生化分析-2氣相色譜分析法

第二相色譜gas ysis第一 氣相色譜gaschromatographic一、氣相色譜儀gaschromatographic島津新氣相色譜儀系統(tǒng)gc-2002 化學(xué)分開子發(fā)三出維了結(jié)用構(gòu)來的確核定磁溶共發(fā)明了對生物大分子進(jìn)行質(zhì)譜分析方 振技術(shù)大agilent安捷倫6820氣相色譜GC-MS氣質(zhì)聯(lián)用二、氣相色譜結(jié)構(gòu)流processofgas1-載氣鋼瓶2-減壓閥3-凈化干燥管4-針形閥5-流量計(jì)6-壓力表7-氣化室8-色譜柱9-檢測器10-放大器11-溫度控制器12-記錄氣相色譜由以下幾個(gè)主要部分構(gòu)成記錄系檢記錄系檢測系分離系進(jìn)樣系氣路系溫控系三、氣相色譜儀mainassemblyofgas氣路系常用的載氣有氫氣、氮?dú)?、氦氣、氬氣，一般由相?yīng)的高壓鋼瓶供給；載載氣的作用：作為動(dòng)力，驅(qū)動(dòng)樣品在色譜柱中流動(dòng)，并分離后的各組分推進(jìn)檢測凈化干燥管（凈化器提高載氣純度的裝置。載氣的凈化要求主要取決于所用的色譜柱、檢測器和分析項(xiàng)目。水分會(huì)影響氣固色譜吸附劑的活性和 ，也會(huì)影響部分氣液色譜固定液的分離效率，所以要將水分從載氣中除；影響檢測器靈敏度的雜質(zhì)如微量烴類、氧通常是一根金屬或塑料制成的管子，串聯(lián)在氣路里，管內(nèi)裝有不同的凈化劑，如：硅膠、分子篩可除去水分；活性炭除去烴類雜質(zhì)；N2、Ar中微量氧用脫氧劑除去。載氣流速控進(jìn)樣系統(tǒng)：包括進(jìn)樣器及氣化室作用：轉(zhuǎn)移到色譜柱中，以便進(jìn)行分離。進(jìn)樣液體試樣的進(jìn)樣，一般都采用微量注射器，常用規(guī)格：1μL，5μL，10μL，50μL等。不同規(guī)格的注射器，填充柱色譜常用10L；毛細(xì)管色譜常用器，、潤沖、取樣、進(jìn)樣、換樣等過程自動(dòng)完成，一次可放置數(shù)氣體試樣的進(jìn)樣，常采用色譜儀本身配置的六通閥進(jìn)樣。該法進(jìn)樣重現(xiàn)性好，體積相對誤差小。試樣首先充滿定量管，切入后，載氣攜帶定量管中的試樣氣體進(jìn)入分離柱。試樣首先充滿定量管，切入后，載氣攜帶定量管中的試樣氣體進(jìn)入分離柱。六通閥進(jìn)樣器是色譜系統(tǒng)中最理想的進(jìn)樣器，它是由圓形密封墊(轉(zhuǎn)子)和固定底座(定子)組成。當(dāng)在充樣(Load)位置時(shí)，從進(jìn)樣孔充樣進(jìn)定量環(huán)，多余樣品從放空孔排出；轉(zhuǎn)動(dòng)至進(jìn)樣(Inject)位置（2）氣化室（樣品注射室而不分解，避免氣化過而不分解，避免氣化過程長而影響色譜峰形。要求密封性好、體積小、熱容分離系分離系統(tǒng)包括色譜柱和色譜爐（柱箱，混合物中各組分的分離在這里完成，是(1作用：分離,色譜儀 部件色譜柱主要有兩類：色譜填充由不銹鋼、銅或玻璃材料制成，內(nèi)裝固定相，一般內(nèi)徑2~4，長1~10。形狀有型和螺旋型兩種。螺旋直徑與柱內(nèi)徑之比一般為15：1到25：1。毛細(xì)管又叫空心柱，是在內(nèi)壁涂一層固定液，或涂一層已有固定液的載體（約m厚），內(nèi)徑00m，長0，由不銹鋼或玻璃制成?？傮w上講，空心毛細(xì)管柱滲透性好，分離效率高，分析速度快。但柱容量低，進(jìn)樣量小（不到μL），要求檢測器靈敏度高。檢測系作用：測量的電信號(hào)。隨時(shí)間的變化，轉(zhuǎn)化成相應(yīng)電信號(hào)，經(jīng)放大后記錄和顯示，給出色譜圖；理想檢測器：響應(yīng)快、靈敏度高、噪聲低、線性范圍寬，對各種物質(zhì)均有響應(yīng)，對流速和溫度變化不敏感。溫度控制系溫度是色譜分離條件的重要選擇參數(shù)氣化室、色譜爐、檢測器三部分在色譜儀操作時(shí)均需控制和測量溫度；度比柱溫高10~50。檢測器溫度：保證被分度比柱溫高10~50。檢測器溫度：保證被分離后的組分通過時(shí)不在此冷凝，控溫精度要優(yōu)0.1程序升溫：適用于沸點(diǎn)范圍很寬的混合物，指在一個(gè)分析周期內(nèi)柱溫隨時(shí)間由低到高作線性或非線性變化，以使沸點(diǎn)不同的組分分別在其最佳柱溫出，從而改善分離效果，縮短分析記錄系作用：自動(dòng)記錄由檢測器輸出的電信號(hào)。配備微處理機(jī)的色譜儀還可以自動(dòng)控制色譜儀操作過程。第二氣相色譜固定stationaryphasesingas

