導(dǎo)學(xué)案 動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體

2.2.2 動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體課標(biāo)要求1、能力要求列表比較動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的異同2、內(nèi)容要求理解和掌握動(dòng)物細(xì)胞融合的原理、過(guò)程和意義。理解和掌握單克隆抗體制備的過(guò)程的步驟和應(yīng)用知識(shí)網(wǎng)絡(luò)體系制備：免疫后的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合后，再培養(yǎng)制備：免疫后的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合后，再培養(yǎng)特點(diǎn)：特異性強(qiáng)，靈敏度高，優(yōu)越性非常明顯應(yīng)用：理論研究；疾病的診斷和治療誘導(dǎo)劑：PEG、滅活病毒動(dòng)物細(xì)胞融合主要應(yīng)用：?jiǎn)慰寺】贵w重難熱點(diǎn)歸納動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的異同比較項(xiàng)目細(xì)胞融合的原理細(xì)胞融合的方法誘導(dǎo)手段用途植物體細(xì)胞雜交細(xì)胞膜的流動(dòng)性用纖維素酶、果膠酶去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合離心、電刺激、振動(dòng)、聚乙二醇（PEG）誘導(dǎo)克服遠(yuǎn)源雜交不親和，獲得雜種植株動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞膜的流動(dòng)性用胰蛋白酶使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合除應(yīng)用植物細(xì)胞雜交手段外，還有用滅活病毒誘導(dǎo)制備單克隆抗體單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體可以作為診斷試劑，準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)，與抗原的特異性結(jié)合具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速的特點(diǎn)。單克隆抗體還可以用于治療疾病和運(yùn)載藥物：主要用于治療癌癥。單克隆抗體作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”，準(zhǔn)確殺傷癌變細(xì)胞。經(jīng)典例題剖析1.科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是A.經(jīng)過(guò)免疫的B淋巴細(xì)胞B.不經(jīng)過(guò)免疫的T淋巴細(xì)胞C.經(jīng)過(guò)免疫的T淋巴細(xì)胞D.不經(jīng)過(guò)免疫的B淋巴細(xì)胞[解析]此題考查對(duì)細(xì)胞工程的了解。單克隆抗體的產(chǎn)生是利用了細(xì)胞工程中的細(xì)胞融合技術(shù)。小鼠的骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)過(guò)免疫的B淋巴細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞，在體外培養(yǎng)的條件下無(wú)限繁殖，產(chǎn)生特異性的單一抗體。[答案]A2.動(dòng)物細(xì)胞融合的目的中最重要的是A.克服遠(yuǎn)源雜交不親和B.制備單克隆抗體C.培育新物種D.生產(chǎn)雜種細(xì)胞[解析]考查動(dòng)物細(xì)胞融合的目的。動(dòng)物細(xì)胞融合就是指不同動(dòng)物細(xì)胞的原生質(zhì)融合，形成雜種細(xì)胞的過(guò)程。動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)最重要的用途是制備單克隆抗體。[答案]B3.下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，不正確的是A.用于培養(yǎng)的細(xì)胞大都取自胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織B.將所取的組織先用胰蛋白酶等進(jìn)行處理使其分散成單個(gè)細(xì)胞C.在培養(yǎng)瓶中要定期用胰蛋白酶使細(xì)胞從瓶壁上脫離，制成懸浮液D.