通痹液分子透入對(duì)實(shí)驗(yàn)性椎管內(nèi)瘢痕羥脯氨酸含量的影響

通痹液分子透入對(duì)實(shí)驗(yàn)性椎管內(nèi)瘢痕羥脯氨酸含量的影響【關(guān)鍵詞】通痹液；,,椎板切除術(shù)；,,硬膜外瘢痕增生；,,羥脯氨酸摘要：目的通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察和評(píng)價(jià)通痹液分子透入對(duì)硬膜外瘢痕羥脯氨酸含量的影響，并初步討論其作用機(jī)理。方法45只大白兔切除L5椎板后造成1.2×0.5硬脊膜裸露區(qū)，隨機(jī)分為3組：空白組〔B組〕不作任何治療，對(duì)照組〔S組〕濾紙浸透0.9%氯化鈉注射液后，行低頻脈沖治療，實(shí)驗(yàn)組〔TB組〕濾紙浸透通痹液后，行低頻脈沖治療。術(shù)后3、5、8周進(jìn)展瘢痕組織行羥脯氨酸含量測(cè)定。結(jié)果第3周各組羥脯氨酸含量差異無(wú)顯著性差異〔P0.05〕，第5周B組羥脯氨酸含量高于S、TB組〔P0.05〕，第8周TB組羥脯氨酸含量低于B、S組〔P0.01〕。S、B組3個(gè)時(shí)相羥脯氨酸含量呈顯著增加趨勢(shì)〔P0.05〕，TB組羥脯氨酸含量也呈增高趨勢(shì)，第8周羥脯氨酸的含量與第3周比擬有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔P0.05〕。結(jié)論通痹液分子透入通過(guò)藥物分子和低頻電脈沖的綜合作用，能減少瘢痕生成，抑制膠原纖維的形成。關(guān)鍵詞：通痹液；椎板切除術(shù)；硬膜外瘢痕增生；羥脯氨酸硬膜外瘢痕增生是引起腰椎手術(shù)失敗綜合征〔failedbaksurgerysyndre，F(xiàn)BSS〕的一個(gè)常見(jiàn)的重要原因。一般認(rèn)為，血腫和炎性滲出［1，2］是導(dǎo)致硬膜外瘢痕增生的重要因素。以活血祛淤、利水通絡(luò)立法，用經(jīng)歷方通痹液通過(guò)分子透入預(yù)防FBSS獲得較好的臨床效果［3］，為討論其作用機(jī)理，建立實(shí)驗(yàn)性椎管內(nèi)瘢痕形成模型，觀察其對(duì)羥脯氨酸含量的影響。1材料1.1材料1.1.1動(dòng)物的選擇普通級(jí)安康成年大耳白兔45只，體重2.5～3.0kg，雄性。由湖南中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2藥物的制備通痹液由桃仁、紅花、丹參、防己、黃芪等10味中藥組成，按等份參加多能提取罐中水提3次，然后低溫減壓濃縮至5%濃度。藥液由湖南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院制劑室制備。1.3儀器與試劑DZYB型電腦骨質(zhì)增生治療儀〔北京無(wú)線電儀器廠消費(fèi)〕；751型紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)〔上海分析儀器廠〕；分析天平〔北京光學(xué)儀器廠〕；羥脯氨酸測(cè)試盒〔南京建成生物工程研究所一分所提供，批號(hào)20020509〕。2方法2.1椎板缺損模型的制作將全部45只家兔，按孫康等［4］的方法制作成椎板缺損模型。以橫突和棘突明顯突出的L7椎為參照，確定L5棘突，以L5棘突為中心，剪除面積為4.0×4.0的兔毛，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)25%烏拉坦，按1.0g/kg劑量行兔耳緣靜脈麻醉，將兔固定于手術(shù)臺(tái)上，部分用絡(luò)合碘消毒，鋪無(wú)菌巾。以L5棘突為中心，取兔背部正中切口，長(zhǎng)約3，向兩側(cè)剝離豎脊肌，暴露并咬除L5棘突及椎板，造成1.2×0.5椎板缺損，切除其下的黃韌帶，去除硬膜外脂肪，完全裸露硬脊膜，去除碎骨片，徹底止血，沖洗切口，逐層縫合切口，無(wú)菌紗布包扎。所有動(dòng)物術(shù)后3d內(nèi)每天肌注青霉素鈉鹽2次，40萬(wàn)u/次，傷口換藥1次，5d后拆線。