微生物學(xué)檢驗(第3版)藥物敏感試驗課件

抗菌藥物敏感性試驗K-B法

實驗十1、掌握K－B法的原理、操作方法、

結(jié)果判讀與解釋及其臨床意義。

2、掌握紙K－B法的質(zhì)控方法。

一.目的：菌種:革蘭陰性桿菌（氧化酶+、-）革蘭陽性球菌（觸酶+、-）MH瓊脂、無菌生理鹽水、0.5麥?zhǔn)蠁挝粯?biāo)準(zhǔn)比濁管、藥敏紙片、無菌棉拭、鑷子、尺子、革蘭染液、3%H2O2、氧化酶試紙等二.材料三、其他β－內(nèi)酰胺類抗生素（一）單環(huán)β－內(nèi)酰胺類抗生素，主要有氨曲南和卡蘆莫南。（二）頭霉素類和氧頭孢烯類抗生素，主要有頭孢西丁、頭孢替坦、頭孢美唑。（三）碳青霉烯類抗生素，主要有亞胺培南、米洛培南、必安培南、帕尼培南。（四）β－內(nèi)酰胺類抑制劑，主要有克拉維酸、舒巴坦和他唑巴坦?？股氐姆N類四、氨基糖苷類抗生素按其來源分為：①由鏈霉菌屬發(fā)酵濾液提取獲得，有鏈霉素、卡那霉素、妥布霉素、核糖霉素、巴龍霉素、新霉素；②由小單胞菌屬發(fā)酵濾液中提取，有慶大霉素、福提霉素；③半合成氨基糖苷類，有阿米卡星、奈替米星、地貝卡星等。一.目的：抗生素的種類五、喹諾酮類抗生素第一代為窄譜抗生素，有新惡酸、奈啶酸和惡喹酸。第二代為廣譜類抗生素，抗菌強度依次為環(huán)丙沙星、氧氟沙星、洛美沙星、氟咯沙星、培氟沙星、諾氟沙星。第三代為超廣譜類抗生素，有司帕沙星、妥舒沙星、左氟沙星等。一.目的：抗生素的種類六、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，常用的有紅霉素、柱晶白霉素、麥迪霉素、乙酰螺旋霉素。一.目的：抗生素的種類八、糖肽類抗生素，常用的有萬古霉素和替卡拉寧抗生素的種類十、其他合成抗菌藥（一）硝基呋喃類用于腸道、尿路感染和外用消毒，有呋喃坦啶和呋喃唑酮。（二）硝基咪唑類對厭氧菌有抗菌作用，對需氧菌無效，有甲硝唑和替硝唑。一.目的：抗生素的種類C組藥物用于對A組藥物耐藥的流行菌株或?qū)組藥物過敏的病人和某些不常見的細菌（如腸外分離的沙門菌屬或耐萬古霉素腸球菌）。U組僅用于尿道中分離的細菌，不作為尿道外分離菌的常規(guī)藥敏試驗。試驗常規(guī)抗菌藥物選擇A組一級試驗并常規(guī)報告的抗微生物藥,如葡萄球菌屬用苯唑西林和青霉素。B組一級試驗有選擇報告的抗微生物藥,如腸球菌屬用萬古霉素。C組補充試驗有選擇報告的抗微生物藥，如葡萄球菌屬用氯霉素。U組僅用于泌尿道的補充實驗的抗微生物藥，如葡萄球菌屬用洛美沙星和諾氟沙星。(一）非苛養(yǎng)菌藥敏試驗抗生素的選用A組一級試驗并常規(guī)報告的抗微生物藥,如肺炎鏈球菌用紅霉素和青霉素。B組一級試驗有選擇報告的抗微生物藥,如肺炎鏈球菌用頭孢噻肟或頭孢曲松

。C組補充試驗有選擇報告的抗微生物藥，如肺炎鏈球菌用頭孢呋辛

。(一）苛養(yǎng)菌藥敏試驗抗生素的選用

將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測試菌的瓊脂平板上，紙片中所含藥物吸取瓊脂中水分溶解后不斷向紙片周圍擴散形成遞減的梯度濃度，在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)測試菌的生長被抑制，從而形成無菌生長的透明圈即為抑菌圈。抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度。并與該藥對測試菌有MIC呈負相關(guān)關(guān)系。實驗原理1.原理：實驗原理觸酶陽性的G＋球菌：青、苯唑、克林、慶大、環(huán)丙沙星、萬古、紅霉素、頭孢唑林觸酶陰性的G+球菌：青、氨芐、氯、紅、利福平、慶大、環(huán)丙沙星、萬古氧化酶陰性的桿菌：氨芐、丁卡、環(huán)丙沙星、慶大、頭孢噻肟、復(fù)達欣、泰能、哌拉西林氧化酶陽性的桿菌：頭他、慶大、哌拉、丁卡、氨曲南、環(huán)丙、頭孢噻肟、泰能藥敏試驗選擇紙片(2)、挑選待檢純菌落，用無菌的生理鹽水配制成濃度為0.5麥?zhǔn)蠁挝坏木鷳乙骸?3)、取MH平板一塊，注明姓名學(xué)號及所選藥敏紙片的名稱，然后用棉試子蘸取菌液，在試管內(nèi)壁輕擠去多余菌液后均勻涂布于整個平板表面3次，每次旋轉(zhuǎn)平板60度，最后沿平板內(nèi)緣涂一周。放置約5分鐘后用鑷子分別挾取所選擇的藥敏紙片貼上。室溫放置10分鐘左右，恒溫箱培養(yǎng)24h。實驗操作(4)、MH平板涂布均勻，放置5分鐘再貼紙片，紙片放置應(yīng)該迅速準(zhǔn)確，不得在平板上拖動紙片，紙片間的距離和位置要均勻。離平板邊緣不小于15mm，兩紙片間距離不小于24mm。驗操實作結(jié)果判讀：用尺子準(zhǔn)確測量抑菌環(huán)的直徑(mm)，抑菌圈的邊緣以肉眼見不到細菌明顯生長為限。結(jié)果報告應(yīng)以最小抑菌圈的的直徑為準(zhǔn)。結(jié)果判讀：用刻度尺量取抑菌圈直徑，根據(jù)CLSI（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute）標(biāo)準(zhǔn)判讀結(jié)果；報告：細菌對該抗生素是敏感（susceptible，S）；耐藥（resistant，R）；還是中介（intermediate，I