高三一輪復(fù)習(xí)2012-專題2-微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課件(高三復(fù)習(xí))

專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用判斷下列說法是否正確：1．分離能分解尿素的細(xì)菌，要以尿素作為培養(yǎng)基中唯一的氮源()2．利用稀釋涂布平板法只能分離微生物不能對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)()3．消毒和滅菌實(shí)質(zhì)是相同的(

)√××判斷下列說法是否正確：√××一、培養(yǎng)基及無菌技術(shù)1．種類：液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基。2．營養(yǎng)成分：一般都含有水、

、

、無機(jī)鹽和生長因子。3．無菌技術(shù)消毒方法：

、巴氏消毒法和化學(xué)藥劑消毒。滅菌法：灼熱滅菌、干熱滅菌、

滅菌。碳源氮源煮沸消毒法高壓蒸汽一、培養(yǎng)基及無菌技術(shù)碳源氮源煮沸消毒法高壓蒸汽二、微生物培養(yǎng)的基本技術(shù)1．配制培養(yǎng)基：稱量→混合→溶化→調(diào)pH→分裝→包扎。2．滅菌：加水→加培養(yǎng)基→密封→排冷氣→維持壓力→取出倒平板(或擱置斜面)。二、微生物培養(yǎng)的基本技術(shù)接種環(huán)、涂布器

平板劃線

稀釋涂布

接種環(huán)、涂布器平板劃線稀釋涂布1.高溫?zé)o菌的原理是什么？提示：

高溫可以使菌體細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、核酸變性失活，從而達(dá)到滅菌的目的。2．用酒精消毒時(shí)，為什么70%的酒精殺菌效果最好？提示：

濃度過高，使菌體表面蛋白質(zhì)凝固成一層保護(hù)膜，乙醇分子不能滲入其中；濃度過低，殺菌力減弱。1.高溫?zé)o菌的原理是什么？三、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)1．分離原理：土壤中細(xì)菌之所以能分解尿素，是由于它們能合成

，這種物質(zhì)在把尿素分解成無機(jī)物的過程中起催化作用。2．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目：統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌一般用

法。3．實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣→制備

→微生物的培養(yǎng)與觀察→細(xì)菌的計(jì)數(shù)。脲酶稀釋涂布平板法、顯微鏡直接計(jì)數(shù)稀釋液三、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)脲酶稀釋涂布平板法、顯微剛果紅

纖維二糖和葡萄糖

剛果紅纖維二糖和葡萄糖3．實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣、

、梯度稀釋、將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上、挑選產(chǎn)生

的菌落。選擇培養(yǎng)透明圈3．實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣、、梯度3.分離微生物的方法有哪些？提示：

從混合樣品中獲得某種微生物的方法通常有兩種：(1)利用該分離對(duì)象對(duì)某一營養(yǎng)物質(zhì)有“嗜好”的原理，專門在培養(yǎng)基中加入該營養(yǎng)物質(zhì)，從而使它成為一種加富培養(yǎng)基。(2)利用該分離對(duì)象對(duì)某種抑菌物質(zhì)的抗性，在混合培養(yǎng)物中加入該抑制物，經(jīng)培養(yǎng)后，原來占優(yōu)勢(shì)的微生物生長受抑制，而分離對(duì)象卻可乘機(jī)大大增殖，在數(shù)量上占優(yōu)勢(shì)。3.分離微生物的方法有哪些？1．微生物的營養(yǎng)：碳源、氮源、水、無機(jī)鹽和生長因子。2．微生物培養(yǎng)的無菌技術(shù)進(jìn)行無菌操作主要是為了防止外來雜菌的入侵，重點(diǎn)是消毒和滅菌。1．微生物的營養(yǎng)：碳源、氮源、水、無機(jī)鹽和生長因子。三種常用滅菌方法的比較：

