2022-2023學(xué)年新教材高中生物第3章基因工程第2節(jié)基因工程的基本操作程序第2課時(shí)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞并進(jìn)行檢測(cè)與鑒定課件新人教版選擇性必修3

第2節(jié)基因工程的基本操作程序第2課時(shí)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞并進(jìn)行檢測(cè)與鑒定第三章內(nèi)容索引0102基礎(chǔ)落實(shí)?必備知識(shí)全過關(guān)重難探究?能力素養(yǎng)全提升課程標(biāo)準(zhǔn)1.基于實(shí)例分析,掌握將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法以及目的基因檢測(cè)與鑒定的原理。2.結(jié)合聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增DNA片段并完成電泳鑒定實(shí)驗(yàn),掌握實(shí)驗(yàn)原理和操作?；A(chǔ)落實(shí)?必備知識(shí)全過關(guān)知識(shí)點(diǎn)一將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞1.導(dǎo)入植物細(xì)胞(1)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法利用農(nóng)桿菌細(xì)胞中Ti質(zhì)粒上的T-DNA(可轉(zhuǎn)移DNA)___________________

_________________________的特點(diǎn),將目的基因插入_______________中,通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用,可以使目的基因進(jìn)入植物細(xì)胞。

雙子葉植物或裸子植物細(xì)胞

(2)_______________①用微量注射器將含目的基因的DNA溶液__________子房中。

②在植物受粉后的一段時(shí)間內(nèi),剪去柱頭,將__________滴加在花柱切面上,使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入胚囊。

能夠轉(zhuǎn)移并整合到被侵染細(xì)胞的染色體DNA上

Ti質(zhì)粒的T-DNA花粉管通道法

直接注入

DNA溶液

2.導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞(受精卵)表現(xiàn)全能性相對(duì)容易__________技術(shù)。

3.導(dǎo)入微生物細(xì)胞

大腸桿菌應(yīng)用廣泛用_________處理細(xì)胞,使受體細(xì)胞處于一種_________________________的生理狀態(tài),再將重組的基因表達(dá)載體導(dǎo)入其中。

感受態(tài)細(xì)胞

顯微注射

Ca2+能吸收周圍環(huán)境中DNA分子

旁欄邊角想一想受體植物不同,所用的具體轉(zhuǎn)化方法有什么區(qū)別?請(qǐng)舉例分析說明。提示

受體植物不同,所用的具體轉(zhuǎn)化方法不同。例如,可以將新鮮的從葉片上取下的圓形小片與農(nóng)桿菌共培養(yǎng),然后篩選轉(zhuǎn)化細(xì)胞,并再生成植株;可以將花序直接浸沒在含有農(nóng)桿菌的溶液中一段時(shí)間,然后培養(yǎng)植株并獲得種子,再進(jìn)行篩選、鑒定等。結(jié)論語句辨一辨1.目的基因?qū)胫参锛?xì)胞一般采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。(

)2.為培育抗除草劑的作物新品種,導(dǎo)入抗除草劑基因時(shí)只能以受精卵為受體。(

)3.常用卵細(xì)胞作為培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的受體細(xì)胞。(

)4.生產(chǎn)需要加工和分泌的蛋白質(zhì)時(shí),酵母菌比大腸桿菌有優(yōu)勢(shì)。(

)√××√知識(shí)點(diǎn)二目的基因的檢測(cè)與鑒定1.分子水平的檢測(cè)(1)通過__________等技術(shù)檢測(cè)受體細(xì)胞的染色體DNA上是否插入了目的基因或檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了__________。

(2)用相應(yīng)抗體進(jìn)行____________________,檢測(cè)目的基因是否翻譯成目的蛋白等。

2.__________水平的鑒定:抗蟲、抗病接種實(shí)驗(yàn)等。

PCRmRNA抗原—抗體雜交

個(gè)體生物學(xué)

旁欄邊角想一想科研工作者在發(fā)現(xiàn)棉鈴蟲出現(xiàn)抗性之前,就應(yīng)該想辦法應(yīng)對(duì)。他們想出的延緩棉鈴蟲對(duì)Bt抗蟲蛋白產(chǎn)生抗性的措施有哪些?提示

