體內(nèi)藥物分析常用的分析方法

體內(nèi)藥物分析常用的分析方法體內(nèi)藥物分析是借助于現(xiàn)代化的儀器與技術(shù)來分析藥物在體內(nèi)數(shù)量與質(zhì)量的變化，以獲得藥物在體內(nèi)的各種藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)、代謝方式、代謝途徑等信息。目前，用于體內(nèi)藥物分析的方法有很多，歸納起來主要有以下幾類：1.色譜分析法體內(nèi)藥物分析中，色譜技術(shù)(Chromatography)—直是研究體內(nèi)藥物及其代謝物最強(qiáng)有力的手段，其在體內(nèi)藥物分析中的應(yīng)用始于上世紀(jì)八十年代。由于其具有分離和分析的雙重功能，且有很高的選擇性和較高的靈敏度，因而可同時(shí)分析結(jié)構(gòu)相似的藥物和代謝物等。色譜法可分為薄層色譜法、薄層掃描法、氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)及高效毛細(xì)管電泳法(HPCE)等。色譜法中以高效液相色譜法最為常用，特別是反相高效液相色譜法(RP-HPLC)更具有試劑價(jià)廉、方法簡單和適應(yīng)范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，中評(píng)價(jià)其它方法的參比方法。GC法在體內(nèi)藥物分析方法中也占有重要地位，雖然該法只限于高揮發(fā)性、熱穩(wěn)定性的化合物，但通過化學(xué)衍生化技術(shù)可使應(yīng)用范圍大大增加。特別值得一提的是毛細(xì)管氣相色譜法，由于其柱效高，可分析復(fù)雜的混合物，因而在體內(nèi)藥物分析中具有很好的應(yīng)用前景。高效毛細(xì)管電泳(HPCE)是20世紀(jì)80年代后期發(fā)展起來的經(jīng)典電泳技術(shù)和現(xiàn)代微柱分離相結(jié)合的產(chǎn)物 ，是一類以細(xì)管為分離通道，以高壓直流電場為驅(qū)動(dòng)力的新型液相分離分析技術(shù)。它分離模式多，分離效率高，速度快,適用范圍廣，所需樣品、試劑用量少，在體內(nèi)藥物分析中得到廣泛應(yīng)用。根據(jù)分離模式的不同，又可分為毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)，毛細(xì)管凝膠電泳(CEC)，毛細(xì)管等電聚焦(CIEF)，膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜(MEKC)等，CZE是目前應(yīng)用最廣泛的毛細(xì)管電泳分離模式。2?聯(lián)用分析法目前使用較廣泛的為色譜聯(lián)用分析法和色譜與核磁共振聯(lián)用分析法。色譜與質(zhì)譜的聯(lián)用是應(yīng)用于藥物分析中最為活躍的技術(shù)，能夠使樣品的分離、定性、定量一次完成。色譜技術(shù)為質(zhì)譜分析提供了純化的試樣，質(zhì)譜則提供準(zhǔn)確的結(jié)構(gòu)信息。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用是目前最重要的分離分析方法之一，HPLC的高分離性能和MS的高選擇性，高靈敏度及豐富的結(jié)構(gòu)信息相結(jié)合，已成為體內(nèi)藥物分析研究中強(qiáng)有力的工具。分析前樣品預(yù)處理簡單，一般無需衍生化或水解，更適合于體內(nèi)藥物的分離和鑒定。GC-MS聯(lián)用技術(shù)已經(jīng)是一門成熟的分析鑒定技術(shù)于揮發(fā)性強(qiáng)、熱穩(wěn)定的藥物的分離。隨著核磁共振儀在靈敏度、分辯率、動(dòng)態(tài)范圍等方面技

，適合術(shù)的提高，色譜，特別是HPLC與NMR儀直接聯(lián)用已成為可能并已經(jīng)成為體內(nèi)藥物分析中有力的結(jié)構(gòu)鑒定技術(shù)之一。3.免疫分析法免疫分析法的原理是利用抗原 -抗體的特異反應(yīng)來測(cè)定體內(nèi)藥物的含量。它將分析方法與免疫原理相結(jié)合，進(jìn)行超微量分析，具有靈敏度高、選擇性強(qiáng)、操作簡便、快速用量少、樣品一般不需進(jìn)行預(yù)處理等優(yōu)點(diǎn)。因此，該法特別適合分析大批量的低濃度的體液樣品。其缺點(diǎn)是測(cè)定藥物的種類受試劑盒供應(yīng)的限制，且測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度不如色譜法。根據(jù)對(duì)抗原標(biāo)記方法的不同，免疫分析法可分為放射免疫分析(RIA)、酶免疫分析(EIA)、化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA)及熒光免疫分析(FIA)等。在體內(nèi)藥物分析中免疫分析方法已成為一種必不可少的基本檢測(cè)技術(shù)。4?光譜分析法光譜分析法(SpectroscopicAnalysis)包括比色法、紫外分光光度法(UV)、熒光分光光度法(FLUOR)和原子吸收分光光度法(AAS)。光譜分析法是體內(nèi)藥物分析中應(yīng)用較早的方法之一。其特點(diǎn)是儀器結(jié)構(gòu)簡單，測(cè)定快速簡便。但由于這些方法本身不具分離功能，易受到結(jié)構(gòu)相近的其它藥物、代謝物及內(nèi)源性雜質(zhì)的干擾，因而其應(yīng)用正逐漸減少，僅適用于分析一些濃度較高、含干擾成分較少的樣品。但是光譜法中的熒光分析法由于靈敏度高，可分析濃度極低的藥物，而成為體內(nèi)藥物分析中不可缺少的方法。此外，原子吸收分光光度法在測(cè)定體液中微量金屬元素方面也占有特殊的地位。5.電化學(xué)分析法電化學(xué)分析法(ElectrochemicalAnalysis)是一類基于電池內(nèi)發(fā)生電化學(xué)反應(yīng)而建立起來的方法。測(cè)定時(shí)，通過選擇適當(dāng)?shù)碾姌O組成化學(xué)電池，以測(cè)定電壓、電流、電阻、電量等電信號(hào)強(qiáng)度變化來對(duì)藥物進(jìn)行定性和定量分析。該類方法的特點(diǎn)是儀器