遺傳病的診斷課件整理

遺傳病的診斷基礎醫(yī)學院醫(yī)學遺傳學教研室徐朝陽遺傳病的診斷基礎醫(yī)學院醫(yī)學遺傳學教研室徐朝陽遺傳病的常規(guī)診斷Chapter01遺傳病的常規(guī)診斷Chapter01341病史、癥狀和體征細胞遺傳學檢查系譜分析生物化學檢查2Chapter01遺傳病的常規(guī)診斷341病史、癥狀和體征細胞遺傳學檢查系譜分析生物化學檢查2C1.病史采集遺傳病的個人病史和家族史的采集與常規(guī)疾病相似，但需問清一些重要的細節(jié)：助孕情況(接受供卵或供精)，流產(chǎn)史，死胎，終止妊娠，兒童的收養(yǎng)或過繼，近親婚配和非婚生情況；對于先天畸形，還需采集懷孕時父母身體健康情況和年齡、妊娠早期歷史、暴露致畸物的情況、胎兒生長和活動情況、詳細的出生記錄，家庭其他成員的異常、發(fā)病年齡、病程特點，未受累者現(xiàn)在的年齡、種族等有關資料。1.病史采集遺傳病的個人病史和家族史的采集與常規(guī)疾病相似，但2.體格檢查因為遺傳病的患者及其家屬常常具有較大的心理壓力，所以檢查病人的時間要充裕，環(huán)境要安靜。遺傳性疾病可能影響許多器官、系統(tǒng)，因此體格檢查必須全面，既要注意明顯的體征、也要注意細微的異常跡象。2.體格檢查因為遺傳病的患者及其家屬常常具有較大的心理壓力，智力低下黃疸白內(nèi)障肝脾腫大智力發(fā)育不全毛發(fā)黃腐臭味苯丙酮尿征？半乳糖血癥？智力低下智力發(fā)育不全苯丙酮尿征？半乳糖血癥？面似滿月生長緩慢哭聲象貓叫貓叫綜合征？副性征發(fā)育不良繼發(fā)/原發(fā)性閉經(jīng)身體矮小肘外翻45，XO?面似滿月貓叫綜合征？副性征發(fā)育不良45，XO?34病史、癥狀和體征細胞遺傳學檢查系譜分析生物化學檢查2Chapter01遺傳病的常規(guī)診斷2134病史、癥狀和體征細胞遺傳學檢查系譜分析生物化學檢查2Ch系譜分析的原則系統(tǒng)完整去偽存真注意新的基因突變系譜分析的原則系統(tǒng)完整1.孟德爾遺傳?。?）常染色體顯性遺傳病(AD)（2）常染色體隱性遺傳病(AR)（3）X連鎖隱性遺傳病(XR)（4）X連鎖顯性遺傳病(XD)（5）Y連鎖遺傳病1.孟德爾遺傳?。?）常染色體顯性遺傳病(AD)（2）常染色1.1常染色體顯性遺傳病基因多效性(pleiotropy)：是指某一基因與多種不同的看起來似乎無關的表型有關。多效性等位基因的每種效應都可表現(xiàn)為不同的外顯率和不同的表現(xiàn)度。環(huán)境因素的影響：內(nèi)在的和外在的體細胞突變：體細胞突變的“二次打擊”動態(tài)突變：不穩(wěn)定的三核苷酸重復序列的預期現(xiàn)象遺傳背景的影響：與其他基因座發(fā)生相互作用1.1常染色體顯性遺傳病基因多效性(pleiotropy)1.2常染色體隱性遺傳病(AR)遺傳異質(zhì)性是產(chǎn)生AR表型表達不規(guī)律的原因先天聾啞1.2常染色體隱性遺傳病(AR)遺傳異質(zhì)性是產(chǎn)生AR表型表1.3X連鎖顯性遺傳病X連鎖的女性雜合子，由于X染色體的Lyon化導致的染色體隨機失活使女性的癥狀不像男性那么嚴重。1.3X連鎖顯性遺傳病X連鎖的女性雜合子，由于X染色體的L1.4X連鎖隱性遺傳病臨床表型雜合子(manifestingheterzygote)：X連鎖基因的女性雜合攜帶者，由于X染色體的隨機Lyon化，導致部分組織的細胞大部分突變基因所在的染色體處于活躍狀態(tài)而患病。1.4X連鎖隱性遺傳病臨床表型雜合子(manifestin1.5Y連鎖遺傳病很少見。全男性傳遞。1.5Y連鎖遺傳病很少見。2.非孟德爾遺傳?。?）線粒體遺傳病

