江蘇省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)上崗培訓(xùn)課件

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參加實(shí)驗(yàn)動(dòng)物從業(yè)人員上崗培訓(xùn)的

各位老師！考試形式：上機(jī)考試,時(shí)間為60分鐘（到時(shí)間網(wǎng)絡(luò)自動(dòng)關(guān)機(jī)），共100道題，分為是非(40×0.5)題、單選題(40×1)和多選題(20×2)，85分為合格。注意：請(qǐng)務(wù)必帶好個(gè)人身份證方可入場(chǎng)考試！模擬考試網(wǎng)址:一.基本概念實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：指經(jīng)人工飼養(yǎng)、繁育，對(duì)其攜帶的微生物及寄生蟲實(shí)行控制、遺傳背景明確或來源清楚，應(yīng)用于科學(xué)研究、教學(xué)、生產(chǎn)和鑒定以及其它科學(xué)實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物。亦稱狹義的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物：泛指所有應(yīng)用于科學(xué)實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物,包括實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、野生動(dòng)物、經(jīng)濟(jì)動(dòng)物和觀賞動(dòng)物。也稱廣義的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物.我國(guó)已建立嚙齒類動(dòng)物的種子中心（上海和北京）國(guó)家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量檢測(cè)中心掛靠在中國(guó)醫(yī)科院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物所GLP（良好實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范）是用于新藥臨床前安全性評(píng)價(jià)的法規(guī)《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》規(guī)定，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)不能在同一區(qū)域。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證的有效期為5年，生產(chǎn)許可證的申請(qǐng)必須種子來源可靠，有健全的質(zhì)量管理制度，環(huán)境符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。許可證的發(fā)放向科技部門申請(qǐng)，由科技部門組織專家評(píng)審，合格后發(fā)放許可證。包括生產(chǎn)和使用許可證兩種。國(guó)家種子中心、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量檢測(cè)機(jī)構(gòu)的主要任務(wù)（p82）近交系：連續(xù)20代或20代以上近親交配所培育而成的品系。如BALB/C,C57BL/6J,DBA,C3H,A/He等（常以F加數(shù)字表示近交代數(shù)）。封閉群：以非近親繁殖方式，不從外部引入新個(gè)體的前提下至少連續(xù)繁殖4代以上。引種數(shù)目不少于25對(duì)。