羅氏試劑盒說明書 CMV IgM05199450001V1

05199450001V1巨細胞病毒IgM抗體（CMVIgM）2008-10,V1中文 6/6 Elecsys和cobase分析儀04784618190 100測試本試劑盒適用的分析儀Elecsys2010MODULARANALYTICSE170cobase411cobase601····主要用途體外定性檢測人體血清或血漿中巨細胞病毒（CMV）IgM抗體。結(jié)果可輔助診斷CMV現(xiàn)癥感染。Elecsys和cobase免疫分析儀的工作原理是電化學(xué)發(fā)光免疫分析“ECLIA”。臨床應(yīng)用1，2，3，4，5，6巨細胞病毒屬于皰疹病毒科，可感染任何年齡的人群，引起宿主的長期隱性感染，個別可出現(xiàn)再次感染導(dǎo)致的發(fā)病。成人血清抗體的陽性率約為40％～100％，且與個體的社會經(jīng)濟能力呈負相關(guān)。CMV的感染途徑為密切接觸受污染的分泌物，如唾液、尿液、宮頸及陰道分泌物、精液、乳汁和血液。CMV的感染通常是隱匿性的。但是感染CMV的初次妊娠母親的胎兒宮內(nèi)感染的幾率很高，可導(dǎo)致胎兒生長和智力發(fā)育遲緩，黃疸和中樞神經(jīng)系統(tǒng)畸形。這類畸形新生兒無癥狀表現(xiàn)，但隨著生長發(fā)育可能表現(xiàn)出聽力障礙和智力低下。宮內(nèi)CMV感染的幾率約為0.2～2.5％。約有10％的血清CMV抗體陽性的妊娠婦女會在懷孕期間再次感染，但感染胎兒的幾率初次妊娠（約40％）明顯高于非初次妊娠約（約1％）。初次感染CMV的個體再次感染的途徑可能是外源性的，也可能是內(nèi)源性的。重癥CMV感染性疾病可威脅生命，其發(fā)病多見于免疫力低下的病人，如器官移植的病人和感染HIV的病人。如果這些病人需要輸血，必須提供血清CMV抗體陰性的血制品。檢測血清CMVIgG抗體可以評估個體急性和既往感染CMV的狀況。檢測CMV特異性IgG、IgM抗體是診斷急性原發(fā)性CMV感染常用方法。CMVIgM抗體陽性提示急性、現(xiàn)癥或復(fù)發(fā)感染。檢測CMVIgG親和力可進一步輔助診斷原發(fā)性CMV感染。IgM的陽性結(jié)果結(jié)合IgG的低親和力指數(shù)可強力證實最近4個月內(nèi)的原發(fā)性CMV感染。CMVIgM和IgG的血清學(xué)轉(zhuǎn)換可診斷CMV的現(xiàn)癥感染。檢測原理捕獲法，總檢測時間：18分鐘第一次孵育：10μl樣本儀器自動使用Elecsys稀釋液20倍稀釋，生物素化抗人特異性IgM抗體一起孵育。第二次孵育：釕復(fù)合物標記的特異性CMV重組抗原，包被鏈霉素的磁珠微粒一起孵育，樣本中的CMVIgM抗體與釕復(fù)合物標記的特異性CMV重組抗原結(jié)合，該復(fù)合物與磁珠通過生物素和鏈霉素的作用結(jié)合。將反應(yīng)液吸入測量池中，通過電磁作用將磁珠吸附在電極表面。未與磁珠結(jié)合的物質(zhì)通過ProCell被去除。給電極加以一定的電壓，使復(fù)合體化學(xué)發(fā)光，并通過光電倍增器測量發(fā)光強度。儀器自動通過比較樣本的檢測信號值和CMVIgM定標的cutoff值得到檢測結(jié)果。