滅菌方法適用材料或用具滅菌條件滅菌時(shí)間灼燒滅菌接種環(huán)、接種針或其他金屬工具酒精燈火焰的充分燃燒層直到燒紅干熱滅菌玻璃器皿(吸管培養(yǎng)皿)和金屬用具等干熱滅菌箱內(nèi)，160～170℃1～2h高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基等高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)100kPa,121℃15～30min三種常用滅菌方法的比較：滅菌方法適用材料滅菌條件滅菌時(shí)間灼3．微生物的純化培養(yǎng)—平板劃線法與稀釋涂布平板法方法平板劃線法稀釋涂布平板法注意事項(xiàng)(1)接種環(huán)的灼燒①第一次劃線前：接種環(huán)上的微生物，避免污染培養(yǎng)物②每次劃線前：殺死殘留菌種，保證每次劃線菌種來自上次劃線末端③劃線結(jié)束后：殺死殘留菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者(1)稀釋操作時(shí)：每支試管及其中的9mL水、移液管等均需滅菌；操作時(shí)，試管口和移液管應(yīng)在離火焰1cm～2cm處3．微生物的純化培養(yǎng)—平板劃線法與稀釋涂布平板法方法平板劃線方法平板劃線法稀釋涂布平板法注意事項(xiàng)(2)灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后再進(jìn)行操作，以免溫度太高殺死菌種(3)劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連(4)劃線用力要大小適當(dāng)，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破(2)涂布平板時(shí)①涂布器用體積分?jǐn)?shù)為70%酒精消毒，取出時(shí)，讓多余酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引燃②不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精③酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適，移液管管頭不要接觸任何物體方法平板劃線法稀釋涂布平板法注(2)灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后方法平板劃線法稀釋涂布平板法目的在培養(yǎng)基上形成由單個(gè)菌種繁殖而來的子細(xì)胞群體——菌落培養(yǎng)平板冷凝后倒置培養(yǎng)，使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，防止皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基造成污染方法平板劃線法稀釋涂布平板法目的在培養(yǎng)基上形成由單個(gè)菌種繁殖1．下列關(guān)于微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用的敘述錯(cuò)誤的是()A．通過消毒不能殺死物體內(nèi)所有的微生物B．利用平板劃線法可以統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目C．微生物所用的培養(yǎng)基的成分和植物組織培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基的成分不同D．平板劃線法和稀釋涂布平板法常用于微生物的接種1．下列關(guān)于微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用的敘述錯(cuò)誤的是()解析：

消毒是指殺死部分對(duì)人體有害的病原微生物，但不一定能殺死細(xì)菌的芽孢，故A正確；統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目要用稀釋涂布平板法，平板劃線法辦不到，故B錯(cuò)誤；不同的培養(yǎng)對(duì)象，所需的營養(yǎng)成分不同，培養(yǎng)基中所加入的物質(zhì)就不同，故C正確；微生物接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法，故D正確。答案：

B解析：消毒是指殺死部分對(duì)人體有害的病原微生物，但不一定能殺2．如圖是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序?yàn)?2345。下列操作方法正確的是()A．操作前要將接種環(huán)放在火焰邊灼燒滅菌B．劃線操作須在火焰上進(jìn)行C．在5區(qū)域中才可以得到所需菌落D．在12345區(qū)域中劃線前后都要對(duì)接種環(huán)滅菌2．如圖是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序?yàn)?2345。下列解析：

本題考查平板劃線操作方法。在每次劃線前后都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌，接種環(huán)的滅菌方法應(yīng)是在火焰上灼燒，接種時(shí)劃線操作是在火焰邊進(jìn)行。在5個(gè)區(qū)域中，只要有單個(gè)活細(xì)菌，通過培養(yǎng)即可獲得所需菌落。答案：

