RNA提取中基因組DNA殘留解決方案

解決RNA提取時(shí)候有基因組DNA殘留的問題第一種方法：傳統(tǒng)的大家都知道的RNasefree的DNA酶消化的方法我就不多說了，我主要說說（DNA酶柱上柱上消化），這個(gè)方法簡單些。提取樣品：葡萄葉片提取試劑盒：RN09EASYspin植物RNA提取試劑盒。28SRNA電泳圖電泳圖A電泳圖B電泳圖C圖片說明：電泳圖A是未使用DNA酶消化直接提取得到的RNA,B是洗脫下來RNA后，用DNA酶消化的，可見明顯基因組DNA。電泳圖C是柱上消化之后的，未見基因組DNA殘留。電泳圖Cmarker為DL2000，最大條帶是2kb?？蛻糁螪NA酶消化方法：A:DNaseI工作液的配制：40皿RNasefreeDNaseI（MBIfermentas）1U/gl力口35gl10xDNaseIBuffer輕柔混勻配成工作液體。如果DNA殘留少，可以減少DNA酶用量。B:操作步驟：1?前面按照正常步驟操作，在加入去蛋白液RW1步驟前按照以下步驟操作。2?向吸附柱RA中加入350gl去蛋白液RW1，12,000rpm離心30-60秒，棄廢液，將吸附柱放回收集管中。3?向吸附柱RA中央加入75gl的DNaseI工作液，室溫放置15分鐘。4?向吸附柱RA中加入350gl去蛋白液RW1， 12,000rpm離心30-60秒，棄廢液，將吸附柱放回收集管中。5?接漂洗液RW步驟等后續(xù)步驟。以QiagenRNasefreeDNaseset舉例（qiagen貨號(hào)：79254）A:DNaseI儲(chǔ)存液的配制：將DNaseI干粉（1500Kunitz單位）溶解在550卩l(xiāng)RNase-free水中，輕柔混勻，分裝后-20°C貯存（可保存9個(gè)月）。注意從-20C融化后的DNaseI儲(chǔ)存液保存于4C（可保存6周），不要再次凍存。B:DNaseI工作液的配制：取10glDNaseI儲(chǔ)存液加70glRDD（產(chǎn)品中附帶）溶液，輕柔混勻。

操作步驟：1?前面按照正常步驟操作，在加入去蛋白液RW1步驟前按照以下步驟操作。2?向吸附柱RA中加入350皿去蛋白液RW1，12,000rpm離心30-60秒，棄廢液，將吸附柱放回收集管中。3?向吸附柱RA中央加入80皿的DNaseI工作液，室溫放置15分鐘。4?向吸附柱RA中加入350皿去蛋白液RW1，12,000rpm離心30-60秒，棄廢液，將吸附柱放回收集管中。5?接漂洗液RW步驟等后續(xù)步驟。第二種方法：獨(dú)家產(chǎn)品RN38EASYspinPlus植物RNA提取試劑盒（RN09的基礎(chǔ)上添加基因組清除柱子，提取過程種直接去除基因組DNA殘留）另外一個(gè)選擇就是嘗試使用我們獨(dú)家產(chǎn)品RN38使用基因組清除柱子，提取過程種直接清除掉基因組直接可以得到不殘留基因組DNA的RNA,不需要DNA酶消化，直接可以做熒光定量PCR已經(jīng)再多種植物上面獲得成功。但是注意：雖然成功例子很多了，但是植物千變?nèi)f化，我們也不是100%成功，部分樣品可能不成功或者降低產(chǎn)量。植物樣品種類：短柄二穗草1是葉子，2是根試劑盒：使用RN38EASYspinPlus植物RNA提取試劑盒。圖片來源：廣州中山大學(xué)1：BdCkSl（第一次洗脫）2：BdCkR1（第一次洗脫）3：BdCkSl（第二次洗脫）4：BdCkR1（第二次洗脫）M:DS2000marker圖片說明：試劑盒提取草坪草莖干RNA電泳圖。左為使用RN09EASYspin植物RNA提取試劑盒結(jié)果,右為使用R