溶出研究課件

藥物的溶出研究

楊碩

中國(guó)藥科大學(xué)

溶出度的定義與作用

溶出度系指藥物從片劑、膠囊劑或顆粒劑等固體制劑在規(guī)定條件下溶出的速率和程度。

溶出度檢查是一種模擬口服固體制劑在胃腸道中的崩解和溶出的體外試驗(yàn)方法。

它是評(píng)價(jià)藥物制劑質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo)，可用于評(píng)價(jià)和篩選制劑處方與工藝。溶出度檢查制訂原則—需制訂制劑當(dāng)藥物溶出影響其體內(nèi)吸收時(shí)(如難溶性、多晶型藥物)當(dāng)血藥濃度波動(dòng)易引起臨床不良反應(yīng)(如治療指數(shù)較小或治療窗較窄的藥物)。如鹽酸地爾硫卓片和格列奇特片。主藥劑量較小，藥效強(qiáng)。用于預(yù)防和治療嚴(yán)重疾病。用于急救的固體制劑、避孕藥以及用于重點(diǎn)部位。用制劑學(xué)手段特殊處理（如微粉化、固體分散、CD包合、微囊化、脂質(zhì)體、促吸收等）具有特殊釋藥要求（如速釋、遲釋、緩控釋等）1、方法選擇籃法(B)/漿法(P)，不提首選漿法或藍(lán)法A非崩解型藥物（B）B崩解型藥物

制劑中含有難以溶解、擴(kuò)散的成分（P）

主藥或輔料為一定膠性物質(zhì)（P）C懸浮的制劑（B）,如輔料易堵塞網(wǎng)孔(P,使用沉降籃)小杯法:≥500ml濃度過(guò)低,較靈敏的方法仍難以進(jìn)行定量測(cè)定(不能使用沉降籃，測(cè)定不能再稀釋測(cè)定)。2、溶出介質(zhì)的選擇水:不提以水為主（pH值無(wú)法控制，在試驗(yàn)過(guò)程中易發(fā)生改變，適合非pH依賴釋藥）人工胃液（0.01～0.1mol/L鹽酸溶液,必要時(shí)可加胃蛋白酶）人工腸液（必要時(shí)可加胰蛋白酶）其他緩沖液（pH值一般不超過(guò)7.6）

三羥甲基氨基甲烷(Tris):緩沖范圍pH7.0～9.5，低離子強(qiáng)度(二氟尼柳膠囊)其他:低濃度表面活性劑;醇溶液（一般＜5％）人體生理pH值在胃內(nèi)為1～3.5,小腸內(nèi)約為7,結(jié)腸內(nèi)約為7.5。

常用不同pH介質(zhì)表面活性劑盡量避免使用，種類和濃度需通過(guò)多個(gè)試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證。FDA溶出度指導(dǎo)原則：對(duì)于難溶性藥物不提倡使用有機(jī)溶劑，推薦SDS，但必須證明表面活性劑的選擇和用量的合理性。即應(yīng)考察表面活性劑對(duì)藥物的增溶量，以確定最少且最佳的使用濃度。USP:氯貝丁酯膠囊5%SDS,最高?；尹S霉素片4%SDS（Chp2005中0.54%SDS）。Chp2005中貝諾酯片1%SDS，最高。腫瘤細(xì)胞溶酶體pH為5.5，正常體液為7.4，因此對(duì)于生物堿類抗腫瘤藥物的新型碳納米管載藥系統(tǒng)，若體外評(píng)價(jià)其緩控釋效果，需選擇5.5和7.4的介質(zhì)。(6)根據(jù)實(shí)際需要，可在溶出介質(zhì)中添加表面活性劑，但應(yīng)對(duì)添加種類與濃度進(jìn)行評(píng)價(jià)。濃度研究應(yīng)從0.01％(w/v)起點(diǎn)、按照1、2、5級(jí)別逐步增加，不建議采用3.0%以上的濃度；且應(yīng)注意不同來(lái)源的表面活性劑可能會(huì)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果帶來(lái)顯著性差異的情況，尤其是使用十二烷基硫酸鈉時(shí)，目前我國(guó)中檢所已有相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)的該試劑出售。(7)至于種類，日本傾向采用吐溫-80的原因系為：一者藥物較易與十二烷基硫酸鈉相互作用，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果帶來(lái)影響，而吐溫-80作用較少；二者系因其一般不會(huì)因?yàn)閬?lái)源不同而對(duì)試驗(yàn)結(jié)果帶來(lái)顯著性影響。研究者可根據(jù)試驗(yàn)情況加以綜合考慮。

