第九章 體液葡萄糖檢驗(yàn).-06-9課件

第九章體液葡萄糖檢驗(yàn)糖是人體的主要能源,也是構(gòu)成機(jī)體結(jié)構(gòu)的重要主成成份。體內(nèi)的糖是在有關(guān)激素的調(diào)節(jié)下,維持與機(jī)體適應(yīng)的代謝平衡,血糖是反映體內(nèi)糖代謝狀況的常用指標(biāo)。臨床上常見的糖代謝紊亂主要是血糖濃度過(guò)高和過(guò)低。目錄第一節(jié)糖代謝及調(diào)節(jié)-

糖的重要生理作用-血糖的來(lái)源與去路-血糖濃度的調(diào)節(jié)第二節(jié)糖尿病-糖尿病的分型-幾種糖尿病的主要特點(diǎn)-口服糖耐量試驗(yàn)第三節(jié)糖尿病的生化檢測(cè)血糖的概念血糖是指血液中的糖,正常人血液中的糖主要是葡萄糖,且測(cè)定血糖的方法也主要是檢測(cè)葡萄糖,血糖是指血液中的葡萄糖。參考值:3.89--6.11mmol/L一、糖的重要生理作用1.人體的主要組成成分之一2.重要的供能物質(zhì)二、血糖的來(lái)源與去路胃腸肝臟血糖3.89-6.11mmol/L腎消化吸收肝糖元分解糖異生其他單糖轉(zhuǎn)化組織攝取有氧氧化無(wú)氧酵解合成糖元轉(zhuǎn)化成脂類氨基酸和其他糖類或衍生物供能合成轉(zhuǎn)化糖尿超過(guò)腎糖閥來(lái)源去路三、血糖濃度的調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用激素的調(diào)節(jié)作用肝臟在糖代謝調(diào)節(jié)中的作用神經(jīng)系統(tǒng)激素肝臟肌肉脂肪等組織酶活性改變胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF)一種多肽，有類似于胰島素的代謝作用和促生長(zhǎng)作用。IGFⅠ：生長(zhǎng)調(diào)節(jié)素C，在生長(zhǎng)激素的調(diào)控下由肝臟產(chǎn)生，是細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的主要調(diào)節(jié)因子激素調(diào)節(jié)—升高血糖的激素2.腎上腺素（epinephrine）腎上腺髓質(zhì)分泌的兒茶酚胺類激素，促進(jìn)肝糖原分解，升高血糖，并降低血糖的利用。在胰高血糖素分泌受損時(shí)，是升高血糖的關(guān)鍵激素腎上腺髓質(zhì)腫瘤可分泌過(guò)量腎上腺素，引起高血糖癥血糖濃度調(diào)節(jié)降低血糖的激素升高血糖的激素胰島素胰島素樣生長(zhǎng)因子胰高血糖素腎上腺素生長(zhǎng)激素皮質(zhì)醇第二節(jié)糖尿病

（diabetesmellitus）概述糖尿病是一組由于胰島素分泌不足或/和胰島素作用低下而引起的代謝性疾病，其特征是高血糖癥。糖尿病的長(zhǎng)期高血糖將導(dǎo)致多種器官的損害、功能紊亂和衰竭，尤其是眼、腎、神經(jīng)、心臟和血管系統(tǒng)。概述兩種病理過(guò)程參與糖尿病的發(fā)病機(jī)制：①胰腺β細(xì)胞的自身免疫性損傷；②機(jī)體對(duì)胰島素的作用產(chǎn)生抵抗。糖尿病人胰島素的絕對(duì)或/和相對(duì)不足是導(dǎo)致糖、脂肪和蛋白質(zhì)代謝紊亂的基礎(chǔ)。兩種機(jī)制可以共存于同一患者，有時(shí)很難鑒別哪一個(gè)是原發(fā)性的原因。概述糖尿病的典型癥狀為多尿、煩渴、多飲和體重減輕，有時(shí)伴隨有多食及視力下降。長(zhǎng)期高血糖使患者易繼發(fā)感染，青少年患者可出現(xiàn)生長(zhǎng)發(fā)育遲緩。糖尿病可并發(fā)危及生命的糖尿病酮癥酸中毒昏迷和非酮癥高滲性昏迷。糖尿病的病因?qū)W分類（2001年）