(2)多基因病2.非孟德爾遺傳病（1）線粒體遺傳病(2)多基因病母系遺傳，女性患者的子女都可能發(fā)病。晚發(fā)，進行性。2.1線粒體遺傳病母系遺傳，女性患者的子女都可能發(fā)病。2.1線粒體遺傳病2.2多基因病許多出生缺陷和慢性晚發(fā)型疾病，家族性聚集性類似于孟德爾遺傳，但不嚴格遵循孟德爾分離率。近期研究結果表明：原來認為是多基因病的一些疾病中，相當一部分是由于遺傳異質(zhì)性所致。2.2多基因病許多出生缺陷和慢性晚發(fā)型疾病，家族性聚集性類3.具有特殊遺傳方式的疾病遺傳印記動態(tài)突變3.具有特殊遺傳方式的疾病遺傳印記動態(tài)突變3.1遺傳印記來自父母雙親的等位基因和染色體區(qū)域的表達不是等同的，這些等位基因在雙親的配子細胞中經(jīng)過修飾，在子代中的表達不一樣。等位基因按孟德爾方式遺傳，但在表達上受傳遞的雙親性別影響。母源印記：母源的等位基因處于失活狀態(tài)父源印記：父源的等位基因處于失活狀態(tài)3.1遺傳印記來自父母雙親的等位基因和染色體區(qū)域的表達不是3.2動態(tài)突變在三核苷酸重復序列擴展所致的疾病中，處于突變狀態(tài)的基因在世代傳遞甚至在體細胞的世代傳遞中表現(xiàn)為不穩(wěn)定，其重復單元的數(shù)目會發(fā)生改變。AUGCGGGAACAGCTGCGGTAAFraXFraXE11BGlnHDSCA1DRPLAMJDSBMAFRDAXF16ADM3.2動態(tài)突變在三核苷酸重復序列擴展所致的疾病中，處于突變4細胞遺傳學檢查系譜分析生物化學檢查2Chapter01遺傳病的常規(guī)診斷31病史、癥狀和體征4細胞遺傳學檢查系譜分析生物化學檢查2Chapter011.核型分析骨髓,胸腹水,活檢組織(如絨毛膜,手術取材的腫瘤組織等),組織培養(yǎng)物(如原代培養(yǎng)的細胞)羊水等都可以作為檢查材料.人外周血淋巴細胞培養(yǎng)PHA淋巴母細胞秋水仙素分裂中期的細胞1.核型分析骨髓,胸腹水,活檢組織(如絨毛膜,手術取材的腫瘤染色體檢查的指征1.明顯的生長發(fā)育異常,多發(fā)畸形,智力低下者;2.多發(fā)性流產(chǎn)和不育的夫婦;3.性腺以及外生殖器發(fā)育異常者;4.原發(fā)性閉經(jīng);5.35歲以上的高齡孕婦;6.已經(jīng)生有染色體異?；純旱姆驄D;7.身材高大,性情粗暴的男性;8.惡性血液病患者9.長期接受X線,電離輻射的人員.染色體檢查的指征1.明顯的生長發(fā)育異常,多發(fā)畸形,智力低下者2.性染色質(zhì)檢查Y染色質(zhì)檢查X染色質(zhì)檢查2.性染色質(zhì)檢查Y染色質(zhì)檢查X染色體Y染色體13號染色體18號染色體21號染色體3.熒光原位雜交技術檢查X染色體Y染色體13號染色體18號染色體21號染色體3.熒光3細胞遺傳學檢查系譜分析生物化學檢查2Chapter01遺傳病的常規(guī)診斷41病史、癥狀和體征3細胞遺傳學檢查系譜分析生物化學檢查2Chapter01生化檢查主要是對蛋白質(zhì)和酶結構或功能的檢測;特別適用于分子病,先天性代謝病,免疫缺陷等遺傳病的檢查；材料主要有血液/活檢組織/糞便/脫落細胞/尿/陰道分泌物等。生化檢查主要是對蛋白質(zhì)和酶結構或功能的檢測;

