《microRNA定量檢測》課件

06December2022

MicroRNA定量檢測--技術(shù)講座南寧科迪生物技術(shù)有限公司《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA2主要內(nèi)容microRNA基礎(chǔ)知識介紹12microRNA數(shù)據(jù)庫及其應(yīng)用3microRNA定量檢測4microRNA功能驗(yàn)證《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA31.MicroRNA的特征及功能2.MicroRNA的作用原理及解決方案MicroRNA基礎(chǔ)知識1MicroRNA基礎(chǔ)知識介紹《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA4MicroRNA的發(fā)現(xiàn)Lin-14Lin-41.C.elegansLeeRC，F(xiàn)einbaumRL，AmbrosV．TheC．elegansheterochronicgenelin-4encodessmallRNAswithantisenseplementaritytolin-14

．Cell．1993，75：843-8542.C.elegans：let-7ReinhartBJ，SlackFJ，BassonM，etal．The21-nucleotidelet-7RNAregulatesdevelopmentaltiminginCaenorhabditiselegans．Nature.2000，403：901-906《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA5MicroRNA的特征《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA6MicroRNA的作用原理《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA7microRNA研究解決方案-發(fā)現(xiàn)新MiRNA發(fā)現(xiàn)新的microRNA分離MicroRNATaKaRaD304RNAisoforSmallRNAmicroRNA克隆TaKaRaDRR065SmallRNACloningKit測序Solidsequence《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA8microRNA研究解決方案-MiRNA的檢測MiRNA的定量檢測數(shù)據(jù)庫查詢MiRNA功能驗(yàn)證《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA9microRNA靶標(biāo)數(shù)據(jù)庫數(shù)據(jù)庫名字?jǐn)?shù)據(jù)庫描述數(shù)據(jù)庫類型網(wǎng)頁鏈接targetScantargetScan搜尋動物的microRNA靶基因。database,webserver.starBasestarBase從高通量的CLIP-Seq實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)（CLIP-Seq和HITS-CLIP）和降解組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中（degradomesequencing）搜尋micorRNA的靶標(biāo)。提供了各式各樣的可視化界面去探討microRNA的靶標(biāo)。databasePicTarPicTar聯(lián)合的microRNA靶標(biāo)預(yù)測。database,webserver,predictionspictar.mdc-berlin.de/PITAPITA基于靶位點(diǎn)的可接性（target-siteaccessibility）預(yù)測microRNA的靶標(biāo)。webserver,predictionsgenie.weizmann.ac.il/pubs/mir07/mir07_data.htmlRNA22RNA22基因序列特征預(yù)測microRNA的結(jié)合位點(diǎn)。webserver,predictionscbcsrv.watson.ibm./rna22.htmlmiRecords一個整合的microRNA靶標(biāo)數(shù)據(jù)庫。database/TarBase一個全面收集已被實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的microRNA靶標(biāo)數(shù)據(jù)庫。databasediana.cslab.ece.ntua.gr/tarbase/miRTarBase一個全面收集已被實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的microRNA靶標(biāo)數(shù)據(jù)庫。database.tw/index.html《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA10MicroRNA靶標(biāo)預(yù)測登陸targetscan選擇物種和基因名稱Submit查閱圖譜查閱相關(guān)序列《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA11MicroRNA靶標(biāo)預(yù)測登陸targetscan選擇物種和基因名稱Submit查閱圖譜查閱相關(guān)序列《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA12MicroRNA查詢方法-查找序列已知MiRNA基因名稱查詢序列進(jìn)入MiRbase鏈接輸入MiRNA基因名稱點(diǎn)擊查閱序列《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA13MicroRNA查詢方法-查找序列進(jìn)入MiRbase鏈接輸入MiRNA基因名稱點(diǎn)擊查閱序列《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA14MiRNA研究解決方案-MiRNA的定量檢測microRNA的定量檢測-TaKaRa方案

