硅膠柱層析的操作方法及注意事項

硅膠柱層析的操作方法及注意事項硅膠柱層析的操作方法及注意事項硅膠柱層析的操作方法及注意事項xxx公司硅膠柱層析的操作方法及注意事項文件編號：文件日期：修訂次數(shù)：第1.0次更改批準審核制定方案設計，管理制度硅膠柱層析一、硅膠柱層析的原理利用吸附原理，即利用硅膠對中藥混合物中各種成分吸附能力的差異，而使混合物中各成分得以分離的色譜方法。二、硅膠柱層析的操作方法及注意事項1、裝柱操作要點：裝柱前柱底要墊一層脫脂棉以防吸附劑外漏。有干法裝柱和濕法裝柱兩種方法（1）干法裝柱：將硅膠通過漏斗裝入柱內(nèi)，中間不應間斷，形成一細流慢慢加入管內(nèi)。也可用橡皮槌輕輕敲打柱硅膠柱使硅膠裝填連續(xù)均勻、緊密。柱裝好后，打開下端活塞，然后倒入洗脫劑洗脫以排盡柱內(nèi)空氣，并保持一定液面。（2）濕法裝柱：將最初準備使用的洗脫劑裝入柱內(nèi)，打開下端活塞，使洗脫劑緩慢流出。然后把硅膠慢慢連續(xù)不斷地倒入柱內(nèi)（或將硅膠與適量洗脫劑調(diào)成混懸液慢慢加入柱內(nèi)，），硅膠依靠重力和洗脫劑的帶動，在柱內(nèi)自由沉降，此間要不斷把流出的洗脫劑加回柱內(nèi)保持一定的液面，直至把硅膠加完并在柱內(nèi)沉降不再變動為止。然后在硅膠上面加一小片濾紙或少許脫脂棉。根據(jù)加樣量控制洗脫劑液面至一定高度。勻漿法：攪成勻漿。加入干硅膠體積一倍的溶劑用玻璃棒充分攪拌。如果洗脫劑是石油醚/乙酸乙酯/丙酮體系，就用石油醚拌；如果洗脫劑是氯仿/醇體系，就用氯仿拌。如果不能攪成勻漿，說明溶劑中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不與水配伍走分配色譜的話，必須預先用無水硫酸鈉久置干燥。氯仿用無水氯化鈣干燥，以除去1%的醇。如果樣品對酸敏感，不能用氯仿體系過柱。2、上樣將欲分離的樣品溶于少量裝柱時用的洗脫劑中，制成體積小、濃度高的樣品溶液，加入層析柱中硅膠面上。如樣品不溶于裝柱時用的洗脫劑，則將樣品溶于易揮發(fā)的溶劑中，并加入適量硅膠（不超過柱中硅膠全量的1/10）與其拌勻，除盡溶劑，將拌有樣品的硅膠均勻加到柱頂（始終保持洗脫劑有一定的液面），再覆蓋一層硅膠即可。上樣時注意沿著柱內(nèi)壁慢慢加入，始終保持硅膠上端表面平整；上樣量為硅膠的1/60~1/30。3、洗脫洗脫劑的選用可通過薄層色譜篩選，一般TLC展開時Rf值為~的溶劑系統(tǒng)是最佳的洗脫系統(tǒng)，采用梯度洗脫法洗脫。先打開柱下端活塞，保持洗脫劑流速1~2滴/秒。上端不斷添加洗脫劑（可用分液漏斗控制添加速度與下端流出速度相近）。如單一溶劑洗脫效果不好，可用混合溶劑洗（一般不超過三種溶劑），通常采用梯度洗脫。洗脫劑的洗脫能力由弱到強逐步遞增。4、收集處理等份收集洗脫液，每份收集量大概與所用硅膠的量相當。每份洗脫液采用薄層定性檢查，合并含相同成分的洗脫液。經(jīng)濃縮、重結晶處理往往可得到某一單體成分。如仍為幾個單體成分的混合物，不易析出單體成分的結晶。則需要進一步層析或用其他方法分離。注：(1)柱色譜分離能力比