十二章-免疫學檢驗的質量保證(與“測定”有關文檔共47張)

免疫檢驗質量控制相關的基本概念。標準品的分類及特性。定量、半定量和定性實驗的質量控制方法檢測試劑免疫學檢測試劑的批間差異和穩(wěn)定性。免疫學實驗常用評價指標。本章要點第1頁，共47頁。返回總目錄目錄

免疫檢驗質量控制的概念1免疫檢驗質量控制的特殊性2免疫學實驗常用評價指標和質控方法3第2頁，共47頁。前言免疫學檢驗是臨床檢驗中一大類重要的常規(guī)檢查,對疾病的診斷、篩查、監(jiān)測疾病的發(fā)展過程和觀察患者對治療的反應等方面發(fā)揮著重要的作用。如何保證檢驗結果的質量，在日常檢測中如何貫徹實施質量保證是免疫學檢驗的一個重要內容。第3頁，共47頁。第一節(jié)免疫檢驗質量控制的概念免疫檢驗要保證檢驗結果的準確、可靠、及時、有效，并盡可能使各實驗室間檢驗結果有可比性，這是免疫檢驗質量保證的基本目的。只有明確了免疫檢驗質量控制的概念，才能真正理解免疫檢驗的質量控制，并準確、有效地完成質控工作。4第4頁，共47頁。一、基本概念準確度（accuracy）

待測物的測定值與其真值的一致性程度。精密度（precision）

在一定條件下進行多次測定，所得結果之間的符合程度。第5頁，共47頁。（二）Cutoff值批間差異的控制由二級標準品的比對而來的，通常由實驗室自己或試劑生產廠家制備。酶標記抗體在應用防腐劑時要注意不能用NaN3。免疫學檢驗方法的種類較多，其測定方法的靈敏度和特異性要比生化方法高得多，因此進行質量控制的手段不能照搬生化模式。免疫檢驗室在進購試劑時，要選擇質量有保障的正規(guī)試劑產商，建立完善的實驗室內質量控制體系，盡量減少批間差異使其在規(guī)定的范圍內（一般CV<15%），這對長期控制免疫檢測結果的可靠性大有裨益?？购丝贵w血清(均質型)待測物的測定值與客觀存在的真值之間的差異。正態(tài)分布的基本統計學含義可用均數（）、標準差（s）和概率來說明，均數是位于曲線的正中線所對應的值。本指標是用于評價測定方法的臨床應用價值，理想測定方法的診斷特異度應為100%。第三節(jié)免疫學實驗常用評價指標三、檢測試劑的批間差異測定多份陰性血清，設定Cutoff值恰好高于95％的陰性血清的測定值。誤差（error）

待測物的測定值與客觀存在的真值之間的差異。包括系統誤差和隨機誤差兩類。偏差（deviation）

待測物的測定值與多次測量平均值之間的差異。第6頁，共47頁。重復性條件（repeatabilityconditions）

在同一實驗室內，由相同的操作者使用同一儀器設備，在短的間隔時間內對相同的測試項目使用同一方法相互獨立進行的測試條件。批（run）

在相同條件下所獲得的一組測定。第7頁，共47頁。均值（mean）

一組測定值中所有值的平均值，也稱均數。標準差（standarddeviation，SD或S）

用于表示一組測定數據的分布情況。第8頁，共47頁。變異系數（coefficientofvariation，CV）

標準差與平均值之比用百分數表示。CV是相對比，沒有單位，更便于資料間的分析比較。第9頁，共47頁。正態(tài)分布(gaussiandistribution)