a)Tris(2,2’-bipyridyl)ruthenium(II)-complex(Ru(bpy){)三聯(lián)吡啶釕試劑－工作溶液M 包被鏈霉素的磁珠微粒（透明瓶蓋），每瓶6.5ml；包被鏈霉素的磁珠微粒，0.72mg/ml；防腐劑R1生物素化抗人特異性IgM抗體（灰色瓶蓋），每瓶9ml：生物素化單克隆抗人特異性IgM抗體（鼠源）>500ug/L；MES緩沖液，50mmol/L，PH6.5；防腐劑R2Ru(bpy)32+標記的CMV抗原（黑色瓶蓋），每瓶9ml：釕復(fù)合體標記的CMV特異性抗原（重組，大腸桿菌）>50ug/L；MES緩沖液，50mmol/L，PH5.5；防腐劑Cal1陰性定標液1（白色瓶蓋），2瓶，每瓶1.0ml：人血清，anti-CMVIgM陰性；防腐劑。Cal2陽性定標液2（黑色瓶蓋），2瓶，每瓶1.0ml：人血清anti-CMVIgMHEPES緩沖液；防腐劑。警告和注意事項僅用于體外診斷。在使用本試劑盒時必需遵循所有試驗室試劑操作的注意事項。所有廢棄物必需按照當?shù)胤ㄒ?guī)進行處置。專業(yè)人員可要求獲得安全數(shù)據(jù)報告。所有人源性物質(zhì)必須視為有潛在感染性。定標液1和2由獻血員提供，經(jīng)特殊制備而成，經(jīng)檢測HBSAg、HCV抗體和HIV抗體均為陰性。定標液2含有的anti-CMVIgM血清經(jīng)過無菌消毒處理。所應(yīng)用的檢測方法經(jīng)FDA認可或符合歐洲法令98/79/EC附件II列表A。但由于任何實驗方法都不能絕對地排除潛在感染的危險，故該產(chǎn)品仍需視作病人樣本一樣仔細處理。接觸者必須遵循健康專業(yè)機構(gòu)相應(yīng)的法規(guī)7，8。若試劑超過保質(zhì)期，則不能再使用。避免試劑和樣本（樣本、定標液和質(zhì)控品）產(chǎn)生氣泡。試劑處理試劑盒中的試劑為即用型，提供的試劑瓶適用于分析儀。Elecsys2010和cobase411分析儀：定標液Cal1和Cal2使用前必須室溫平衡(20-25°C)。定標吸樣結(jié)束后，應(yīng)立即蓋好瓶蓋，2-8°C儲存。確保定標液瓶蓋不粘有定標液。考慮蒸發(fā)因素，每瓶定標液定標次數(shù)不宜超過5次。MODULARANALYTICSE170和cobase601分析儀:不要把整瓶定標液放在分析儀上進行定標，可使用專用小空瓶分裝定標液，并貼上標簽，2-8°C下儲存，每瓶定標液一次使用。試劑相關(guān)信息可以通過試劑條形碼閱讀獲取。。儲存及穩(wěn)定性2－8℃儲存。垂直擺放ElecsysCMVIgM試劑盒，確保儀器的自動攪拌器能夠完全混勻磁珠微粒。穩(wěn)定性：未開封試劑，2-8℃有效期內(nèi)均可使用開封后，2-8℃12周放置MODULARE170,Elecsys2010和Cobase分析儀上2周或6周（冰箱或儀器交替放置，且儀器上不能超過80小時）定標液開封后2－8℃8周20－25℃，在Elecsys2010和cobase411分析儀上最長可保存5小時MODULARANALYTICSE170和cobase601分析儀只可使用一次定標液要垂直保存!不能冰凍。確保定標液沒有附著在瓶蓋上。樣本的采集和準備以下羅列的樣本類型經(jīng)過測試可供檢測。血清樣本須用標準試管或有分離膠的真空管收集。肝素鋰，K2-EDTA和K3-EDTA抗凝血漿都適用。標準：陽性樣本的血清值回收率為80－120％。穩(wěn)定性：2–8°C可保存4周；25°C可保存7天；-20°C可保存3個月。樣本可凍融5次。選擇合適的試管進行不同類型樣本的采集，不是所有的試管均可用于檢測。不同廠商的樣本采集系統(tǒng)可能含有不同的物質(zhì)，某些情況下會影響檢測結(jié)果。如果使用原始管進行檢測（樣本前處理系統(tǒng)）時，應(yīng)遵循生產(chǎn)商所提供的指導(dǎo)。樣本檢測前必須先作離心處理。凍干樣本可以使用。熱滅活的樣本不能使用。