高三生物一輪復習易錯點講義微生物的分離和計數(shù)

13/13微生物的分離和計數(shù)易錯歸因對微生物分離的方法原理、操作注意事項等掌握不全面；對微生物計數(shù)的方法原理、計算公式理解不到位等。典型易錯題例1（2022·遼寧·建平縣實驗中學模擬預測）酵母的蛋白含量高，可用作飼料蛋白，且有些酵母能利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進行繁殖，既可減少污染，又可降低成本。研究人員擬從土壤中分離該類酵母并大量培養(yǎng)，操作流程如下圖。下列相關敘述錯誤的是（

）（注：25×16型血細胞計數(shù)板，表示計數(shù)室中有25個中格，每個中格又分成16個小格。）A．取步驟②中不同梯度的稀釋液加入標記好的無菌培養(yǎng)皿中，在步驟③中將溫度約70℃的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿混勻B．只有③過程中使用的培養(yǎng)基需以甲醇作為唯一的碳源C．⑤過程擴大培養(yǎng)時需要保證充足的營養(yǎng)并營造無氧環(huán)境D．將發(fā)酵液稀釋1000倍后，用25×16（1mm×1mm×0.1mm）血細胞計數(shù)板計數(shù)5個中格中的細胞數(shù)為60個，則發(fā)酵液中每毫升有3×109個細胞【答案】D【解析】分離某種微生物的原理：選擇適合于待分離微生物的生長條件，如營養(yǎng)，酸堿度，溫度和氧等要求或加入某種抑制物質造成只利于該微生物生長，而抑制其他微生物生長的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物。平板澆注分離是將少量的菌液與融化的固體培養(yǎng)基充分混合均勻后倒入培養(yǎng)皿，所以溫度過高使微生物失活，溫度過低培養(yǎng)基又易成固態(tài)，因而選擇50°C左右的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿混勻，A錯誤；③是進行選擇培養(yǎng)，需要以甲醇作為唯一的碳源，將分解甲醇的酵母篩選出來，⑤擴大培養(yǎng)時也需要以甲醇作為唯一的碳源，不是只有③過程，B錯誤；酵母是兼性厭氧型真菌，在有氧條件下可大量繁殖，酵母擴大培養(yǎng)時，需保證充足的營養(yǎng)和氧氣等條件，C錯誤；已知血細胞計數(shù)板的規(guī)格為25×16（1mm×1mm×0.1mm），若5個中格中的細胞數(shù)為60個，則可得公式60÷（5×16）×400×10000×1000=3×109，D正確。故選D。例2（2022·湖南岳陽·一模）在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)研究上，常需要進行微生物的分離和計數(shù)。（1）下表為兩種微生物的培養(yǎng)基配方：A組KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素瓊脂1.4g2.1g0.2g10.0g1.0g15.0gB組纖維素粉NaNO3Na2HPO4·7H2OKH2PO4MgSO4·7H2OKCl酵母膏水解酪素5g1g1.2g0.9g0.5g0.5g0.5g0.5g注：上述兩種培養(yǎng)基中的物質溶解后，均用蒸餾水定容至1000mL。①雖然各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有________________________________。②從功能上來看，上述兩種培養(yǎng)基均屬于________培養(yǎng)基。根據(jù)配方判斷兩培養(yǎng)基的作用分別是：_____________________________________。（2）如圖是某同學采用的接種微生物的方法，請回答下列問題：①本實驗采用的接種微生物的方法是________________法，把聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面，為達到這一目的，操作上應注意：_______________________________________________________________________________________________________（答2項）。②三位同學用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中細菌數(shù)量，在對應稀釋倍數(shù)為106的稀釋液中各取0.1mL涂平板，得到以下統(tǒng)計結果：甲同學涂布了兩個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是236和260，取平均值248；乙同學涂布了三個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是209、240和250，取平均值233；丙同學涂布了三個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是21、212和256，取平均值163；在三位同學的統(tǒng)計中，______同學的統(tǒng)計是正確的，據(jù)此計算，每克土壤樣品中含細菌______________個?！敬鸢浮浚?）①

