動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體課件-高二下學(xué)期生物人教版選修3

動(dòng)物細(xì)胞融合1970年人-鼠細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)滅活的仙臺(tái)病毒誘導(dǎo)指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程2.結(jié)果：形成單核的雜交細(xì)胞3.原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性4.誘導(dǎo)方式物理法：離心、振動(dòng)、電激化學(xué)法：聚乙二醇（PEG)生物法：滅活的病毒（例如：仙臺(tái)病毒）1.概念動(dòng)物細(xì)胞融合1（融合后形成的具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞）（動(dòng)物細(xì)胞融合所特有）（融合完成的標(biāo)志）也叫細(xì)胞雜交仙臺(tái)病毒紫外線滅活喪失感染活性（不感染細(xì)胞）保留融合活性（誘導(dǎo)細(xì)胞融合）②什么是病毒的滅活？滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒失去感染能力，但是并不破壞病毒的抗原結(jié)構(gòu)。①滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。動(dòng)物細(xì)胞A動(dòng)物細(xì)胞B誘導(dǎo)，融合完整的雜交細(xì)胞AB（膜融合→質(zhì)融合→核融合）注意：動(dòng)物細(xì)胞的融合也需要把多個(gè)兩種細(xì)胞放在一起，讓它們隨機(jī)融合后，再?gòu)闹泻Y選雜交細(xì)胞。融合完成的標(biāo)志5.意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動(dòng)植物之間）成為可能。6.應(yīng)用：成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。特別是利用雜交瘤技術(shù)制造單克隆抗體生物種類成功年代酵母菌-雞1975年人-胡蘿卜1976年

人-鼠1978年已成功的動(dòng)物細(xì)胞融合實(shí)例還有哪些？總結(jié)：比較植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合原理融合前處理誘導(dǎo)方法用途細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性用纖維素酶、果膠酶去壁用胰蛋白酶使細(xì)胞分散物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)、生物方法獲得部分或完整植株主要用于制備單克隆抗體單克隆抗體1、抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？漿細(xì)胞（效應(yīng)B細(xì)胞）2、抗體是如何產(chǎn)生的？抗原刺激B淋巴細(xì)胞增殖分化成漿細(xì)胞3、抗體主要分布在哪里？抗體主要分布在血清中溫故知新吞噬細(xì)胞→T淋巴細(xì)胞↓抗原→B淋巴細(xì)胞↑↓效應(yīng)B細(xì)胞抗體↓獲得抗體的傳統(tǒng)方法？缺點(diǎn)：產(chǎn)量低純度低特異性差從血清中分離所需抗體特定抗原反復(fù)免疫動(dòng)物↓由單一的B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖形成的細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體。那么，如何大量獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？（即單克隆抗體）單克隆抗體單克隆抗體2產(chǎn)量高、純度高、特異性強(qiáng)每個(gè)B細(xì)胞只分泌一種特異性的抗體在體外培養(yǎng)條件下，B淋巴細(xì)胞是不可能無限增殖的，因此上述方案不可行。那么，如何大量獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？（即單克隆抗體）提示1：僅用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可行嗎？提示2：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？一個(gè)B淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞群?jiǎn)慰寺】贵w→克隆→產(chǎn)生提示3：有什么方法能使B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力和腫瘤細(xì)胞無限增殖能力同時(shí)具備呢？一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體

雜交瘤細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)方案：?jiǎn)慰寺】贵w既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量繁殖的細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖+1975年，英國(guó)科學(xué)家米爾斯坦和德國(guó)科學(xué)家科勒設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)獲得了單克隆抗體，因此獲得1984年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。G.Kohler

C.Milstein

動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)克隆化培養(yǎng)專一抗體檢測(cè)單克隆抗體制備過程BB、B瘤、瘤瘤（B、瘤）（一選）選擇性培養(yǎng)基：篩選出融合的雜種細(xì)胞(雜交瘤細(xì)胞

)（二選）專一抗體檢測(cè)：篩選出分泌所需的特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的細(xì)胞先免后合兩篩兩得體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖制備特異性B淋巴細(xì)胞

↓獲得雜交瘤細(xì)胞

↓克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)

↓體外培養(yǎng)或體內(nèi)培養(yǎng)↓提取單克隆抗體氨基蝶呤（阻斷合成DNA的D途徑）BB-B不具有增殖能力而死亡瘤瘤-瘤缺乏S途徑，D途徑又被阻斷，無法增殖而死亡。B-瘤骨髓瘤細(xì)胞從B細(xì)胞那里獲得S途徑，可以無限增殖。第一次篩選：HAT選擇培養(yǎng)基中篩選（篩選出雜交瘤細(xì)胞)B淋巴細(xì)胞合成DNA骨髓瘤細(xì)胞D途徑S途徑D途徑了解即可第二次篩選：多孔細(xì)胞培養(yǎng)板，有限稀釋。（篩選出分泌所需的特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞）多孔細(xì)胞培養(yǎng)板上培養(yǎng)（約每孔一個(gè)細(xì)胞）↓抗原抗體雜交法檢測(cè)↓呈陽性反應(yīng)即為所需細(xì)胞有限稀釋法通過適當(dāng)?shù)南♂屵_(dá)到分離單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)的目的了解即可特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備①作為診斷試劑，具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速的優(yōu)點(diǎn)。②用于治療疾病和運(yùn)載藥物。單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體的特點(diǎn)早早孕檢測(cè)試紙①作為診斷試劑用抗人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體做成的“早早孕診斷試劑盒”，靈敏度很高單克隆抗體的應(yīng)用利用放射性同位素標(biāo)記的單克隆抗體，在特定的組織中成像的枝術(shù)，可定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病。準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速例：