(1)在分子水平上提高轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的抗蟲性和抗蟲持久性,包括在棉花中轉(zhuǎn)入多個(gè)殺蟲基因、構(gòu)建組織特異性表達(dá)的啟動(dòng)子、提高殺蟲基因的表達(dá)量等。(2)在種植時(shí),如提供庇護(hù)所、與其他作物輪作或套種等。這樣做的原理是為少部分害蟲提供一個(gè)正常的取食環(huán)境,始終保持一定的敏感目標(biāo)害蟲種群。這樣,即使目標(biāo)害蟲對(duì)轉(zhuǎn)基因抗蟲棉產(chǎn)生了抗性,但是因?yàn)槠渑c敏感目標(biāo)害蟲交配,后代抗性基因會(huì)發(fā)生分離,所以抗性目標(biāo)害蟲的種群也不至于迅速增加。結(jié)論語句辨一辨1.轉(zhuǎn)基因抗蟲棉植株抗蟲效果的鑒定必須通過分子檢測(cè)。(

)2.抗蟲基因即使成功地插入植物細(xì)胞染色體上也未必能正常表達(dá)。(

)3.檢測(cè)目的基因是否插入受體細(xì)胞的DNA中,可用抗原—抗體雜交技術(shù)。(

)4.抗蟲、抗病鑒定可用于確定轉(zhuǎn)基因生物是否具備相關(guān)性狀。(

)×√×√知識(shí)點(diǎn)三DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定1.實(shí)驗(yàn)原理(1)DNA片段的擴(kuò)增PCR利用了DNA的__________原理,通過調(diào)節(jié)溫度來控制DNA雙鏈的解聚與結(jié)合。

(2)DNA片段的電泳鑒定①DNA分子具有可解離的基團(tuán),在一定的pH下,這些基團(tuán)可以帶上正電荷或負(fù)電荷。在電場(chǎng)的作用下,這些帶電分子會(huì)向著與它所帶電荷__________的電極移動(dòng)。

②在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的__________、DNA分子的__________等有關(guān)。

③凝膠中的DNA分子通過染色,可以在波長(zhǎng)為300nm的紫外燈下被檢測(cè)出來。熱變性

相反

濃度

大小和構(gòu)象

2.實(shí)驗(yàn)步驟(1)DNA片段的擴(kuò)增微量移液器10s(2)DNA片段的電泳鑒定

電泳緩沖液電泳槽PCR產(chǎn)物凝膠邊緣名師點(diǎn)睛實(shí)驗(yàn)操作提示(1)為避免外源DNA等因素的污染,PCR實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管、槍頭和蒸餾水等在使用前必須進(jìn)行高壓滅菌處理。(2)緩沖液和酶應(yīng)分裝成小份,并在-20

℃儲(chǔ)存。使用前,將所需試劑從冰箱拿出,放在冰塊上緩慢融化。(3)在向微量離心管中添加反應(yīng)組分時(shí),每吸取一種試劑后,移液器上的槍頭都必須更換。(4)在進(jìn)行操作時(shí),一定要戴好一次性手套。旁欄邊角想一想判斷是否成功擴(kuò)增出DNA片段的依據(jù)是什么?提示

可以通過在紫外燈下直接觀察DNA條帶的分布及粗細(xì)程度來評(píng)價(jià)擴(kuò)增的結(jié)果。結(jié)論語句辨一辨1.PCR利用了DNA的熱變性原理,通過調(diào)節(jié)溫度來控制DNA雙鏈的解聚與結(jié)合。(

)2.在電場(chǎng)的作用下,帶電分子會(huì)向著與它所帶電荷相同的電極移動(dòng)。(

)3.在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象等有關(guān)。(

)4.凝膠中的DNA分子通過染色,可以在波長(zhǎng)為300

nm的紫外燈下被檢測(cè)出來。(

)√×√√重難探究?能力素養(yǎng)全提升主題一將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞【情境探究】

下圖表示培育轉(zhuǎn)基因抗病毒番茄的過程示意圖。

1.簡(jiǎn)述用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的過程。提示

將目的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上的T-DNA中,通過農(nóng)桿菌對(duì)植物細(xì)胞的侵染作用,Ti質(zhì)粒上的T-DNA轉(zhuǎn)移至被侵染的植物細(xì)胞,并將其整合到該細(xì)胞的染色體DNA上。2.將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞通常采用的方法是什么?選取的受體細(xì)胞一般是什么細(xì)胞?提示

顯微注射法。受精卵。3.簡(jiǎn)述將目的基因?qū)氪竽c桿菌的基本過程。提示

用Ca2+處理大腸桿菌細(xì)胞,使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài),這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞。將基因表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合,在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收基因表達(dá)載體?！痉椒ㄍ黄啤?/p>