D解析：本題考查平板劃線操作方法。在每次劃線前后都要對(duì)接種環(huán)1．篩選菌株(1)原則：人為提供有利于目的菌生長的條件，同時(shí)抑制或阻止其他微生物的生長。1．篩選菌株(2)菌株篩選原理的比較土壤中分解尿素的細(xì)菌分解纖維素的微生物常用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，即提供有利于目的菌株生長的條件，如營養(yǎng)、溫度、pH等，同時(shí)抑制其他微生物的生長剛果紅染色法，即在含有纖維素的培養(yǎng)基中，加入剛果紅時(shí)，剛果紅與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被分解后，該復(fù)合物不能形成，培養(yǎng)基中出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈(2)菌株篩選原理的比較土壤中分解尿素的細(xì)菌分解纖維素的微生2.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法①原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。②方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。③缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。2.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法(2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。②計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)×M，其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。③操作：設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。同時(shí)為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。(2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)3.設(shè)置對(duì)照(1)目的：排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。(2)方法：①證明培養(yǎng)基未被污染，用空白培養(yǎng)基作對(duì)照。②證明選擇培養(yǎng)基的選擇作用，用基礎(chǔ)培養(yǎng)基接種等量同種菌液作對(duì)照。3.設(shè)置對(duì)照3．分離纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)過程中，下列操作有誤的是()A．經(jīng)選擇培養(yǎng)后將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上B．富集培養(yǎng)這一步可省略，但培養(yǎng)的纖維素分解菌少C．經(jīng)稀釋培養(yǎng)后，用剛果紅染色D．對(duì)照組可用同樣量的培養(yǎng)液涂布到不含纖維素的培養(yǎng)基上答案：

A3．分離纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)過程中，下列操作有誤的是()統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法

①原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血球計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)；③缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法(2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。②計(jì)算公式：每克樣品中的菌數(shù)＝(C÷V)×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。(2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)(2012·西鐵一中模擬)下列是關(guān)于“檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)”實(shí)驗(yàn)操作的敘述，其中錯(cuò)誤的是()A．用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板B．取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各0.1mL，分別涂布于各組平板上C．將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置，37℃恒溫培養(yǎng)24～48小時(shí)D．確定對(duì)照組無菌后，選擇菌落數(shù)在300以上的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)(2012·西鐵一中模擬)下列是關(guān)于“解析：

本題以“土壤中細(xì)菌的計(jì)數(shù)”為命題點(diǎn)，考查對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的識(shí)記情況。為防止培養(yǎng)皿蓋上凝結(jié)的水珠落在培養(yǎng)基表面造成雜菌污染，應(yīng)將平板倒置。在細(xì)菌計(jì)數(shù)時(shí)，為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，應(yīng)至少涂布三個(gè)平板，選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)；然后求出平均數(shù)，再根據(jù)對(duì)應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中的細(xì)菌數(shù)。答案：

D解析：本題以“土壤中細(xì)菌的計(jì)數(shù)”為命題點(diǎn)，考查對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的1.(2012·蕪湖一中質(zhì)檢)在做分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，A同學(xué)從對(duì)應(yīng)106培養(yǎng)基上篩選出大約150個(gè)菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約50個(gè)菌落。產(chǎn)生A同學(xué)結(jié)果的原因可能有()①土樣不同②培養(yǎng)基污染③操作失誤④沒有設(shè)置對(duì)照A．①②③B．②③④C．①③④D．①②④答案：

A1.(2012·蕪湖一中質(zhì)檢)在做分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，消毒與滅菌的區(qū)別滅菌方法條件結(jié)果常用方法消毒較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法，還有化學(xué)藥劑(如酒精、氯氣、石炭酸等)消毒、紫外線消毒滅菌強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌消毒與滅菌的區(qū)別滅菌方法條件結(jié)果常用方法消毒較為溫和的物理或關(guān)于滅菌和消毒的理解不正確的是()A．滅菌是指殺滅環(huán)境中一切微生物的細(xì)胞、芽孢和孢子B．消毒和滅菌實(shí)質(zhì)是相同的C．接種環(huán)用灼燒法滅菌D．常用滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌等關(guān)于滅菌和消毒的理解不正確解析：

滅菌是指殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。答案：

A解析：滅菌是指殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。2.細(xì)菌培養(yǎng)過程中，分別采用了高壓蒸汽、酒精、火焰灼燒等幾種不同的處理方法，這些方法可依次用于消滅或殺滅哪些部位的雜菌()A．接種針、手、培養(yǎng)基B．培養(yǎng)基、手、接種針C．手、接種針、培養(yǎng)基 D．培養(yǎng)基、接種針、手答案：