D9108總RNA提取D350加尾+反轉(zhuǎn)錄一步法DRR081SYBGRealTimePCR《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA15加A尾與反轉(zhuǎn)錄一步完成稀釋至100ul，取2ul做qPCR（可以檢測任何基因）。含Primer《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA16SYBRGreenI法作用機(jī)理示意圖Primer退火FFFFPol.FPrimerPol.延伸FFFFFFPrimer熱變性FFFF《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA17結(jié)果舉例靈敏度驗(yàn)證《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA18結(jié)果舉例microRNA定量檢測多種用途《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA19常見問題-引物設(shè)計(jì)要求《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA20常見問題-模板要求可以是總RNA可以是MicroRNA要求去除gDNA10pg-1ug總RNA／20ul體系加入模板RNA的總體積不要超過總體系的10%。

當(dāng)豐度低時，適當(dāng)增加模板量最高添加量為5ug模板要求

模板用量是多少？《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁!常見問題-引用文獻(xiàn)舉例06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA21《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA22MiRNA研究解決方案-MiRNA功能驗(yàn)證MicroRNA表達(dá)載體：

克隆表達(dá)感興趣的MiRNA，然后進(jìn)行篩選等研究工作。632541632542Clontech《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA23MiRNA研究解決方案-MiRNA功能驗(yàn)證MiRNA的誘導(dǎo)表達(dá)631120631121Clontech《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA24THANKYOU！《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第24頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA25MicroRNA的特征22-23nt（19-24nt）單鏈調(diào)控基因表達(dá)穩(wěn)定存在存在于細(xì)胞質(zhì)中《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第25頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA26MicroRNA的功能?發(fā)育?Timing(Leeetal.1993)?Cellproliferation(Brenneckeetal.2003)?Stemcell&neuron(Krichevskyetal.2003;Hatfieldetal.,2005)?細(xì)胞凋亡(Baehrecke,2003)?疾病?腫瘤(Luetal.2005)?原癌miRNA(Heetal.2005)?腦腫瘤(Ciafreetal.2005;Chanetal.2005)?白血病(Calinetal.2002;2004)?糖尿病(Poyetal.2004)?膽固醇的生物合成(Krutzfeldtetal.2005)?DNA甲基化與染色質(zhì)修飾(Baoetal.2004)《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第26頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA27MicroRNA的作用原理《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第27頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA28microRNA研究解決方案-MiRNA的檢測目前有很多與癌癥臨床診斷相關(guān)的研究在進(jìn)行中。定量PCR的方法由于其靈敏度高，需要樣品量少，而被廣泛應(yīng)用。MicroRNA的檢測方法《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第28頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA29MicroRNA數(shù)據(jù)庫及其應(yīng)用2MicroRNA數(shù)據(jù)庫及其應(yīng)用1.microRNA數(shù)據(jù)庫2.microRNA數(shù)據(jù)查詢與使用3.microRNA靶基因的預(yù)測與驗(yàn)證《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第29頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA30MicroRNA查詢數(shù)據(jù)庫數(shù)據(jù)庫名稱數(shù)據(jù)庫描述數(shù)據(jù)庫類型網(wǎng)頁鏈接deepBasedeepBase從新一代測序技術(shù)（深度測序技術(shù)，deep-sequencing）數(shù)據(jù)中注釋和鑒定microRNA，piRNA，siRNA基因及長非編碼RNA基因及其他們的表達(dá)模式。database/miRBasemiRBase數(shù)據(jù)庫是查詢和發(fā)布發(fā)表的microRNA基因。database./microRNA.orgmicroRNA.org構(gòu)建和查詢microRNA的表達(dá)模式及microRNA的靶標(biāo)。database./microrna/getExprForm.domiRGenmiRGen研究動物的microRNA基因組織和功能。database./miRGenmiRNAMapmiRNAMap:動物microRNA基因的基因組的map和microRNA的靶基因。database.tw/PMRD植物microRNA數(shù)據(jù)庫database/PMRD/.《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第30頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA31MicroRNA靶標(biāo)預(yù)測登陸targetscan選擇物種和基因名稱Submit查閱圖譜查閱相關(guān)序列《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第31頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA32MicroRNA靶標(biāo)預(yù)測登陸targetscan選擇物種和基因名稱Submit查閱圖譜查閱相關(guān)序列《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第32頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA33MicroRNA查詢方法-查找序列進(jìn)入MiRbase鏈接輸入MiRNA基因名稱點(diǎn)擊查閱序列《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第33頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA34主要內(nèi)容3MicroRNA定量檢測反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