將目的基因?qū)氩煌?xì)胞的方法

項(xiàng)目植物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞微生物細(xì)胞常用方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射法Ca2+處理法受體細(xì)胞體細(xì)胞受精卵原核細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上→導(dǎo)入植物細(xì)胞→整合到受體細(xì)胞的DNA中→表達(dá)目的基因表達(dá)載體提純→取卵(受精卵)→顯微注射→受精卵發(fā)育→獲得具有新性狀的動(dòng)物用Ca2+處理細(xì)胞→能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)細(xì)胞→重組的基因表達(dá)載體導(dǎo)入細(xì)胞中【視角應(yīng)用】

視角1將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法1.(2021河北高碑店高二期中)受體細(xì)胞不同,將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法也不相同,下列受體細(xì)胞與導(dǎo)入方法匹配錯(cuò)誤的是(

)選項(xiàng)受體細(xì)胞導(dǎo)入方法A棉花細(xì)胞花粉管通道法B大腸桿菌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法C羊受精卵顯微注射法D水稻細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法B解析

花粉管通道法是一種十分簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)的方法,我國(guó)的轉(zhuǎn)基因抗蟲棉培育過程用到此種方法,A項(xiàng)正確;將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞用Ca2+處理法,這種方法能使大腸桿菌細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài),B項(xiàng)錯(cuò)誤;顯微注射法是將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞(如羊受精卵)的最常用、最有效的方法,C項(xiàng)正確;可用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胨炯?xì)胞,D項(xiàng)正確。2.(2021遼寧沈陽高二期中)世界上已報(bào)道了多種生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的方法。目前,可以穩(wěn)定生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的方法有核顯微注射法(將外源基因注射到細(xì)胞核內(nèi),然后進(jìn)行胚胎移植)、精子介導(dǎo)法(將精子作適當(dāng)處理后,使其攜帶外源基因,而后用攜帶外源基因的精子對(duì)母畜進(jìn)行人工授精)等。下列有關(guān)說法錯(cuò)誤的是(

)A.采用核顯微注射法向某受精卵導(dǎo)入外源基因,則受精卵發(fā)育成的動(dòng)物每個(gè)體細(xì)胞都含有該外源基因B.采用精子介導(dǎo)法時(shí),不需要再進(jìn)行胚胎移植,較為便捷C.核顯微注射法生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物使用的原理有基因重組D.核顯微注射法的受體細(xì)胞一定不能是體細(xì)胞D解析

采用核顯微注射法向某受精卵導(dǎo)入外源基因,則受精卵通過有絲分裂和細(xì)胞分化形成的動(dòng)物的每一個(gè)體細(xì)胞中都含有該外源基因(哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞除外),A項(xiàng)正確;采用精子介導(dǎo)法時(shí),用攜帶外源基因的精子對(duì)母畜進(jìn)行人工授精,因此該方法不需要進(jìn)行胚胎移植,較為便捷,B項(xiàng)正確;轉(zhuǎn)基因技術(shù)的原理是基因重組,C項(xiàng)正確;核顯微注射法的受體細(xì)胞一般是受精卵,也可以用體細(xì)胞,D項(xiàng)錯(cuò)誤。視角2農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的原理和特點(diǎn)3.(2022浙江山水聯(lián)盟高二開學(xué)考)植物基因工程可以改造農(nóng)作物性狀,使農(nóng)作物變得更加高產(chǎn)。如圖是培育良種水稻的有關(guān)原理和步驟,有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(

)A.圖中表達(dá)載體中的T-DNA插入外源基因后將失去作用B.圖中②過程需要在無菌環(huán)境下用Ca2+處理土壤農(nóng)桿菌C.需要用除草劑檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植株是否具有抗除草劑性狀D.該過程需要用到固體和液體培養(yǎng)基A解析

T-DNA可將T-DNA之間的DNA序列轉(zhuǎn)移并整合至受體細(xì)胞的染色體DNA上,使目的基因能夠穩(wěn)定遺傳,故T-DNA插入外源基因后不會(huì)失去作用,A項(xiàng)錯(cuò)誤;用Ca2+處理農(nóng)桿菌,使農(nóng)桿菌處于感受態(tài),利于農(nóng)桿菌吸收目的基因完成轉(zhuǎn)化過程,故圖中②將載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌過程需要在無菌環(huán)境下用Ca2+處理土壤農(nóng)桿菌,B項(xiàng)正確;為從個(gè)體生物學(xué)水平上檢測(cè)圖中植株是否具有抗除草劑性狀,可采用的方法是用相應(yīng)除草劑噴灑待測(cè)植株,C項(xiàng)正確;篩選含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌時(shí)用的是固體培養(yǎng)基,擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)應(yīng)該用液體培養(yǎng)基,故該過程需要用到固體和液體培養(yǎng)基,D項(xiàng)正確?？碱}點(diǎn)睛