水、無機鹽、碳源、氮源

②選擇培養(yǎng)基

分離尿素分解菌；分離纖維素分解菌（2）

①平板劃線法

每次劃線前要灼燒接種環(huán)；冷卻后從上一次劃線的末端開始劃線

②乙

2.33×109【解析】配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠生長的細菌就是能分解尿素的細菌；分解尿素的細菌能合成脲酶將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強，在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變紅，可確定該種細菌能夠分解尿素。為了保證稀釋涂布平板法統(tǒng)計菌落數(shù)目的結果準確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)。（1）①雖然各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有水、無機鹽、碳源、氮源。②據(jù)題表中的培養(yǎng)基的配方分析，A組中的氮源為尿素，應該是篩選尿素分解菌的選擇培養(yǎng)基。B組中的碳源是纖維素，應該是篩選纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基。（2）①據(jù)圖分析，圖示表示平板劃線法接種，是把聚集的菌種逐步稀釋到培養(yǎng)基的表面，操作上應注意每次劃線前接種環(huán)要灼燒；冷卻后從上一次劃線的末端開始劃線。②在進行平板菌落計數(shù)時，應選擇菌落數(shù)在30～300之間的平板進行計數(shù)，同時為避免誤差應選擇至少3個或3個以上的平板進行計數(shù)并取平均值，因此乙同學的統(tǒng)計結果是正確的。每克土壤樣品中含細菌為（C/V）×M＝平板上菌落數(shù)的平均值÷體積×稀釋倍數(shù)=233÷0.1×106=2.33×109。解題技巧1．分離微生物的原理與措施（1）原理：自然環(huán)境中的微生物是混雜在一起的，因此分離獲得純培養(yǎng)物應首先采用的方法是將單個的細胞與其他細胞分離，再給細胞提供合適的營養(yǎng)和條件，使其生長成為可見的群體。（2）常用措施：①接種過程中盡量使細胞分散開來，如平板劃線法、稀釋涂布平板法。②通過選擇培養(yǎng)基來抑制不需要的微生物的生長，促進所需微生物的生長。2．選擇培養(yǎng)基四種常見制備方法或實例 3．微生物常用計數(shù)的方法 （1）活菌計數(shù)法（常用的是稀釋涂布平板法）：①原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少個活菌。②操作：設置重復組，增強實驗的說服力與準確性。將待測樣品經(jīng)一系列10倍稀釋，選擇三個稀釋度的菌液，分別取0.1mL接種到已制備好的平板上，然后用無菌涂布器將菌液涂布于整個平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)，計算菌落數(shù)。為使結果接近真實值，可將同一稀釋度的樣液加到三個或三個以上的平板上，經(jīng)涂布、培養(yǎng)，計算出菌落平均數(shù)。③計算公式：每克樣品中的細菌數(shù)＝（C/V）×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)。④注意事項：a、為了保證結果準確，一般選擇菌落數(shù)為30～300個的平板進行計數(shù)，若設置的重復組中結果相差太遠，意味著操作有誤，需重新實驗。b、此種方法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低。這是因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。（2）顯微鏡直接計數(shù)法：①原理：利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。②操作：用血細胞計數(shù)板計數(shù)。計數(shù)板是一塊特制的載玻片，上面有一個特定面積（1mm2）和高（0.1mm）的計數(shù)室，在1mm2的面積里又被劃分成25個（或16個）中格，每個中格進一步劃分成16個（或25個）小格，但計數(shù)室都是由400個小格組成的。將清潔干燥的計數(shù)板蓋上蓋玻片，再將稀釋的樣品滴在計數(shù)板上，稍等片刻，待細菌全部沉降到計數(shù)室底部再在顯微鏡下統(tǒng)計4～5個中格中的細菌數(shù)，并求出每個小格所含細菌的平均數(shù)，再按公式求出每毫升樣品中所含的細菌數(shù)。③計算公式：每毫升原液所含細菌數(shù)=每小格平均細菌數(shù)×400×10000×稀釋倍數(shù)。④注意事項：不能區(qū)分死菌與活菌。同類題練習1．（2022·四川·鹽亭中學一模）利用微生物分解纖維素對廢棄物污染的減輕和作物秸稈再利用具有重要意義。某興趣小組從富含纖維素的土壤中取樣，加入選擇培養(yǎng)基中進行振蕩培養(yǎng)，之后接種于鑒別培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，篩選出能夠分解纖維素的微生物。下列敘述錯誤的是（