如KM，SD,Wistar等雜交群：不同品系或種群間雜交產(chǎn)生的后代近交系小鼠常選用10個(gè)染色體上的13個(gè)生化位點(diǎn)作為純度檢測(cè)的方法，而大鼠一般選用9個(gè)位點(diǎn)；皮膚移植一般用同系異體移植同源突變系：兩近交系除指明位點(diǎn)外其他基因完全相同重組近交系：兩近交系雜交后再連續(xù)20代近交而成（以Χ表示）同源導(dǎo)入近交系：通過雜交-互交或回交等方式將一基因?qū)氲浇幌抵羞z傳污染：管理疏忽，本品系與其他品系動(dòng)物交配遺傳漂變：飼養(yǎng)過程中可能發(fā)生的隨機(jī)改變，多由于殘留雜合基因的分離突變：基因組中某個(gè)核苷酸堿基的置換、缺失或插入引起等位基因的改變近交系數(shù)：表示近交程度普通動(dòng)物：不攜帶規(guī)定的人畜共患病原和烈性傳染病病原清潔動(dòng)物：除普通動(dòng)物應(yīng)排除的病原外，不攜帶對(duì)動(dòng)物危害大和對(duì)科研干擾大的病原3R指的是：減少（Reduction)、替代(Replacement)、優(yōu)化(Refinement).動(dòng)物福利除了生理福利外，還包括心理福利、衛(wèi)生福利、行為福利、環(huán)境福利普通級(jí)、清潔級(jí)和SPF級(jí)動(dòng)物微生物和寄生蟲的檢測(cè)頻率均為每三個(gè)月檢測(cè)一次。無菌動(dòng)物為每年至少檢測(cè)一次.取樣數(shù)量：群體〈100，取樣〉5只；群體大小為100-500,取樣〉10;群體〉500,取樣〉20只;無菌動(dòng)物每個(gè)隔離器取樣2只2000年6月，人類基因組計(jì)劃完成。小鼠是繼人之后第二個(gè)完成基因測(cè)序的哺乳動(dòng)物。小鼠與人類功能基因的同源性高達(dá)90%以上，是最為理想的模式動(dòng)物，并作為基因改造的材料生物安全柜為活病原微生物的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施;動(dòng)\植物確實(shí)存在或潛在危害的,該實(shí)驗(yàn)需在感染性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施內(nèi)進(jìn)行普通環(huán)境飼養(yǎng)普通級(jí)動(dòng)物;屏障環(huán)境飼養(yǎng)清潔級(jí)或SPF級(jí)動(dòng)物;隔離環(huán)境飼養(yǎng)無菌動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境指標(biāo)中,只有氨氣濃度是動(dòng)態(tài)檢測(cè)指標(biāo);屏障環(huán)境的空氣潔凈度指標(biāo)為10000級(jí)國(guó)標(biāo)中，生產(chǎn)型和使用型屏障系統(tǒng)大小鼠溫度為20-26℃;相對(duì)濕度為40%-70%;換氣次數(shù)為10-20次/h;氣流速度為0.1-0.2m/s;壓強(qiáng)梯度為20-50Pa國(guó)標(biāo)中，使用型屏障系統(tǒng)工作照度為150-300lx;動(dòng)物照度為15-20lx實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施的空調(diào)系統(tǒng)按空氣處理設(shè)備的設(shè)置不同一般分為集中式、局部式和半集中式。集中式即集中冷源，并將全部空氣處理設(shè)備集中在同一機(jī)房?jī)?nèi)，處理過空氣經(jīng)風(fēng)道、風(fēng)口送至屏障設(shè)施內(nèi)?？諝鈦y流利用稀釋作用是室內(nèi)產(chǎn)生的灰塵均勻擴(kuò)散而被“沖淡”，一般采用上送下回的形式，使氣流自上而下與塵埃重力沉降方向一致?？諝鈦y流是流向單一，并具有一定的、均勻的斷面速度的氣流組織形式。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料與營(yíng)養(yǎng)豚鼠和獼猴體內(nèi)不能合成維生素C,須從飼料中獲得大小鼠、兔目前常用的是顆粒飼料；貯存的顆粒飼料的含水率應(yīng)低于11%飼料滅菌的最佳方式是輻照必須氨基酸只能從飼料中提供，而非必須氨基酸體內(nèi)能合成，無須從飼料中供給。碳水化合物是體內(nèi)能量的主要來源，其中粗纖維可促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)；無氮浸出物可提供熱能并可轉(zhuǎn)化成脂肪飼料中脂肪有真脂肪（由脂肪酸和甘油組成）和類脂肪（由脂肪酸和甘油及其他含氮物質(zhì)組成）飼料抽樣數(shù)量為0.5Kg/次/批維生素A維持上皮的形態(tài)與功能；維生素D參與鈣磷調(diào)節(jié)；維生素E與生殖泌乳有關(guān)大小鼠飼料水分≤10%；豚鼠維持料蛋白≥17%，繁殖料蛋白≥20%；兔維持飼料粗蛋白≥

