島津LC-20AD液相使用說明

高效液相色譜儀操作規(guī)程原理：高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱（固定相）內，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對運動時，經過反復多次的吸附解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。儀器：名稱LC-20AD高效液相色譜儀，分硬件與軟件兩個部分，硬件：DGU-20A、LC-20AD、SIL-20A、SPD-20A、CTO-20AC五個模塊，軟件labsolutions工作站。硬件脫氣機、泵、自動進樣器、托盤、柱溫箱每天來1、開機（按鈕左下角）2、流動相放好。流動相水相：一般純化水、超純水、哇哈哈、條件好屈臣氏，水相每天現(xiàn)配最好。有機相：色譜級試劑上機之前流動相先過濾（0.45um以下濾膜），然后超聲10-20min。托盤上五根管道，ABCD用于放流動相，一般情況四根用兩根A-B、A-C，島津儀器最好A與其他搭配，便于設參數(shù)，具體流動相中藥依據(jù)藥典。另一個無標識為自動進樣器清洗液，一般是50%甲醇水（反相系統(tǒng)），正相系統(tǒng)則與流動相同，正反相轉化□先用流動相過口用異丙醇過濾口用甲醇水。補充：正相色譜法采用極性固定相（如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相）；流動相為相對非極性的疏水性溶劑（烷烴類如正已烷、環(huán)已烷），常加入乙醇、異丙醇、四氫吠喃、三氯甲烷等以調節(jié)組分的保留時間。常用于分離中等極性和極性較強的化合物（如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等）。反相色譜法：一般用非極性固定相（如C18、C8）；流動相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙月青、異丙醇、丙酮、四氫吠喃等與水互溶的有機溶劑以調節(jié)保留時間。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現(xiàn)代液相色譜中應用最為廣泛，據(jù)統(tǒng)計，它占整個HPLC應用的80%左右。3、擰松黑色排氣閥。擰松黑色排氣閥，之后點擊兩次purge，分別為泵單元上按鈕與自動進樣器上purge按鈕，注：泵單元上按鈕點擊時，流動相管道用的哪些，purge那些，可于工作站上面設置。比如用的A與B，先purgeA，之后purgeB。purge之后一定要擰緊黑色排氣閥，非purge下，擰緊，否則不出峰。關于泵單元，一般泵的壓力范圍0.2MPa,壓力故障大部分是由于單向閥造成的，清洗單向閥（90%水+10%的甲醇超聲10-20min，純的異丙醇10-20min，再用90%水+10%的甲醇超聲10-20min，實在不行可用5%的稀硝酸替代異丙醇那一步。）泵最大流速10ml/min,40MPa。單向閥上下左右共計四個，下面進，上面出，之間是泵頭，再上面是壓力傳感器，下面有個在線過濾器，黑色即為排氣閥，這一次purge，流速8ml/min,3minstop。什么時候purge？（1）濾頭離開液面（否則可能有氣泡進來）（2）每天分析之前（溫差變化，可能有氣泡）4、接柱子、上樣品流動相-脫氣機-低壓閥-入口單向閥-泵頭-出口單向閥-壓力傳感器-擰松-purge-擰緊-混合器-自動進樣器首先流動相到混合器，混合，混合器在柱溫箱左邊，柱溫箱可降溫，溫度控制范圍最低溫度為環(huán)境溫度減10口，報警系統(tǒng)其他單元在右下角感應，柱溫箱則是濃度報警，可打開，擦拭一下。混合器混合后，到自動進樣器。自動進樣器有兩個托盤，分別為0號架，1號架，一般用1號架，共105孔，孔放1.5ml瓶子，一般液體放一半即可，瓶蓋可清洗，墊片是一次性，墊子一面深色與里面，特殊材料，耐酸耐腐蝕。