公共衛(wèi)生突發(fā)事件樣品采集與處理課件

公共衛(wèi)生突發(fā)事件樣品

采集與處理

武漢市傳染病防治所檢驗(yàn)科龍一兵傳染病的分類甲類傳染病是指：鼠疫、霍亂。乙類傳染病是指：病毒性肝炎、細(xì)菌性和阿米巴性痢疾、傷寒和副傷寒、艾滋病、淋病、梅毒、脊髓灰質(zhì)炎、麻疹、百日咳、白喉、流行性腦脊髓膜炎、猩紅熱、流行性出血熱、狂犬病、鉤端螺旋體病、布魯氏菌病、炭疽、流行性和地方性斑疹傷寒、流行性乙型腦炎、黑熱病、瘧疾、登革熱。丙類傳染病是指：肺結(jié)核、血吸蟲病、絲蟲病、包蟲病、麻風(fēng)病、流行性感冒、流行性腮腺炎、風(fēng)疹、新生兒破傷風(fēng)、急性出血性結(jié)膜炎、除霍亂、痢疾、傷寒和副傷寒以外的感染性腹瀉病。

一、鼠疫取材（一）疑似病人的取材疑似鼠疫病人應(yīng)在服用抗茵藥物前，依其癥狀和體征，按以下規(guī)定部位采取檢材。各型疑似鼠疫患者，除采取相應(yīng)部位材料外，均應(yīng)采取靜脈血3~5mL，供栓菌和血清學(xué)診斷用。1、疑似腺鼠疫病人取材選取腫大之淋巴結(jié)，用碘酒、酒精局部消毒，以左手姆指、食指固定，用滅菌注射器（12~16號針頭）刺入淋巴結(jié)，抽取組織液適量，保存于滅菌試管內(nèi)或直接接種于血瓊脂平板。淋巴結(jié)腫大不明顯者，可先向淋巴結(jié)注射0.3~0.5mL滅菌生理鹽水，稍停后再行抽取。感染后期可在腫大的淋巴結(jié)周圍穿刺抽取組織液。7、疑似腦膜炎型鼠疫的病人用腰椎穿刺法抽取腦脊液備檢。8、疑似鼠疫尸體的取材

首例疑似鼠疫尸體應(yīng)作解剖取材。取材前應(yīng)作好解剖器材、場所選擇和尸體處理的準(zhǔn)備。以無菌手續(xù)采取肝、脾、肺、心血及有可疑病理改變的淋巴結(jié)等，分別置于滅菌平皿或試管內(nèi)保存。尸體有腐敗跡象時(shí)，必須取長骨材料。如不能解剖，可行局部取材，用腰椎穿刺器按淋巴結(jié)、心、肝、脾及肺的順序穿刺采取組織，分別保存于滅菌試管內(nèi)，尸體腐敗時(shí)可穿刺取骨髓。

凡所取材料均應(yīng)保存于滅菌器皿內(nèi)；組織塊可保存于滅菌生理鹽水中，或用5~10mLBroke氏液保存；亦可應(yīng)用CaryBleir培養(yǎng)基保存運(yùn)送材料。容器用石蠟密封。1、檢材應(yīng)包裝嚴(yán)密，保存場所適宜，保存溫度不高于4℃2、準(zhǔn)確詳細(xì)填寫送檢單。3、指派二名人員（其中一名專業(yè)人員），乘快速交通工具送檢材。直接送達(dá)負(fù)責(zé)該地區(qū)檢驗(yàn)工作的專業(yè)實(shí)驗(yàn)室。4、接交材料時(shí)首先檢查包裝，絕對不能有破損、污染，如有破損應(yīng)立即消毒并報(bào)告有關(guān)單位處理。材料接交按清單點(diǎn)清種類、數(shù)量，并準(zhǔn)確記錄簽字。應(yīng)在調(diào)查范圍內(nèi)選擇有代表性地段捕獲所需動(dòng)物并同時(shí)在全范圍內(nèi)收集自斃動(dòng)物送檢。

取材方法：將獲得的全部應(yīng)檢動(dòng)物分類編號登記，單只裝入小布袋內(nèi)，活動(dòng)物處死后，揀凈體外寄生蟲，進(jìn)行動(dòng)物分類鑒定，然后按下述方法剖檢。