苯

丙

酮

尿

癥

酶活性檢查

苯丙氨酸羥化酶

肝

臟

血液濾片法

枯草桿菌抑制試驗

FeCl3顯色反應

苯丙酮酸

綠

色

上海：1981～1987年對284,396名新生兒進行PKU篩查，查出PKU患兒15名，高苯丙氨酸血癥4名。苯丙酮尿癥的生化檢查苯丙酮尿癥酶活性檢查苯丙氨酸羥化酶肝臟遺傳病的基因診斷Chapter02遺傳病的基因診斷Chapter02直接以基因作為檢測對象，具有其他臨床診斷方法所沒有的特點：針對性強、靈敏度高、特異性高、適應性強等。1.基因診斷的特點直接以基因作為檢測對象，具有其他臨床診斷方法所沒有的特點：12.基因診斷的基本途徑2.基因診斷的基本途徑2.1直接診斷直接檢測致病基因本身的異常2.1直接診斷直接檢測致病基因本身的異常2.2間接診斷多態(tài)性連鎖分析①選擇要分析的基因座位②確定應用的分析方法③選擇合適的家系④對家系中的各個成員進行表型分析⑤分析、判斷并解釋得到的結果2.2間接診斷多態(tài)性連鎖分析3.基因診斷的方法常用于基因診斷的方法有分子雜交、聚合酶鏈反應（PCR）和聚合酶鏈反應－單鏈構象多態(tài)（PCR-SSCP）分析。此外，近年來隨著分子遺傳學基礎研究的發(fā)展，在DNA多態(tài)性連鎖分析的臨床診斷中，除了應用RFLP分析，還廣泛應用了STR、SNP和DNA芯片技術。3.基因診斷的方法常用于基因診斷的方法有分子雜交、聚合酶鏈反3.1分子雜交（molecularhybridization)分子雜交是現(xiàn)代分子生物學技術的基礎，是根據(jù)堿基互補配對原理，利用標記探針鑒定核酸序列中密切相關的分子方法。在DNA、RNA和蛋白質(zhì)不同水平常用相應的雜交方法有三種，即Southern印跡、Northern印跡和Western印跡。3.1分子雜交（molecularhybridizatiA.Southern印記雜交原理：將待檢測的DNA分子用/不用限制性內(nèi)切酶消化后，通過瓊脂糖凝膠電泳進行分離，繼而將其變性并按其在凝膠中的位置轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素薄膜或尼龍膜上，固定后再與同位素或其它標記物標記的DNA或RNA探針進行反應。如果待檢物中含有與探針互補的序列，則二者通過堿基互補的原理進行結合，游離探針洗滌后用自顯影或其它合適的技術進行檢測，從而顯示出待檢的片段及其相對大小。用途：檢測樣品中的DNA及其含量，了解基因的狀態(tài),如是否有點突變、擴增重排等。A.Southern印記雜交原理：將待檢測的DNA分子用