3.介質(zhì)的體積選擇使藥物符合漏槽條件

即所用介質(zhì)的體積應(yīng)達(dá)到被測(cè)物質(zhì)在37℃時(shí)在此介質(zhì)中達(dá)到飽和溶液濃度體積的3～10倍。此條件下，溶出到介質(zhì)中的藥物很快被介質(zhì)稀釋帶走，藥物的溶出不受溶出介質(zhì)中藥物濃度的影響，亦即濃度差不是藥物溶出的限速步驟。本實(shí)驗(yàn)中碳納米管負(fù)載共1.33mg喜樹(shù)堿，而Hydrochloridetopotecan,solubleinwaterupto1mg/ml，介質(zhì)體積200ml，符合漏槽條件。

制劑中輔料往往可以增大藥物的溶解度，單測(cè)定原料的溶解度無(wú)意義，需結(jié)合輔料測(cè)定。4、轉(zhuǎn)速的選擇低于20r/min不符合流體力學(xué)要求;高于150r/min產(chǎn)生湍流，且轉(zhuǎn)速過(guò)快造成與生物利用度不相關(guān)。常規(guī)：轉(zhuǎn)籃100r/min≈槳法50r/min≈小杯35r/min(一般相當(dāng)于正常胃腸道蠕動(dòng)狀態(tài))?！顭o(wú)特殊要求時(shí)，一般為25r/min的整倍數(shù)漿

法：50～75r/min;轉(zhuǎn)籃法：50～100r/min;小杯法：35～50r/min;5溶出度指標(biāo)制定基本原則：完全釋藥指標(biāo)（如普通制劑1-2h內(nèi)，釋藥>90%標(biāo)示量），以防藥物殘留而降低藥效。控制釋藥指標(biāo)（如緩控釋制劑初始釋藥、中間釋藥等），保證釋藥曲線特性—藥效↑，不良反應(yīng)↓。預(yù)防釋藥指標(biāo)（如腸溶、結(jié)腸釋藥制劑在胃中的滲漏等），保證釋藥部位—藥效↑,不良反應(yīng)↓。

在選擇的方法及溶出介質(zhì)和預(yù)選的轉(zhuǎn)速下測(cè)定不同時(shí)間的溶出量，建立溶出曲線，從圖譜上來(lái)確定取樣液時(shí)間，一般溶出曲線的拐點(diǎn)處后推10-15分鐘；如果時(shí)間較長(zhǎng)或太短，可適當(dāng)提高或降低轉(zhuǎn)速后重新測(cè)定溶出曲線，制定出合理可行的取樣時(shí)間和釋藥量。速釋制劑根據(jù)制劑設(shè)計(jì)思想制定合理取樣點(diǎn)和釋藥量。如分散片可定在15min，>80%。6

溶出度均勻性試驗(yàn)（批內(nèi)）在確定的條件下測(cè)定6片（粒）樣品的溶出曲線，6條溶出曲線進(jìn)行比較，應(yīng)基本均勻一致。影響溶出度的因素藥物性質(zhì)的影響制劑方面的影響工藝方面的影響溶出試驗(yàn)條件的影響測(cè)定方法的影響溶出結(jié)果評(píng)價(jià)

生物藥劑分類系統(tǒng)（BCS）

Ⅰ溶解性和滲透性均好——吸收好可不必考慮測(cè)定溶出度

Ⅱ溶解性好、滲透性差——吸收不佳一般采用促吸收手段，增加藥物的胃腸道透過(guò)性

Ⅲ溶解性差、滲透性好——吸收易波動(dòng)一般采用提高藥物溶解性，控制藥物溶出速率

Ⅳ溶解性和滲透性均差——吸收極差

不易改進(jìn)且一般難成為有效口服藥物體外溶出度的統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)分析模型依賴法：Weibull非模型依賴方法相似因子法(50≤f2≤100)相似等效限法(Chow’s法)溶出曲線與生物等效關(guān)系如果兩個(gè)藥品均滿足溶出度要求且溶出曲線

相似，則基本上表現(xiàn)為生物等效，而少有反例。兩個(gè)生物等效的制劑則可能會(huì)表現(xiàn)出不同的溶出特性。05版中國(guó)藥典2部溶出度收載情況紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定注意事項(xiàng) 紫外可見(jiàn)分光光光度法操作簡(jiǎn)便直接，得到廣泛的應(yīng)用，但輔料干擾是主要的缺點(diǎn)

：特別是在短波長(zhǎng)處，更應(yīng)注意輔料的末端吸收。一般認(rèn)為輔料的干擾應(yīng)在2%以內(nèi)，否則UV法不適用。

測(cè)定前，必須先進(jìn)行紫外掃描，考察輔料是否存在干擾。方法為：分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液(濃度最好與對(duì)照品溶液一致或略低)，進(jìn)行紫外掃描。