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能傳50代左右，所培養(yǎng)的細(xì)胞就會(huì)衰老死亡[解析]動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程是：先制備培養(yǎng)液，然后取動(dòng)物細(xì)胞，用于培養(yǎng)的細(xì)胞大都來(lái)自胚胎或出生不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織。將組織取出后，用胰蛋白酶等處理使組織分散成單個(gè)細(xì)胞，將單個(gè)細(xì)胞配制成一定濃度的細(xì)胞懸浮液，再將懸浮液放入培養(yǎng)瓶中在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞的數(shù)目越來(lái)越多，需定期用胰蛋白酶使細(xì)胞從瓶壁上脫離下來(lái)，再配制成懸浮液，分到兩個(gè)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)50代可成為細(xì)胞系，50代以前10代以后稱(chēng)為細(xì)胞株。50代以后生存下來(lái)的細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了變化，也就是說(shuō)細(xì)胞發(fā)生了癌變，癌細(xì)胞會(huì)無(wú)限增殖。[答案]D4.能使動(dòng)物細(xì)胞融合的特有的誘導(dǎo)因子是A.離心B.滅活的病毒C.電刺激D.振動(dòng)[解析]在體外培養(yǎng)條件下，動(dòng)物細(xì)胞會(huì)自發(fā)融合，但是頻率很低。因此，一般都需要添加具有誘導(dǎo)細(xì)胞融合效應(yīng)的生物藥劑或化學(xué)藥劑，或者采用電融合技術(shù)，人為地促進(jìn)細(xì)胞融合。常用的動(dòng)物細(xì)胞融合的誘導(dǎo)因子是聚乙二醇和滅活的病毒。其中聚乙二醇既可用于促進(jìn)植物原生質(zhì)體融合，又可用于促進(jìn)動(dòng)物原生質(zhì)體融合。而滅活的病毒只能用于促進(jìn)動(dòng)物細(xì)胞的融合，如滅活的仙臺(tái)病毒是最常用的誘導(dǎo)因子，其誘導(dǎo)原理是因?yàn)椴《揪哂星秩炯?xì)胞的能力，優(yōu)點(diǎn)是融合率高，對(duì)各種動(dòng)物細(xì)胞都適用。[答案]B基礎(chǔ)試題訓(xùn)練一、選擇題1．單克隆抗體制備過(guò)程中使用的骨髓瘤細(xì)胞是一種缺陷型細(xì)胞，在含有次黃嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶的培養(yǎng)基（HAT）中無(wú)法生長(zhǎng)；而小鼠脾細(xì)胞是正常細(xì)胞，在HAT培養(yǎng)基上可正常存活。用聚乙二醇誘導(dǎo)細(xì)胞融合后，經(jīng)過(guò)數(shù)代培養(yǎng)，最終可在HAT培養(yǎng)基上存活并能產(chǎn)生單克隆抗體的細(xì)胞是 （） A．骨髓瘤細(xì)胞之間形成的融合細(xì)胞B．脾細(xì)胞之間形成的融合細(xì)胞 C．骨髓瘤細(xì)胞與脾細(xì)胞之間形成的融合細(xì)胞D．脾細(xì)胞2．(2022，廣雅中學(xué)考題)研究單克隆抗體治療癌癥的思路是 （）A．利用單克隆抗體特異性地對(duì)抗癌細(xì)胞B．以單克隆抗體作抗癌藥物殺死癌細(xì)胞C．抗癌物質(zhì)在克隆細(xì)胞中大量合成D．單克隆抗體攜帶抗癌藥物特異性地與癌細(xì)胞結(jié)合3．（2022，天津、山西理綜卷）科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是 （）A．經(jīng)過(guò)免疫的B淋巴細(xì)胞 B．不經(jīng)過(guò)免疫的T淋巴細(xì)胞C．經(jīng)過(guò)免疫的T淋巴細(xì)胞 D．不經(jīng)過(guò)免疫的B淋巴細(xì)胞4．（2022年，全國(guó)）用動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)獲取單克隆抗體，下列實(shí)驗(yàn)步驟中錯(cuò)誤的是（）A．將抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞B．用纖維素酶處理B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞C．用聚乙二醇作誘導(dǎo)劑，促使能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合D．篩選雜交資金積累細(xì)胞，并從中選出能產(chǎn)生所需抗體的細(xì)胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體5．只能使動(dòng)物細(xì)胞融合的常用誘導(dǎo)方法是 （）