）A．選擇培養(yǎng)的目的是促進纖維素分解菌生長，抑制其他微生物的生長B．振蕩培養(yǎng)可以增加溶解氧量，促進微生物對營養(yǎng)物質的充分接觸和利用C．鑒別培養(yǎng)基上涂布接種時，將1mL菌液滴到培養(yǎng)基表面再用涂布器涂布均勻D．加入剛果紅的鑒別培養(yǎng)基上出現(xiàn)透明圈的菌落，可能是能夠分解纖維素的微生物2．（2022·湖北武漢·模擬預測）為了從反芻動物的瘤胃中分離出能分解尿素的微生物，某興趣小組設計了如下實驗流程。下列敘述錯誤的是（

）A．為創(chuàng)造無氧環(huán)境，可采用穿刺接種法B．該實驗使用的固體培養(yǎng)基是選擇培養(yǎng)基C．細菌能分解尿素，是因為它們能合成脲酶D．脲酶將尿素分解為氨和CO2，會使培養(yǎng)基pH降低3．（2022·遼寧沈陽·三模）剛果紅是一種染料，可與纖維素反應形成紅色復合物，但不會與纖維素水解產(chǎn)物發(fā)生反應。研究人員利用該原理從土壤中分離纖維素分解菌并計數(shù)，培養(yǎng)結果如下圖所示。下列敘述錯誤的是（

）A．剛果紅培養(yǎng)基以纖維素為唯一碳源B．將菌液分散在培養(yǎng)基表面用平板劃線法C．圖中菌落丁分解纖維素的能力最強D．用顯微鏡直接計數(shù)統(tǒng)計的結果往往比活菌實際數(shù)目多4．（2022·天津·模擬預測）如圖是研究人員從紅棕壤中篩選高效分解尿素細菌的示意圖，有關敘述正確的是（

）A．步驟③純化分解尿素細菌的原理是將聚集的細菌分散，可以獲得單細胞菌落B．在配制步驟②、③的培養(yǎng)基時；高壓蒸汽滅菌后還需調pHC．步驟③中需要配制含酚紅的選擇性培養(yǎng)基進行篩選D．步驟③采用稀釋涂布平板法接種，并需向牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入尿素5．（2022·江蘇泰州·模擬預測）幽門螺桿菌（含有脲酶）感染是急慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病因素。在患者體內采集樣本并制成菌液后，進行分離培養(yǎng)。下列有關敘述不正確的是（

）A．分離純化幽門螺桿菌時應使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基B．鑒別幽門螺桿菌時應在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑和緩沖物質C．可用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作對照證明選擇培養(yǎng)基的選擇作用D．可采用稀釋涂布平板法對幽門螺桿菌進行分離和計數(shù)6．（2021·遼寧丹東·一模）下圖所示為分離某種以尿素為氮源的細菌實驗過程，下列敘述錯誤的是（

）A．土樣從有哺乳動物尿液的地方取，獲得目的菌種幾率很高B．為驗證尿素固體培養(yǎng)基具有選擇作用，可用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基作對照C．將實驗組和對照組37℃恒溫培養(yǎng)24至48h時，需將平板倒置D．在尿素固體培養(yǎng)基上生長的細菌都是以尿素為氮源的細菌7．（2021·山東淄博·一模）某生物興趣小組嘗試對土壤中分解尿素的細菌進行分離并計數(shù)，相關敘述正確的是（

）A．制備選擇培養(yǎng)基時，需加入尿素、瓊脂、葡萄糖、硝酸鹽等物質B．用活菌計數(shù)法統(tǒng)計結果，活菌的實際數(shù)目往往比統(tǒng)計的菌落數(shù)低C．脲酶將尿素分解成氨使培養(yǎng)基的pH降低，加入酚紅指示劑后變紅D．每克樣品中的菌株數(shù)＝（C÷V）×M，C為某一稀釋度下平板上的平均菌落數(shù)8．（2022·江蘇·模擬預測）新疆的“生命營養(yǎng)液”是以多種天然食材為原料發(fā)酵而成。為從中分離到紅曲菌（真菌），現(xiàn)用無菌水將其稀釋成濃度為10-1g/mL、10-2g/mL、10-3g/mL的懸液，分別取0.1mL稀釋液涂布于含有氯霉素和四環(huán)素的PDA（馬鈴薯葡萄糖瓊脂）平板上，制備3個平行組。然后將PDA平板置于恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，并連續(xù)7天統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)。下列敘述正確的是（