觀察供試品溶液圖譜是否存在基線被抬升的現(xiàn)象，以及與對(duì)照品溶液圖譜重合的情況。常用雙波長(zhǎng)吸收差值法與導(dǎo)數(shù)光譜法校正。實(shí)際操作中經(jīng)常會(huì)發(fā)現(xiàn)溶出度明顯高于含量的現(xiàn)象，尤其是膠囊劑.原因可能是目前國(guó)產(chǎn)輔料的質(zhì)量參差不齊。此點(diǎn)應(yīng)予重視。如中國(guó)藥典中氟康唑膠囊溶出度的測(cè)定，分析人員在工作中曾多次遇到溶出度均值大于含量10～20％(均采用UV法測(cè)定)的情況。而日本橙皮書(shū)中該制劑則采用HPLC法測(cè)定。HPLC法易于將輔料與主成分分離，該法測(cè)定最為準(zhǔn)確、可靠，只是工作量略顯增加。綜合考慮濾膜吸附和輔料的干擾，溶出度測(cè)方法采用：直接高速離心后，取上清液用HPLC法測(cè)定。針對(duì)本課題組的研究，不采用紫外可見(jiàn)分光光度法的原因是：碳納米管所負(fù)載的原料藥物純度較低（喜樹(shù)堿89%，羥基喜樹(shù)堿95%），雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、中間體等有關(guān)物質(zhì)會(huì)對(duì)紫外吸收造成較大影響，產(chǎn)生較大誤差。宜將溶出液離心后取上清直接HPLC進(jìn)樣，因?yàn)閷?shí)際操作中發(fā)現(xiàn)濾膜對(duì)藥物存在一定的吸附。釋放度測(cè)定取樣點(diǎn)分析方法測(cè)定條件測(cè)定介質(zhì)測(cè)定儀器AddYourText是否突釋釋藥特性釋藥是否完全數(shù)學(xué)模型擬合：

零級(jí)方程一級(jí)方程

Higuchi方程針對(duì)本課題緩控釋效果的特別要求

釋放度測(cè)定儀的選擇

緩、控釋制劑，由于工藝及包衣材料不同，在測(cè)定儀器和方法選擇上需要考慮其適應(yīng)性。通常選用溶出度測(cè)定儀(漿法、籃法或采用沉降籃法)，因?yàn)閮x器普及，新產(chǎn)品申報(bào)中免去很多困難。取樣點(diǎn)和介質(zhì)脫氣情況也在一定程度上影響釋放度。流室法(Flow-through)釋放儀早已收載入U(xiǎn)SP，其優(yōu)點(diǎn)是對(duì)難溶性藥物可以定期更換釋放介質(zhì)，避免因溶出介質(zhì)飽和而不再溶出，可以累積測(cè)定，但目前儀器尚不普遍，蠕動(dòng)泵的仿制有一定難度。對(duì)于易降解的藥物，其回收試驗(yàn)難于達(dá)到理想效果。轉(zhuǎn)瓶式溶出儀：早在60年代已應(yīng)用于緩、控式制劑，但未被中國(guó)藥典收載，此儀器制作簡(jiǎn)單，使用方便，尤其適用于緩、控釋顆粒和部分密度小的小丸和微丸，但取樣量小，宜采用自動(dòng)釋放儀，釋放度結(jié)果為相對(duì)釋放速率。結(jié)合現(xiàn)有條件及藥劑同學(xué)做脂質(zhì)體藥物溶出曲線的經(jīng)驗(yàn)，選取類似于轉(zhuǎn)籃法的搖床，介質(zhì)模擬體液pH7.4，腫瘤溶酶體5.5，轉(zhuǎn)速75r/min，模擬胃腸蠕動(dòng)，恒溫37℃，取樣時(shí)長(zhǎng)48h。轉(zhuǎn)速和取樣時(shí)間點(diǎn)的設(shè)置對(duì)于大部分制劑而言，不同轉(zhuǎn)速下的釋放行為會(huì)有不同，例如溶蝕型制劑，轉(zhuǎn)速越大，釋放越快，故應(yīng)考察制劑在不同轉(zhuǎn)速下的釋放行為。轉(zhuǎn)速過(guò)快,可能削弱對(duì)不同制劑釋放行為的區(qū)分能力，所以不推薦首選過(guò)高轉(zhuǎn)速。如確有需要，應(yīng)進(jìn)行充分的驗(yàn)證，證明在所用轉(zhuǎn)速下能夠區(qū)分不同產(chǎn)品質(zhì)量。為了解產(chǎn)品的釋放特性，通常應(yīng)選取足夠多的取樣測(cè)試點(diǎn)，以繪制完整的釋放曲線（包括上升曲線及達(dá)到平臺(tái)的階段）。前期取樣點(diǎn)的間隔應(yīng)比較短，后期取樣點(diǎn)間隔可相對(duì)延長(zhǎng)，直至90％以上的藥物釋放或達(dá)到平臺(tái)期。釋放度整體考察時(shí)間要根據(jù)制劑釋放時(shí)間長(zhǎng)短不同而異，一般不宜短于給藥間隔。釋放度限度應(yīng)反映突釋、釋放平穩(wěn)性、末端釋放情況：第一點(diǎn)的取樣時(shí)間為0.5－2小時(shí)，用于考察藥物是否有突釋；第二點(diǎn)的累計(jì)釋放量約為50％左右，用于考察釋藥特性及藥物是否平穩(wěn)釋放；最后取樣點(diǎn)的累計(jì)釋放量至少達(dá)80％，用于考察藥物釋放是否基本完全。根據(jù)具體制劑不同的釋藥時(shí)間和釋藥特性，可考慮適當(dāng)增加釋藥測(cè)定點(diǎn)，以保證對(duì)產(chǎn)品的釋藥特性有比較全面的控制和反映。緩控釋制劑的釋放度體內(nèi)外相關(guān)性藥典相關(guān)指導(dǎo)原則對(duì)緩釋、控釋制劑的生物利用度和生物等效性試驗(yàn)以及體內(nèi)-體外相關(guān)性均做了詳細(xì)闡述。具體要求為：“系指體內(nèi)吸收相的吸收曲線與體外釋放曲線之間相應(yīng)的各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的回歸，得到直線回歸方程的相關(guān)系數(shù)符合要求”

