DB12-T 1067-2021 淡水小球藻生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.99CCSB3912天津市地方標(biāo)準(zhǔn)DB12/T1067—2021淡水小球藻生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程TechnicalregulationsforproductionoffreshwaterChlorellasp.2021-08-16發(fā)布2021-09-16實(shí)施天津市市場監(jiān)督管理委員會發(fā)布DB12/T1067—2021前言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由天津市農(nóng)業(yè)農(nóng)村委員會提出并歸口。本文件起草單位：天津市農(nóng)業(yè)科學(xué)院。本文件主要起草人：張峰峰、謝鳳行、周可、趙瓊、李瑞環(huán)、趙玉潔、孫海波、王姝、張?jiān)?、高晶琳、張新建。IDB12/T1067—2021淡水小球藻生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程12范圍本文件規(guī)定了淡水小球藻（Chlorellasp.）培養(yǎng)的環(huán)境、設(shè)備、水、培養(yǎng)方法、采收及注意事項(xiàng)。本文件適用于淡水小球藻生產(chǎn)。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB5749SL733生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)陸水域浮游植物監(jiān)測技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.13.2原藻種theoriginalmicroalgaespecies由單藻落分離純化，并在固體斜面培養(yǎng)基上繁殖保存的藻種。液體藻種theliquidmicroalgaespecies原藻種在固體平板培養(yǎng)基上活化，挑取單藻落接種至裝有滅菌液體培養(yǎng)基的透明容器中，光照培養(yǎng)的藻種。4生產(chǎn)用水和設(shè)施設(shè)備4.1生產(chǎn)用水生產(chǎn)用水應(yīng)符合地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)GB5749中水質(zhì)要求。4.2設(shè)施設(shè)備4.2.1藻種保藏室放置冰箱、冰柜，保存原藻種的房間。4.2.2藻種培養(yǎng)室進(jìn)行培養(yǎng)基的配制和藻種的保種、培養(yǎng)及檢查等操作的房間。配有分光光度計(jì)、電子天平（精度為0.01g）、光學(xué)顯微鏡（1000×）、照度計(jì)（精度為0.1lx）超凈工作臺、高壓蒸汽滅菌鍋、恒溫光照培養(yǎng)箱等。4.2.3規(guī)模生產(chǎn)車間1DB12/T1067—2021進(jìn)行藻液規(guī)模培養(yǎng)。配有光照設(shè)備和不同容量的透明發(fā)酵容器等。5生產(chǎn)技術(shù)流程5.1生產(chǎn)流程生產(chǎn)流程應(yīng)按附錄A執(zhí)行。5.2藻種質(zhì)量用于培養(yǎng)的藻種應(yīng)有藻種鑒定報(bào)告或藻株來源相關(guān)信息。規(guī)模生產(chǎn)之前需檢測藻種的細(xì)胞密度和純度，不能有其他藻污染，藻細(xì)胞密度≥1×107cells/mL，利用平板涂布法或計(jì)數(shù)框計(jì)數(shù)法測定藻細(xì)胞密度，計(jì)數(shù)框計(jì)數(shù)法應(yīng)按SL733中6.4的規(guī)定執(zhí)行。5.3培養(yǎng)基小球藻液體培養(yǎng)基配方見附錄B。保種固體培養(yǎng)基和計(jì)數(shù)培養(yǎng)基為在液體培養(yǎng)基中加入20g/L瓊脂粉。