葡聚糖氣相紅外分析

葡聚糖分析1單糖組成分析1.1薄層色譜法分析本品為灰樹花倍他葡聚糖，樣品經(jīng)酸水解后可采用薄層色譜法進(jìn)行單糖組成分析。照《中華人民共和國藥典》（2005年版二部）附錄VIB薄層色譜法進(jìn)行測定，具體分析條件如下：少量水溶解備用。樣品制備：取樣品2mg溶于6mol/L的鹽酸2mL中，裝于安瓿瓶中封管，置于105^恒溫水解1h，經(jīng)濃縮后，凍十，少量水溶解備用。薄層板：Silicagel60F254plate2.4展開劑：正丙醇：水：氨水=60：30：2.4顯色劑：苯胺一二苯胺甘露糖和木糖標(biāo)準(zhǔn)品對照品：半乳糖，阿拉伯糖，葡萄糖、甘露糖和木糖標(biāo)準(zhǔn)品上樣：取水解液10uL用微量移液器進(jìn)行點(diǎn)樣本品的薄層色譜分析結(jié)果如下圖3所示：圖5圖5：灰樹花倍他葡聚糖的薄層色譜（No.1?8分別為：半乳糖，阿拉伯糖，葡萄糖，樣品1樣品2，樣品3，甘露糖，木糖）測定結(jié)果：灰樹花倍他葡聚糖經(jīng)水解后，用TLC法檢查，只在葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品位置上出現(xiàn)一個斑點(diǎn)，表明本品只含有葡萄糖。1.2氣相色譜法分析本品為灰樹花倍他葡聚糖，樣品經(jīng)衍生化處理后可采用氣相色譜法進(jìn)行單糖

組成分析。照《中華人民共和國藥典》（2005年版二部）附錄VE氣相色譜法進(jìn)行測定，具體分析條件如下：儀器：HP5890II型氣相色譜儀，美國安捷倫公司。樣品制備：采用糖腈乙酸脂法進(jìn)行衍生化，取水解干燥后的樣品5mg，加入10mg鹽酸羥胺和5mg肌醇，加入0.5mL毗啶，封口后于90°C下加熱反應(yīng)30min，間或振蕩。取出后冷卻全室溫，加入0.5mL醋酸酎，90C下繼續(xù)反應(yīng)30min，反應(yīng)產(chǎn)物直接進(jìn)氣相色譜分析。色譜條件：色譜柱為AC225（30mX0.25um）柱溫215C，進(jìn)樣口溫度270C，檢測器溫度270C。本品的氣相色譜分析結(jié)果如下圖6所示：mV-80.00-LJD72.00-64.00-56.00-4S.00-40.00-3結(jié)果J顯示:為葡聚糖。24.00-圖6：6-葡糖糖中單糖組本品的氣相色譜圖上只檢測到單一的葡萄糖峰，可以確定本品2紅外光譜（成氣相色譜定糖苷鍵定向及多勾象又對多糖活性的發(fā)揮起著IR3結(jié)果J顯示:為葡聚糖。24.00-圖6：6-葡糖糖中單糖組本品的氣相色譜圖上只檢測到單一的葡萄糖峰，可以確定本品2紅外光譜（成氣相色譜定糖苷鍵定向及多勾象又對多糖活性的發(fā)揮起著IR)多糖的a或6構(gòu)型是糖空間構(gòu)象的重要因素之一，而多分重要的作用。通過紅卜光譜可以區(qū)分糖的空間彳葡聚糖的a或6構(gòu)型。在紅外光譜上，6端基C-H的變角振動吸收峰約在895cm-1處，，而a-毗喃構(gòu)型葡聚糖的特征吸收約在8叫成芽處沽品的紅外光譜分析條件如下:儀器型號：用NicoletNexus470FT-IR型付立葉紅外光譜儀進(jìn)行測定。儀器校正：參考2000年中華人民共和國藥典二部附錄IVC（附錄27頁）方法進(jìn)行。

樣品制備：樣品為固體，米用KBr壓片法，取0.5?2mg樣品研細(xì)后，加入100?200mg干燥KBr粉末，研細(xì)，在7?10噸/cm2壓力下，壓成透明薄片進(jìn)彳亍測試。本品的紅外光譜如圖8所示：25ZS80L8S.9Z0L25ZS80L8S.9Z0L4000300020001000Wavenumbers(cm-1)圖8：灰樹花倍他葡聚糖的紅外光譜從本品的紅外光譜圖中可以看出，本品在895cm-1波數(shù)附近有弱的特征吸收峰，表明本品為灰樹花倍他葡聚糖。本品的紅外光譜圖各吸收峰解析如下：糖類分子中含有大量-OH基，O-H伸縮振動多在3200-3600cm-1之間出現(xiàn)強(qiáng)而寬吸收峰，本品在3410cm-1有強(qiáng)吸收，為灰樹花倍他葡聚糖O-H伸縮振動峰；糖環(huán)中C-H吸收較弱，一般在3000-2800cm-1以及在1400cm-1左右出現(xiàn)C-H變角振動弱吸收峰，本品在2889cm-1和1412cm-1出現(xiàn)弱吸收，分別為灰樹花倍他葡聚糖C-H伸縮振動峰和變角振動吸收；多糖類物質(zhì)有時在1600-1650cm-1附近出現(xiàn)吸收，該吸收屬于分子含有P-糖苷鍵以及微量水分締合羥基吸收造成，本品在1633cm-1出現(xiàn)吸收，為樣品中6-糖苷鍵吸收以及微量水中締合-OH吸收。O-H變角振動在1040-1160cm-1之間出現(xiàn)強(qiáng)吸收峰，本品在1043，1076和1159cm-1有三個吸收峰，為毗喃葡聚糖中O-H變角振動特征吸收峰(吠喃糖環(huán)此區(qū)域只有2個吸收)；多糖分子中a-和6-差向異構(gòu)體中C-H變