實驗一-微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌課件

微生物學實驗課堂紀律嚴格遵守實驗室規(guī)章制度嚴肅課堂紀律不允許無故曠課、早退遲到工作服進入微生物實驗室的注意事項1.進入實驗室必須穿白大褂2.實驗室內不準吃東西3.在實驗室內不要趴在桌子上4.實驗完成后值日生留下做好清潔工作（值日工作實行組長負責制，納入實驗成績）5.離開實驗室前洗手6.實驗現(xiàn)象要隔天觀察的實驗，必須要按時到實驗室記錄實驗現(xiàn)象實驗報告要求一個實驗，一份實驗報告，有連續(xù)性的實驗等到做完后再寫實驗報告。實驗報告內容：1.實驗項目名稱2.實驗目的3.實驗原理4.實驗步驟5.實驗結果與分析（即使實驗失敗也要寫好分析）6.思考題實驗一微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌一、實驗目的了解培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制過程。掌握加壓蒸汽滅菌法的原理及其使用方法。（一）培養(yǎng)基的配制二.實驗原理1.培養(yǎng)基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料。不同微生物對營養(yǎng)物質的要求各不相同，加之實驗和研究的目的不同，所以培養(yǎng)基的種類很多，使用的原料也各有差異，但從營養(yǎng)角度分析，培養(yǎng)基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、無機鹽、生長素以及水分等。另外，培養(yǎng)基還應具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓。培養(yǎng)基是指由人工配制的、適合微生物生長繁殖或產生代謝產物用的混合營養(yǎng)料。培養(yǎng)基簡介碳源、氮源、無機鹽、能源、生長因子、水營養(yǎng)物質的濃度要適宜營養(yǎng)物質之間的配比要適宜培養(yǎng)基的pH值、滲透壓、水活度和氧化還原電勢等物理化學條件要適宜。培養(yǎng)基的種類按照培養(yǎng)基的物理狀態(tài)可分為1.液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的液體狀態(tài)培養(yǎng)基。2.固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入2%左右的凝固劑的固體狀態(tài)的培養(yǎng)基。3.半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入0.2—0.5%凝固劑而成的半固體狀培養(yǎng)基。實驗室的常用培養(yǎng)基：細菌：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；放線菌：高氏1號合成培養(yǎng)基培養(yǎng)；酵母菌：麥芽汁培養(yǎng)基；霉菌：查氏合成培養(yǎng)基；稱量--配置--調節(jié)pH值--過濾--分裝--滅菌

1.稱量

按照培養(yǎng)基配方，準確稱量各成份放于燒杯中。對于不是粉狀（如肉膏），應用燒杯稱量。

培養(yǎng)基配制的基本步驟2.配調

向燒杯中加入適量的水，攪拌，使其溶解（可加熱助溶）。如是配制固體培養(yǎng)基，在瓊脂的熔化時，需不斷攪拌，并控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦。待完全熔化后，補足所失水分。如果配方中含有淀粉，先將淀粉用少量冷水調成糊狀并在火上加熱攪拌，然后加足水分及其他藥品，待完全熔化后補足所失水分。3.調節(jié)pH值

培養(yǎng)基溶解均勻并冷卻至室溫時用pH試紙測pH，然后根據(jù)要求加酸或堿（一般用1molHcl和1molNaOH），要緩慢少量且多加攪拌。培養(yǎng)基配方為自然pH時，不用調節(jié)。

4.過濾

用濾紙或多層紗布過濾，一般無特殊要求可省去。

5.分裝

將制好的培養(yǎng)基分裝入試管內或三角瓶內，管（瓶）口塞上棉塞。固體培養(yǎng)基要趁熱裝。分裝時要避免培養(yǎng)基粘染管（瓶）口，引起污染。分裝量可分為下面幾方面：

（1）斜面：裝量為管長的1/4-1/5。

（2）液體培養(yǎng)基、高層培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基：裝載量不超過管長的1/3。