一、氣固色譜固定stationaryphasesGas-solid二、氣液色譜固定stationaryphasesgas-liquid一、氣固色譜固定相-固體吸附 常用固體吸附--活性炭：有較大的比表面積，吸附性較活性氧化鋁：有較大的極性。適用于常溫下O2、N2、CO、CH4、C2H6、C2H4等氣體的相互分離。CO2能被活性氧化鋁硅膠：與活性氧化鋁大致相同的分離性能，除能分析上述物分子篩：堿及堿土金屬的硅鋁酸鹽（沸石），多孔性。除了廣泛用于H2、O2、N2、CH4、CO等的分離外，還能夠測定、Ne、Ar、NO、N2O人工合成固體吸附如國內(nèi)的X型高分子多孔微球，國外oapak系列等。以苯乙烯或乙基苯乙烯為單體，二乙烯基苯為交聯(lián)劑共聚而成，其孔徑大小及表面性質(zhì)可控。特點(diǎn)可直接作為固定相使用，也可作為載體在表面涂漬固定液使色譜柱容易填充均在直接用作固定相時(shí)，無液膜存在，也就沒有流失問題、腈類、胺類分固體吸附氣固色譜固定相的特性能 和活化條件有很大關(guān)系同一種固定相，不同廠家或不同活化條件，分離效果差異較大；種類有使用方二、氣液色譜固stationaryphasesingas-liquid氣液色譜固定相[固定液+載體（擔(dān)體、支持體）]就是將固定液均勻地涂到載體上而構(gòu)成的載體為固定液提供大的惰性表面，以承擔(dān)固定液，使其形成薄而均勻的液膜，以加大與流動(dòng)相接觸的表面積。1載體的一般要求比表面積大，孔徑分布均勻化學(xué)惰性，表面 附性或吸附性很弱，與被分離組份顆粒大小均勻、適度。一般常用60~80目、80~100載體種類及性：：由于表面難以潤，這類擔(dān)體常用于特殊的分析應(yīng)用范圍不如硅藻土類擔(dān)體廣泛硅藻硅藻土載體的預(yù)處硅藻土載體的預(yù)處理方固定液---高沸點(diǎn)難揮發(fā)的有機(jī)化對固定液的要在使用溫度下為液體，熱穩(wěn)定性及化學(xué)穩(wěn)定性，好不與被分離組分發(fā)生不可逆的化學(xué)反應(yīng)；粘度和凝固點(diǎn)低，以便在載體表面均勻分布低于“最高使用溫度”，高于“最低使用溫度”；組分有足夠的分離能力。把具有相同官能團(tuán)的固定液排在一起，然后按官能團(tuán)類型不同分類，便于按組分與固定液“結(jié)構(gòu)相似”原則，選擇固定液時(shí)參考。在各種色譜手冊中，一般將固定液按有機(jī)化合物的分類方法分為：脂肪烴、芳烴、醇、酯、聚酯、胺、聚硅氧烷等。按固定液的相對極性分規(guī)定：非極性固定液角鯊?fù)椋ó惾椋┑南鄬O性強(qiáng)極性固定液β,β’-氧二丙腈的相對極性相對保留值，根據(jù)它們的對應(yīng)關(guān)系