檢測前，樣本、定標液及質(zhì)控品須室溫平衡(20–25°C)。由于蒸發(fā)因素的影響，樣本、定標液及質(zhì)控品在分析儀上的檢測必須2小時內(nèi)完成。提供的物品參閱“試劑”章節(jié)。需要的物品（未提供）貨號04784626,PrecontrolCMVIgM,規(guī)格8x1mlPrecontrolCMVIgM1和2貨號11732277，DiluentUniversal，2×16ml樣本稀釋液，或者貨號03183971.DiluentUniversal，2×36ml樣本稀釋液貨號11776576，定標液專用小瓶，2×56有蓋空小瓶實驗室基礎(chǔ)設(shè)備Elecsys2010、MODULARANALYTICSE170或cobase分析儀Elecsys1010/2010和cobase411分析儀所需材料：貨號11662988,ProCell,6x380mL,系統(tǒng)緩沖液貨號11662970,CleanCell,6x380mL,測量池洗液貨號11930346,ElecsysSysWash,1x500mL附加洗液貨號11933159,SysClean適配器貨號11706829,Elecsys2010分析杯,60x60反應(yīng)管貨號11706799,Elecsys2010分析吸頭,30x120吸樣吸頭MODULARANALYTICSE170和cobase601分析儀所需材料：貨號04880340,ProCellM,2x2L系統(tǒng)緩沖液貨號04880293,CleanCellM,2x2L測量池洗液貨號03023141,PC/CC杯,12個用于在檢測前預(yù)熱ProcellM及CleancellM。貨號03005712,ProbeWashM,12x70mL清洗液，用于在檢測完畢后或更換試劑時清洗試劑針。貨號12102137,反應(yīng)杯/吸頭組合裝×84反應(yīng)杯/吸頭組合裝48盒,廢物袋貨號03023150,WasteLiner,廢物袋貨號03027651,系統(tǒng)清潔適配器M所有分析儀需要：貨號11298500,ElecsysSysClean,5x100mL系統(tǒng)清洗液檢測要優(yōu)化檢測性能，請遵照本說明書中有關(guān)分析儀的相關(guān)指導(dǎo)，并參照分析儀操作手冊。試劑使用前分析儀自動攪拌磁珠微粒，使其處于懸浮狀態(tài)。試劑相關(guān)信息可通過條形碼自動讀取，在特殊情況下，分析儀無法自動讀取條碼信息時，請輸入條碼標簽上的15位數(shù)字序列。MODULARANALYTICSE170、Elecsys2010和cobase分析儀：將冷藏試劑室溫平衡至20°C左右，放置分析儀的試劑盤（20°C）內(nèi)。避免泡沫產(chǎn)生。分析儀能自動調(diào)節(jié)試劑溫度和開、關(guān)各試劑盒瓶蓋。將定標液Cal1和Cal2放在分析儀的樣本架上。只在定標時打開瓶蓋。定標相關(guān)信息可通過條形碼閱讀自動獲取。定標完成后，將定標液Cal1和Cal2放回2－8℃保存或者丟棄(MODULARANALYTICSE170和cobase601分析儀)定標溯源性：該檢測方法可溯源至Roche內(nèi)部CMVIgM參考標準。定校頻率：新批號試劑使用ElecsysCMVIgMCal1和Cal2進行定標（新試劑盒在分析儀上放置不能超過24小時）。以下情況建議重新進行定標：使用同一批號試劑，1月后（28天）7天后（同一試劑盒在分析儀上使用）根據(jù)需要：如失控。