14%，繁殖料粗蛋白≥

17%；犬維持飼料粗蛋白≥

20%，繁殖料粗蛋白≥

24%實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生物學(xué)特性一.小鼠屬于嚙齒目,初生為紅色,12-13天睜眼,妊娠期19-21天，哺乳期為20-22天,雌性有5對(duì)乳頭,成年體重為18-40克,一般生育期為1年，壽命為1-2年.體溫為36.5℃,KM鼠每胎產(chǎn)8-15只,維生素A過量可致繁殖紊亂二.大鼠嚙齒目,新生為紅色,約5-6克;8-10天長(zhǎng)牙;14-17天睜眼;妊娠期哺乳期均為21天;為常年多發(fā)情動(dòng)物;成年體重為250-450克;壽命為2-3年;封閉群平均產(chǎn)仔數(shù)為8只;尾是散熱器官;無膽囊;體溫37.5℃。近交系大鼠：ACI,F344,SHR,BN,AGUS;封閉群：Long-Evans,Brown-Norway(飼養(yǎng)類），SD,Wistar三.豚鼠:嚙齒目,草食動(dòng)物,妊娠期為68天,哺乳期21天,剛出生就有視力,初生體重75-100克,有1對(duì)乳頭,每胎產(chǎn)3-4只,一般壽命為6年;體內(nèi)缺少合成維生素C的酶(猴),免疫學(xué)研究首選動(dòng)物,是最早獲得無菌動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。無尾巴四.地鼠嚙齒目,有冬眠和假妊娠現(xiàn)象,妊娠期16天，是哺乳動(dòng)物中妊娠期最短的動(dòng)物;哺乳期21天;有頰囊,可貯存食物;為全年多發(fā)情動(dòng)物;壽命2-2.5年。中國(guó)地鼠無膽囊,有5對(duì)乳腺;金黃地鼠有乳腺6-7對(duì)。七.貓除夏季外均可發(fā)情，屬季節(jié)性多發(fā)情動(dòng)物;善攀登和跳躍;妊娠期63天，哺乳期60天;有4對(duì)乳頭;可根據(jù)光線的強(qiáng)弱靈敏的調(diào)節(jié)瞳孔;喜孤獨(dú)自由的生活;飼料中重點(diǎn)補(bǔ)充維生素.八.猴有頰囊；有月經(jīng)周期，與人的生殖生理非常接近；妊娠期165天左右，哺乳期6個(gè)月以上；對(duì)嘔吐反應(yīng)靈敏；主要組織相容性抗原（RhLA)與人的HLA相似；能用手操縱工具;是脊髓灰質(zhì)炎疫苗研究鑒定的動(dòng)物八.小型豬偶蹄目;常年多發(fā)情;妊娠期114,哺乳期1個(gè)月;是皮膚燒傷實(shí)驗(yàn)研究的首選動(dòng)物;平均體溫為38℃九.沙鼠嚙齒目,大小介于大、小鼠之間，成年重78克；常年多發(fā)情；性成熟10-12月；平均壽命2-4年;有自發(fā)性癲癇??；可建立腦缺血模型;應(yīng)激時(shí)腎上腺釋放糖皮質(zhì)激素和黃體酮實(shí)驗(yàn)方法動(dòng)物標(biāo)記中染色法最簡(jiǎn)單、適用于小動(dòng)物短期實(shí)驗(yàn)；常用染色液：苦味酸、硝酸銀、品紅；染色編號(hào)方法：先左后右，先上后下，單一顏色可標(biāo)記1-10號(hào)；烙印常用溶于酒精的黑墨染色；還有耳緣剪孔法局部麻醉常用浸潤(rùn)麻醉大小鼠豚鼠肌肉注射部位：大腿外側(cè)面腹腔注射常選擇在腹白線兩側(cè)大小鼠尿液采集適宜用代謝籠，采集未污染尿液則應(yīng)采用導(dǎo)尿法；大小鼠大量采血常采用股動(dòng)脈采血犬、貓的皮下注射一般在大腿外側(cè)，靜脈注射不超過10ml小鼠（20g）一般灌胃不超過0.8ml、腹腔注射不超過1.0ml、靜脈注射不超過0.8ml大鼠一般灌胃不超過5ml、腹腔注射不超過4ml、靜脈注射不超過4ml靜脈注射