B2.細(xì)菌培養(yǎng)過程中，分別采用了高壓蒸汽、酒精、火焰灼燒等幾種1．用平板劃線法或稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時(shí)()①可以用相同的培養(yǎng)基②都需要使用接種針進(jìn)行接種③都需要在火焰旁進(jìn)行接種④都可以用來計(jì)數(shù)活菌A．①②B．③④C．①③ D．②④1．用平板劃線法或稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時(shí)()解析：

平板劃線法或稀釋涂布平板法都使用固體培養(yǎng)基；平板劃線法采用接種針進(jìn)行操作，而稀釋涂布平板法采用涂布器進(jìn)行操作；純化時(shí)，要進(jìn)行無菌操作，需要在火焰旁接種，避免空氣中的微生物混入培養(yǎng)基；平板劃線法一般用于分離而不是計(jì)數(shù)。答案：

C解析：平板劃線法或稀釋涂布平板法都使用固體培養(yǎng)基；平板劃線2．有關(guān)稀釋涂布平板法的敘述中，錯(cuò)誤的是()A．首先將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋B．然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面C．適宜條件下培養(yǎng)D．結(jié)果都可在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落答案：

D2．有關(guān)稀釋涂布平板法的敘述中，錯(cuò)誤的是()3．關(guān)于纖維素分解菌選擇培養(yǎng)的正確敘述是()A．可以增加纖維素分解菌的濃度B．可以減少纖維素分解菌的濃度C．所用培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基D．所用培養(yǎng)基是平板培養(yǎng)基答案：

A3．關(guān)于纖維素分解菌選擇培養(yǎng)的正確敘述是()4．(2011·新課標(biāo)卷)有些細(xì)菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同學(xué)欲從受原油污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株。回答問題：(1)在篩選過程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以________為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上。從功能上講，該培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。(2)純化菌種時(shí)，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，即______________和______________。4．(2011·新課標(biāo)卷)有些細(xì)菌可分解原油，從而消除由原油(3)為了篩選出高效菌株，可比較單菌落周圍分解圈的大小，分解圈大說明該菌株的降解能力________。(4)通常情況下，在微生物培養(yǎng)過程中，實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、________和________________。無菌技術(shù)要求實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈________附近進(jìn)行，以避免周圍環(huán)境中微生物的污染。(3)為了篩選出高效菌株，可比較單菌落周圍分解圈的大小，分解解析：

(1)從受原油污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株，使用的培養(yǎng)基應(yīng)是以原油為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，通過控制碳源這種營養(yǎng)成分，來促進(jìn)能高效降解原油的菌株的生長，抑制其他微生物的生長。(2)菌種純化培養(yǎng)時(shí)，常采用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種。(3)當(dāng)固體培養(yǎng)基上長出單菌落后，可通過比較菌落周圍分解圈的大小，來判斷菌株降解原油能力的大小。一般來說，分解圈越大說明該菌株的降解能力越強(qiáng)，反之則越弱。

解析：(1)從受原油污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株(4)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物的過程中，常用灼燒滅菌法對(duì)接種環(huán)、接種針、試管口、瓶口等進(jìn)行滅菌；用高壓蒸汽滅菌法對(duì)培養(yǎng)基、試管等進(jìn)行滅菌；用干熱滅菌法對(duì)玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)和金屬用具等進(jìn)行滅菌。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰旁進(jìn)行，因?yàn)榫凭珶艋鹧媾钥尚纬梢粋€(gè)無菌環(huán)境，可防止微生物的污染。答案：

(1)原油選擇(2)平板劃線法稀釋涂布平板法(3)強(qiáng)(4)干熱滅菌高壓蒸汽滅菌火焰(4)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物的過程中，常用灼燒滅菌法對(duì)接種環(huán)、接種［練規(guī)范、練速度、練技能］課時(shí)作業(yè)返回目錄［練規(guī)范、練速度、練技能］課時(shí)作業(yè)返回目錄專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用判斷下列說法是否正確：1．分離能分解尿素的細(xì)菌，要以尿素作為培養(yǎng)基中唯一的氮源()2．利用稀釋涂布平板法只能分離微生物不能對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)()3．消毒和滅菌實(shí)質(zhì)是相同的(