根據(jù)相關(guān)規(guī)定設(shè)定定標頻率定標液的信號值范圍：陰性定標液（CAL1）:500-1600(Elecsys2010,ModularAnalyticsE170和cobase分析儀)陽性定標液（CAL2）：2800-16000(Elecsys2010,ModularAnalyticsE170和cobase分析儀)質(zhì)控室內(nèi)質(zhì)控可使用ElecsysPreciControlCMVIgM。質(zhì)控品1和質(zhì)控品2至少每24小時內(nèi)檢測一次，每次更換試劑盒或定標后也須進行質(zhì)控。每個實驗室可根據(jù)各自的情況設(shè)定合適的控制限和質(zhì)控頻率。質(zhì)控值必須處于規(guī)定的控制限內(nèi)。若失控每個試驗室必須采取相應(yīng)的糾正措施。必要時重復(fù)檢測相關(guān)樣本。請遵循政府法規(guī)和當?shù)匦袠I(yè)導(dǎo)則進行質(zhì)量控制。注意：由于質(zhì)控品沒有配置條碼，因此以非Roche質(zhì)控的方式在儀器上運行。質(zhì)控品的靶值和范圍需手工輸入。具體可參見操作手冊的相關(guān)章節(jié)。不同試劑批號的對應(yīng)靶值和范圍可參見質(zhì)控品或試劑盒內(nèi)的賦值表。計算儀器通過定標自動計算cutoff值。樣本檢測結(jié)果以cutoff指數(shù)（COI）分別表示有反應(yīng)性或非反應(yīng)性。結(jié)果解釋無反應(yīng)性：＜0.7COI不確定：≥0.7-<1.0COI有反應(yīng)性：≥1.0COI樣本cutoff指數(shù)＜0.7COI判斷為ElecsysCMVIgM檢測無反應(yīng)性。樣本cutoff指數(shù)≥0.7但＜1.0判斷為不確定。不確定樣本必須重復(fù)檢測。如果結(jié)果仍為不確定建議2-3周內(nèi)重新抽血檢測。樣本cutoff指數(shù)≥1.0判斷為CMVIgM抗體有反應(yīng)性。測定信號值的高低與樣本中抗體濃度水平與關(guān)。CMVIgM抗體的檢測結(jié)果與樣本類型和檢測方法密切相關(guān)，不同檢測系統(tǒng)間的結(jié)果可能不一致。干擾因素CMVIgG陰性結(jié)果可見于CMVIgG陽性結(jié)果的樣本，因此不能夠完全排除急性CMV感染的可能。個體急性感染的早期可能存在低于檢出限的CMVIgM抗體。一些急性感染早期的病例會出現(xiàn)CMVIgG檢測結(jié)果的不確定或弱陽性。第二份樣本必須在2周內(nèi)重新測定。檢測到CMVIgM和（或）CMVIgG抗體滴度的明顯增加可支持CMV急性感染的診斷。CMV感染的機體免疫反應(yīng)存在個體差異。一些病例在急性感染的晚期階段CMVIgM的檢測結(jié)果會出現(xiàn)無反應(yīng)性。單次檢測到CMV特異性IgM抗體不能證明急性感染。個別病例CMVIgM抗體自首次感染后可持存在數(shù)年。結(jié)合病史、臨床癥狀表現(xiàn)以及其它的實驗室檢驗（如特異性的CMVIgM抗體，CMVIgM親和力）綜合判斷。對HIV患者、免疫抑制治療的患者以及一些能夠引起免疫功能抑制的疾病患者的CMVIgM檢測結(jié)果的解釋必須加以重視。新生兒、臍帶血、移植手術(shù)前患者以及其它一些體液的樣本（如尿液、唾液、羊水）未進行過實驗。檢測結(jié)果不受黃疸（膽紅素<342μmol/L或<20mg/dl）,溶血（血紅蛋白<0.31mmol/L或<0.5g/dl）,脂血(脂肪乳劑<1500mg/dl）和生物素<410nmol/L（100ng/mL）的影響?；厥章蕵藴剩宏栃詷颖净厥章试诔跏贾档摹?0％之內(nèi)。