定量實(shí)驗(yàn)解決方案

加A尾及反轉(zhuǎn)錄一步完成

引物提供

應(yīng)用SYBRGreen方法進(jìn)行qPCR

特異性引物庫

常見問題分析RealTimePCR反應(yīng)《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第34頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA35加A尾與反轉(zhuǎn)錄一步完成microRNApolyApolymerase加A尾microRNAmicroRNAAAAA……OligodTPrimingAAAA……NVTTTT……XXXXRTasemicroRNAAAAA……TTTT……XXXXFR10pg-5ug總RNA《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第35頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA36RealtimePCR原理-染料法SYBRGreenI：是一種能結(jié)合于所有dsDNA雙螺旋小溝區(qū)域的 具有綠色激發(fā)波長的染料。SYBRGreenI《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第36頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA37RealTimePCR反應(yīng)儀器不同有差別已經(jīng)含有《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第37頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA38結(jié)果舉例microRNA定量檢測多種用途《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第38頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA39TaKaRamicroRNA定量引物庫TakaraHumanmiRNASpecificqPCRPrimerSetsTakaraCodeProductNameSangerRegistryIDSangerAccession#EntrezGeneIDMaturesequenceDHM0001hsa-let-7aqPCRPrimerMixhsa-let-7aMIMAT0000062406883UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUUDHM0002hsa-let-7bqPCRPrimerMixhsa-let-7bMIMAT0000063406884UGAGGUAGUAGGUUGUGUGGUUDHM0003hsa-let-7cqPCRPrimerMixhsa-let-7cMIMAT0000064406885UGAGGUAGUAGGUUGUAUGGUUDHM0004hsa-let-7dqPCRPrimerMixhsa-let-7dMIMAT0000065406886AGAGGUAGUAGGUUGCAUAGUUDHM0005hsa-let-7eqPCRPrimerMixhsa-let-7eMIMAT0000066406887UGAGGUAGGAGGUUGUAUAGUUDHM0006hsa-let-7fqPCRPrimerMixhsa-let-7fMIMAT0000067406888UGAGGUAGUAGAUUGUAUAGUUDHM0007hsa-let-7gqPCRPrimerMixhsa-let-7gMIMAT0000414406890UGAGGUAGUAGUUUGUACAGUUDHM0008hsa-let-7iqPCRPrimerMixhsa-let-7iMIMAT0000415406891UGAGGUAGUAGUUUGUGCUGUUDHM0009hsa-miR-100qPCRPrimerMixhsa-miR-100MIMAT0000098406892AACCCGUAGAUCCGAACUUGUGDHM0010hsa-miR-101qPCRPrimerMixhsa-miR-101MIMAT0000099406893UACAGUACUGUGAUAACUGAADHM0011hsa-miR-103a-3pqPCRPrimerMixhsa-miR-103a-3pMIMAT0000101406896AGCAGCAUUGUACAGGGCUAUGADHM0012hsa-miR-103bqPCRPrimerMixhsa-miR-103bMIMAT0007402100302238UCAUAGCCCUGUACAAUGCUGCUTakara提供600多種MicroRNA的定量引物，并且提供管家基因引物。./?action=Page&Plat=pdetail&newsid=881&subclass=1《microRNA定量檢測》課件共45頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第39頁!06December2022南寧科迪技術(shù)講座之MicroRNA40常見問題-引物設(shè)計(jì)原則