, PC/CC杯, 12個(gè)用于在檢測(cè)前預(yù)熱Procell M及Cleancell M。貨號(hào)03005712190,ProbeWash M, 12 x 70 mL 清洗液，用于在檢測(cè)完畢后或更換試劑時(shí)清洗試劑針。貨號(hào)12102137001,反應(yīng)杯/吸頭 組合裝,84反應(yīng)杯/吸頭 組合裝48盒,廢物袋 貨號(hào)03023150001, WasteLiner,廢物袋 貨號(hào)03027651001,系統(tǒng)清潔適配器 M所有分析儀需要：貨號(hào)11298500316, Elecsys SysClean, 5 x 100 mL 系統(tǒng)清洗液 檢測(cè)方法：要優(yōu)化

14、檢測(cè)性能，請(qǐng)遵照本說(shuō)明書(shū)中有關(guān)分析儀的相關(guān)指導(dǎo)，并參照分析儀操作手冊(cè)。試劑使用前分析儀自動(dòng)攪拌磁珠微粒，使其處于懸浮狀態(tài)。試劑相關(guān)信息可通過(guò)條形碼自動(dòng)讀取，在特殊情況下，分析儀無(wú)法自動(dòng)讀取條碼信息時(shí)，請(qǐng)輸入條碼標(biāo)簽上的15位數(shù)字序列。MODULAR ANALYTICS E170, Elecsys 2010 and cobas e分析儀： 將冷藏試劑預(yù)溫到20 度后放置于儀器的試劑盤(pán)上(20 C)，避免產(chǎn)生泡沫。系統(tǒng)自動(dòng)控制試劑溫度和開(kāi)/關(guān)試劑瓶蓋。將復(fù)溶定標(biāo)液Cal 1和Cal 2放在分析儀的標(biāo)本測(cè)試區(qū)。只在定標(biāo)時(shí)打開(kāi)瓶蓋。有關(guān)定標(biāo)的所有必要信息都編碼在試劑瓶條形碼標(biāo)簽上并被自動(dòng)讀入。定標(biāo)完成

15、后，將Cal 1和Cal 2儲(chǔ)存在28下或丟棄(MODULAR ANALYTICS E170 and cobas e 601和cobas e 602分析儀）。定標(biāo)：溯源性：該方法已經(jīng)過(guò)NIBSC第二國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)HAV抗體免疫球蛋白標(biāo)準(zhǔn)化，NIBSC編號(hào)97/646。定標(biāo)頻率：使用Elecsys HSV-2 IgG Cal1、Cal2對(duì)每批試劑和新鮮試劑（新試劑盒注冊(cè)后在分析儀上放置不超過(guò)24小時(shí)）進(jìn)行定標(biāo)。另外，以下情況需要再次定標(biāo)： 使用同一批號(hào)試劑，1月后（28天）7天后（同一試劑盒在分析儀上使用）根據(jù)需要：例如，Elecsys PreciControlHAV 抗體試劑質(zhì)控結(jié)果超出范圍時(shí)。根據(jù)

16、有關(guān)規(guī)章要求可增加定標(biāo)頻率。質(zhì)控使用Elecsys PreciControl HAV抗體,進(jìn)行質(zhì)控。當(dāng)此項(xiàng)檢查有持續(xù)運(yùn)作,質(zhì)控液1和2每24小時(shí)至少應(yīng)該單獨(dú)測(cè)定一次,每個(gè)試劑組以及每次定標(biāo)后也都要測(cè)定一次。質(zhì)控區(qū)間和限制應(yīng)該合乎每個(gè)實(shí)驗(yàn)室個(gè)別的需求。所取得的質(zhì)控值應(yīng)位于設(shè)定的范圍內(nèi)。若質(zhì)控值在設(shè)定范圍外，各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采取相應(yīng)的糾正措施。 若有需要,請(qǐng)重復(fù)測(cè)量。注意：請(qǐng)參閱assay/precicontrol試劑盒內(nèi)附測(cè)定值參考表，并檢查是否需要手工輸入靶值。計(jì)算*分析儀會(huì)自動(dòng)計(jì)算每個(gè)標(biāo)本中HAV抗體的濃度,報(bào)告單位為IU/l。結(jié)果說(shuō)明:在Elecsys HAV抗體試驗(yàn)中標(biāo)本濃度 20 IU/l