自斃、染病萎糜動(dòng)物：按常規(guī)方法解剖后，分別觀察腺、肝、脾、肺、心等有無病變，并取相應(yīng)材料作細(xì)菌學(xué)檢查，使用的器械每用一次，必須進(jìn)行檢查。

腐敗動(dòng)物：多采取骨髓和腦組織作檢查。（二）動(dòng)物材料的采集昆蟲材料包括：蚤類、蜱類、螨類、虱子等，以蚤類為重點(diǎn)。蚤的采集：

動(dòng)物體蚤的采集：收集的體蚤及其他昆蟲，揀入裝有0.5×10-5龍膽紫、2%鹽水的小瓶內(nèi)，注明寄主、采集地點(diǎn)、采集日期。洞道蚤的采集：用頂端固定白色法蘭絨或毛巾的探蚤棒收集，巢穴蚤的采集：主要靠挖掘穴內(nèi)的窩巢及表層泥土而獲得。必須一巢裝一袋，然后放入大白搪瓷盆內(nèi)檢蚤，收集的蚤分裝并登記。地面游離蚤的采集：常用粘蚤紙收集，將粘蚤紙按要求放在房屋地面的一定位置，昏置晨查，搜集蚤紙上的蚤類，分裝并登記。將以上收集的蚤類進(jìn)行分類鑒定并進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)。昆蟲材料的采集動(dòng)物接種病人、尸體材料，特別是腐敗材料必須在進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)的同時(shí)接種小白鼠（18~20g）或豚鼠（250~300g）臟器塊，置于消毒乳缽內(nèi)，用滅菌剪刀剪碎并研成勻漿，加入適量生理鹽水，制成懸液備用。新鮮材料可用腹腔或皮下接種，豚鼠接種0.5~1.0mL，小白鼠接種0.2~0.4Ml。腐敗材料可采用經(jīng)皮接種，剃去動(dòng)物腹毛，并造成輕微劃痕，將材料以棉拭子涂布于剃毛之皮膚上并擦之，涂擦?xí)r應(yīng)以平皿蓋掩蓋，以防材料四濺。接種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物后，做好標(biāo)記，放入飼養(yǎng)籠內(nèi)，掛牌記載編號、接種日期、途徑等。每日飼養(yǎng)1~2次，直到動(dòng)物死亡或經(jīng)7d后殺死剖檢。如7d動(dòng)物沒有死亡，應(yīng)處死動(dòng)物，取動(dòng)物的脾臟及有可疑病變組織制成勻漿，接種第2組動(dòng)物，動(dòng)物死亡或觀察7d后處死，同時(shí)采集血清，做被動(dòng)血凝試驗(yàn)。無陽性發(fā)現(xiàn)方可做出陰性報(bào)告。三、鉤端螺旋體病鉤端螺旋體病是由鉤端螺旋體屬的不同血清型致病性鉤端螺旋體（Leptospirainterrogans）引起的一種人獸共患病。它廣泛分布于全世界，我國本病危害嚴(yán)重。由于鉤端螺旋體侵犯人的多種臟器，所以臨床表現(xiàn)復(fù)雜。全年均有病人發(fā)生，但常在夏秋季、稻田收割季節(jié)和洪澇害引起發(fā)病和流行。人普通對本病易感。以青壯年發(fā)病較多。

2、培養(yǎng)分離病原體病人血液、尿液培養(yǎng)：采集早期病人血液，無菌操作接種于2~3管Korthof培養(yǎng)基中，每管接種1~3滴。血培養(yǎng)管置28℃培養(yǎng)。每隔5~7d取培養(yǎng)物暗視野顯微鏡下觀察有無鉤端螺旋體生長，若有生長，即為分離陽性。若未見生長，需繼續(xù)培養(yǎng)60d，仍不見鉤端螺旋體方作陰性處理。接取病后兩周以上的病人中段尿30~50mL于無菌離心管中3500~4000r/min離心1h。取沉渣染，可在采集尿標(biāo)本的前一天晚上給病人服碳酸氫鈉（NaHCO3）2~4g，同時(shí)，在培養(yǎng)基中加入100~400μg/mL5-氟脲嘧啶或1/2000的磺胺嘧啶。病人血液、尿液接種金黃地鼠或幼齡豚鼠（體重120~140g之間）。菌株分群，分型鑒定：應(yīng)用分群血清與新分離的鉤端螺旋體作凝集試驗(yàn)，確定菌群。應(yīng)用交叉凝集素吸收試驗(yàn)或分型因子血清來確定菌型。

