抗壞血酸-總抗壞血酸（AsA-T-AsA）含量檢測試劑盒（比色法）說明書-可見分光光度法UPLC-MS-6013

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質(zhì)檢測技術(shù)有限公司第第頁抗壞血酸/總抗壞血酸（AsA/T-AsA）含量檢測試劑盒（比色法）說明書可見分光光度法貨號：UPLC-MS-6013規(guī)格：50T/24S產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時(shí)聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體40mL×1瓶4℃保存試劑一粉劑×1瓶-20℃保存試劑二液體20mL×1瓶4℃保存試劑三液體3mL×1瓶4℃保存試劑四液體30mL×1瓶4℃保存試劑五液體20mL×1瓶4℃保存試劑六粉劑×1瓶4℃保存試劑七液體12mL×1瓶4℃保存標(biāo)準(zhǔn)品粉劑×1支4℃保存溶液的配制：1、試劑一：臨用前加入3.3mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑-20℃分裝避光保存。2、試劑六：臨用前加入12mL70%乙醇（V/V）溶液溶解。31.136mL0.01mL上述溶液，加入0.99mL提取液，500nmol/mLAsA標(biāo)準(zhǔn)溶液。產(chǎn)品說明:抗壞血酸（AsA）是輔酶、自由基清除劑、電子共體/受體和草酸鹽與酒石酸鹽生物合成的底物等。作為植物細(xì)胞中最重要的抗氧化劑，AsA在保護(hù)葉綠體免于氧化損傷起著舉足輕重的作用，也是衡量農(nóng)作物產(chǎn)品品質(zhì)的重要指標(biāo)之一。脫氫抗壞血酸（DHA）AsA的可逆的氧化型，在生物體內(nèi)，與抗壞血酸共同組成氧化還原系統(tǒng)，具有電子受體作用。AsAFe3+2,2’-525nm處有特征性吸收峰。DTTDHAAsA，可用于檢測樣本總抗壞血酸（AsA+DHA）含量。注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。需自備的儀器和用品：研缽/勻漿器、冰、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液器、乙醇和蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）組織：按照組織質(zhì)量（g）:提取液體積(mL)為1:5~10的比例（建議稱取約0.1g1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿。13000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。細(xì)胞或細(xì)菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）:提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（5001mL提取液（功率300W373min13000g4℃min，取上清液置冰上混勻待測。500μL500μL提取液，漩渦混勻。13000g，4℃10min，取上清置冰上待測。二、測定步驟30min，調(diào)節(jié)波長到525nm，蒸餾水調(diào)零。AsA含量測定AsA含量測定操作表，按照操作表加入下列試劑：試劑名稱（μL）測定管對照管空白管1空白管2標(biāo)準(zhǔn)管樣本5050提取液--5050-標(biāo)準(zhǔn)溶液50試劑二200200200200200試劑四250250250250250試劑五200200200200200試劑六200-200-20070%乙醇溶液-200-200-試劑七10010010010010040525nmAAA1A2A1測定管=（A測定管-A對照管-(A1-A21標(biāo)準(zhǔn)管=A標(biāo)準(zhǔn)管-A1。注意：加入試劑七時(shí)將槍頭伸入液面以下加入，不可懸空滴加，否則會導(dǎo)致液體渾濁?？瞻坠?、空白管2及標(biāo)準(zhǔn)管只需測定1-2次。T-AsA含量測定T-AsA含量測定操作表，按照操作表加入下列試劑：試劑名稱（μL）測定管對照管空白管1空白管2標(biāo)準(zhǔn)管樣本5050--提取液--5050-標(biāo)準(zhǔn)溶液--50試劑一5050505050試劑二100100100100100混勻，42℃水浴反應(yīng)15min。試劑三5050505050混勻，室溫靜置1min。試劑四250250250250250試劑五200200200200200試劑六200-200-20070%乙醇溶液-200-200-試劑七10010010010010040525nmAAA1A2A2測定管=（A測定管-A對照管-(A1-A22標(biāo)準(zhǔn)管=A標(biāo)準(zhǔn)管-A1。注意：加入試劑七時(shí)將槍頭伸入液面以下加入，不可懸空滴加，否則會導(dǎo)致液體渾濁?？瞻坠?、空白管2及標(biāo)準(zhǔn)管只需測定1-2次。三、AsA/T-AsA含量計(jì)算公式a、AsA含量計(jì)算按樣本質(zhì)量計(jì)算AsA(nmol/g質(zhì)量)=(C標(biāo)準(zhǔn)液×ΔA1測定管÷ΔA1標(biāo)準(zhǔn)管×V樣)÷(W×V樣÷V樣總)=500×ΔA1測定管÷ΔA1標(biāo)準(zhǔn)管÷W按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算AsA(nmol/104cell)=(C標(biāo)準(zhǔn)液×ΔA1測定管÷ΔA1標(biāo)準(zhǔn)管×V樣)÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)=500×ΔA1測定管÷ΔA1標(biāo)準(zhǔn)管÷細(xì)胞數(shù)量按液體體積計(jì)算AsA(nmol/mL)=C標(biāo)準(zhǔn)液×ΔA1測定管÷ΔA1標(biāo)準(zhǔn)管×2=1000×ΔA1測定管÷ΔA1標(biāo)準(zhǔn)管C標(biāo)準(zhǔn)液：標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，500nmol/mL；V樣總：提取離心后上清液體積，1.0mL；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.05mL；W：樣本質(zhì)量，g；2：稀釋倍數(shù)，（500μL液體+500μL提取液）÷500μL液體=2。b、T-AsA含量計(jì)算按樣本質(zhì)量計(jì)算T-AsA(nmol/g質(zhì)量)=(C標(biāo)準(zhǔn)液×ΔA2測定管÷ΔA2標(biāo)準(zhǔn)管×V樣)÷(W×V樣÷V樣總)=500×ΔA2測定管÷ΔA2標(biāo)準(zhǔn)管÷W按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算T-AsA(nmol/104cell)=(C標(biāo)準(zhǔn)液×ΔA2測定管÷ΔA2標(biāo)準(zhǔn)管×V樣)÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)=500×ΔA2測定管÷ΔA2標(biāo)準(zhǔn)管÷細(xì)胞數(shù)量按液體體積計(jì)算T-AsA(nmol/mL)=C標(biāo)準(zhǔn)液×ΔA2測定管÷ΔA2標(biāo)準(zhǔn)管×2=1000×ΔA2測定管÷ΔA2標(biāo)準(zhǔn)管C標(biāo)準(zhǔn)液：標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，500nmol/mL；V樣總：提取離心后上清液體積，1.0mL；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.05mL；W：樣本質(zhì)量，g；2：稀釋倍數(shù)，（500μL液體+500μL提取液）÷500μL液體=2。c、DHA含量計(jì)算DHA含量=T-AsA含量-AsA含量按樣本質(zhì)量計(jì)算DHA(nmol/g質(zhì)量)=500×（ΔA2測定管÷ΔA2標(biāo)準(zhǔn)管-ΔA1測定管÷ΔA1標(biāo)準(zhǔn)管）÷W按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算DHA(nmol/104cell)=500×（ΔA2測定管÷ΔA2標(biāo)準(zhǔn)管-ΔA1測定管÷ΔA1標(biāo)準(zhǔn)管）÷細(xì)胞數(shù)量按液體體積計(jì)算DHA(nmol/mL)=1000×（ΔA2