）A．制備PDA培養(yǎng)基時，先高壓蒸汽滅菌2～3h，冷卻后再進行分裝B．計數(shù)時平板上菌落過于密集，可多做幾組平行組進行實驗統(tǒng)計C．恒溫培養(yǎng)前，需在培養(yǎng)皿底部標明組別、培養(yǎng)日期和稀釋度等D．可大幅度提高“生命營養(yǎng)液”中氯霉素和四環(huán)素含量以抑制雜菌9．（2022·重慶·二模）研究發(fā)現(xiàn)，土壤中某種微生物能降解石油。分離降解石油的菌株和探索其降解機制的實驗過程如圖所示。回答下列問題：（1）該實驗所用的振蕩培養(yǎng)的培養(yǎng)基只能以石油作為唯一碳源，其原因是__________________________________________________，這種培養(yǎng)基屬于___________培養(yǎng)基。（2）振蕩培養(yǎng)的細菌比靜置培養(yǎng)的細菌生長速度快，原因是振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中__________的含量，同時可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高______________的利用率。（3）若要測定活菌數(shù)量，可選用_________________法進行計數(shù)；若要測定培養(yǎng)液中微生物的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用________________________________直接計數(shù)。（4）為探究石油的降解機制，將該菌種的培養(yǎng)液過濾離心，取上清液做圖乙所示實驗。該實驗的假設是_________________________________________________，該實驗設計是否合理？_________為什么？______________________________________________________。（5）丙圖中3號試管中樣品液的稀釋倍數(shù)為_______倍，5號試管的結果表明每克土壤中的活菌數(shù)為___________。該實驗方法統(tǒng)計得到的結果往往會比實際活菌數(shù)目要________，因為_____________________________________________________________________。10．（2022·湖南·模擬預測）解磷菌是土壤中的一類功能微生物，通過自身分泌的有機酸和磷酸酶等代謝產(chǎn)物，能使土壤中難溶性或不溶性的磷轉化成易于被植物吸收利用的有效態(tài)磷。從土壤中分離純化解磷菌的步驟如下：（1）按規(guī)范流程配制蒙金娜無機磷（磷酸三鈣）培養(yǎng)基（見表格）：計算、稱量、溶化和____________________后倒平板。從功能來看，此培養(yǎng)基屬于___________培養(yǎng)基，其中酵母膏中含有的主要營養(yǎng)物質為______________________________（填1種）。物質葡萄糖（NH4）2SO4NaClKClFeSO4·7H2OMgSO4·7H2O質量/g100.530.30.030.3物質MnSO4·H2OCaCO3酵母膏磷酸三鈣瓊脂/質量/g0.0350.42030（2）稱取土壤_________g，溶于9mL無菌水中，10倍稀釋法分別將梯度稀釋至10-1~10-6倍，可選擇_____________________________3個稀釋倍數(shù)用移液槍吸取100μL土壤稀釋液涂布至上述培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)5d。觀察出現(xiàn)解磷圈（透明圈）菌落的解磷圈直徑（D）、菌落直徑（d），以此初步確定菌株的解磷能力。已知接種的四個平板上的菌落數(shù)分別為215、236、312和254，每毫升土壤原液中的解磷菌活菌數(shù)約為2.35×108個，則土壤原液的稀釋倍數(shù)為__________倍。（3）從上述菌中找到解磷能力最強的菌進行擴大培養(yǎng)，并進行了磷酸酶的提取和分離，為了鑒定磷酸酶的分子純度可以采用_____________________________________（方法）。（4）將解磷能力最強菌重新接種振蕩培養(yǎng)的菌懸液1mL，與1mLLB甘油液體培養(yǎng)基（含質量分數(shù)為40%的甘油），在2mL保藏管內混勻（甘油最終質量分數(shù)為20%），標記好菌株名稱、日期，保存于______℃冰箱。

