大學基礎化學試驗-食品中防腐劑的測定課件

防腐劑的測定

概論薄層層析法苯甲酸、山梨酸測定防腐劑的測定概論1防腐劑是指能防止食品腐敗、變質，抑制食品中微生物繁殖，延長食品保存期的物質，它是人類使用最悠久、最廣泛的食品添加劑。防腐劑是指能防止食品腐敗、變質，抑制食品中微生物繁殖，延長食2防腐劑的種類

我國允許使用的品種主要有：苯甲酸及其鈉鹽、山梨酸及其鉀鹽、對羥基苯甲酸乙酯和丙酯、丙酸鈉、丙酸鈣、脫氫乙酸等。非允許的防腐劑：硼砂、水楊酸、氯霉素、青霉素

防腐劑的種類3防腐劑的測定方法GB/T5009·29—2003第一法氣相色譜法第二法高效液相色譜法第三法薄層色譜法本標準規(guī)定了醬油、水果汁、果醬等食品中苯甲酸、山梨酸含量的測定方法。本標準適用于醬油、水果汁、果醬等食品中苯甲酸、山梨酸含量的測定。

防腐劑的測定方法GB/T5009·29—20034教學重點、難點薄層層析法薄層色譜法測定苯甲酸和山梨酸教學重點、難點5原理利用樣品中各組分對吸附劑吸附能力的不同，發(fā)生了無數次吸附和解吸過程。對吸附劑吸附能力弱、對展開劑溶解度大的組分隨流動相迅速向前移動，可較快地隨著展開劑遷移到層析板的上端；對吸附劑吸附能力強的組分移動慢，則留在層析板的下端。利用各組分在展開劑中溶解能力和被解吸能力的不同，最終將各組分彼此分開。

原理利用樣品中各組分對吸附劑吸附能力的不同，發(fā)生了無數6實驗流程制板→活化→點樣→展開→定性或定量

實驗流程7

1、制板――吸附劑均勻地涂在玻璃板上作為固定相，經干燥、活化后，稱薄層板。將吸附劑均勻地涂在玻璃板上這個過程稱制板。2、點樣――把含有不同組成的被測樣品，點在涂有吸附劑的薄層板上，稱點樣。3、展開――由于物質中各組分受到吸附劑的吸附力和溶劑的解吸附力的反復作用，各組分在層析板上向前遷移過程稱為展開，選用適當的有機溶劑，通過毛細管作用，逐步浸潤層析板，有機溶劑稱為展開劑（流動相）。

1、制板――吸附劑均勻地涂在玻璃板上作為固定相，經干燥8定性或定量展開后使各組分分離，再根據比移值和斑點的大小進行定性或定量。

定性或定量9吸附劑分離效果及層析速度主要取決一吸附劑的粒度的大小。而吸附作用則與顆粒本身的微孔大小有關。吸附劑的活性：對于同一吸附劑，若以不同的方法制備處理，其吸附能力也有強弱的變化，一般常以“活性”表示吸附力的強弱。分為五級：一級活性最強，五級活性最弱。一般用二－三級。

吸附劑的常用種類有：硅膠、聚酰胺吸附劑分離效果及層析速度主要取決一吸附劑的粒度的大小。而10薄層板制備1、平鋪法：用購置或自制的薄層涂布器，進行制板，涂層既方便又均勻，是科研中常用的方法。2、傾注法：將調好的漿料倒在玻璃板上，用手搖晃，使其表面均勻平整，然后放在水平的平板上晾干。這種制板方法厚度不易控制。薄層板制備11注意事項⑴用濕法制薄層，應入在水平的臺面上，否則由于臺面不平而使吸附劑糊狀體向低處流動，造成薄層厚度不一致。⑵晾干時應放在通風良好的地方，無灰塵，以防薄層被污染。⑶烘干后應放在干燥器中冷卻、貯存。注意事項12活化活化的目的：是為了增加吸食劑的吸附能力，即增加活性。操作：濕法制板都應進行晾干、烘干干燥。薄層板經過自然干燥后，失去了大部分水分才能進行活化處理?；罨臏囟葹?05-110℃。觀察與思考：將含水分過多的薄層板立即放入烘箱（105-110℃）中活化，會出現(xiàn)什么現(xiàn)象？由于水分突然大量蒸發(fā)則造成板面斷裂或龜裂，而使薄層板不能使用?；罨?3點樣點樣技術直接影響到分離效果和要檢出靈敏度。點樣儀器：玻璃毛細管（一般用于定性）、生化用血色素管（一般用于定性），微量注射器（一般用于定量），規(guī)格：20×20cm在薄板一端1.5厘米處開始每隔２厘米作一記號（鉛筆輕輕點一下，切勿刺破薄層）共六點，用0.5毫米直徑的毛細管吸取樣品，各樣品按右圖點樣二次（樣品量５－５０微克，點子直徑不超過２毫米）。