SouthernBlot操作步驟：DNA瓊脂糖電泳印跡轉(zhuǎn)移預雜交雜交（變性探針）洗膜放射自顯影或顯色SouthernBlot操作步驟：DNA瓊鐮形紅細胞貧血癥的分子診斷1.35Kb1.15KbＣＣＴＧＴＧＧＡＧ脯纈谷ＣＣＴＧＡＧＧＡＧ脯谷谷第１１號染色體ββＳMstII識別順序ββＳMstIIMstIICCTNAGG鐮形紅細胞貧血癥的分子診斷1.35Kb1.15KbＣＣＴＧ1.35Kb1.15Kb凝膠電泳圖HbAHbAHbAHbSHbSHbS1.35Kb1.15Kb凝膠電泳圖HbAHb原理：在變性條件下將待檢的RNA樣品進行瓊脂糖凝膠電泳，繼而按照同SouthernBlot相同的原理進行轉(zhuǎn)膜和用探針進行雜交檢測。用途：檢測樣品中是否含有基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物（mRNA）及其含量。B.Northern印記雜交原理：在變性條件下將待檢的RNA樣品進行瓊脂糖凝膠電泳，繼而操作過程

mRNA提取甲醛變性電泳印跡轉(zhuǎn)移預雜交雜交（變性探針）洗膜放射自顯影或化學發(fā)光操作過程mRNA提取甲醛變性電泳印遺傳病的診斷課件整理3.2PCRPCR-SSCPPCR-RFLPPCR-STR3.2PCRPCR-SSCPA.PCR-SSCP當雙鏈DNA變性為兩條單鏈后，各自會在中性條件下形成各自特定的空間構象，因而在電泳時將在不同的位置上出現(xiàn)各自電泳條帶。如果DNA序列發(fā)生變化，甚至只有一個堿基變化，空間構象也有可能發(fā)生變化，電泳條帶也隨之變化。A.PCR-SSCP當雙鏈DNA變性為兩條單鏈后，各自會在中1989年，Orita等建立的PCR產(chǎn)物單鏈DNA凝膠電泳技術。12345a