)√××判斷下列說法是否正確：√××一、培養(yǎng)基及無菌技術(shù)1．種類：液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基。2．營養(yǎng)成分：一般都含有水、

、

、無機(jī)鹽和生長因子。3．無菌技術(shù)消毒方法：

、巴氏消毒法和化學(xué)藥劑消毒。滅菌法：灼熱滅菌、干熱滅菌、

滅菌。碳源氮源煮沸消毒法高壓蒸汽一、培養(yǎng)基及無菌技術(shù)碳源氮源煮沸消毒法高壓蒸汽二、微生物培養(yǎng)的基本技術(shù)1．配制培養(yǎng)基：稱量→混合→溶化→調(diào)pH→分裝→包扎。2．滅菌：加水→加培養(yǎng)基→密封→排冷氣→維持壓力→取出倒平板(或擱置斜面)。二、微生物培養(yǎng)的基本技術(shù)接種環(huán)、涂布器

平板劃線

稀釋涂布

接種環(huán)、涂布器平板劃線稀釋涂布1.高溫?zé)o菌的原理是什么？提示：

高溫可以使菌體細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、核酸變性失活，從而達(dá)到滅菌的目的。2．用酒精消毒時(shí)，為什么70%的酒精殺菌效果最好？提示：

濃度過高，使菌體表面蛋白質(zhì)凝固成一層保護(hù)膜，乙醇分子不能滲入其中；濃度過低，殺菌力減弱。1.高溫?zé)o菌的原理是什么？三、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)1．分離原理：土壤中細(xì)菌之所以能分解尿素，是由于它們能合成

，這種物質(zhì)在把尿素分解成無機(jī)物的過程中起催化作用。2．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目：統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌一般用

法。3．實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣→制備

→微生物的培養(yǎng)與觀察→細(xì)菌的計(jì)數(shù)。脲酶稀釋涂布平板法、顯微鏡直接計(jì)數(shù)稀釋液三、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)脲酶稀釋涂布平板法、顯微剛果紅

纖維二糖和葡萄糖

剛果紅纖維二糖和葡萄糖3．實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣、

、梯度稀釋、將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上、挑選產(chǎn)生

的菌落。選擇培養(yǎng)透明圈3．實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣、、梯度3.分離微生物的方法有哪些？提示：

從混合樣品中獲得某種微生物的方法通常有兩種：(1)利用該分離對(duì)象對(duì)某一營養(yǎng)物質(zhì)有“嗜好”的原理，專門在培養(yǎng)基中加入該營養(yǎng)物質(zhì)，從而使它成為一種加富培養(yǎng)基。(2)利用該分離對(duì)象對(duì)某種抑菌物質(zhì)的抗性，在混合培養(yǎng)物中加入該抑制物，經(jīng)培養(yǎng)后，原來占優(yōu)勢(shì)的微生物生長受抑制，而分離對(duì)象卻可乘機(jī)大大增殖，在數(shù)量上占優(yōu)勢(shì)。3.分離微生物的方法有哪些？1．微生物的營養(yǎng)：碳源、氮源、水、無機(jī)鹽和生長因子。2．微生物培養(yǎng)的無菌技術(shù)進(jìn)行無菌操作主要是為了防止外來雜菌的入侵，重點(diǎn)是消毒和滅菌。1．微生物的營養(yǎng)：碳源、氮源、水、無機(jī)鹽和生長因子。三種常用滅菌方法的比較：