主題二目的基因的檢測(cè)與鑒定【情境探究】

抗蟲棉中的“殺蟲基因”就是培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的目的基因——Bt抗蟲蛋白基因。Bt基因進(jìn)入受體細(xì)胞后,是否穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳特性,只有通過檢測(cè)與鑒定才能知道。下圖為抗蟲棉的接種實(shí)驗(yàn),結(jié)合圖示(下圖為轉(zhuǎn)基因抗蟲棉使蟲體發(fā)育不正常)探究以下問題。1.圖中抗蟲棉的接種試驗(yàn)屬于哪種水平的鑒定?提示

屬于個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定。2.分子水平的鑒定包括哪些內(nèi)容?提示

目的基因的檢測(cè)與鑒定在分子水平包括:目的基因是否插入受體DNA,目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA和目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì)三個(gè)層次。3.實(shí)際操作中只有部分Bt基因能夠進(jìn)入受體細(xì)胞并表達(dá)出抗蟲蛋白。用什么方法檢測(cè)棉花的染色體DNA上是否插入了Bt基因或檢測(cè)Bt基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA?請(qǐng)?zhí)岢瞿愕乃悸贰Ｌ崾?/p>

利用PCR等技術(shù)檢測(cè)棉花的染色體DNA中是否插入Bt基因或檢測(cè)Bt基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA。4.如果棉花中插入的Bt基因轉(zhuǎn)錄成功,是否一定能夠翻譯出相應(yīng)的蛋白質(zhì)呢?如何從分子水平進(jìn)行檢測(cè)?提示

不一定成功翻譯。可從轉(zhuǎn)基因棉花中提取蛋白質(zhì),用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原—抗體雜交,檢測(cè)Bt基因是否翻譯成Bt抗蟲蛋白等?！痉椒ㄍ黄啤?/p>

1.目的基因的檢測(cè)與鑒定

2.不同分子檢測(cè)原理的異同(1)檢測(cè)目的基因是否插入受體DNA中、目的基因是否轉(zhuǎn)錄時(shí),用的探針都是放射性同位素等標(biāo)記的含有目的基因的DNA片段。檢測(cè)原理都是堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,只是被檢測(cè)的物質(zhì)不同,一個(gè)是轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNA,一個(gè)是轉(zhuǎn)基因生物細(xì)胞內(nèi)的mRNA。(2)進(jìn)行翻譯水平的檢測(cè),通常以目的基因表達(dá)產(chǎn)物(蛋白質(zhì))作抗原,制備相應(yīng)抗體,檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的蛋白質(zhì),利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理。(3)不論是復(fù)制水平、轉(zhuǎn)錄水平還是翻譯水平的檢測(cè),都是在體外進(jìn)行的?！疽暯菓?yīng)用】

1.(2021福建南平二模)植株在干旱、低溫等逆境中,脫水素(具有一定抗干旱脅迫和耐冷凍能力的蛋白質(zhì))被誘導(dǎo)表達(dá),脫水素基因編碼區(qū)共含678個(gè)堿基對(duì)?？茖W(xué)家利用如圖所示PBI121質(zhì)粒,以及XbaⅠ和SacⅠ兩種限制酶,運(yùn)用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,將脫水素基因?qū)氩葺嚬苊缛~片細(xì)胞,再經(jīng)植物組織培養(yǎng)獲得脫水素基因過量表達(dá)的轉(zhuǎn)基因草莓植株。下列相關(guān)敘述,錯(cuò)誤的是(

)A.重組質(zhì)粒利用SacⅠ和HindⅢ切割后能得到1500bp片段,則表明目的基因正確插入質(zhì)粒B.組織培養(yǎng)過程中,培養(yǎng)基需添加卡那霉素和新霉素以便篩選轉(zhuǎn)基因植株C.可以利用PCR等技術(shù)鑒定目的基因是否整合到草莓染色體的DNA上D.轉(zhuǎn)基因草莓植株批量生產(chǎn)前需進(jìn)行抗干旱、耐冷凍實(shí)驗(yàn)B解析