2.2動(dòng)物的分組造模成功后，將45只家兔稱(chēng)重，按體重大小排序編號(hào)，查隨機(jī)數(shù)目表將45只家兔隨機(jī)分為空白對(duì)照組〔blankntrlgrup,B組〕、低頻電對(duì)照組〔0.9%sdiuhlridegrup,S組〕、實(shí)驗(yàn)組〔TngBislutingrup,TB組〕，每組15只。所有動(dòng)物在同一條件下單籠喂養(yǎng)，籠上編號(hào)。2.3治療方法2.3.1B組術(shù)后不作治療。2.3.2S組低頻脈沖治療，2.0×2.0濾紙加0.9%氯化鈉注射液2l，墊在切口兩側(cè)并置導(dǎo)入，在運(yùn)動(dòng)閾下進(jìn)展治療，造模后第3天開(kāi)場(chǎng)，1次/d，25in/次。2.3.3TB組低頻脈沖治療，2.0×2.0濾紙加通痹液2l，墊在切口兩側(cè)并置導(dǎo)入，在運(yùn)動(dòng)閾下進(jìn)展治療，造模后第3天開(kāi)場(chǎng)，1次/d，25in/次。2.4觀察方法2.4.1觀察時(shí)相點(diǎn)確實(shí)定根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)觀察結(jié)果及相關(guān)文獻(xiàn)資料，于術(shù)后3，5，8周3個(gè)時(shí)相點(diǎn)對(duì)B，S，TB3組進(jìn)展分批處死，每時(shí)相點(diǎn)各組處死5只動(dòng)物。2.4.2標(biāo)本的采集與預(yù)制空氣栓塞法處死動(dòng)物后，立即完好取出手術(shù)段脊椎，從側(cè)方切開(kāi)豎脊肌，取椎板切除部位硬脊膜后部的瘢痕組織，大小約為0.2×0.2×0.1，漂洗后置于100℃恒溫箱中烘干，稱(chēng)干重。作羥脯氨酸含量測(cè)定。2.4.3瘢痕組織羥脯氨酸含量測(cè)定烘干后的瘢痕組織按干粉10g/l比例參加6l/L鹽酸，在105℃高溫下水解10h，使其成為游離氨基酸，汲取水解液0.1l，滴入酸酞指劑，并參加2l/L的氫氧化鈉0.3l中和鹽酸，取標(biāo)本液按羥脯氨酸試劑盒方法進(jìn)展測(cè)試。根據(jù)膠原纖維中羥脯氨酸的含量比例〔13.4%〕推算出膠原纖維的含量［5］。2.5統(tǒng)計(jì)方法各時(shí)相點(diǎn)組間比擬采用方差分析，不同時(shí)相點(diǎn)組內(nèi)比擬采用兩因素方差分析。3結(jié)果硬膜外瘢痕羥脯氨酸含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。第3周，各組瘢痕組織剛剛形成，羥脯氨酸含量無(wú)顯著性差異〔P0.05〕；第5周，B組羥脯氨酸含量高于S組、TB組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔P0.05或P0.01〕，S組羥脯氨酸含量高于TB組，具有顯著性差異〔P0.05〕。說(shuō)明低頻脈沖和通痹液透入均可減少瘢痕形成量，中藥透入效果更優(yōu)；第8周，B組羥脯氨酸含量明顯高于S組和TB組，具有顯著性差異〔P0.01〕，S組羥脯氨酸含量高于TB組，亦具有顯著性差異〔P0.01〕，說(shuō)明低頻脈沖和通痹液透入均可明顯減少瘢痕形成量，通痹液透入效果更優(yōu)于低頻脈沖。B、S組相鄰時(shí)相羥脯氨酸含量呈顯著增加趨勢(shì)〔P0.05〕，TB組羥脯氨酸含量也呈增高趨勢(shì)，但相鄰時(shí)相間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔P0.05〕，第8周羥脯氨酸的含量與第3周比擬有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔P0.05〕，說(shuō)明瘢痕組織的增生是椎板切除術(shù)后的根本病理變化，通痹液透入可明顯抑制瘢痕增生。4討論4.1椎管內(nèi)瘢痕粘連形成機(jī)理腰椎手術(shù)后機(jī)體的修復(fù)屬于瘢痕修復(fù)。以血腫為中介，在各種因素影響下，因多種炎性介質(zhì)、生長(zhǎng)因子引發(fā)的修復(fù)細(xì)胞增殖及活性增強(qiáng)，膠原超常合成，沉積與降解減少，是椎管內(nèi)瘢痕增生與粘連形成的病理基矗中醫(yī)理論認(rèn)為，腰椎術(shù)后，椎板缺損，筋肉受傷，脈絡(luò)破損，血逸脈外，在椎板缺損區(qū)形成血腫，致使淤血停留。