架子往里面推有聲音，才是推進去，正常情況下，自動進樣器工作狀態(tài)門要關著（否則儀器顯示doorisopen）。接柱子：每根柱子有方向，箭頭，即流動相流動方向。每天做完沖柱子（10%甲醇水1ml/min0.5h+純甲醇1ml/min0.5h為最低要求），主子是耗材，輕拿輕放，長期不用，沖一遍拿下，兩頭堵住，放于柱箱中。樣品通過柱子到流動池，氘燈提供能量，到紫外檢測器分離，分離后與工作站顯示圖譜，廢液進廢液瓶。氘燈最大使用時間2000h,檢測器最大波長700nm。軟件（labsolutions工作站）Labsolution-用戶名、密碼-進入工作站工作站左邊儀器、處理工具、管理工具、手冊點擊儀器-選擇項目-島津-連接儀器-主界面主界面左邊是工具欄，中間圖譜顯示區(qū)，右邊詳細參數(shù)。軟件一般分三大模塊，分別為參數(shù)設定、圖像采集、后處理。1、參數(shù)設定3EI--：a凝.”N:吟 而山.『：四山『畫3EI--：a凝.”N:吟 而山.『：四山『畫di石液離F日中油"l皿修通|睢串 ?肛笛鏟疑優(yōu)嘲滬簡單設置LC結束時間設定后，點擊應用應用所有采集時間模式，結束時間便與LC結束時間同。選擇低壓梯度，泵濃度，A是默認，只有BCD三個參數(shù)設定。A+B+C+D=100%，波長設定（通道）依據(jù)藥典說明。柱溫箱溫度就是控制溫度，即所需溫度。雙波長模式開啟：儀器-系統(tǒng)配置-檢測器-勾上即可。時間程序有梯度洗脫、等度洗脫兩個。梯度洗脫以人參為例，根據(jù)藥典參數(shù)設置，設梯度最好帶著A，點擊梯度曲線，梯度只要有一個從零開始，會默認A泵，A本身設不了，默認所以最好ABCD四根管道由A搭配其他。實例（人參）時間流動相A（%） 流動相B（%） 設置如下圖0-35198135-55190-35198135-5519-2981-7155-70297170-10029-4071-60aw混row'N口5睜BCunc.植mMC;9等梯度洗脫設置100 控制器 stop時間具體可做特殊分析。自動排氣改參數(shù)改右邊的，左邊的可能要權限，默認ApurgeA，3min之后，改右邊詳細B，然后purgeo

??11?3皿41AHi空］目就送擇總加二??11?3皿41AHi空］目就送擇總加二JWK信總揩卬■031項目篌式聶，1型封隹3道金巨亳狂1哂1Q00C-]山!1出泉B漳慳10E)01ODG泵c3雷CC0.家B市度006B ;泉*壓力延片宣懿,￡3舉W0?YBoa卻90K：t樣品就轉工自|卜】龍祥卷時方法設定好之后，文件-另存為-名字然后點擊下載下次進主頁面-選擇項目（沒有就設置一個）-人參-下載-文件，后期選擇項目里面會有品種名字，針對每個樣品。2、圖像采集主項目（左邊助手欄，助手欄消失的話，點擊視圖助手欄）-批處理分析-出現(xiàn)類似于Excel表（每行代表一針，可根據(jù)需要添加）其中樣品瓶號、架號、方法文件、數(shù)據(jù)文件、進樣體積必設參數(shù)項。樣品瓶號設定：右鍵，向下填充。數(shù)據(jù)文件：命名瓶號東西，例如人參標樣01，可根據(jù)針數(shù)向下填充，進樣體積：藥典方法中有。然后文件-批處理文件另存為-文件名-保存即可-等柱溫箱溫度穩(wěn)定，泵壓力、檢測器基線穩(wěn)定后-批處理分析開始。3、后處理報告修飾:登錄密碼之后界面里處理工具-選擇項目-在解析-數(shù)據(jù)（多的話有篩選）-雙擊目標圖，會出現(xiàn)圖數(shù)據(jù)，針對數(shù)據(jù)一欄，可加想要數(shù)據(jù)參數(shù)-點擊空白處-右擊表樣式-可添加數(shù)據(jù)參數(shù)，右下角有積分參數(shù)可做圖片修飾。（編輯-。。。。-視圖）報告的生成：數(shù)據(jù)報告（默認模板）也可新建報告模板，左上角，表頭+樣品信息+色譜圖+峰表。如果表參數(shù)在導出報告中不出，則文件數(shù)據(jù)報告-峰表向下拉