1型糖尿病β細(xì)胞破壞，導(dǎo)致胰島素絕對(duì)不足-自身免疫性（占80%以上）-特發(fā)性2型糖尿病-胰島素抵抗伴胰島素分泌不足-胰島素分泌不足伴/不伴胰島素抵抗妊娠糖尿?。℅DM）糖尿病的病因?qū)W分類（2001年）特殊型糖尿病β細(xì)胞功能基因異常胰島素作用基因異常胰腺外分泌疾病內(nèi)分泌疾病藥物或化學(xué)制劑所致感染免疫介導(dǎo)的罕見類型可能伴有糖尿病的其他遺傳綜合征糖尿病的主要代謝紊亂急性變化糖代謝紊亂：血糖濃度增高，超過(guò)腎閾，出現(xiàn)糖尿脂代謝紊亂：高脂血癥，游離脂肪酸增加，生成酮體過(guò)多蛋白質(zhì)代謝紊亂：肌糖原合成減少，分解加強(qiáng)，蛋白質(zhì)分解加強(qiáng)，表現(xiàn)為肌無(wú)力、體重減輕和兒童為生長(zhǎng)遲緩糖尿病的主要代謝紊亂慢性變化長(zhǎng)期高血糖使蛋白質(zhì)糖基化，糖基化蛋白質(zhì)分子與正常蛋白質(zhì)互相結(jié)合交聯(lián)，使分子不斷加大，形成大分子的糖化產(chǎn)物。如膠原蛋白、晶體蛋白、髓鞘蛋白等，從而引起血管基底膜增厚、晶體混濁變性、和神經(jīng)病變等。由此引起的大血管、微血管和神經(jīng)病變時(shí)引起眼、腎、神經(jīng)、血管等多器官損害的基礎(chǔ)。糖尿病的主要代謝紊亂非酮癥高滲性糖尿病昏迷(hyperosmolarnonketoticdiabeticcoma,HNDC)特點(diǎn)：發(fā)生率低于糖尿病酮癥酸中毒，以嚴(yán)重高血糖而無(wú)明顯酮癥酸中毒、血漿滲透壓升高、失水和意識(shí)障礙為特征。糖尿病的診斷糖尿病的診斷本身并不困難，但要準(zhǔn)確作出診斷必須依據(jù)一定的標(biāo)準(zhǔn)，特別對(duì)那些有潛在糖尿病傾向的人群應(yīng)進(jìn)行相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室檢查。糖尿病的診斷標(biāo)準(zhǔn)（2001年）

1.出現(xiàn)糖尿病癥狀加上隨機(jī)血漿葡萄糖濃度≥11.1mmol/L（200mg/dl）。隨機(jī)是指一天內(nèi)任何時(shí)間，不管上次用餐時(shí)間。2.空腹血漿葡萄糖（FPG）≥7.0mmol/L(126mg/dl)?？崭怪钢辽?h內(nèi)無(wú)含熱量食物的攝入。3.口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（OGTT），2h血漿葡萄糖≥11.1mmol/L(200mg/dl)。試驗(yàn)應(yīng)按WHO的要求進(jìn)行，受試者服用的糖量相當(dāng)于溶于水的75g無(wú)水葡萄糖。

OGTT的三個(gè)主要環(huán)節(jié)1.測(cè)定前的準(zhǔn)備工作2.血漿（清）葡萄糖測(cè)定3.糖耐量曲線的解釋測(cè)定前的準(zhǔn)備工作試驗(yàn)前三天，每日飲食中糖含量不應(yīng)低于150g，且維持正?；顒?dòng)；影響試驗(yàn)的藥物應(yīng)在三日前停用；試驗(yàn)前病人應(yīng)至少8小時(shí)禁食后采血；采血后5分鐘內(nèi)飲入250ml含75g無(wú)水葡萄糖的糖水，以后每隔30分鐘取血一次，共四次；整個(gè)試驗(yàn)中不可吸煙，喝咖啡、茶和進(jìn)食。糖耐量曲線mmol/L分鐘編號(hào)臨床資料糖負(fù)荷后時(shí)間(min)03060901201男，65歲，肥胖8.813.817.516.816.72女，62歲，口腔廣泛潰瘍6.011.715.216.417.03男，41歲，糖尿數(shù)周6.79.510.810.19.54女，75歲5.08.610.711.010.2第三節(jié)糖尿病的生化檢測(cè)一、血糖的測(cè)定（一）標(biāo)本的采集及處理1.標(biāo)本類型：全血Glu<血漿Glu濃度10-15%靜脈Glu<動(dòng)脈Glu7%毛細(xì)血管Glu=靜脈Glu（空腹），進(jìn)食后則不一致建議：測(cè)定靜脈血漿葡萄糖較為方便可靠一、血糖的測(cè)定2.采集時(shí)間、部位可取空腹血，餐后2小時(shí)血，或隨機(jī)血，但意義不同。對(duì)于住院病人尤其要注意采集部位一、血糖的測(cè)定3.標(biāo)本處理靜脈血+2mg/ml草酸鉀（EDTA或肝素）（抗凝）+2-5mg氟化鈉/ml血（阻止糖酵解）新鮮采集的全血室溫下最初酵解7%，以后的酵解則減慢，有白細(xì)胞增多或細(xì)菌時(shí)酵解增加。分離出的血清，25℃下穩(wěn)定8小時(shí)，4℃下穩(wěn)定72小時(shí)。建議：無(wú)防腐劑的全血必須在1小時(shí)內(nèi)分離出血清或血漿，并及時(shí)測(cè)定。二、測(cè)定方法1.化學(xué)法銅還原法芳香胺縮合法（鄰甲苯胺法）2.酶法葡萄糖氧化酶-過(guò)氧化物酶法（臨檢中心推薦）己糖激酶法（參考方法）3.葡萄糖氧化酶氧消耗法—氧電極分析二、測(cè)定方法1.銅還原法原理：Glu+Cu2+Cu+Cu+與磷鉬酸反應(yīng)生成鉬藍(lán)（Folin-Wu法，）Cu+與砷鉬酸反應(yīng)生成鉬藍(lán)（Somogyi-Nelson法）評(píng)價(jià)：血中肌酸、肌酐、尿酸和非糖還原性物質(zhì)（谷胱甘肽，VitC等）均干擾測(cè)定結(jié)果，產(chǎn)生假陽(yáng)性，因此特異性低。操作較繁瑣，一般必須制備無(wú)蛋白濾液。二、測(cè)定方法2.鄰甲苯胺法（O-T法）原理：Glu+O-TΔ