100 s非弱 第三氣相色譜條件的selectionofoperating

譜柱及使用條件chromatographicandchoiceofoperating二、其它操作條件的選choiceofother譜柱及使用條件的選固定液的選擇---“相似相溶物質(zhì)溶解性能的規(guī)律，即溶質(zhì)和溶劑性質(zhì)相似時(shí)，易于相互溶解。是選擇固定液的基本原則。C中指被分離組分與固定液之間有某些相似性（極性、官能團(tuán)、化學(xué)性質(zhì)等），則組分分子與固定液分子間作用力強(qiáng)，組分在固定液中溶解度大，分配系數(shù)大，保留時(shí)間長，易于相互分離。反之，則分子間作用力小，溶解度小，分配系數(shù)小，不利于相互分離。②分離極性組分時(shí)②分離極性組分時(shí)，一般選用極性固定液。各組分按極①分離非極性組分（烴類）時(shí)③分離非極性和極性的混合物，一般選用極性固定液。④對于組成復(fù)雜、較難分離的試樣當(dāng)各組分的沸點(diǎn)差別大時(shí)，選非極性固定液，低沸點(diǎn)先出當(dāng)各組分間極性差別大時(shí)，選極性固定液，極性小固定液配比（涂漬量）配比：固定液在擔(dān)體上的涂漬量，一般指的是固定液與擔(dān)體的百分比，配比通常在5%～25%之間配比越低，擔(dān)體上形成的液膜越薄，傳質(zhì)阻力越小，柱效越高，分析速度也越快。分析工作中通常傾向于使用較低的配比。配比較低時(shí)，固定相的負(fù)載量低，允許的進(jìn)樣量較小。柱長和柱內(nèi)徑的選柱長的選用原則是在能滿足分離目的的前提下，盡可能選。增加色譜柱內(nèi)徑，可以增加分離的試樣量，但由于縱向擴(kuò)散路徑的增加，會(huì)使柱效降低。在一般分析工作中，色譜柱內(nèi)徑常為36。柱溫的確相和液相中的傳質(zhì)過程，減小傳質(zhì)阻力，提高柱效。但提高柱溫也加劇了分子的縱向擴(kuò)散，又會(huì)導(dǎo)致柱效降低。應(yīng)使柱溫控制在固定液的最高使用溫度和最低使用溫度范圍之內(nèi)。柱溫一般選擇在接近或略低于組分平均沸點(diǎn)時(shí)的溫柱溫一般選擇在接近或略低于組分平均沸點(diǎn)時(shí)的溫度對于沸程寬的多組分混合物，可用程序升溫法柱溫宜高。既要高的分離度，又要縮短分析時(shí)間，在實(shí)際作中常采用較低的固定液配比與較低柱溫相結(jié)若分離是主程序升它操作條件的選choiceofotheroperating進(jìn)樣方式和進(jìn)樣量的選液體試樣采用色譜微量進(jìn)樣器進(jìn)樣，規(guī)格有1μL,5μL,10μL等。測范圍內(nèi)。一般液體試樣約0.1~5mL,氣體試樣0.1~10mL,進(jìn)樣要求動(dòng)作快、時(shí)間短。氣體試樣應(yīng)采用氣體進(jìn)樣閥進(jìn)樣氣化溫度的選完全氣化，又不引起樣品分解。氣化室溫度一般比柱溫高30～70或比樣品組分中最高沸點(diǎn)高～。第四氣相色譜應(yīng)用技applicationtechnologyofgaschromatograph

一、裂解氣相色譜技與應(yīng)applicationandtechnologyofpyrolysisgaschromatograph二、頂空氣相色譜技與應(yīng)applicationsandtechnologyofheadspacegas一、裂解氣相色譜的原理與應(yīng)裂解氣相色譜（pyrolysisgas——熱裂解和氣相色譜一些分子量較大、結(jié)構(gòu)復(fù)雜、難揮發(fā)、難溶解的物分析鑒定方法。熱裂解+氣相色譜+質(zhì)譜（紅外、核磁）技術(shù)——研究高分子化合物的有力工具在高分子、生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境科學(xué)、考古學(xué)、地球化學(xué)、礦物 、 等領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用。基本原理及方基本原理在一定條件下，高分子及非揮發(fā)性有機(jī)化合物遵循一定的裂解規(guī)律，即特定的樣品能夠產(chǎn)生特征性的裂解產(chǎn)物及產(chǎn)物分布，采用氣相色譜分析、鑒定裂解產(chǎn)物，據(jù)此可對原樣品進(jìn)行表征。方法樣品置于裂解器中，在嚴(yán)格控制的條件下，快速加熱，使之迅速分解成為可揮發(fā)的小分子產(chǎn)物，然后直接將裂解產(chǎn)物送入色譜柱中進(jìn)行分離，獲得定性定量數(shù)據(jù)。特點(diǎn)分離效率高靈敏度高，樣品用量少分析速度快信息量裂解機(jī)理、熱穩(wěn)定性、相關(guān)的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究適合于各種形態(tài)樣品，且一般不需預(yù)處粘稠液體、粉末、薄膜、纖維及彈性體， 樹脂、涂設(shè)備簡對裂解器的要裂解反應(yīng)控裂解溫度的精確控制(裂解溫度不同，裂解產(chǎn)物不同)；可重復(fù)進(jìn)行；裂解溫度范圍可不同物質(zhì)需要不同的裂解溫度400-1500裂解器與接口的體積減小死體積對裂解反應(yīng)無催化反二、頂空氣相色譜的技術(shù)與應(yīng)appl