如血腫量少，淤血能及時(shí)消散，血脈暢通，當(dāng)無(wú)大礙，如血腫量大，無(wú)力自行消散，那么刺激經(jīng)絡(luò)，阻礙經(jīng)氣，引發(fā)腰腿疼痛。淤積日久，氣不行水，而化濕生痰，痰淤互結(jié)，在硬膜外形成淤痰塊，更加擠壓刺激腰部經(jīng)絡(luò)，使腰腿疼痛麻木病癥纏綿難愈。綜上所述，淤血作為腰椎術(shù)后不可防止形成的病理產(chǎn)物，如不能及時(shí)消散，那么化濕生水聚痰，形成難以消除的塊，成為導(dǎo)致腰椎手術(shù)失敗綜合征的重要致病因素。防治方法，應(yīng)活血化淤，治病求本，同時(shí)又需利水消腫，到達(dá)既病防變的目的。表1各組不同時(shí)相硬膜外膠原含量〔略〕組間比擬★P0.05,與B組比擬，*P0.05;與S比擬,△P0.05，與B組比擬，△P0.05;與B組比擬*P0.05，與B、S比擬●P0.01;組內(nèi)比擬與前一時(shí)相比，▲P0.05；n=54.2通痹液組方根據(jù)通痹液由桃仁、紅花、丹參、田七、土蟲(chóng)、大黃、乳香、伸筋草、防己、黃芪等10味中藥組成。方中以活血祛淤之桃仁、紅花為君藥，利水消腫之防已、黃芪為臣藥，佐以活血化淤之丹參、田七、土蟲(chóng)、大黃、乳香及舒筋活絡(luò)之伸筋草，共奏活血祛淤、利水通絡(luò)之功?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究說(shuō)明，桃仁可進(jìn)步血小板中AP程度，抑制ADP誘導(dǎo)血小板聚集，抑制血液凝固及血栓形成；紅花具有抗凝血，抗血小板聚集及纖溶，減少膠原蛋白生成的作用；大黃可抑制細(xì)胞膜Na+，K+ATP酶的活性，進(jìn)步血漿浸透壓，使組織內(nèi)水分向血管內(nèi)轉(zhuǎn)移，使血液稀釋、血容量增加，從而解除微循環(huán)障礙；丹參可抑制成纖維細(xì)胞膠原合成率和纖維連結(jié)素的產(chǎn)量，抑制成纖維細(xì)胞的增殖和生長(zhǎng)。防己、黃芪、田七、土鱉蟲(chóng)能抑制血小板聚集。4.3通痹液分子透入對(duì)椎管內(nèi)瘢痕羥脯氨酸含量影響的作用機(jī)理膠原蛋白是構(gòu)成瘢痕組織膠原纖維的主要組成成分，其主要特征是在它的氨基酸成分中，羥脯氨酸占12%～14%。除彈性蛋白含有1%～2%羥脯氨酸外，這個(gè)氨基酸在其它動(dòng)物組織蛋白質(zhì)中是沒(méi)有的，因此，可把羥脯氨酸作為判斷膠原含量的特殊標(biāo)志。低頻脈沖電作用于人體，具有改善部分血液循環(huán)、減輕組織水腫、促進(jìn)炎癥產(chǎn)物的吸收，加強(qiáng)部分組織的營(yíng)養(yǎng)和代謝等特點(diǎn)。并且電流能進(jìn)步組織膜和組織膜的通透性，使藥物分子由于藥物濃度梯度的擴(kuò)散作用，通過(guò)皮膚的組織間隙與細(xì)胞間隙較多地進(jìn)入體內(nèi)，形成藥物分子堆。藥物分子堆一方面刺激皮內(nèi)的末梢神經(jīng)，起到部分和遠(yuǎn)隔部位的治療作用，另一方面藥物進(jìn)入相應(yīng)組織后，在部分發(fā)揮其獨(dú)特的藥理作用，電流和藥物還可能對(duì)末梢感覺(jué)器產(chǎn)生刺激，引起軸突反射及節(jié)段反射作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示分子透入能降低模型動(dòng)物硬膜外瘢痕組織中羥脯氨酸的含量。其可能的作用機(jī)制是：藥物分子由低頻電的作用，累積于病損處形成藥物分子堆，電流和藥物協(xié)同作用，降低部分炎癥反響程度，抑制成纖維細(xì)胞的增殖和生長(zhǎng)，減少膠原纖維形成。參考文獻(xiàn)：［1］胡有谷.腰椎間盤(pán)突出癥，第2版［］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1995：313.［2］王歡，郝立波，王海義.血腫在硬膜外瘢痕粘連形成中作用的討論［J］.中華骨科雜志，1998，18(3):