17、表示目前存在或過(guò)去曾罹患甲型肝炎感染或在接種甲肝疫苗后, 出現(xiàn)了HAV抗體抗體。重要提示：依分析所使用方法的不同,所測(cè)得HAV抗體的值可能有所差異。當(dāng)使用不同廠家的分析方法,所獲得標(biāo)本的結(jié)果會(huì)因此而不同,若在監(jiān)控疫苗接種情況的期間,分析步驟有改變的話, 由新方法所得HAV抗體的測(cè)定值必須使用對(duì)照方法進(jìn)行平行測(cè)定。干擾因素：該方法不受黃疸（膽紅素855mol/L或50mg/dL）、溶血（血紅蛋白 0.745 mmol/L 或1.2g/dl）、脂血（脂質(zhì)1000mg/dl）和生物素（生物素5mg/天）治療的病人，至少要等最后一次攝入生物素8小時(shí)后才能采血。18種常用藥物經(jīng)試驗(yàn)對(duì)本測(cè)定無(wú)干擾。在罕見(jiàn)

18、病例中由于存在高滴度的分析物特異性抗體,鏈霉親和素抗體和釕抗體可能會(huì)對(duì)結(jié)果有所干擾。通過(guò)合適的試驗(yàn)設(shè)計(jì)可最大程度的減少這些效應(yīng)。重要！HAV抗體測(cè)定結(jié)果應(yīng)結(jié)合病人病史、臨床其他檢查結(jié)果綜合起來(lái)進(jìn)行診斷。如結(jié)果判定有困難，特別當(dāng)測(cè)定值在cutoff值附近時(shí)，應(yīng)考慮受測(cè)者曾注射甲肝疫苗。期望值*3.0060 IU/l (由主曲線的最低檢測(cè)限及最大檢測(cè)值來(lái)定義)低于最低檢測(cè)限的測(cè)定值報(bào)告為 60 IU/l或必須稀釋。在某些個(gè)例中,含有HAV IgM抗體的標(biāo)本,稀釋后的檢測(cè)結(jié)果可能為非線性變化。檢測(cè)方法低限：檢測(cè)下限檢測(cè)下限：20 IU/ml,結(jié)果要乘以稀釋倍數(shù)。特異性參數(shù)：試劑在各分析儀上的性能試驗(yàn)

19、數(shù)據(jù)如下。各實(shí)驗(yàn)室得出的數(shù)據(jù)可能會(huì)稍有差異。精密度：應(yīng)用Elecsys試劑盒、人血清樣本和質(zhì)控品檢測(cè)精密度（可重復(fù)性n21,中間精密度n10）；按照CLSI（臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)研究所）的改良協(xié)議（EP5-A）測(cè)定MODULAR ANALYTICS E170分析儀的中間精密度：每天測(cè)試6次,進(jìn)行10天(n=60),結(jié)果如下所示: Elecsys 2010 and cobas e 411分析儀批內(nèi)精密度c批間精密度樣品均值IU/LSDIU/LCV%均值IU/LSDIU/LCV%HSd，陰性3.00.29-3.00.69-HS，cutoff附近17.60.221.218.40.744.0HS，陽(yáng)性41

20、.90.481.242.31.232.9PCe A-HAV1 20.90.401.921.70.813.7PCe A-HAV135.80.842.336.51.022.8c)重復(fù)性=批內(nèi)精密度d) HS=人血清e(cuò)) PC = PreciControlMODULAR ANALYTICS E170和 cobas e 601和cobas e 602分析儀批內(nèi)精密度批間精密度樣品均值IU/LSDIU/LCV%均值IU/LSDIU/LCV%HS，陰性3.00.34- 20 IU/ml)。使用Elecsys HAV抗體以及商品化對(duì)照試驗(yàn),檢測(cè)165個(gè)來(lái)自46位接受甲肝疫苗受試者的標(biāo)本。所有標(biāo)本的抗HAV抗

21、體濃度都在各自的檢測(cè)限值之上。臨床特異性：為了檢測(cè)檢測(cè)臨床特異性，1301例來(lái)自無(wú)HAV感染癥狀的獻(xiàn)血者，住院病人，孕婦和透析病人標(biāo)本經(jīng)Elecsys 抗HAV和對(duì)照方法檢測(cè), 使用Elecsys 抗HAV檢測(cè)，其中1286例檢測(cè)結(jié)果小于20IU/L。該檢測(cè)的臨床特異性為98.85，95的置信區(qū)間為98.1199.35。參考文獻(xiàn)：1. Robertson BH, Nainan OV. Genetic and antigenetic variants of hepatitis Avirus. In: Viral Hepatitis and Liver Disease. Eds: Rizzeto

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