滅菌方法適用材料或用具滅菌條件滅菌時(shí)間灼燒滅菌接種環(huán)、接種針或其他金屬工具酒精燈火焰的充分燃燒層直到燒紅干熱滅菌玻璃器皿(吸管培養(yǎng)皿)和金屬用具等干熱滅菌箱內(nèi)，160～170℃1～2h高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基等高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)100kPa,121℃15～30min三種常用滅菌方法的比較：滅菌方法適用材料滅菌條件滅菌時(shí)間灼3．微生物的純化培養(yǎng)—平板劃線法與稀釋涂布平板法方法平板劃線法稀釋涂布平板法注意事項(xiàng)(1)接種環(huán)的灼燒①第一次劃線前：接種環(huán)上的微生物，避免污染培養(yǎng)物②每次劃線前：殺死殘留菌種，保證每次劃線菌種來自上次劃線末端③劃線結(jié)束后：殺死殘留菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者(1)稀釋操作時(shí)：每支試管及其中的9mL水、移液管等均需滅菌；操作時(shí)，試管口和移液管應(yīng)在離火焰1cm～2cm處3．微生物的純化培養(yǎng)—平板劃線法與稀釋涂布平板法方法平板劃線方法平板劃線法稀釋涂布平板法注意事項(xiàng)(2)灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后再進(jìn)行操作，以免溫度太高殺死菌種(3)劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連(4)劃線用力要大小適當(dāng)，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破(2)涂布平板時(shí)①涂布器用體積分?jǐn)?shù)為70%酒精消毒，取出時(shí)，讓多余酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引燃②不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精③酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適，移液管管頭不要接觸任何物體方法平板劃線法稀釋涂布平板法注(2)灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后方法平板劃線法稀釋涂布平板法目的在培養(yǎng)基上形成由單個(gè)菌種繁殖而來的子細(xì)胞群體——菌落培養(yǎng)平板冷凝后倒置培養(yǎng)，使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，防止皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基造成污染方法平板劃線法稀釋涂布平板法目的在培養(yǎng)基上形成由單個(gè)菌種繁殖1．下列關(guān)于微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用的敘述錯(cuò)誤的是()A．通過消毒不能殺死物體內(nèi)所有的微生物B．利用平板劃線法可以統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目C．微生物所用的培養(yǎng)基的成分和植物組織培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基的成分不同D．平板劃線法和稀釋涂布平板法常用于微生物的接種1．下列關(guān)于微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用的敘述錯(cuò)誤的是()解析：

消毒是指殺死部分對(duì)人體有害的病原微生物，但不一定能殺死細(xì)菌的芽孢，故A正確；統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目要用稀釋涂布平板法，平板劃線法辦不到，故B錯(cuò)誤；不同的培養(yǎng)對(duì)象，所需的營養(yǎng)成分不同，培養(yǎng)基中所加入的物質(zhì)就不同，故C正確；微生物接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法，故D正確。答案：

B解析：消毒是指殺死部分對(duì)人體有害的病原微生物，但不一定能殺2．如圖是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序?yàn)?2345。下列操作方法正確的是()A．操作前要將接種環(huán)放在火焰邊灼燒滅菌B．劃線操作須在火焰上進(jìn)行C．在5區(qū)域中才可以得到所需菌落D．在12345區(qū)域中劃線前后都要對(duì)接種環(huán)滅菌2．如圖是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序?yàn)?2345。下列解析：

本題考查平板劃線操作方法。在每次劃線前后都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌，接種環(huán)的滅菌方法應(yīng)是在火焰上灼燒，接種時(shí)劃線操作是在火焰邊進(jìn)行。在5個(gè)區(qū)域中，只要有單個(gè)活細(xì)菌，通過培養(yǎng)即可獲得所需菌落。答案：

D解析：本題考查平板劃線操作方法。在每次劃線前后都要對(duì)接種環(huán)1．篩選菌株(1)原則：人為提供有利于目的菌生長的條件，同時(shí)抑制或阻止其他微生物的生長。1．篩選菌株(2)菌株篩選原理的比較土壤中分解尿素的細(xì)菌分解纖維素的微生物常用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，即提供有利于目的菌株生長的條件，如營養(yǎng)、溫度、pH等，同時(shí)抑制其他微生物的生長剛果紅染色法，即在含有纖維素的培養(yǎng)基中，加入剛果紅時(shí)，剛果紅與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被分解后，該復(fù)合物不能形成，培養(yǎng)基中出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈(2)菌株篩選原理的比較土壤中分解尿素的細(xì)菌分解纖維素的微生2.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法①原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。②方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。③缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。2.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法(2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。②計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)×M，其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。③操作：設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。同時(shí)為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。(2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)3.設(shè)置對(duì)照(1)目的：排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。(2)方法：①證明培養(yǎng)基未被污染，用空白培養(yǎng)基作對(duì)照。②證明選擇培養(yǎng)基的選擇作用，用基礎(chǔ)培養(yǎng)基接種等量同種菌液作對(duì)照。3.設(shè)置對(duì)照3．分離纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)過程中，下列操作有誤的是()A．經(jīng)選擇培養(yǎng)后將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上B．富集培養(yǎng)這一步可省略，但培養(yǎng)的纖維素分解菌少C．經(jīng)稀釋培養(yǎng)后，用剛果紅染色D．對(duì)照組可用同樣量的培養(yǎng)液涂布到不含纖維素的培養(yǎng)基上答案：