b1：正常人2,4,5：純合體患者3：雜合體(2的弟弟)左為泳動變位模式：a正常人；b純合體患者1989年，Orita等建立的PCR產(chǎn)物單鏈DNA凝膠電泳技B.PCR-RFLP應用PCR-RFLP法檢測軟骨發(fā)育不全B.PCR-RFLP應用PCR-RFLP法檢測軟骨發(fā)育不全C.PCR-STR家系STR位點名稱DXS102DXS8094DXS1192DXS1211DXS8013DXS1227家系AYYNYNN家系BYYYYYN家系CNYYYYNC.PCR-STR家系STR位點名稱DXSDXSDXSDXS1，6，11：待診胎兒外祖父；2，7，12：孕婦；3，8，13：待診胎兒4，9，14：待診胎兒外祖母；5，10，15：先證者（待診胎兒舅舅）家系A產(chǎn)前診斷電泳分析圖譜家系A產(chǎn)前診斷電泳分析圖譜3.3基因芯片利用核酸雜交的原理，應用于DNA、RNA的研究基因芯片（genechip）是利用點樣機等機械裝置，在玻璃等支持物表面整齊地點上高密度的、成千上萬個“點”，每個“點”含有可與一種基因雜交的一條ＤＮＡ探針。由于芯片上有序地排列著ＤＮＡ探針，因此也被稱為微陣列（Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ）。在芯片上滴加樣品后，在合適的條件下，樣品中含有的各種核酸片段（ｃＤＮＡ或ｃＲＮＡ）就與相應的探針雜交。由于核酸片段上已標記有熒光素，激發(fā)后產(chǎn)生的熒光強度就與樣品中所含有的相應核酸片段的量成正比，也就代表該基因的表達量。經(jīng)激光共聚焦掃描儀等裝置掃描后，所獲得的信息經(jīng)專用軟件分析處理，即可獲得成千上萬種基因的表達情況。3.3基因芯片利用核酸雜交的原理，應用于DNA、RNA的研基因芯片的應用用于基因轉(zhuǎn)錄水平的檢測、基因組分析和后基因組研究美國斯坦福大學Davis等用PCR法從外周血淋巴細胞cDNA文庫中得到了1046種cDNA片段，制成芯片，然后與熱處理的T淋巴細胞和未處理的T細胞種提取的mRNA反轉(zhuǎn)錄出的單鏈cDNA片段雜交，經(jīng)激光共聚焦掃描系統(tǒng)分析，共發(fā)現(xiàn)17個差異表達的基因，其中11個是被熱誘導的，6個是被熱抑制的。經(jīng)序列分析證實，其中3個是未報導的新基因。基因芯片的應用用于基因轉(zhuǎn)錄水平的檢測、基因組分析和后基因組研4.疾病分子診斷所帶來的問題準確性穩(wěn)定性復雜性基因歧視4.疾病分子診斷所帶來的問題準確性遺傳病診斷的三個層次Chapter03現(xiàn)癥病人診斷癥狀前診斷產(chǎn)前診斷遺傳病診斷的三個層次Chapter03現(xiàn)癥病人診斷1.現(xiàn)癥病人的診斷明確的臨床診斷相對比較容易確定其遺傳規(guī)律遺傳異質(zhì)性患病對后代的影響很難確定1.現(xiàn)癥病人的診斷明確的臨床診斷2.攜帶者的檢出攜帶者攜帶有隱性致病基因，本人表現(xiàn)正常的個體；攜帶有顯性致病基因，但沒有外顯的正常個體；攜帶有致病基因，遲發(fā)個體；染色體平衡易位或倒位的個體。2.攜帶者的檢出攜帶者臨床水平:只能提供線索,不能確診.如部分血友病基因的雜合子具有損傷后輕度出血傾向;細胞水平:染色體檢查,細胞培養(yǎng)和組織化學測定;酶與蛋白質(zhì)水平:主要是生化檢查;基因水平:對單基因病的檢查具有獨特的優(yōu)勢,是以后發(fā)展的方向.臨床水平:只能提供線索,不能確診.如部分血友病基因的雜合子具3.遺傳病的產(chǎn)前診斷3.