當一質控物用同一方法在不同的時間重復多次測定，以橫軸表示測定值，縱軸表示在大量測定中相應測定值的個數，則可得到一個兩頭低，中間高，中為所有測定值的均值，左右對稱的“鐘形”曲線，亦即正態(tài)分布，又稱高斯分布。正態(tài)分布的基本統計學含義可用均數（）、標準差（s）和概率來說明，均數是位于曲線的正中線所對應的值。第10頁，共47頁。正態(tài)分布是質量控制圖的理論依據，也是許多統計方法的理論基礎，正常情況下測量（或實驗）誤差服從正態(tài)分布。第11頁，共47頁。第三節(jié)免疫學實驗常用評價指標抗核抗體血清(均質型)質控品（物）（qualitytestingmaterisls）（externalqualityassessment，EQA）由于批間差異的影響，室內質控只能是一個批號的試劑盒使用一個質控框架圖。診斷特異度（specificityofdiagnosis）FITC—綿羊抗人Ig質控品（物）（qualitytestingmaterisls）由實驗室工作人員采取一定的方法和步驟，連續(xù)評價本實驗室從收取樣本至獲得測定結果，并對結果進行分析的整個測定過程可靠性程度的措施。室內質控則應選擇特定試劑盒或方法的測定范圍內的高、中和低三種濃度的質控品，以監(jiān)測不同濃度標本測定結果的變化。FITC—綿羊抗人Ig待測物的測定值與客觀存在的真值之間的差異。是專門用于質量控制目的的特性明確的物質，其含量已知并處于與實際標本相同的基質中，故質控物必須按患者標本一樣對待進行檢測。定性測定判斷陰、陽性時有一個“判斷值”（cutoff值），其質控的目的是考察檢測結果是否準確和穩(wěn)定。在保存過程中發(fā)生聚合反應等分子結構的變化，可使標準品失活。又稱真陰性，是指一項試驗能將實際上未患某病的人正確地判定為未患某病的能力。二、質量保證的有關概念質量保證（qualityassurance，QA）致力于為某一產品或服務滿足特定的質量要求，提供充分信任性所要求的而采取一系列有效的措施。第12頁，共47頁。室內質量控制（internalqualitycontrol，IQC）由實驗室工作人員采取一定的方法和步驟，連續(xù)評價本實驗室從收取樣本至獲得測定結果，并對結果進行分析的整個測定過程可靠性程度的措施。旨在監(jiān)測和控制本室常規(guī)工作的精密度，提高本室常規(guī)工作中批內、批間樣本檢驗的一致性，以確定測定結果是否可靠、可否發(fā)出報告的一項工作。第13頁，共47頁。室間質量評價（externalqualityassessment，EQA）

為客觀地比較某一實驗室的測定結果與靶值的差異，由外單位機構，采取一定的方法，連續(xù)、客觀地評價實驗室的結果，發(fā)現誤差并校正結果，使各實驗室之間的結果具有可比性。又稱為實驗室能力驗證（proficiencytesting，PT）。第14頁，共47頁。質控品（物）（qualitytestingmaterisls）

是專門用于質量控制目的的特性明確的物質，其含量已知并處于與實際標本相同的基質中，故質控物必須按患者標本一樣對待進行檢測。一般包括室內質控物和室間質評物兩類。第15頁，共47頁。第二節(jié)免疫檢驗質量控制的特殊性免疫學檢驗方法的種類較多，其測定方法的靈敏度和特異性要比生化方法高得多，因此進行質量控制的手段不能照搬生化模式。免疫檢驗質量控制包括定量實驗、半定量實驗和定性實驗三個方面。第16頁，共47頁。標準品（standard）

指性質純的處于一定基質中已知含量或成分，且特性明確的物質，通常用于比較檢測未知的物質或成分。標準品質量的優(yōu)劣直接影響樣品的測定結果。一、標準品（一）標準品的分類第17頁，共47頁。根據標準品性質的差異，可分為三級：一級標準品二級標準品

三級標準品

為凍干品，內含載體蛋白，數量有限，可使用10~20年。通常為國際標準品，由WHO指定的實驗室制備

即國家標準品，是由國家的有關權威機構制備，供國家內部使用，其效價單位與國際標準品一致由二級標準品的比對而來的，通常由實驗室自己或試劑生產廠家制備。

第18頁，共47頁。標準品IU/支建立的年份Mg/IU類風濕關節(jié)炎血清10019650.1710抗核抗體血清(均質型)10019700.1860人血清IgG、IgA、IgM10019700.1847人血清IgD10019710.8100人血清IgE1150019730.06562人AFP10000019750.001399人CEA10019750.0236FITC—綿羊抗人Ig10019760.0594FITC—綿羊抗人IgMμ鏈10019780.0447血清蛋白(白蛋白、α1-抗胰蛋白酶、C3銅藍蛋白、轉鐵蛋白)10019781.1140人補體成分(C4、C5、Clq、B因子)10019801.1070FITC—綿羊抗人IgGγ鏈10019810.0923過氧化物酶標記綿羊抗人Ig10019820.0316抗RNP抗體-1983-平滑肌抗體-1983-線粒體抗體-1983-免疫學檢驗質控常用國際標準品第19頁，共47頁。（二）標準品的特性與被測物具有相同的特性，活性穩(wěn)定