兔:耳緣靜脈，最大容量10ml;猴:皮下淺層靜脈(小隱、股、頭靜脈），最大容量20ml；犬最大容量100ml。肌肉注射最大給藥量猴：3ml；犬：4ml。兔少量多次采血一般為耳緣靜脈采血?jiǎng)游锬Ｐ桶串a(chǎn)生原因分為：自發(fā)性模型：應(yīng)用價(jià)值高，與人類相應(yīng)疾病相似程度高，但來源困難，種類有限誘發(fā)性模型：來源多，條件易控制、但相似程度稍差；誘發(fā)性腫瘤模型分為原位和異位誘發(fā)抗疾病模型：特定疾病不在某動(dòng)物身上發(fā)生生物醫(yī)學(xué)模型：某些動(dòng)物特殊的生理結(jié)構(gòu)如兔的胸腔結(jié)構(gòu)按中醫(yī)分類：陰虛、陽(yáng)虛、氣虛、血虛、腎虛、厥脫癥裸鼠為先天性無胸腺，常用于人體腫瘤移植研究CBA/CIH為先天性B淋巴細(xì)胞功能缺陷Beige小鼠為先天性NK細(xì)胞功能缺陷SHR為自發(fā)性高血壓大鼠，適合篩選抗高血壓藥物

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇與應(yīng)用一般幼齡動(dòng)物對(duì)實(shí)驗(yàn)因素較為敏感，慢性實(shí)驗(yàn)因周期長(zhǎng)而通常選用幼齡動(dòng)物。一般實(shí)驗(yàn)都選用成年動(dòng)物清潔動(dòng)物是國(guó)內(nèi)科研標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物，而SPF動(dòng)物是國(guó)際公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物一般來說，淡水中生活的動(dòng)物尿液是低滲的，海水中生活的動(dòng)物尿液是等滲的，陸地上生活的動(dòng)物尿液是高滲的，特別是沙漠中生活的動(dòng)物，這種傾向性更明顯犬：是紅綠色盲，不能以紅綠作為條件刺激物來進(jìn)行條件反射實(shí)驗(yàn)；有嘔吐反射；長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)中大動(dòng)物實(shí)驗(yàn)常選；易于調(diào)教，短期訓(xùn)練即可較好配合實(shí)驗(yàn)，適合慢性實(shí)驗(yàn)；適宜實(shí)驗(yàn)外科學(xué)研究；可用壓迫膀胱法集尿豚鼠：不能合成維生素C；對(duì)人型結(jié)核桿菌高度易感，是結(jié)核病研究首選動(dòng)物；也是鎮(zhèn)咳藥篩選試驗(yàn)的首選動(dòng)物；氣管平滑肌對(duì)致痙劑和藥物最敏感，常作為支氣管擴(kuò)張藥物研究選用動(dòng)物；家兔：減壓神經(jīng)獨(dú)立分支，適合觀察減壓神經(jīng)對(duì)心臟影響試驗(yàn)；適宜做發(fā)熱和檢查致熱源研究；刺激性排卵；常用于制備抗血清；家兔的胸腔中央有一層很薄的縱膈膜將胸腔分為左右兩部，互不相通，兩肺被肋胸膜隔開，心臟又有心包胸膜隔開；也是心血管疾病研究的較好模型；不宜做利尿或抗利尿藥物研究；沒嘔吐反射；食用高膽固醇高脂肪飼料后易形成動(dòng)脈粥樣硬化及高脂血癥模型大鼠：無膽囊，適合做膽管插管收集膽汁，進(jìn)行消化功能的研究；常選做長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)地鼠：中國(guó)地鼠易產(chǎn)生真性糖尿??；小鼠：適合于各類唇裂、腭裂研究青蛙和蟾蜍：反射弧實(shí)驗(yàn)遺傳工程動(dòng)物模型獲得遺傳工程的基本技術(shù)手段:顯微注射轉(zhuǎn)基因、基因定位突變技術(shù)、基因化學(xué)誘變技術(shù)。其中顯微注射法是將外源目的基因注射到受精卵雄原核內(nèi)模式生物：果蠅、線蟲、小鼠、斑馬魚、酵母，其中小鼠是研究人類基因功能的理想動(dòng)物基因敲除動(dòng)物中研究最多最深入的是基因敲除小鼠小鼠是繼人之后第二個(gè)完成基因組測(cè)序的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物疾病病毒：自然界最小微生物；在PH為7時(shí)較穩(wěn)定；對(duì)干燥的抵抗力與病毒的種類及干燥的方法有關(guān)；多數(shù)能保存于50%的甘油中,確診病毒可通過檢查包涵體等方法來確定。細(xì)菌：有球狀、桿狀和螺旋狀；有細(xì)胞壁；水是主要成分，固形物主要由C、H、O、N組成，占總重量的75-80%；比重一般大于1；PH值可影響其代謝活動(dòng)；高溫是有效的滅菌方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的傳染病發(fā)展過程分為：潛伏期、前驅(qū)期、明顯期（發(fā)病期）和轉(zhuǎn)歸期傳染源、傳播途徑和易感動(dòng)物，稱為傳染鎖鏈各類動(dòng)物應(yīng)分室飼養(yǎng)，以防交叉感染飼養(yǎng)和獸醫(yī)人員應(yīng)每年進(jìn)行健康檢查實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的隔離措施主要用于新引入的動(dòng)物隔離是為了控制傳染源，隔離場(chǎng)所應(yīng)離開動(dòng)物繁殖區(qū)檢疫的目的是檢查有無潛在性疾病的存在新引進(jìn)的動(dòng)物應(yīng)有供應(yīng)商的的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證書新引進(jìn)的靈長(zhǎng)類動(dòng)物要特別防止B型皰疹病毒新引進(jìn)的犬必須有犬瘟熱、傳染性肝炎、犬細(xì)小病毒等免疫證明滅菌方法有熱滅菌法、冷滅菌法和Co60輻照滅菌法消毒不能殺死細(xì)菌的芽孢，比滅菌的范圍窄濕熱高壓滅菌：121℃，15min干熱高壓滅菌：160℃，45min預(yù)真空高壓滅菌：121℃，3min低壓蒸汽加甲醛滅菌法：70-80℃，2h