點樣點樣技術直接影響到分離效果和要檢出靈敏度。14薄層色譜法原理

樣品酸化后，用乙醚提取苯甲酸、山梨酸。將樣品提取液濃縮，點于聚酰胺薄層板上，展開。顯色后，根據薄層板上苯甲酸、山梨酸的比移值，與標準比較定性，并可進行概略定量。

薄層色譜法15展開

展層至溶劑前沿頂端0.5～１厘米處時取出薄板（展開時間約１小時），在溶劑前沿處作記號并放在空氣中晾干，以除去溶劑。將選擇的展開劑倒入層析槽或層析缸中（液層高度約為0.5cm）,待容器內溶劑蒸氣達到飽和后，將點好樣的薄層析放入槽或缸中進行展開。（注意：點樣的位置必須要在展開劑液面之上。）當展開劑展開，其前沿上升到板頂端5-10mm處時，取出薄層板，用鉛筆劃出前沿的位置、晾干。

展開

展層至溶劑前沿頂端0.5～１厘米處時取出薄板（展開時間16顯色

用噴霧器顯色均勻噴霧在薄層上，放烘箱中保持８５℃加溫至層析斑點顯現(xiàn)。此顯色劑可使各種糖呈現(xiàn)出不同顏色。顯色

17定性根據各標準糖液層析后所得班點的位置確定混合樣品中所分離出的各個斑點分別為何種糖。定性根據各標準糖液層析后所得班點的位置確定混合樣品中所分離出18定量用各種顯色方法使斑點出現(xiàn)后，應立即用鉛筆或小針劃出斑點的位置，并計算R值。

化合物移動的距離（斑點中心到原點的距離）R值

＝─────────────────────

溶劑的移動的距離（溶劑前沿到原點距離）定量用各種顯色方法使斑點出現(xiàn)后，應立即用鉛筆或小針劃出斑點的19苯甲酸和山梨酸測定

（薄層層析法）步驟樣品處理→點樣→展開→顯色→定性或半→定量苯甲酸和山梨酸測定

（薄層層析法）20聚酰胺板的制備

稱取1.6g聚酰胺粉，加0.4g可溶性淀粉，加約7ml水，研磨3~5min，立即倒入涂布器內制成、0.3mm的薄層板兩塊，室溫干燥后，于80℃干燥1h,取出置于干燥器中保存。

注意事項：聚酰胺薄層板，烘干溫度不能高于80℃，否則聚酰胺變色。注意！聚酰胺板的制備稱取1.6g聚酰胺粉，加0.4g可溶性淀21樣品提取操作流程圖：2.5g樣品→于25ml具塞量筒→加0.5ml鹽酸→用15ml乙醚萃取，振搖1min→用10ml乙醚萃取→合并兩次萃取液→于另一25ml具塞量筒。

思考題：酸化的目的是什么？使苯甲酸鈉、山梨酸鉀轉變?yōu)楸郊姿峄蛏嚼嫠幔靡颐烟崛　?/p>

????樣品提取操作流程圖：????22另一25ml具塞量筒→NaCl洗滌兩次→靜止10min→通過無水NaSO4層過濾→于25ml容量瓶→加乙醚定容至25ml。

吸取10.0ml乙醚提取液→分現(xiàn)將置于10ml具塞離心管中→40水浴上揮干→加0.1ml乙醇溶解殘渣→備用。另一25ml具塞量筒→NaCl洗滌兩次→靜止10min→通23思考題1、樣品中如含有二氧化碳、酒精時應如何處理？2、富含脂肪和蛋白質的樣品應如何處理？答：如含有二氧化碳、酒精時應先加熱除去；富含脂肪和蛋白質的樣品應除去脂肪和蛋白質，以防用乙醚萃取時發(fā)生乳化。除去的方法同糖精的測定。