所用基質對測定結果無明顯影響，通常為含蛋白質的緩沖液。

無已知傳染危險性，物理性能均一，能準確重溶為澄清液體。對標準品的要求第20頁，共47頁?；|中的酶、細菌污染、pH變化、氧化、等因素都可導致標準品變性，高溫和光照可加速這些變化。容器內壁的吸附作用和溶劑的蒸發(fā)可造成標準品濃度的改變。在保存過程中發(fā)生聚合反應等分子結構的變化，可使標準品失活。保存條件不適當也可以影響標準品的穩(wěn)定性，如反復的凍融可降低標準品的免疫活性等。標準品穩(wěn)定性的影響因素第21頁，共47頁。定量免疫實驗通常需要使用全自動免疫分析儀，在測定時須用校準品對儀器進行校準。室內質控則應選擇特定試劑盒或方法的測定范圍內的高、中和低三種濃度的質控品，以監(jiān)測不同濃度標本測定結果的變化。二、定量、半定量和定性實驗（一）定量實驗

第22頁，共47頁。定量實驗的質量控制比較復雜，通常是根據室內質控物的測定結果，采用統計學的原理方法判斷所進行的臨床常規(guī)標本測定是否在控。目前多采用的質控方法主要包括：Levey-Jennings（L-J）質控圖方法、基線測定、Levey-Jennings質控圖結合Westgard多規(guī)則質控方法、“即刻法”質控方法以及累積和質控方法等。第23頁，共47頁。Levey-Jennings質控圖第24頁，共47頁。符號意義判定標準12S一個質控測定值超出±2s質控限。發(fā)出警告，在控13S一個質控測定值超出±3s質控限。隨機誤差，失控22S兩個連續(xù)質控測定值同時超出它們各自的+2s或－2s質控限。系統誤差，失控R4S同一批內，兩個不同濃度質控物的測定值之間的差值超出4s質控限。隨機誤差，失控41S四個連續(xù)的質控測定值同時超出+1s或－1s質控限。系統誤差，失控10十個連續(xù)的質控測定值同時處于均值（）的同一側。系統誤差，失控Westgard多規(guī)則常用質控標準第25頁，共47頁。半定量實驗在免疫檢驗中比較少用，此類實驗主要有酶免疫試驗、熒光免疫試驗等，測定結果通常以抗體的滴度、效價等表示。半定量免疫檢驗質控要點在于采用多個相應滴度或效價的抗體作為室內質控品，與臨床標本同時測定，當然還需要有陰性質控。（二）半定量實驗

第26頁，共47頁。定性實驗是免疫學檢驗的重點，其測定方法有很多，常以“有”或“無”也即“陽性”或“陰性”來表達測定結果。定性測定的室內質控以低值的質控品最為重要，設置臨界于cutoff值（CO值）的低值弱陽性質控物是定性室內質控的關鍵。（三）定性實驗

第27頁，共47頁。定性測定判斷陰、陽性時有一個“判斷值”（cutoff值），其質控的目的是考察檢測結果是否準確和穩(wěn)定。定性測定不僅檢測項目多，而且方法類型也多，因此決定采取何種質控方法必須要考慮檢測方法的特點，1定性測定質控的特點第28頁，共47頁。