遺傳病的產(chǎn)前診斷Thanksyouforyourattention!Thanksyou遺傳病的診斷基礎醫(yī)學院醫(yī)學遺傳學教研室徐朝陽遺傳病的診斷基礎醫(yī)學院醫(yī)學遺傳學教研室徐朝陽遺傳病的常規(guī)診斷Chapter01遺傳病的常規(guī)診斷Chapter01341病史、癥狀和體征細胞遺傳學檢查系譜分析生物化學檢查2Chapter01遺傳病的常規(guī)診斷341病史、癥狀和體征細胞遺傳學檢查系譜分析生物化學檢查2C1.病史采集遺傳病的個人病史和家族史的采集與常規(guī)疾病相似，但需問清一些重要的細節(jié)：助孕情況(接受供卵或供精)，流產(chǎn)史，死胎，終止妊娠，兒童的收養(yǎng)或過繼，近親婚配和非婚生情況；對于先天畸形，還需采集懷孕時父母身體健康情況和年齡、妊娠早期歷史、暴露致畸物的情況、胎兒生長和活動情況、詳細的出生記錄，家庭其他成員的異常、發(fā)病年齡、病程特點，未受累者現(xiàn)在的年齡、種族等有關資料。1.病史采集遺傳病的個人病史和家族史的采集與常規(guī)疾病相似，但2.體格檢查因為遺傳病的患者及其家屬常常具有較大的心理壓力，所以檢查病人的時間要充裕，環(huán)境要安靜。遺傳性疾病可能影響許多器官、系統(tǒng)，因此體格檢查必須全面，既要注意明顯的體征、也要注意細微的異常跡象。2.體格檢查因為遺傳病的患者及其家屬常常具有較大的心理壓力，智力低下黃疸白內(nèi)障肝脾腫大智力發(fā)育不全毛發(fā)黃腐臭味苯丙酮尿征？半乳糖血癥？智力低下智力發(fā)育不全苯丙酮尿征？半乳糖血癥？面似滿月生長緩慢哭聲象貓叫貓叫綜合征？副性征發(fā)育不良繼發(fā)/原發(fā)性閉經(jīng)身體矮小肘外翻45，XO?面似滿月貓叫綜合征？副性征發(fā)育不良45，XO?34病史、癥狀和體征細胞遺傳學檢查系譜分析生物化學檢查2Chapter01遺傳病的常規(guī)診斷2134病史、癥狀和體征細胞遺傳學檢查系譜分析生物化學檢查2Ch系譜分析的原則系統(tǒng)完整去偽存真注意新的基因突變系譜分析的原則系統(tǒng)完整1.孟德爾遺傳病（1）常染色體顯性遺傳病(AD)（2）常染色體隱性遺傳病(AR)（3）X連鎖隱性遺傳病(XR)（4）X連鎖顯性遺傳病(XD)（5）Y連鎖遺傳病1.孟德爾遺傳?。?）常染色體顯性遺傳病(AD)（2）常染色1.1常染色體顯性遺傳病基因多效性(pleiotropy)：是指某一基因與多種不同的看起來似乎無關的表型有關。多效性等位基因的每種效應都可表現(xiàn)為不同的外顯率和不同的表現(xiàn)度。環(huán)境因素的影響：內(nèi)在的和外在的體細胞突變：體細胞突變的“二次打擊”動態(tài)突變：不穩(wěn)定的三核苷酸重復序列的預期現(xiàn)象遺傳背景的影響：與其他基因座發(fā)生相互作用1.1常染色體顯性遺傳病基因多效性(pleiotropy)1.2常染色體隱性遺傳病(AR)遺傳異質(zhì)性是產(chǎn)生AR表型表達不規(guī)律的原因先天聾啞1.2常染色體隱性遺傳病(AR)遺傳異質(zhì)性是產(chǎn)生AR表型表1.3X連鎖顯性遺傳病X連鎖的女性雜合子，由于X染色體的Lyon化導致的染色體隨機失活使女性的癥狀不像男性那么嚴重。1.3X連鎖顯性遺傳病X連鎖的女性雜合子，由于X染色體的L1.4X連鎖隱性遺傳病臨床表型雜合子(manifestingheterzygote)：X連鎖基因的女性雜合攜帶者，由于X染色體的隨機Lyon化，導致部分組織的細胞大部分突變基因所在的染色體處于活躍狀態(tài)而患病。1.4X連鎖隱性遺傳病臨床表型雜合子(manifestin1.5Y連鎖遺傳病很少見。全男性傳遞。1.5Y連鎖遺傳病很少見。2.非孟德爾遺傳?。?）線粒體遺傳病