????思考題????24測定點樣：在薄層下端2cm的基線上，用微量注射器點

樣品液，同時各點

苯甲酸、山梨酸標準溶液。展開與顯色：

將點樣后的薄層板放入預先盛有展開劑的展開

內，展開

槽周圍貼有濾紙，待溶劑前沿上展至10cm，取出揮干，噴顯色劑，斑點成黃色，背景為藍色。樣品中所含苯甲酸、山梨酸的量與標準斑點比較定量（苯甲酸、山梨酸的比移值依次為）。

測定點樣：在薄層下端2cm的基線上，用微量注射器點樣品25操作技術要點點樣：少量多次，大小要均勻。展開：展開劑倒入展開槽中，展開劑液層約為.0.5cm,并蓋蓋一段時間，使之預告達到飽和狀態(tài)，再放入薄層板。顯色：均勻噴灑顯色劑。操作技術要點點樣：少量多次，大小要均勻。26計算X=m5×1000M6×10/25×V6/V5×1000計算27防腐劑的測定

概論薄層層析法苯甲酸、山梨酸測定防腐劑的測定概論28防腐劑是指能防止食品腐敗、變質，抑制食品中微生物繁殖，延長食品保存期的物質，它是人類使用最悠久、最廣泛的食品添加劑。防腐劑是指能防止食品腐敗、變質，抑制食品中微生物繁殖，延長食29防腐劑的種類

我國允許使用的品種主要有：苯甲酸及其鈉鹽、山梨酸及其鉀鹽、對羥基苯甲酸乙酯和丙酯、丙酸鈉、丙酸鈣、脫氫乙酸等。非允許的防腐劑：硼砂、水楊酸、氯霉素、青霉素

防腐劑的種類30防腐劑的測定方法GB/T5009·29—2003第一法氣相色譜法第二法高效液相色譜法第三法薄層色譜法本標準規(guī)定了醬油、水果汁、果醬等食品中苯甲酸、山梨酸含量的測定方法。本標準適用于醬油、水果汁、果醬等食品中苯甲酸、山梨酸含量的測定。

防腐劑的測定方法GB/T5009·29—200331教學重點、難點薄層層析法薄層色譜法測定苯甲酸和山梨酸教學重點、難點32原理利用樣品中各組分對吸附劑吸附能力的不同，發(fā)生了無數次吸附和解吸過程。對吸附劑吸附能力弱、對展開劑溶解度大的組分隨流動相迅速向前移動，可較快地隨著展開劑遷移到層析板的上端；對吸附劑吸附能力強的組分移動慢，則留在層析板的下端。利用各組分在展開劑中溶解能力和被解吸能力的不同，最終將各組分彼此分開。

原理利用樣品中各組分對吸附劑吸附能力的不同，發(fā)生了無數33實驗流程制板→活化→點樣→展開→定性或定量

實驗流程34

1、制板――吸附劑均勻地涂在玻璃板上作為固定相，經干燥、活化后，稱薄層板。將吸附劑均勻地涂在玻璃板上這個過程稱制板。2、點樣――把含有不同組成的被測樣品，點在涂有吸附劑的薄層板上，稱點樣。3、展開――由于物質中各組分受到吸附劑的吸附力和溶劑的解吸附力的反復作用，各組分在層析板上向前遷移過程稱為展開，選用適當的有機溶劑，通過毛細管作用，逐步浸潤層析板，有機溶劑稱為展開劑（流動相）。

1、制板――吸附劑均勻地涂在玻璃板上作為固定相，經干燥35定性或定量展開后使各組分分離，再根據比移值和斑點的大小進行定性或定量。

定性或定量36吸附劑分離效果及層析速度主要取決一吸附劑的粒度的大小。而吸附作用則與顆粒本身的微孔大小有關。吸附劑的活性：對于同一吸附劑，若以不同的方法制備處理，其吸附能力也有強弱的變化，一般常以“活性”表示吸附力的強弱。分為五級：一級活性最強，五級活性最弱。一般用二－三級。