同類題練習參考答案1．C【解析】從土壤中分離纖維素分解菌的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株；篩選纖維素分解菌需要用以纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，纖維素分解菌可以用剛果紅染液進行鑒別，在培養(yǎng)基中加入剛果紅染液，在其菌落周圍會出現(xiàn)透明圈。選擇培養(yǎng)的原理是人為提供有利于目的菌生長的條件，同時抑制或阻止其他微生物的生長，因此選擇培養(yǎng)的目的是促進纖維素分解菌生長，抑制其他微生物的生長，A正確；振蕩培養(yǎng)可以增加溶解氧量，促進微生物對營養(yǎng)物質和氧氣的充分接觸和利用，B正確；鑒別培養(yǎng)基上涂布接種時，將0.1mL菌液滴到培養(yǎng)基表面再用涂布器涂布均勻，C錯誤；加入剛果紅的培養(yǎng)基上所出現(xiàn)的有透明圈的菌落，可能是分解纖維素的細菌或依賴剛果紅而生存的真菌繁殖而成，D正確。故選C。2．D【解析】穿刺接種法：用接種針取少許菌垂直穿刺于半固體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，常用來接種厭氧菌、檢查細菌的運動性或保藏菌種。根據(jù)某微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養(yǎng)基，稱為選擇培養(yǎng)基。穿刺接種法常用來接種厭氧菌，因此為創(chuàng)造無氧環(huán)境，可采用穿刺接種法，A正確；由圖可知，該實驗使用的固體培養(yǎng)基，目的是分離出能夠分解尿素的細菌，是典型的選擇培養(yǎng)基，B正確；細菌想要分解尿素，必然含有能夠分解尿素的酶，即細菌能合成脲酶，C正確；脲酶將尿素分解為氨和CO2，氨會使培養(yǎng)基堿性增強，pH升高，D錯誤。故選D。3．B【解析】分解纖維素的微生物的分離實驗的原理：①土壤中存在著大量纖維素分解酶，包括真菌、細菌和放線菌等，它們可以產(chǎn)生纖維素酶。纖維素酶是一種復合酶，可以把纖維素分解為纖維二糖，進一步分解為葡萄糖使微生物加以利用，故在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中，纖維素分解菌能夠很好地生長，其他微生物則不能生長。②在培養(yǎng)基中加入剛果紅，可與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復合物，當纖維素被分解后，紅色復合物不能形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，從而可篩選纖維素分解菌。該實驗的目的是從土壤中分離纖維素分解菌并計數(shù)，因此該剛果紅培養(yǎng)基應該以纖維素為唯一碳源，A正確；微生物常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法，稀釋涂布平板法可用于計數(shù)，平板劃線法不能用來計數(shù)，故將菌液分散在培養(yǎng)基表面應該用稀釋涂布平板法，B錯誤；有透明圈說明纖維素被纖維素酶催化降解，透明圈大小與纖維素酶的量與活性有關，透明圈越大，說明降解纖維素能力越強，由圖可知，菌落丁周圍的透明圈最大，說明其降解纖維素的能力最強，C正確；由于顯微鏡直接計數(shù)時統(tǒng)計的數(shù)據(jù)包括了已經(jīng)死亡的細菌，所以其統(tǒng)計的結果往往比活菌實際數(shù)目多，D正確。故選B。4．A【解析】由于細菌分解在尿素的過程中合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，會使培養(yǎng)基堿性增強，pH升高，所以可以用檢測pH的變化的方法來判斷尿素是否被分解，可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，尿素被分解后產(chǎn)生氨，pH升高，指示劑變紅。步驟③是利用稀釋涂布平板法將聚集的細菌分散成單個，從而獲得單細胞菌落，A正確；制備培養(yǎng)基時，需要先調節(jié)pH，后進行高壓蒸汽滅菌，B錯誤；步驟③中含有酚紅指示劑的培養(yǎng)基是鑒別培養(yǎng)基，C錯誤；由于實驗目的是篩選高效分解尿素細菌，所以應該以尿素作為唯一的氮源，而不應該加入牛肉膏和蛋白胨，D錯誤，故選A。5．B【解析】脲酶可以將尿素分解成二氧化碳和氨氣。分離純化細菌的方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法。