(2)多基因病2.非孟德爾遺傳?。?）線粒體遺傳病(2)多基因病母系遺傳，女性患者的子女都可能發(fā)病。晚發(fā)，進行性。2.1線粒體遺傳病母系遺傳，女性患者的子女都可能發(fā)病。2.1線粒體遺傳病2.2多基因病許多出生缺陷和慢性晚發(fā)型疾病，家族性聚集性類似于孟德爾遺傳，但不嚴格遵循孟德爾分離率。近期研究結果表明：原來認為是多基因病的一些疾病中，相當一部分是由于遺傳異質(zhì)性所致。2.2多基因病許多出生缺陷和慢性晚發(fā)型疾病，家族性聚集性類3.具有特殊遺傳方式的疾病遺傳印記動態(tài)突變3.具有特殊遺傳方式的疾病遺傳印記動態(tài)突變3.1遺傳印記來自父母雙親的等位基因和染色體區(qū)域的表達不是等同的，這些等位基因在雙親的配子細胞中經(jīng)過修飾，在子代中的表達不一樣。等位基因按孟德爾方式遺傳，但在表達上受傳遞的雙親性別影響。母源印記：母源的等位基因處于失活狀態(tài)父源印記：父源的等位基因處于失活狀態(tài)3.1遺傳印記來自父母雙親的等位基因和染色體區(qū)域的表達不是3.2動態(tài)突變在三核苷酸重復序列擴展所致的疾病中，處于突變狀態(tài)的基因在世代傳遞甚至在體細胞的世代傳遞中表現(xiàn)為不穩(wěn)定，其重復單元的數(shù)目會發(fā)生改變。AUGCGGGAACAGCTGCGGTAAFraXFraXE11BGlnHDSCA1DRPLAMJDSBMAFRDAXF16ADM3.2動態(tài)突變在三核苷酸重復序列擴展所致的疾病中，處于突變4細胞遺傳學檢查系譜分析生物化學檢查2Chapter01遺傳病的常規(guī)診斷31病史、癥狀和體征4細胞遺傳學檢查系譜分析生物化學檢查2Chapter011.核型分析骨髓,胸腹水,活檢組織(如絨毛膜,手術取材的腫瘤組織等),組織培養(yǎng)物(如原代培養(yǎng)的細胞)羊水等都可以作為檢查材料.人外周血淋巴細胞培養(yǎng)PHA淋巴母細胞秋水仙素分裂中期的細胞1.核型分析骨髓,胸腹水,活檢組織(如絨毛膜,手術取材的腫瘤染色體檢查的指征1.明顯的生長發(fā)育異常,多發(fā)畸形,智力低下者;2.多發(fā)性流產(chǎn)和不育的夫婦;3.性腺以及外生殖器發(fā)育異常者;4.原發(fā)性閉經(jīng);5.35歲以上的高齡孕婦;6.已經(jīng)生有染色體異?；純旱姆驄D;7.身材高大,性情粗暴的男性;8.惡性血液病患者9.長期接受X線,電離輻射的人員.染色體檢查的指征1.明顯的生長發(fā)育異常,多發(fā)畸形,智力低下者2.性染色質(zhì)檢查Y染色質(zhì)檢查X染色質(zhì)檢查2.性染色質(zhì)檢查Y染色質(zhì)檢查X染色體Y染色體13號染色體18號染色體21號染色體3.熒光原位雜交技術檢查X染色體Y染色體13號染色體18號染色體21號染色體3.熒光3細胞遺傳學檢查系譜分析生物化學檢查2Chapter01遺傳病的常規(guī)診斷41病史、癥狀和體征3細胞遺傳學檢查系譜分析生物化學檢查2Chapter01生化檢查主要是對蛋白質(zhì)和酶結構或功能的檢測;特別適用于分子病,先天性代謝病,免疫缺陷等遺傳病的檢查；材料主要有血液/活檢組織/糞便/脫落細胞/尿/陰道分泌物等。生化檢查主要是對蛋白質(zhì)和酶結構或功能的檢測;