縮合、脫水Schiff堿藍(lán)綠色化合物（630nm）評(píng)價(jià)1.此法受煮沸時(shí)間、比色時(shí)間、試劑存放時(shí)間等因素的影響。一般不宜以校正曲線法進(jìn)行計(jì)算，故每次應(yīng)同時(shí)作標(biāo)準(zhǔn)管。2.鄰甲苯胺在冰醋酸中并不十分穩(wěn)定，易氧化產(chǎn)生棕色物質(zhì)而干擾比色，故在鄰甲苯胺試劑中加入硫脲，使試劑有抗氧化作用，減少棕色干擾，增加試劑的穩(wěn)定性，降低空白管的吸光度，并有一定的增色效應(yīng)。鄰甲苯胺法操作步驟

加入物(ml)空白管標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管蒸餾水0.1--葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液-0.1-血清/血漿/腦脊液--0.1鄰甲苯胺試劑3.03.03.0混勻，置沸水中煮沸5min，取出置冷水中冷卻3min，在630nm處比色，以空白管調(diào)零，讀取各管吸光度。二、測(cè)定方法3.葡萄糖氧化酶法原理：Glu+H2OGODH2O2+葡萄糖酸H2O2+4-氨基安替比林+酚POD

紅色醌類化合物（520nm）評(píng)價(jià)：特異性高，操作簡(jiǎn)單，結(jié)果可靠，是我國(guó)臨檢中心推薦方法。還原性物質(zhì)谷胱甘肽，VitC、膽紅素等干擾測(cè)定結(jié)果，因此特異性低。葡萄糖氧化酶法測(cè)定血清（漿）葡萄糖試劑組成:1．0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.0)2．酶試劑3．酚溶液4．12mmol/L苯甲酸溶液5．5mmol/L葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液葡萄糖氧化酶法測(cè)血糖操作步驟加入物(ml)空白管標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管血清--0.02葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液-0.02-蒸餾水0.02--酶酚混合試劑3.03.03.0混勻，置37℃水浴中，保溫15min，在波長(zhǎng)505nm處比色，以空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管及測(cè)定管吸光度。葡萄糖氧化酶法方法評(píng)價(jià):

