?；D(zhuǎn)移酶（AAT）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)-微量法UPLC-MS-5089

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途！-上海液質(zhì)檢測(cè)技術(shù)有限公司第第頁(yè)?；D(zhuǎn)移酶（AAT）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)貨號(hào)：UPLC-MS-5089規(guī)格：100T/96S

微量法產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系工作人員。試劑名稱(chēng)規(guī)格保存條件提取液液體100mL×1瓶4℃保存試劑一液體15mL×1瓶4℃保存試劑二粉劑×1支-20℃保存試劑三液體2mL×1瓶4℃保存試劑四粉劑×1支4℃保存溶液的配制：1、提取液：內(nèi)含不溶物，使用前搖勻。2、試劑二：臨用前加蒸餾水1mL充分溶解，4℃保存。3、試劑四：臨用前加入試劑一1mL充分溶解，4℃避光保存。產(chǎn)品說(shuō)明：AAT是一個(gè)多功能蛋白大家族，主要負(fù)責(zé)催化生物體內(nèi)各種?；腿ヵ；磻?yīng)，在基因表達(dá)、代謝和信AAT催化乙酰CoADTNB生成在412nm有吸收峰，測(cè)定412nm吸光度增加速率，來(lái)計(jì)算AAT活性。注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。需自備的儀器和用品：可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/和蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）0.1g1mL，冰上充分研磨，15000g4℃20min血清（漿）樣本：直接檢測(cè)。二、測(cè)定步驟1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至412nm，蒸餾水調(diào)零。2、試劑一在37℃水浴保溫20min以上。3、樣本測(cè)定：試劑名稱(chēng)（μL）空白管測(cè)定管蒸餾水20-上清液/血清-20試劑一（預(yù)熱）140140試劑二1010試劑三2020試劑四1010將上述試劑按順序加入微量石英比色皿/96412nm10s時(shí)A1130sA2ΔA空=A2空-A1空；ΔA測(cè)=A2測(cè)-A1測(cè)，ΔA=ΔA測(cè)-ΔA空。三、AAT活性計(jì)算A、使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下：1、按樣本蛋白濃度計(jì)算單位的定義：37℃中每mL反應(yīng)體系下每毫克蛋白每分鐘催化吸光值變化0.001個(gè)單位為1個(gè)酶活單位。AAT(U/mgprot)=ΔA÷0.001÷(Cpr×V樣)÷T×（V反總÷1）=5000×ΔA÷Cpr此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。2、按樣本質(zhì)量計(jì)算單位的定義：37℃中每mL反應(yīng)體系下每克組織每分鐘催化吸光值變化0.001個(gè)單位為1個(gè)酶活單位。AAT(U/g質(zhì)量)=ΔA÷0.001÷(V樣÷V樣總×W)÷T×（V反總÷1）=5000×ΔA÷W3、按血清濃度計(jì)算單位的定義：37℃中每mL反應(yīng)體系下每mL血清每分鐘催化吸光值變化0.001個(gè)單位為1個(gè)酶活單位。AAT(U/mL血清)=ΔA÷0.001÷V樣÷T×（V反總÷1）=5000×ΔACpr：上清液蛋白濃度，mg/mL；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.02mL；W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2min；V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；1：每mL反應(yīng)體系。B、使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下：1、按蛋白濃度計(jì)算AAT活力單位定義：37℃中每mL反應(yīng)體系下每毫克蛋白每分鐘催化吸光值變化0.0005個(gè)單位為1UAAT(U/mgprot)=ΔA÷0.0005÷(Cpr×V樣)÷T×（V反總÷1）10000×ΔA÷Cpr2、按樣本質(zhì)量計(jì)算AAT活力單位定義：37℃中每mL反應(yīng)體系下每克組織每分鐘催化吸光值變化0.0005個(gè)單位為1UAAT(U/g質(zhì)量)=ΔA÷0.0005÷(V樣÷V樣總×W)÷T×（V反總÷1）=10000×ΔA÷W3、按血清濃度計(jì)算單位的定義：37℃中每mL反應(yīng)體系下每mL血清每分鐘催化吸光值變化0.0005個(gè)單位為1U。AAT(U/mL血清)=ΔA÷0.0005÷V樣÷T×（V反總÷1）=10000×ΔA1Cpr：上清液蛋白濃度，mg/mL，蛋白質(zhì)濃度需要另外測(cè)定；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.02mL；W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2min；V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；1：每mL反應(yīng)體系。注意事項(xiàng)：1、上清液蛋白質(zhì)含量需要另