（3）三角瓶：裝量不超過容積1/2。牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方：牛肉膏0.3g蛋白胨1g氯化鈉0.5g瓊脂1.5g水100mLpH7.2~7.4滅菌121℃，20min牛肉膏蛋白胨半固體培養(yǎng)基配方：

瓊脂0.3g牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基配方：

瓊脂0g牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制1、固體培養(yǎng)基（平板制作）2、固體培養(yǎng)基（斜面制作）2、半固體培養(yǎng)基3、液體培養(yǎng)基三.操作步驟及本次實驗具體安排（二）斜面培養(yǎng)基制作

（由第5,6組同學各做25支斜面培養(yǎng)基）1.稱取一定量的營養(yǎng)瓊脂到100ml的三角瓶中.2.加入100mL水.3.放入水浴鍋內溶解.4.在空試管內倒入2～3mL已經溶解好的培養(yǎng)基，【注意盡量不要讓培養(yǎng)基沾到試管口】塞好硅膠塞.5.放入燒杯中,高壓蒸汽滅菌.6.擺斜面,凝固后放冰箱備用.用于活化菌種，或培養(yǎng)菌種的斜面用于保存菌種的斜面（三）半固體培養(yǎng)基制作

（由第7,8組同學各做25支半固體培養(yǎng)基）1.按牛肉膏蛋白胨半固體培養(yǎng)基配方稱取相應成分到250ml的三角瓶中.2.加入100mL水.3.放入水浴鍋內溶解.4.在空試管內倒入2～3mL已經溶解好的培養(yǎng)基，【注意盡量不要讓培養(yǎng)基沾到試管口】塞好硅膠塞.5.放入燒杯中,高壓蒸汽滅菌.6.凝固后放冰箱備用.牛肉膏蛋白胨

半固體培養(yǎng)基按下列配方及方法配制牛肉膏:0.3g蛋白胨:1gNaCl:0.5g瓊脂:0.3g水:100mlpH:

7.0-7.2放入水浴鍋內溶解后,分裝到試管中,滅菌備用.（四）液體培養(yǎng)基制作

（由第9,10組同學各做25支液體培養(yǎng)基）1.按牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基配方稱取相應成分到250ml的三角瓶中.2.加入100mL水.3.充分溶解.4.在空試管內倒入2～3mL已經溶解好的培養(yǎng)基，【注意盡量不要讓培養(yǎng)基沾到試管口】塞好硅膠塞.5.放入燒杯中,高壓蒸汽滅菌.6.冷卻后放冰箱備用.各組任務：第1-4組配制固體培養(yǎng)基，制平板；第5.6組配制固體培養(yǎng)基，制斜面；第7,8組配制半固體培養(yǎng)基；第9,10組配制液體培養(yǎng)基。注：試管加棉塞(最好)培養(yǎng)基分裝完畢以后，在管口上加一個棉塞。棉塞能防止雜菌污染，保證通氣良好。加棉塞時，應使棉塞長度的2/3在試管口內，如下圖所示。任何一種培養(yǎng)基一經制成就應及時徹底滅菌，以備純培養(yǎng)用。一般培養(yǎng)基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌。常用的滅菌的方法有：干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌、常壓蒸汽滅菌、常壓間歇式滅菌超高溫滅菌、過濾除菌、輻射滅菌、化學藥品滅菌等方法。本實驗培養(yǎng)基的滅菌常使用的是高壓蒸汽滅菌，它是利用高溫濕熱空氣使菌體蛋白質凝固變性而達到滅菌的。（二）培養(yǎng)基的滅菌高壓蒸氣滅菌一般培養(yǎng)基:1.05Kg/cm2,121.3℃,15-30min含糖培養(yǎng)基:0.56Kg/cm2,112.6℃,15-30min

培養(yǎng)基的滅菌器皿的滅菌：

干熱空氣：160℃，2小時無菌室的消毒：

紫外光化學藥物熏蒸（苯酚；高錳酸鉀+甲醛）滅菌鍋濕熱滅菌使用的設備操作過程

加水裝鍋蓋蓋加熱當壓力升為0.5kg/cm2時排放冷空氣正式升壓保壓（1.1kg/c