線性范圍至少可達(dá)22.24mmol/L，回收率94%～105%，批內(nèi)CV為0.7%～2.0%。批間CV為2%左右，日間CV為2%～3%。葡萄糖氧化酶法與己糖激酶法比較，73份標(biāo)本葡萄糖氧化酶法均值為8.31mmol/L，已糖激酶法均值8.21mmol/L，相關(guān)系數(shù)為0.9986，回歸方程y=1.0026x－2.29。葡萄糖氧化酶法方法評(píng)價(jià):本法測(cè)定葡萄糖非常特異，從原理反應(yīng)式中可知第一步是特異反應(yīng)，第二步特異性較差。誤差往往發(fā)生在反應(yīng)的第二步。一些還原性物質(zhì)如尿酸、維生素C、膽紅素和谷胱甘肽等，可與色原性物質(zhì)競(jìng)爭(zhēng)過(guò)氧化氫，從而消耗反應(yīng)過(guò)程中所產(chǎn)生的過(guò)氧化氫，產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)性抑制，使測(cè)定結(jié)果偏低。葡萄糖氧化酶法溶血標(biāo)本血紅蛋白的濃度達(dá)10g/L，黃疽標(biāo)本膽紅素濃度達(dá)342μmol/L，維生素C小于30mg/L，均不影響測(cè)定結(jié)果。氟化鈉濃度達(dá)2g/L不干擾測(cè)定結(jié)果。標(biāo)本中含尿素濃度達(dá)46.7mmol/L，尿酸濃度達(dá)2.95mmol/L，肌酐濃度達(dá)4.42mmol/L。半胱氨酸濃度達(dá)3.30mmol/L，甘油三酯濃度達(dá)5.6mmol/L，膽固醇4.40mmol/L，對(duì)測(cè)定結(jié)果均無(wú)顯著影響。二、測(cè)定方法4.己糖激酶法（Herokinase）原理：Glu+ATPHKG-6-P+ADPG-6-P+NADPG-6-PDH6-P-葡萄糖酸+H++NADPH（340nm)評(píng)價(jià)：準(zhǔn)確度、精密度好，特異性高，是國(guó)際上公認(rèn)的參考方法。二、測(cè)定方法5.葡萄糖氧化酶氧消耗法—氧電極分析將氧電極放入含有適量葡萄糖氧化酶的溶液中，當(dāng)加入一定量的葡萄糖溶液后，葡萄糖被氧化而消耗氧。氧耗量與葡萄糖濃度成正比，而極限擴(kuò)散電流又與溶液中氧含量成正比，因此氧電極電流值即可反映樣品中葡萄糖濃度。三、乳酸測(cè)定標(biāo)本收集保持空腹和完全靜息狀態(tài)至少2小時(shí)，使血中乳酸濃度達(dá)到穩(wěn)態(tài)。不使用壓脈帶，或穿刺血管后將壓脈帶松開，讓血液流動(dòng)幾分鐘后再采集?？墒褂脛?dòng)脈血如用血漿測(cè)定，應(yīng)加氟化鈉防止酵解，并盡快分離血漿三、乳酸測(cè)定測(cè)定原理：

LAC+NAD

乳酸脫氫酶

丙酮酸+H++NADH（340nm)乳酸中毒缺氧型:休克、低血容量等疾病：糖尿病、腫瘤、肝病、藥物或毒物等，與氧利用減弱有關(guān)四、糖化蛋白

糖化血紅蛋白（glycoseylatedhemoglobin，GHb）GHb是在紅細(xì)胞生存期間，HbA與血中己糖緩慢、連續(xù)、不可逆的非酶促反應(yīng)產(chǎn)物，其比例的多少取決于血糖濃度與作用時(shí)間GHb濃度反映測(cè)定日前2-3個(gè)月內(nèi)血糖平均水平，評(píng)估血糖控制效果四、糖化蛋白測(cè)定實(shí)驗(yàn)室一般檢測(cè)HbA1C方法：離子交換層析法親和層析法免疫法等評(píng)價(jià)溶血性疾病或其他疾病引起紅細(xì)胞壽命下降，HbA1C降低大量失血，HbA1C降低

五、其它指標(biāo)的測(cè)定胰島素測(cè)定方法：RIA、ELISA、電化學(xué)發(fā)光法等臨床應(yīng)用對(duì)空腹低血糖進(jìn)行評(píng)估糖尿病分型區(qū)分是否需要胰島素治療五、其它指標(biāo)的測(cè)定C肽無(wú)生物學(xué)活性，無(wú)胰島素的免疫原性質(zhì)，因此不受外源性胰島素干擾且不與胰島素抗體反應(yīng)在腎臟代謝，其濃度更好反映β細(xì)胞分泌功能五、其它指標(biāo)的測(cè)定測(cè)定方法：免疫法-RIA競(jìng)爭(zhēng)法臨床應(yīng)用評(píng)估空腹低血糖：β細(xì)胞瘤、醫(yī)源性低血糖癥評(píng)估胰島素分泌監(jiān)測(cè)胰腺手術(shù)效果如需連續(xù)評(píng)價(jià)β細(xì)胞功能可檢測(cè)尿液C肽

測(cè)定胰島素、胰島素原、

C肽、胰高血糖素的臨床意義

胰島素評(píng)估空腹低血糖；糖尿病分類；預(yù)測(cè)糖尿病，評(píng)估β-細(xì)胞活性；研究胰島素抵抗。胰島素原診斷β細(xì)胞腫瘤；家族性高胰島素原血癥；確定胰島素分析的交叉反應(yīng)。C肽評(píng)估空腹低血糖:1.胰島β細(xì)胞腫瘤;2.醫(yī)源性低血糖癥.3.糖尿病分類.4.評(píng)估β細(xì)胞