DB36-T 1658-2022贛葛1號(hào)粉葛組培微插繁殖技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20CCSB05

DB36江 西 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB36/T1658—20221Technicalregulationofmicro-cuttingpropagationintissuecultureofpachyrhizuaangulatus"GangeNo.1"20222022092620230401江西省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布DB36/T1658—2022目 次前 II1圍 12范引文件 13語(yǔ)定義 14培備 15養(yǎng)制作 26料取 27節(jié)扦插 28代殖 39根養(yǎng) 310管移栽 311案理 4附錄規(guī)性錄MS培基液方制 5附錄規(guī)性錄MS培基配流方法 7I附錄規(guī)性錄MS培基配流方法 7IDB36/T1658—2022前 言GB/T1.1—20201IIIIDB36/T1658—2022DB36/T1658—2022DB36/T1658—2022DB36/T1658—2022“贛葛1號(hào)”粉葛組培微插繁殖技術(shù)規(guī)程范圍本文件適用于“贛葛1號(hào)”粉葛組培苗快繁生產(chǎn)。（NY/T1000容器育苗技術(shù)下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.11GangeNo.1少35cm～459cm～122kg~5kg，鮮塊根淀粉含量18%～25%，早熟，生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，生育周期270d~280d的粉葛新品種。3.2微型插 micro-cutting使用外源激素，促進(jìn)具有頂芽或沒(méi)有頂芽的休眠側(cè)芽啟動(dòng)生長(zhǎng)，進(jìn)行芽苗的增殖培養(yǎng)，快速獲得大量的芽苗后再進(jìn)行生根培養(yǎng)，得到完整植株的這種繁殖方式稱(chēng)為微型扦插。3.3繼代殖 subculturereproduction4組培準(zhǔn)備4.1儀器設(shè)備1天平、純水機(jī)、pH計(jì)、高溫高壓蒸汽滅菌鍋、電熱鼓風(fēng)干燥箱等。超凈工作臺(tái)、滅菌器等?？照{(diào)、定時(shí)器、培養(yǎng)架、搖床、光照培養(yǎng)箱、人工氣候室等。冰箱、萬(wàn)分之一天平等。（建議可加相應(yīng)的序號(hào)）試管、錐形瓶、培養(yǎng)皿及各類(lèi)專(zhuān)用培養(yǎng)瓶。燒杯、試劑瓶。量筒、容量瓶。4.2.4操作器材4.2.4操作器材培養(yǎng)基分注器、細(xì)菌過(guò)濾器、鑷子、剪刀、解剖刀。4.3化學(xué)試劑MS基本AB5培養(yǎng)基制作MS采用附錄C的方法配制固體MS培養(yǎng)基，組培瓶分裝后放入高溫高壓蒸汽滅菌鍋，在0.1Mpa，121℃條件下滅菌20min，取出冷卻凝固后備用。按照附錄C方法分別配制莖節(jié)微扦插的不定芽誘導(dǎo)、增殖和芽苗生根培養(yǎng)基?！o節(jié)微扦插不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+1.5mg/L6-BA+1mg/LNAA+30g/L蔗糖+6.5g/L瓊脂粉，pH5.8，固體培養(yǎng)基；MS+1mg/L6-BA0.5mg/LNAA+30g/L6.5g/L：MS+0.5mg/LNAA+30g/L6.5g/LpH5.8，固2體培養(yǎng)基。選取無(wú)病蟲(chóng)害、長(zhǎng)勢(shì)健壯的葛藤幼嫩莖節(jié)作為誘導(dǎo)材料。前處理330min（75%30min次）。1cm。（）25℃54μmol·m-2·s-1，光周期1430d8繼代增殖8繼代增殖切取將增殖的不定芽從其基部切取分離。增殖將切取的不定芽基部組織轉(zhuǎn)接到組培苗增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)30d后，將增殖的芽再繼續(xù)切成單芽在不定芽增殖培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)。擴(kuò)繁14~61000株~70009生根培養(yǎng)轉(zhuǎn)接4cm~5cm培養(yǎng)在室溫為25℃，光照強(qiáng)度為54μmol·m-2·s-1，環(huán)境相對(duì)濕度為60%和光周期為晝夜14h/10h條件下培養(yǎng)18d~21d，同時(shí)苗長(zhǎng)有主、側(cè)根時(shí)即可移栽。3煉苗選擇葉色濃綠，生根數(shù)多，高5cm~6cm健壯的組培苗，打開(kāi)瓶蓋，在自然光、室溫下煉苗2d~3d。=3：2：112130n移栽8510d20d3d11檔案管理11檔案管理在“贛葛1號(hào)”粉葛組培微插過(guò)程中，詳細(xì)記載初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和煉苗等資料檔案，妥善保存。4附錄A（規(guī)范性附錄）MS培養(yǎng)基母液配方及配制表A.1MS母液成分用量定容每升用量母液1（50倍）NH4NO382.5g1000mL20mLKNO395.0gMgSO4·7H2O18.5g母液2（100倍）CaCl2·H2O44.0g1000mL10mL母液3（100倍）KH2PO417.0g1000mL10mL母液4（100倍）Na2-EDTA3.730g1000mL10mLFeSO4·7H2O2.780g母液5（50倍）H3BO30.31g1000mL20mLMnSO4·4H2O1.115gZnSO4·7H2O0.43gKI0.0415gNaMoO4·2H2O0.0125gCuSO4·5H2O0.00125gCoCl2·6H2O0.00125g母液6（200倍）肌醇（Inositol）20.0g1000mL5mL甘氨酸（Gly）0.4g煙酸（VB3）0.100g鹽酸吡哆醇（VB6）0.100g煙酸硫胺素（VB1）0.020g5附錄B（規(guī)范性附錄）植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)母液配制方法按照下列步驟進(jìn)行配制：（）50mg～100mg；IAA、IBA、NAA、2,4-D）0.1mol/LNaOH95%的KT、ZT、6-BA）mol/LHCl100mL0.5～1mg/mL66C附錄C（規(guī)范性附錄）MS培養(yǎng)基的配制流程