三、檢測試劑的批間差異

不同廠家

不同批號

產品的質量、技術含量的區(qū)別

原料來源、純度不同以及生產條件變動對購入的試劑盒應進行性能檢測，利用可靠的定值血清檢測試劑盒批間差異的大小，只有質量符合實驗要求方可用于實際工作。第29頁，共47頁。引起試劑盒批間變異原因是多方面的。試劑盒的原材料是依靠生物工程技術生產的，生產技術要求難度大，工藝提純方法不好掌握，質量控制要求較高，產品質量不易穩(wěn)定，使每批原材料的純度和活性都有所差別。用不同的提純方法及不同批號的抗原或抗體所制備的試劑質量不一樣；同一批號的的原料，不同組裝工藝，其結果也不盡一樣，組裝工藝相同，質量標準控制稍有欠缺，其結果也會有所差異。第30頁，共47頁。生產技術難度大

提純方法不好掌握

質量控制要求較高產品質量不易穩(wěn)定

每批原材料的純度和活性都有所差別

引起試劑盒批間變異原因是多方面的

第31頁，共47頁。由于批間差異的影響，室內質控只能是一個批號的試劑盒使用一個質控框架圖。根據中、小型檢驗科的工作特點，不利于室內質控的開展和穩(wěn)定。免疫檢驗室在進購試劑時，要選擇質量有保障的正規(guī)試劑產商，建立完善的實驗室內質量控制體系，盡量減少批間差異使其在規(guī)定的范圍內（一般CV<15%），這對長期控制免疫檢測結果的可靠性大有裨益。第32頁，共47頁。

四、檢測試劑的穩(wěn)定性

由于所用的儀器種類繁多，試劑盒品牌不一，實驗室工作人員業(yè)務能力的差異等，造成不同實驗室間的測定結果差異較大。目前臨床免疫檢驗用的試劑盒保質期一般為6個月以上，有些檢驗機構為了節(jié)約成本，分數次使用試劑盒，勢必會使酶標抗原處于溶解狀態(tài)保存一定的時間，最后影響試驗結果。第33頁，共47頁。試劑盒抗體儲存容器應由不吸附蛋白質的材料制成抗體濃度越高（濃度大于10mg/ml），越穩(wěn)定，易保存；濃度低時，應加0.1%~1.5%的牛血清白蛋白作保護劑。酶標記抗體在應用防腐劑時要注意不能用NaN3?？贵w濃縮液應在-20℃保存，避免反復凍融。第34頁，共47頁。35第三節(jié)免疫學實驗常用評價指標臨床上實驗室免疫學檢驗的方法越來越多，如何對各種免疫學實驗的方法進行對比，以評價各種檢測方法的優(yōu)劣，這需要通過一些有效的評價指標來鑒定。第35頁，共47頁。診斷靈敏度（sensitivityofdiagnosis）

反映一項試驗能將實際有病的人判定為患病的百分率，其值越大，則漏診的可能性愈小。一、診斷靈敏度、特異度和正確診斷指數

本指標可用于評價測定方法的臨床應用價值，理想測定方法的診斷敏感度應為100%。第36頁，共47頁。診斷特異度（specificityofdiagnosis）

又稱真陰性，是指一項試驗能將實際上未患某病的人正確地判定為未患某病的能力。其值越大，則誤診的可能性愈小。本指標是用于評價測定方法的臨床應用價值，理想測定方法的診斷特異度應為100%。第37頁，共47頁。正確診斷指數（Youden’sindex）

又稱約登指數，指將靈敏度和特異度結合的評價某種免疫學實驗的綜合指標。其值是靈敏度與特異度之和減去1，大小范圍從0到1

正確診斷指數愈大，實驗的真實性亦愈好。理想實驗方法的正確診斷指數為1。第38頁，共47頁。Cutoff值是被檢分析物的量值，用于確定結果高于還是低于臨床或分析決斷點。在選擇Cutoff值和報告檢測結果時應該考慮敏感性和特異性哪個更重要。理想的Cutoff值是實驗室自己在的人群中確定。二、Cutoff值第39頁，共47頁。大多數免疫分析，來自感染和非感染人群的標本之間有一個檢測結果的重疊區(qū)，即“灰區(qū)”第40頁，共47頁。使用陰性血清測定結果均值的2或3倍作為陽性判斷值。測定大量（數千）正常人血清樣本，然后將所得到的吸光度均值增加2或3個SD作為陽性判斷值。在測定大量正常人血清樣本的同時，測定大量陽性血清樣本，根據