對于接受高劑量生物素治療的患者（>5mg/天），必須在末次生物素治療8小時后采集樣本。濃度達2000IU/mL的類風(fēng)濕因子對檢測無影響。體外對18種添加更昔洛韋和外旋更昔洛韋的常用抗病毒藥物進行試驗未發(fā)現(xiàn)有干擾影響。有報道EBV感染的病人血清會出現(xiàn)ElecsysCMVIgM檢測結(jié)果陽性。由于CMV和EBV均為皰疹病毒科，CMVIgM檢測的方法存在交叉干擾9。與其它捕獲法相似非特異性的IgM會對檢測有影響。高濃度的非特異性IgM抗體會導(dǎo)致ElecsysCMVIgM檢測陽性樣本的結(jié)果值降低。個別病例中極高濃度的分析－特異性抗體（如人抗動物抗體（HAMA））、鏈霉素抗體和釕抗體會影響檢測結(jié)果。但通過適合性試驗設(shè)計可以將這種影響降到最低。作為診斷指標，必須結(jié)合患者病史，臨床檢查和其他臨床資料來綜合評估檢測結(jié)果。特殊的性能指標試劑在分析儀上的性能試驗數(shù)據(jù)如下。各實驗室由于具體情況不同，所得出的數(shù)據(jù)可能會有差異。精密度應(yīng)用Elecsys試劑盒、人血清樣本和質(zhì)控品參照CLSI的EP5-A執(zhí)行：每天2次復(fù)管測定，共21天(n=84)；重復(fù)性n=21。結(jié)果如下b)Repeatability＝批內(nèi)精密度c)Intermediateprecision＝總精密度d)HS＝人血清e)PC＝質(zhì)控分析特異性使用ElecsysCMVIgM試劑和比對試劑檢測可能交叉干擾的433份樣本：含有抗HBV、HAV、HCV、HIV*、HTLV、EBV**、HSV***、VZV**、ParvoB19***、風(fēng)疹病毒****、蒼白密螺旋體和弓形蟲抗體含有自身抗體*****（ANA、anti-tissue、RF）ElecsysCMVIgM試劑和比對試劑的吻合率為92.3％（381/413）。其中377例一致結(jié)果為陰性，4例一致結(jié)果為陽性。20例樣本的結(jié)果均為不確定。*HSV、ParvoB19：1例樣本結(jié)果不一致。**風(fēng)疹病毒：2例樣本結(jié)果不一致。***自身抗體：72例樣本中7例樣本結(jié)果不一致。****HIV：70例樣本中8例樣本結(jié)果不一致。*****EBV：48例樣本中13例樣本結(jié)果不一致。臨床靈敏度原發(fā)性感染的靈敏度365份原發(fā)性CMV感染的妊娠婦女（包括系列和單點）的冰凍樣本，使用ElecsysCMVIgM試劑和可靠的商業(yè)化比對試劑在4個實驗點同時檢測。通過確認陽性的樣本結(jié)合低親和力指數(shù)或者臨床表現(xiàn)計算靈敏度。不確定的結(jié)果歸入陽性結(jié)果計算。親和力指數(shù)為高值結(jié)果并且兩種試劑檢測結(jié)果不一致的樣本和兩種試劑檢測結(jié)果一致為陰性并且親和力指數(shù)中值的樣本不被納入統(tǒng)計。f）66例親和力指數(shù)高/中值的樣本未納入統(tǒng)計g）5例結(jié)果一致陰性且親和力指數(shù)中值的樣本未納入統(tǒng)計h）6例結(jié)果一致陰性且親和力指數(shù)高/中值的樣本未納入統(tǒng)計i）2例結(jié)果不一致且親和力指數(shù)中值的樣本未納入統(tǒng)計既往感染的特異性158份既往CMV感染的妊娠婦女冰凍樣本，使用ElecsysCMVIgM試劑和可靠的商業(yè)化比對試劑在4個實驗點同時檢測。所有樣本均為CMVIgG陽性，CMVIgM陰性結(jié)果且親和力指數(shù)為高值的急性感染樣本。