四、白喉白喉是由白喉?xiàng)U菌引起的急性呼吸道傳染病。其感染特征為咽、喉、鼻部等處粘膜充血，腫脹并有灰白色假膜形成，以及細(xì)菌外毒素引起的全身中毒癥狀，嚴(yán)重者常合并心肌炎和末梢神經(jīng)麻痹。由于白喉菌苗（百白破三聯(lián)制劑）的廣泛應(yīng)用，典型白喉逐漸減少，不典型白喉或輕型白喉日漸增多，尤其成人白喉的發(fā)病應(yīng)引起關(guān)注。

實(shí)驗(yàn)室診斷白喉棒狀桿菌分離培養(yǎng)陽性并證明能產(chǎn)生外毒素，咽拭子直接涂片鏡栓可見革蘭氏陽性棒狀桿菌，并有異染顆粒。病人雙份血清特異性抗體四倍以上增長。以無菌棉拭子或無菌拭子吸附新鮮配制的亞碲酸鉀、甘油鹽水保存液從疑似患者咽喉假膜邊緣蘸取標(biāo)本或同時(shí)采取鼻咽拭子，放入滅菌試管內(nèi)同時(shí)送檢。帶菌者或疑似病人由于未見到明顯的假膜，故應(yīng)采集鼻咽部或扁桃體粘膜上的分泌物送檢。

五、傷寒、副傷寒傷寒、副傷寒是一種急性腸道傳染病，是《中華人民共和國傳染病防治法》中規(guī)定報(bào)告的乙類傳染病。1、標(biāo)本收集按不同病期采集不同種類的標(biāo)本。血標(biāo)本宜在病程的第1~2周采集，但只要發(fā)熱未退，兩周以后仍可獲得陽性結(jié)果，采血量不少于5~10mL，已用氯霉素者取血凝塊作培養(yǎng)。骨髓培養(yǎng)宜在病程的第1~2周送檢糞便標(biāo)本在病程的第3~4周送檢。尿標(biāo)本宜在病程的第3~4周送檢，陽性率較低，采集時(shí)應(yīng)避免糞便污染。玫瑰疹的刮取物或活檢切片。

六、細(xì)菌性痢疾細(xì)菌性痢疾（以下簡稱菌?。┦怯芍举R菌（又稱痢疾桿菌）引起的急性腸道傳染病，是常見多發(fā)病，其發(fā)病率在我國法定報(bào)告的甲、乙類傳染病中居首位，而且往往引起暴發(fā)或流行。

急性非典型菌痢癥狀輕，可僅有腹瀉、稀便急性普通型（典型）菌痢急性起病、腹瀉（除外其他原因的腹瀉）、腹痛、里急后重、可伴發(fā)熱、膿血便或粘液便、左下腹部壓痛。標(biāo)本的收集患者糞便標(biāo)本的收集可采用便盒留便、肛拭或采便管采便便盒留便：留取糞便A時(shí)應(yīng)采集新鮮糞便的膿血部分、粘液部分、水樣便或稀便。便量1~5g。集體腹瀉或食源性暴發(fā)患者糞便采集的數(shù)額，應(yīng)根據(jù)患者人數(shù)的多少，決定采取標(biāo)本的數(shù)量。當(dāng)懷疑患者為菌血癥時(shí)，應(yīng)以無菌操作，從靜脈血管采取10~15mL血液，放入加有EDTA抗凝劑瓶中送檢。所采取的糞便標(biāo)本應(yīng)盡快送檢，不得越過2h送到化驗(yàn)室，否則標(biāo)本應(yīng)放入Cary-Blair運(yùn)送培養(yǎng)基中，運(yùn)送時(shí)間超過2h者，應(yīng)冰浴條件下送檢。

七、新生兒破傷風(fēng)新生兒破傷風(fēng)是破傷風(fēng)桿菌由臍部，偶可由新生兒外傷處侵入而引起的急性感染性疾病。新生兒破傷風(fēng)是發(fā)現(xiàn)中國家的嚴(yán)重衛(wèi)生問題。