A3．分離纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)過程中，下列操作有誤的是()統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法

①原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血球計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)；③缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法(2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。②計(jì)算公式：每克樣品中的菌數(shù)＝(C÷V)×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。(2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)(2012·西鐵一中模擬)下列是關(guān)于“檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)”實(shí)驗(yàn)操作的敘述，其中錯(cuò)誤的是()A．用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板B．取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各0.1mL，分別涂布于各組平板上C．將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置，37℃恒溫培養(yǎng)24～48小時(shí)D．確定對(duì)照組無菌后，選擇菌落數(shù)在300以上的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)(2012·西鐵一中模擬)下列是關(guān)于“解析：

本題以“土壤中細(xì)菌的計(jì)數(shù)”為命題點(diǎn)，考查對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的識(shí)記情況。為防止培養(yǎng)皿蓋上凝結(jié)的水珠落在培養(yǎng)基表面造成雜菌污染，應(yīng)將平板倒置。在細(xì)菌計(jì)數(shù)時(shí)，為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，應(yīng)至少涂布三個(gè)平板，選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)；然后求出平均數(shù)，再根據(jù)對(duì)應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中的細(xì)菌數(shù)。答案：

D解析：本題以“土壤中細(xì)菌的計(jì)數(shù)”為命題點(diǎn)，考查對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的1.(2012·蕪湖一中質(zhì)檢)在做分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，A同學(xué)從對(duì)應(yīng)106培養(yǎng)基上篩選出大約150個(gè)菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約50個(gè)菌落。產(chǎn)生A同學(xué)結(jié)果的原因可能有()①土樣不同②培養(yǎng)基污染③操作失誤④沒有設(shè)置對(duì)照A．①②③B．②③④C．①③④D．①②④答案：

A1.(2012·蕪湖一中質(zhì)檢)在做分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，消毒與滅菌的區(qū)別滅菌方法條件結(jié)果常用方法消毒較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法，還有化學(xué)藥劑(如酒精、氯氣、石炭酸等)消毒、紫外線消毒滅菌強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌消毒與滅菌的區(qū)別滅菌方法條件結(jié)果常用方法消毒較為溫和的物理或關(guān)于滅菌和消毒的理解不正確的是()A．滅菌是指殺滅環(huán)境中一切微生物的細(xì)胞、芽孢和孢子B．消毒和滅菌實(shí)質(zhì)是相同的C．接種環(huán)用灼燒法滅菌D．常用滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌等關(guān)于滅菌和消毒的理解不正確解析：

滅菌是指殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。答案：

A解析：滅菌是指殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。2.細(xì)菌培養(yǎng)過程中，分別采用了高壓蒸汽、酒精、火焰灼燒等幾種不同的處理方法，這些方法可依次用于消滅或殺滅哪些部位的雜菌()A．接種針、手、培養(yǎng)基B．培養(yǎng)基、手、接種針C．手、接種針、培養(yǎng)基 D．培養(yǎng)基、接種針、手答案：

B2.細(xì)菌培養(yǎng)過程中，分別采用了高壓蒸汽、酒精、火焰灼燒等幾種1．用平板劃線法或稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時(shí)()①可以用相同的培養(yǎng)基②都需要使用接種針進(jìn)行接種③都需要在火焰旁進(jìn)行接種④都可以用來計(jì)數(shù)活菌A．①②B．③④C．①③ D．②④1．用平板劃線法或稀