A．PEGB．滅活的病毒C．電刺激D．離心6．單克隆抗體是由下列哪種細(xì)胞產(chǎn)生的 （）

淋巴細(xì)胞B．T淋巴細(xì)胞C．骨髓瘤細(xì)胞D．雜交瘤細(xì)胞7．用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞 （）

A.容易產(chǎn)生各種變異B．具有更強(qiáng)的全能性

C.取材十分方便D．分裂增殖的能力強(qiáng)8.動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是 （）①誘導(dǎo)融合的方法完全相同②所用的技術(shù)手段不相同③所采用的原理完全相同④都能形成雜種細(xì)胞A.①② B.①③C.②④ D.③④9．動(dòng)物細(xì)胞融合和植物原生質(zhì)融合決定于 （）

A.細(xì)胞膜的流動(dòng)性B．細(xì)胞膜的選擇透過(guò)性

C.細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)性D．細(xì)胞質(zhì)酶的活性10.從母羊甲的體細(xì)胞中取出細(xì)胞核，注入到母羊乙去掉核的卵細(xì)胞中，融合后的細(xì)胞經(jīng)卵裂形成早期胚胎，再植入到另一只母羊丙的子宮內(nèi)，出生小羊的大多數(shù)性狀 （）A.難以預(yù)測(cè)B.像甲C.像乙D.像丙11.“生物導(dǎo)彈”是指 （）

A.單克隆抗體B.雜交瘤細(xì)胞

C.產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞D.在單抗上連接抗癌藥物

12.動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是 （）

A.動(dòng)物細(xì)胞融合B.單克隆抗體C.胚胎移植D.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)13．下列哪—項(xiàng)屬于克隆 （）A．將雞的某個(gè)DNA片段整合到小鼠的DNA分子中B．將抗藥菌的某基因引入草履蟲(chóng)的細(xì)胞內(nèi)C．將鼠骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)過(guò)免疫的脾細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞D．將某腫瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)繁殖成一個(gè)細(xì)胞系14．單克隆抗體制備過(guò)程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞。在這種培養(yǎng)基上不能存活．增殖的細(xì)胞是①B淋巴細(xì)胞②小鼠骨髓瘤細(xì)胞③B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞④小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞⑤雜交瘤細(xì)胞A．①②③④B．①③⑤C．②④D．①③15．（2022年，廣東）關(guān)于單克隆抗體，下列敘述不正確的是 （）A．可以制成診斷盒．用于疾病的診斷B．可以與藥物結(jié)合，用于病變細(xì)胞的定向治療C．可以利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)D．可以在生物體內(nèi)生產(chǎn)，不能體外生產(chǎn)16．（多選）下列關(guān)于單克隆抗體的制備和應(yīng)用的敘述中，正確的是 （）A．B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合，一般不需要滅活的仙臺(tái)病毒或聚乙二醇誘導(dǎo)B．融合后形成的雜交瘤細(xì)胞既能無(wú)限增殖，又能產(chǎn)生單克隆抗體C．體外培養(yǎng)時(shí)，一個(gè)效應(yīng)B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體，但不能無(wú)限增殖D．單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，特異性強(qiáng)，靈敏度高，優(yōu)越性明顯17．（多選）1975年米爾斯坦和柯勒成功地獲得了單克隆抗體。下列細(xì)胞中與單克隆抗體的制備有關(guān)的是 （）