苯

丙

酮

尿

癥

酶活性檢查

苯丙氨酸羥化酶

肝

臟

血液濾片法

枯草桿菌抑制試驗

FeCl3顯色反應

苯丙酮酸

綠

色

上海：1981～1987年對284,396名新生兒進行PKU篩查，查出PKU患兒15名，高苯丙氨酸血癥4名。苯丙酮尿癥的生化檢查苯丙酮尿癥酶活性檢查苯丙氨酸羥化酶肝臟遺傳病的基因診斷Chapter02遺傳病的基因診斷Chapter02直接以基因作為檢測對象，具有其他臨床診斷方法所沒有的特點：針對性強、靈敏度高、特異性高、適應性強等。1.基因診斷的特點直接以基因作為檢測對象，具有其他臨床診斷方法所沒有的特點：12.基因診斷的基本途徑2.基因診斷的基本途徑2.1直接診斷直接檢測致病基因本身的異常2.1直接診斷直接檢測致病基因本身的異常2.2間接診斷多態(tài)性連鎖分析①選擇要分析的基因座位②確定應用的分析方法③選擇合適的家系④對家系中的各個成員進行表型分析⑤分析、判斷并解釋得到的結果2.2間接診斷多態(tài)性連鎖分析3.基因診斷的方法常用于基因診斷的方法有分子雜交、聚合酶鏈反應（PCR）和聚合酶鏈反應－單鏈構象多態(tài)（PCR-SSCP）分析。此外，近年來隨著分子遺傳學基礎研究的發(fā)展，在DNA多態(tài)性連鎖分析的臨床診斷中，除了應用RFLP分析，還廣泛應用了STR、SNP和DNA芯片技術。3.基因診斷的方法常用于基因診斷的方法有分子雜交、聚合酶鏈反3.1分子雜交（molecularhybridization)分子雜交是現(xiàn)代分子生物學技術的基礎，是根據(jù)堿基互補配對原理，利用標記探針鑒定核酸序列中密切相關的分子方法。在DNA、RNA和蛋白質(zhì)不同水平常用相應的雜交方法有三種，即Southern印跡、Northern印跡和Western印跡。3.1分子雜交（molecularhybridizatiA.Southern印記雜交原理：將待檢測的DNA分子用/不用限制性內(nèi)切酶消化后，通過瓊脂糖凝膠電泳進行分離，繼而將其變性并按其在凝膠中的位置轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素薄膜或尼龍膜上，固定后再與同位素或其它標記物標記的DNA或RNA探針進行反應。如果待檢物中含有與探針互補的序列，則二者通過堿基互補的原理進行結合，游離探針洗滌后用自顯影或其它合適的技術進行檢測，從而顯示出待檢的片段及其相對大小。用途：檢測樣品中的DNA及其含量，了解基因的狀態(tài),如是否有點突變、擴增重排等。A.Southern印記雜交原理：將待檢測的DNA分子用

SouthernBlot操作步驟：DNA瓊脂糖電泳印跡轉(zhuǎn)移預雜交雜交（變性探針）洗膜放射自顯影或顯色SouthernBlot操作步驟：DNA瓊鐮形紅細胞貧血癥的分子診斷1.35Kb1.15KbＣＣＴＧＴＧＧＡＧ脯纈谷ＣＣＴＧＡＧＧＡＧ脯谷谷第１１號染色體ββＳMstII識別順序ββＳMstIIMstIICCTNAGG鐮形紅細胞貧血癥的分子診斷1.35Kb1.15KbＣＣＴＧ1.35Kb1.15Kb凝膠電泳圖HbAHbAHbAHbSHbSHbS1.35Kb1.15Kb凝膠電泳圖HbAHb原理：在變性條件下將待檢的RNA樣品進行瓊脂糖凝膠電泳，繼而按照同SouthernBlot相同的原理進行轉(zhuǎn)膜和用探針進行雜交檢測。用途：檢測樣品中是否含有基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物（mRNA）及其含量。B.Northern印記雜交原理：在變性條件下將待檢的RNA樣品進行瓊脂糖凝膠電泳，繼而操作過程

mRNA提取甲醛變性電泳印跡轉(zhuǎn)移預雜交雜交（變性探針）洗膜放射自顯影或化學發(fā)光操作過程mRNA提取甲醛變性電泳印遺傳病的診斷課件整理3.2PCRPCR-SSCPPCR-RFLPPCR-STR3.2PCRPCR-SSCPA.PCR-SSCP當雙鏈DNA變性為兩條單鏈后，各自會在中性條件下形成各自特定的空間構象，因而在電泳時將在不同的位置上出現(xiàn)各自電泳條帶。如果DNA序列發(fā)生變化，甚至只有一個堿基變化，空間構象也有可能發(fā)生變化，電泳條帶也隨之變化。A.PCR-SSCP當雙鏈DNA變性為兩條單鏈后，各自會在中1989年，Orita等建立的PCR產(chǎn)物單鏈DNA凝膠電泳技術。12345a

b1：正常人2,4,5：純合體患者3：雜合體(2的弟弟)左為泳動變位模式：a正常人；b純合體患者1989年，Orita等建立的PCR產(chǎn)物單鏈DNA凝膠電泳技B.PCR-RFLP應用PCR-RFLP法檢測軟骨發(fā)育不全B.PCR-RFLP應用PCR-RFLP法檢測軟骨發(fā)育不全C.PCR-STR家系STR位點名稱DXS102DXS8094DXS1192DXS1211DXS8013D