5.4滅菌消毒保種斜面培養(yǎng)基，生產(chǎn)液體藻種培養(yǎng)基以及計(jì)數(shù)培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌，滅菌條件為110℃～115℃，0.1MPa～0.15MPa，滅菌10min～15min。規(guī)模培養(yǎng)容器用10mg/L～20mg/L高錳酸鉀溶液或有效氯濃度為0.1‰～0.3‰次氯酸鈉溶液浸泡12h～24h。消毒后，用清水洗凈。檢查無雜藻雜物后，加水和培養(yǎng)基。也可加入水和培養(yǎng)基后進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，滅菌條件為110℃～115℃，0.1MPa～0.15MPa，滅菌10min～15min。5.5液體藻種培養(yǎng)容器5.5.1容器為200mL～500mL透明玻璃瓶，可高壓蒸汽滅菌。5.5.2培養(yǎng)條件從斜面培養(yǎng)基接種原藻種到液體培養(yǎng)基中，光照強(qiáng)度3000lx～5000lx，光照周期14L:10D，培養(yǎng)溫度20℃～25℃，靜置培養(yǎng)7d～10d。5.5.3質(zhì)量檢測配制計(jì)數(shù)培養(yǎng)基，利用平板涂布法測定小球藻細(xì)胞密度及純度。小球藻細(xì)胞密度≥1×10cells/mL，其他藻類密度＜0.1‰，即為合格藻種。75.6規(guī)模培養(yǎng)5.6.1容器容器容積控制在0.2m3～2m3，高度≤100cm。選用透光性強(qiáng)的塑料桶、塑料袋、玻璃缸等適合的培養(yǎng)容器。5.6.2接種量按培養(yǎng)體積的10%～20%接種液體藻種。2

DB12/T1067—20215.6.3光照光照強(qiáng)度4000lx～20000lx。5.6.4溫度溫度為15℃～30℃，最適培養(yǎng)溫度為20℃～25℃。5.6.5培養(yǎng)方式規(guī)模培養(yǎng)應(yīng)適當(dāng)補(bǔ)充空氣，充氣量應(yīng)大于培養(yǎng)容積的1%。5.6.6培養(yǎng)周期最適培養(yǎng)條件下，一個(gè)培養(yǎng)周期為7d～10d。5.75.8生長監(jiān)測每天采樣監(jiān)測，用計(jì)數(shù)框計(jì)數(shù)法或光密度法計(jì)算藻細(xì)胞密度，觀察污染情況。污染控制在培養(yǎng)的生產(chǎn)過程中，應(yīng)注意避免污染，定期檢查藻細(xì)胞的生長狀況，如發(fā)現(xiàn)有黃化、黑化、浮游動物或其他藻類污染，應(yīng)終止培養(yǎng)，清洗消毒，重新接種。5.9質(zhì)量檢測利用平板涂布法測定小球藻細(xì)胞密度，藻細(xì)胞密度≥1×10cells/mL，其他藻類密度＜1%即為合格。75.10后處理藻液培養(yǎng)完畢，直接分裝。6生產(chǎn)記錄6.1生產(chǎn)、加工過程記錄應(yīng)記載藻種來源、培養(yǎng)日期、培養(yǎng)時(shí)間、灌裝日期、藻液顏色、藻細(xì)胞密度、溫度等。培養(yǎng)基采購、使用記錄6.2應(yīng)記載培養(yǎng)基進(jìn)貨日期、名稱、規(guī)格、批號、數(shù)量、供貨商、索證情況、保質(zhì)期限、驗(yàn)收人記錄、培養(yǎng)基使用量等。6.3記錄保存生產(chǎn)記錄應(yīng)保存不少于2年。7儲存分裝后的藻液應(yīng)貯存在通風(fēng)、干燥、清潔的倉庫，倉庫內(nèi)無有害氣體、易燃易爆物品及有腐蝕性的化學(xué)物品，遠(yuǎn)離熱源。3

DB12/T1067—2021附錄A（規(guī)范性）淡水小球藻生產(chǎn)流程圖淡水小球藻生產(chǎn)流程見圖A.1圖A.1淡水小球藻生產(chǎn)流程4DB12/T1067—2021附錄B（資料性）淡水小球藻培養(yǎng)基淡水小球藻培養(yǎng)基配方如下：——NaNO31.5g；——K2HPO40.04g；——MgSO4·7H2O0.075g；——CaCl2·7H2O0.036g；——Na2CO30.02g；——檸檬酸0.006g；——檸檬酸鐵銨0.006g；——EDTA0.001g；——微量元素溶液A51mL；——氨芐青霉素(終濃度)50μg/mL；——蒸餾水/自來水1L。其中，微量元素