熏蒸消毒法一般為：15ml/m3福爾馬林加7.5克高錳酸鉀,熏蒸時(shí)室溫應(yīng)保持25℃,熏蒸后須靜置24-48h,后在通風(fēng)2-3天80℃熱消毒藥水清洗是良好的消毒方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)室進(jìn)行噴霧消毒后關(guān)閉門窗,保持2-3h;門窗、墻壁等用中性洗滌液洗刷，必要時(shí)可用2%的熱燒堿水洗滌，在高壓水沖洗鼠痘：又稱脫腳病，可經(jīng)皮膚傷口浸入機(jī)體，小鼠感染后肝、脾明顯腫大，康復(fù)后也會(huì)通過糞便長(zhǎng)期排毒，從而污染環(huán)境能夠使病毒廣泛傳播。淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎：只有持續(xù)感染的小鼠和急性感染的金黃地鼠才會(huì)傳播病毒；感染該病毒的小鼠，大腦型最為表現(xiàn)為后肢強(qiáng)直性伸展；小鼠感染并康復(fù)后終生含高滴度的病毒，可經(jīng)唾液、鼻分泌物及尿液向外排毒，同時(shí)該小鼠可成為無癥狀的帶毒者，并通過子宮和乳汁傳給后代，其后代可成為終生帶毒者；人感染主要表現(xiàn)為流感癥狀和腦膜炎仙臺(tái)病毒：動(dòng)物感染后肺部病變明顯，鼠肺呈楊梅色，易與浸潤(rùn)性肺癌相混淆；動(dòng)物體液免疫和細(xì)胞免疫功能普遍下降，妊娠大鼠會(huì)出現(xiàn)胚胎死亡；診斷主要通過免疫學(xué)方法，可采用過濾帽籠盒及剖宮產(chǎn)方法使動(dòng)物免受感染流行性出血熱：自然宿主為小型嚙齒類動(dòng)物，污染塵埃飛沫形成氣溶膠吸入感染是其最主要傳播途徑；兔病毒性出血熱在自然條件下空氣傳播是主要傳播方式，其主要預(yù)防方式為定期注射組織滅活疫苗肝炎病毒：鼠肝炎多數(shù)呈亞臨床或隱形感染，可改變各種免疫參數(shù)，ELISA及免疫熒光法可作為特異性診斷；癥狀可見尿色變深等；嗜神經(jīng)型常引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)壞死；犬病毒性肝炎傳