既往感染的特異性數(shù)據(jù)如下表：j）1例樣本發(fā)現(xiàn)ElecsysCMVIgM結(jié)果為不確定，比對試劑結(jié)果為陰性k）8例樣本發(fā)現(xiàn)ElecsysCMVIgM結(jié)果為陽性；7例樣本與比對試劑結(jié)果一致CMV感染后IgM持續(xù)存在的能力比較68份妊娠婦女的樣本，使用ElecsysCMVIgM試劑和可靠的商業(yè)化比對試劑在3個實驗點同時檢測。所有樣本均為CMVIgG、CMVIgM陽性且親和力指數(shù)為高值的急性感染樣本。CMVIgM持續(xù)存在的能力比較如下表：l）14例ElecsysCMVIgM結(jié)果為陰性的樣本結(jié)果不一致m）24例ElecsysCMVIgM結(jié)果為陰性的樣本結(jié)果不一致n）12例ElecsysCMVIgM結(jié)果為陰性的樣本結(jié)果不一致陰性樣本的特異性173份排除CMV感染的妊娠婦女的冰凍樣本，使用ElecsysCMVIgM試劑和可靠的商業(yè)化比對試劑在4個實驗點同時檢測。o）1例樣本發(fā)現(xiàn)ElecsysCMVIgM結(jié)果為陽性p）1例樣本發(fā)現(xiàn)比對試劑結(jié)果為不確定臨床特異性1647份臨床新鮮樣本（獻血員，實驗點1；產(chǎn)前檢查，實驗點2、3）使用ElecsysCMVIgG試劑和可靠的商業(yè)化比對試劑在3個實驗點同時檢測。CMVIgG親和力指數(shù)同時測定作為不一致結(jié)果的排除指標。q）10例親和力指數(shù)為中值和無結(jié)果的樣本未納入統(tǒng)計r）10例確認陽性且親和力指數(shù)為低值的樣本未納入統(tǒng)計；15例親和力指數(shù)為中值和無結(jié)果的樣本未納入統(tǒng)計s）3例確認陽性且親和力指數(shù)為低值的樣本未納入統(tǒng)計；9例親和力指數(shù)為中值和無結(jié)果的樣本未納入統(tǒng)計參考文獻1.RevelloMG,GernaG.DiagnosisandManagementofHumanCytomegalovirusInfectionintheMother,Fetus,andNewbornInfant.ClinMicrobiolRev2002;15(4):680-715.2.MunroSC,HallB,WhybinLR,etal.DiagnosisofandScreeningforCytomegalovirusInfectioninPregnantWomen.JClinMicrobiol2005;43(9):4713-4718.3.LazzarottoT,GabrielliL,LanariM,etal.CongenitalCytomegalovirusInfection:RecentAdvancesintheDiagnosisofMaternalInfection.HumImmunol2004;65:410-415.4.GuerraB,SimonazziG,BanfiA,etal.ImpactofdiagnosticandconfirmatorytestsandprenatalcounselingontherateofpregnancyterminationamongwomenwithpositivecytomegalovirusimmunoglobulinMantibodytiters.AmJObstetGynecol2007;196:221-223.5.DuffP.Athoughtfulalgorithmfortheaccuratediagnosisofpr