標(biāo)本的采集CSF：無菌操作，吸出CSF2mL，立即放到無菌試管內(nèi)離心（2000~3000r/min，30min），用滅菌過的毛細(xì)管吸取沉淀物直接接種到10%羊血巧克力色瓊脂上（CSF上清液部分供檢測Nm特異抗原，亦可將其置于-20℃待測），5%二氧化碳環(huán)境37℃培養(yǎng)24~72h，每日檢查細(xì)菌生長的情況，及時(shí)分離純培養(yǎng)物供鑒定。血液：采取病人急性期靜脈血液6mL，無菌操作往盛有30mL增菌用的葡萄糖肉湯三角瓶內(nèi)注入4mL血液（余下的2mL血液同上離心后吸出血清，供檢測Nm特異抗原和抗體，亦可將其置于-20℃待測），同上述條件培養(yǎng)24-72h，每日進(jìn)行分離培養(yǎng)。

八、感染性腹瀉感染性腹瀉廣義系指各種病原體腸道感染引起之腹瀉。本標(biāo)準(zhǔn)則僅指除霍亂、痢疾、傷寒、副傷寒以外的感染性腹瀉。為《中華人民共和國傳染病防治法》中規(guī)定的丙類傳染病。主要包括細(xì)菌、病毒、原蟲等病原體引起之腸道感染，較常見的如沙門菌腸類、腸致瀉性大腸肝菌腸炎、致瀉性弧菌腸炎、空腸彎曲菌腸炎、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌腸炎、輪狀病毒腸炎、藍(lán)氏賈第鞭毛蟲腸炎等。

腸產(chǎn)毒性大腸桿菌（ETEC）

標(biāo)本：霍亂樣水樣便腸侵襲性大腸桿菌（EIEC）

標(biāo)本：細(xì)菌性痢疾樣便

腸出血性大腸桿菌（EHEC）

標(biāo)本：早期為水樣便，后為血便。

采取標(biāo)本時(shí)必須遵循的兩條原則盡可能在抗生素治療開始前采取標(biāo)本除必要時(shí)并在具備操作病毒細(xì)菌條件的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，不得用解剖的方式獲取標(biāo)本。所需的血液與組織標(biāo)本，均應(yīng)以穿刺方式取得。

血液標(biāo)本所有的疑似人類病例和病畜，都應(yīng)采取血液樣本，標(biāo)本量至少應(yīng)滿足下列檢查的需要。涂片進(jìn)行顯微鏡檢查接種培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)分離血清檢查抗體常規(guī)血液檢查。

糞便與嘔吐物標(biāo)本表現(xiàn)消化道癥狀的可疑病人收集糞便或嘔吐物標(biāo)本，特別注意選取其中混有血液的部分，置無菌容器中。痰與咳碟標(biāo)本表現(xiàn)為呼吸道癥狀的可疑病人應(yīng)收集其痰液標(biāo)本，無痰液者，應(yīng)取供細(xì)菌分離培養(yǎng)用的培養(yǎng)基，打開平皿蓋置病人口鼻10cm處；令病人對平皿咳嗽，然后迅速蓋上平皿。腦脊液標(biāo)本表現(xiàn)腦膜刺激癥狀的病人，腰椎穿刺獲取腦脊液，標(biāo)本量參照A1.2的要求。

尸體標(biāo)本食草動(dòng)物死于炭疽時(shí)，通常會(huì)從口、鼻、肛門等腔道開口流出血液，這種血液應(yīng)是首先采取的標(biāo)本。如果血液已滲入土壤，則應(yīng)收集混有血液的土壤作為標(biāo)本，沒有血液流出，或已不可不可能獲取血液標(biāo)本時(shí)，可通過穿刺心臟獲得血液或穿刺肝臟等實(shí)質(zhì)性臟器獲得組織標(biāo)本。肉類標(biāo)本如果懷疑罹患炭疽的家畜已被宰殺，或?qū)ι唐啡忸愡M(jìn)行常規(guī)檢查時(shí)，可剪取小塊肉類標(biāo)本。如有可能，特別應(yīng)剪取肝臟、脾臟等富含