幽門螺桿菌可以合成脲酶，可以利用尿素，所以分離純化幽門螺桿菌時應使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，A正確；由于幽門螺桿菌在分解尿素的過程中會合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，使培養(yǎng)基堿性增強，pH升高，所以可以用檢測pH的變化的方法來判斷尿素是否被分解，即在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，尿素被分解后產(chǎn)生氨，pH升高，則該菌落周圍會出現(xiàn)紅色環(huán)帶，故鑒別幽門螺桿菌時應在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，但不能加緩沖物質，B錯誤；為了證明選擇培養(yǎng)基的選擇作用，可用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基做對照，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基為普通培養(yǎng)基，不具有選擇性，如果牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的菌落數(shù)大于選擇培養(yǎng)基，說明選擇培養(yǎng)基有選擇作用，C正確；稀釋涂布平板法可以用于微生物的分離和計數(shù)，因此對幽門螺桿菌進行分離和計數(shù)可才用稀釋涂布平板法，D正確。故選B。6．D【解析】分離某種以尿素為氮源的細菌實驗過程：土壤取樣→樣品的稀釋→將稀釋液涂布到以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上→挑選能生長的菌落→鑒定。在含哺乳動物排泄物的土壤中有較多含脲酶的細菌，因此土樣從有哺乳動物排泄物的地方取，獲得目的菌種幾率很高，A正確；取不同稀釋倍數(shù)的土壤稀釋液各0.1mL，分別涂布于牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基、尿素固體培養(yǎng)基上，其中牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基是對照，B正確；將實驗組和對照組37℃恒溫培養(yǎng)24至48h時，需將平板倒置，C正確；在尿素固體培養(yǎng)基上生長的細菌大多數(shù)是以尿素為氮源的細菌，還有一些利用空氣中氮的微生物等，D錯誤。故選D。7．D【解析】分解尿素的細菌的鑒定細菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強。在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細菌，若指示劑變紅，可確定該種細菌能夠分解尿素。分離土壤中分解尿素的細菌，培養(yǎng)基中要有尿素、瓊脂糖、葡萄糖，尿素給分解尿素的細菌提供氮源，不能加硝酸鹽，否則無法起到選擇出尿素分解菌的作用，A錯誤；用活菌計數(shù)法統(tǒng)計結果時，有的活菌在培養(yǎng)過程中會死亡，而有的菌落是由多個活菌共同形成的，故活菌的實際數(shù)目往往比統(tǒng)計的菌落數(shù)高，B錯誤；脲酶將尿素分解成氨使培養(yǎng)基的pH增加，加入酚紅指示劑后變紅，C錯誤；每克樣品中的菌株數(shù)=（C÷V）×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)，D正確。故選D。8．C【解析】制備PDA培養(yǎng)基時，要先分裝再高壓蒸汽滅菌，防止分裝過程雜菌污染，A錯誤；計數(shù)時平板上菌落過于密集，可稀釋之后在進行計數(shù)，多做幾組平行組進行實驗統(tǒng)計是為了減少實驗誤差，B錯誤；恒溫培養(yǎng)前，需在培養(yǎng)皿底部標明組別、培養(yǎng)日期和稀釋度等，便于進行實驗統(tǒng)計和對比觀察，C正確；氯霉素和四環(huán)素是針對細菌起作用的抗生素，且大幅度提高“生命營養(yǎng)液”中氯霉素和四環(huán)素含量會導致培養(yǎng)液滲透壓升高，也會抑制紅曲菌生長，D錯誤。故選C。9．（1）只有能降解石油的微生物能正常生長繁殖

選擇（2）溶解氧

營養(yǎng)物質（3）稀釋涂布平板

血細胞計數(shù)板(或特定的細菌計數(shù)板)（4）目的菌能分泌降解石油的蛋白質

不合理

缺少對照實驗（5）104

1.7×109

低

兩個或多個細胞連在一起，平板上觀察到的只是一個菌落【解析】分析題圖：圖示是探索石油降解機制的實驗過程，圖甲中，首先用選擇培養(yǎng)基從土壤中篩選菌種，再采用平板劃線法分離出