A.效應(yīng)B細(xì)胞B．T淋巴細(xì)胞

C.骨髓瘤細(xì)胞D．雜交瘤細(xì)胞二、非選擇題1.下圖是單克隆抗體制備過(guò)程示意圖，據(jù)圖回答：（1）圖中A過(guò)程是從小鼠的脾臟中取得_____________細(xì)胞，該細(xì)胞能夠產(chǎn)生_____________。從小鼠體內(nèi)提取分離該細(xì)胞之前，應(yīng)給小鼠注射_____________類(lèi)物質(zhì)。（2）B過(guò)程是一個(gè)_____________過(guò)程，該過(guò)程的進(jìn)行需要滅活的_____________或_____________的誘導(dǎo)。（3）單克隆抗體在疾病的診斷、治療和預(yù)防方面，與常規(guī)抗體相比，其特點(diǎn)是_________________。2.(06佛山一模）兩場(chǎng)籌備了10年的“太空結(jié)合”首次在神舟八號(hào)飛船上舉行了,“新人”之一是小白鼠B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞,新人在“產(chǎn)房”——電融合儀內(nèi)孕育新生命。160min后,中國(guó)首批“太空娃娃”終于順利誕生。“太空娃娃”誕生和地面實(shí)驗(yàn)如圖所示。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)小白鼠B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞能融合在一起,體現(xiàn)了細(xì)胞膜具有__________的特點(diǎn)。(2)若用于SARS的預(yù)防上,則宜采用_______細(xì)胞?？茖W(xué)工作者正在研究治療癌癥使用的生物導(dǎo)彈是_______。(3)B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞都是由________________細(xì)胞形成的。這種相同細(xì)胞的后代,在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上產(chǎn)生穩(wěn)定差異的過(guò)程,叫做_______________。(4)鼠的淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后,在培養(yǎng)時(shí)通過(guò)_______________（有絲/減數(shù)）分裂方式大量繁殖。細(xì)胞中染色體數(shù)目與淋巴細(xì)胞相比有何特點(diǎn)？_____________；要觀察融合后的細(xì)胞中的染色體形態(tài)、數(shù)目,可用一定濃度的_______________處理。(5)融合的細(xì)胞具有兩種細(xì)胞的特性,即_________________和____________________。3．1975年科學(xué)家首次利用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)制備出單克隆抗體。請(qǐng)觀察下圖，回答問(wèn)題：（1）單克隆抗體是指，其特點(diǎn)是。（2）1984年以來(lái)，科學(xué)家針對(duì)如右圖所示的單克隆抗體來(lái)自，應(yīng)用于人體，會(huì)作為產(chǎn)生，加速排斥反應(yīng)，以及完整的抗體分子的相對(duì)分子質(zhì)量過(guò)大，難以穿透腫瘤組織，達(dá)不到有效治療的濃度等問(wèn)題，制備出可用于腫瘤治療的相對(duì)分子質(zhì)量小的單克隆抗體。（3）制備單克隆抗體的B淋巴細(xì)胞一般從（器官）培養(yǎng)基特殊成分主要作用次黃嘌呤骨髓瘤細(xì)胞不能利用氨基蝶嘌呤阻斷DNA合成胸腺嘧啶核苷脾細(xì)胞用于合成DNA中采集。從下表看，用于篩選雜交瘤細(xì)胞的是特定的培養(yǎng)基。（4）大量制備單克隆抗體的方法主要有兩種：①體外培養(yǎng)法，可獲得10μg/mL的抗體；②動(dòng)物體內(nèi)誘生法可獲得5~20mg/mL的抗體。你選擇的方法及原因是。創(chuàng)新應(yīng)用訓(xùn)練2．右圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案。據(jù)圖回答：

（1）該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？。原因是。

（2）圖中②為過(guò)程，常用作為誘導(dǎo)劑。該細(xì)胞繼承了，因此不僅能分泌，還有本領(lǐng)。

（3）該方案的目的是。參考答案：一、選擇題CDABBDDCABDDDAD（BCD）（ABCD）二、非選擇題1.（1）效應(yīng)B抗體抗原（2）細(xì)胞融合仙臺(tái)病毒聚乙二醇（3）特異性強(qiáng)、靈敏度高2.（1）一定的流動(dòng)性（2）SARS病毒感染后產(chǎn)生的效應(yīng)B細(xì)胞,單克隆抗體+抗癌藥物（3）造血干細(xì)胞細(xì)胞分化（4）有絲,加倍