為使體外釋放曲線能預(yù)測(cè)體內(nèi)情況可根據(jù)體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果來(lái)調(diào)整體外試驗(yàn)方法條件和釋放度范圍，而釋放度限度的最終確定則根據(jù)產(chǎn)品穩(wěn)定性數(shù)據(jù)來(lái)進(jìn)行調(diào)整。緩控釋的現(xiàn)狀我國(guó)的緩釋控釋的開(kāi)發(fā)研究起步于80年代中后期，歷經(jīng)十幾年取得很大的成績(jī)。新輔料的研究和應(yīng)用，促進(jìn)了緩控釋制劑的發(fā)展，新技術(shù)和新品種的開(kāi)發(fā)增多，產(chǎn)品的質(zhì)量也更加穩(wěn)定。新設(shè)備的研制和引進(jìn)也提高了國(guó)內(nèi)緩控釋制劑質(zhì)量,如高速壓片機(jī)、高效薄膜包衣機(jī)等。緩控釋制劑的產(chǎn)業(yè)化是瓶頸。藥物溶出度試驗(yàn)儀器的創(chuàng)新目前普遍使用的傳統(tǒng)溶出度測(cè)試方法.存在幾個(gè)問(wèn)題：人工取樣、過(guò)濾和稀釋等操作比較繁雜，大批次試驗(yàn)強(qiáng)

度較大；存在取樣誤差和操作誤差;一致性差異;檢測(cè)間隔較長(zhǎng),不適合于快速制劑檢測(cè);不能全部反映藥物溶出過(guò)程中的真實(shí)過(guò)程,比如突釋。自動(dòng)取樣溶出度試驗(yàn)儀上世紀(jì)末，美、瑞士等國(guó)推出計(jì)算機(jī)控制蠕動(dòng)泵或柱塞泵自動(dòng)取樣，UV或HPLC檢測(cè)的自動(dòng)溶出儀。我國(guó)天大天發(fā)公司也推出ADFC8自動(dòng)溶出取樣系統(tǒng)。系統(tǒng)組成：溶出度儀+自動(dòng)取樣裝置（蠕動(dòng)泵或柱塞泵）+檢測(cè)器(UV或HPLC)工作原理：是由蠕動(dòng)泵或柱塞泵將試液循環(huán)送入檢測(cè)器，實(shí)現(xiàn)在線自動(dòng)分析。雖然可以實(shí)現(xiàn)溶出度自動(dòng)檢測(cè)，但依然存在以下問(wèn)題：1、依然采用取樣分析模式；2、若要獲取溶出曲線在溶出過(guò)程需進(jìn)行多次取樣分析，此時(shí)取樣和補(bǔ)液次數(shù)的增加，會(huì)影響藥物溶出的濃度，尤其對(duì)于小劑量藥物，影響會(huì)更突出；3、取樣間隔一般3-5分鐘，測(cè)定快速釋放藥物

時(shí)突釋點(diǎn)的信息有偏差;4、存在管道吸附、產(chǎn)生泡沫、洗滌困難等題?；谶^(guò)程分析的光纖傳感藥物溶出度測(cè)定儀光纖藥物溶出度原位測(cè)定技術(shù)是采用光纖傳感技術(shù)的一種實(shí)時(shí)、在線、原位全自動(dòng)分析測(cè)試儀器。