由于重組質(zhì)粒上移除1

900

bp而補(bǔ)充了脫水素基因的678個(gè)堿基對(duì),加上未移除的822

bp,所以用SacⅠ和Hind

Ⅲ切割重組質(zhì)粒后,可得到822+678=1

500(bp)的新片段,據(jù)此可確定目的基因正確插入了質(zhì)粒,A項(xiàng)正確;插入植物細(xì)胞染色體DNA中的是質(zhì)粒的T-DNA片段,卡那霉素抗性基因不在此片段上,導(dǎo)入成功的植物細(xì)胞對(duì)卡那霉素?zé)o抗性,B項(xiàng)錯(cuò)誤;PCR技術(shù)是進(jìn)行DNA擴(kuò)增的技術(shù),需要一段引物來進(jìn)行擴(kuò)增,依照脫水素基因的核酸序列設(shè)計(jì)一段引物,若能進(jìn)行擴(kuò)增,說明轉(zhuǎn)入目的基因成功,C項(xiàng)正確;植株批量生產(chǎn)前,需要在個(gè)體生物學(xué)水平上進(jìn)行抗干旱、耐冷凍實(shí)驗(yàn),以確保轉(zhuǎn)基因植物中的脫水素基因表達(dá)出了蛋白質(zhì)并發(fā)揮了作用,使植物表現(xiàn)為抗干旱、耐冷凍,D項(xiàng)正確。2.(2021廣東廣州禺山高級(jí)中學(xué)高二月考)研究者將含有乳鐵蛋白肽基因和人干擾素基因的DNA片段分別制成探針,與從轉(zhuǎn)基因奶牛的乳腺細(xì)胞、口腔上皮細(xì)胞、蹄部細(xì)胞中提取的mRNA分別進(jìn)行雜交,結(jié)果如下表所示。下列敘述正確的是(

)探針乳腺細(xì)胞口腔上皮細(xì)胞蹄部細(xì)胞乳鐵蛋白肽基因探針出現(xiàn)雜交帶未現(xiàn)雜交帶未現(xiàn)雜交帶人干擾素基因探針出現(xiàn)雜交帶出現(xiàn)雜交帶出現(xiàn)雜交帶A.乳鐵蛋白肽基因可在轉(zhuǎn)基因奶牛的多種體細(xì)胞中表達(dá)B.人干擾素基因可在轉(zhuǎn)基因奶牛的多種體細(xì)胞中表達(dá)C.表中兩種基因探針?biāo)拿撗鹾塑账岬男蛄邢嗤珼.乳鐵蛋白肽基因和人干擾素基因都是mRNA片段B解析

據(jù)表分析可知,乳鐵蛋白肽基因探針只在轉(zhuǎn)基因奶牛的乳腺細(xì)胞出現(xiàn)了雜交帶,即只在乳腺細(xì)胞中表達(dá),A項(xiàng)錯(cuò)誤;人干擾素基因探針在轉(zhuǎn)基因奶牛的三種細(xì)胞都出現(xiàn)了雜交帶,說明該基因可以在轉(zhuǎn)基因奶牛的全身多種體細(xì)胞中表達(dá),B項(xiàng)正確;表中兩種基因探針?biāo)拿撗鹾塑账岬男蛄胁煌?才會(huì)出現(xiàn)不同的雜交結(jié)果,C項(xiàng)錯(cuò)誤;乳鐵蛋白肽基因和人干擾素基因都是特定的DNA片段,D項(xiàng)錯(cuò)誤。主題三DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定【情境探究】

利用PCR可以在體外進(jìn)行DNA片段的擴(kuò)增,擴(kuò)增獲得的DNA片段需要進(jìn)行分離、鑒定和純化。自從瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠被引入核酸研究以來,按相對(duì)分子質(zhì)量大小分離DNA的凝膠電泳技術(shù)已經(jīng)發(fā)展成為一種分析鑒定DNA分子的重要實(shí)驗(yàn)手段。(1)為什么PCR實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管、槍頭和蒸餾水等在使用前必須進(jìn)行高壓滅菌處理?提示

避免外源DNA等因素的污染。(2)為什么在PCR擴(kuò)增DNA時(shí)不能隨意加大試劑用量?提示

過高濃度的引物可能引發(fā)錯(cuò)配,導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增;四種脫氧核苷酸濃度過高可能對(duì)擴(kuò)增起抑制作用。(3)影