吸附劑的常用種類有：硅膠、聚酰胺吸附劑分離效果及層析速度主要取決一吸附劑的粒度的大小。而37薄層板制備1、平鋪法：用購置或自制的薄層涂布器，進行制板，涂層既方便又均勻，是科研中常用的方法。2、傾注法：將調好的漿料倒在玻璃板上，用手搖晃，使其表面均勻平整，然后放在水平的平板上晾干。這種制板方法厚度不易控制。薄層板制備38注意事項⑴用濕法制薄層，應入在水平的臺面上，否則由于臺面不平而使吸附劑糊狀體向低處流動，造成薄層厚度不一致。⑵晾干時應放在通風良好的地方，無灰塵，以防薄層被污染。⑶烘干后應放在干燥器中冷卻、貯存。注意事項39活化活化的目的：是為了增加吸食劑的吸附能力，即增加活性。操作：濕法制板都應進行晾干、烘干干燥。薄層板經過自然干燥后，失去了大部分水分才能進行活化處理?；罨臏囟葹?05-110℃。觀察與思考：將含水分過多的薄層板立即放入烘箱（105-110℃）中活化，會出現(xiàn)什么現(xiàn)象？由于水分突然大量蒸發(fā)則造成板面斷裂或龜裂，而使薄層板不能使用?；罨?0點樣點樣技術直接影響到分離效果和要檢出靈敏度。點樣儀器：玻璃毛細管（一般用于定性）、生化用血色素管（一般用于定性），微量注射器（一般用于定量），規(guī)格：20×20cm在薄板一端1.5厘米處開始每隔２厘米作一記號（鉛筆輕輕點一下，切勿刺破薄層）共六點，用0.5毫米直徑的毛細管吸取樣品，各樣品按右圖點樣二次（樣品量５－５０微克，點子直徑不超過２毫米）。

點樣點樣技術直接影響到分離效果和要檢出靈敏度。41薄層色譜法原理

樣品酸化后，用乙醚提取苯甲酸、山梨酸。將樣品提取液濃縮，點于聚酰胺薄層板上，展開。顯色后，根據薄層板上苯甲酸、山梨酸的比移值，與標準比較定性，并可進行概略定量。

薄層色譜法42展開

展層至溶劑前沿頂端0.5～１厘米處時取出薄板（展開時間約１小時），在溶劑前沿處作記號并放在空氣中晾干，以除去溶劑。將選擇的展開劑倒入層析槽或層析缸中（液層高度約為0.5cm）,待容器內溶劑蒸氣達到飽和后，將點好樣的薄層析放入槽或缸中進行展開。（注意：點樣的位置必須要在展開劑液面之上。）當展開劑展開，其前沿上升到板頂端5-10mm處時，取出薄層板，用鉛筆劃出前沿的位置、晾干。

展開

展層至溶劑前沿頂端0.5～１厘米處時取出薄板（展開時間43顯色

用噴霧器顯色均勻噴霧在薄層上，放烘箱中保持８５℃加溫至層析斑點顯現(xiàn)。此顯色劑可使各種糖呈現(xiàn)出不同顏色。顯色

44定性根據各標準糖液層析后所得班點的位置確定混合樣品中所分離出的各個斑點分別為何種糖。定性根據各標準糖液層析后所得班點的位置確定混合樣品中所分離出45定量用各種顯色方法使斑點出現(xiàn)后，應立即用鉛筆或小針劃出斑點的位置，并計算R值。

化合物移動的距離（斑點中心到原點的距離）R值

＝─────────────────────

溶劑的移動的距離（溶劑前沿到原點距離）定量用各種顯色方法使斑點出現(xiàn)后，應立即用鉛筆或小針劃出斑點的46苯甲酸和山梨酸測定

（薄層層析法）步驟樣品處理→點樣→展開→顯色→定性或半→定量苯甲酸和山梨酸測定

（薄層層析法）47聚酰胺板的制備

稱取1.6g聚酰胺粉，加0.4g可溶性淀粉，加約7ml水，研磨3~5min，立即倒入涂布器內制成、0.3mm的薄層板兩塊，室溫干燥后，于80℃干燥1h,取出置于干燥器中保存。

注意事項：聚酰胺薄層板，烘干溫度不能高于80℃，否則聚酰胺變色。注意！聚酰胺板的制備稱取1.6g聚酰胺粉，加0.4g可溶性淀48樣品提取操作流程圖：2.5g樣品→于25ml具塞量筒→加0.5ml鹽酸→用15ml乙醚萃取，振搖1min→用10ml乙醚萃取→合并兩次萃取液→于另一25ml具塞量筒。

思考題：酸化的目的是什么？使苯甲酸鈉、山梨酸鉀轉變?yōu)楸郊姿峄蛏嚼嫠幔靡颐烟崛　?/p>

????樣品提取操作流程圖：?