腫瘤相關(guān)基因課件

腫瘤相關(guān)基因腫瘤相關(guān)基因1腫瘤相關(guān)基因癌基因抑癌基因腫瘤轉(zhuǎn)移基因腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因腫瘤相關(guān)基因癌基因2癌基因（oncogene）病毒癌基因

virusoncogene（v-onc）細(xì)胞癌基因

cellularoncogene（c-onc）原癌基因proto-onc癌基因（oncogene）病毒癌基因

virusoncog3病毒癌基因

virusoncogene（v-onc）1968年Duesberg等首次發(fā)現(xiàn)Rous肉瘤病毒基因組編碼酪氨酸蛋白激酶基因，證實(shí)它在細(xì)胞轉(zhuǎn)化中起關(guān)鍵作用來(lái)自病毒，因而被命名為病毒癌基因病毒癌基因

virusoncogene（v-onc）1964細(xì)胞癌基因

cellularoncogene（c-onc）1972年Bishop核酸分子雜交法證實(shí)：幾乎在所有高等動(dòng)物細(xì)胞基因組中，都有和v-onc相似的DNA序列這些序列是細(xì)胞基因組的成員之一，其編碼的產(chǎn)物具有重要的功能細(xì)胞癌基因在正常情況下的表達(dá)有時(shí)間、空間限制，表達(dá)產(chǎn)物參與細(xì)胞分化、增殖細(xì)胞癌基因

cellularoncogene（c-onc）5原癌基因（proto-onc）未激活的細(xì)胞癌基因在人體正常細(xì)胞中存在是一種正?；蜃饔茫赫{(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)和分化廣泛存在于生物界中，從酵母到人的細(xì)胞中都存在原癌基因（proto-onc）未激活的細(xì)胞癌基因6原癌基因的分類按原癌基因的結(jié)構(gòu)、產(chǎn)物的功能、所在的位置分為下列四類：

1.蛋白激酶類

2.信息傳遞蛋白類

3.生長(zhǎng)因子及其受體類

4.核內(nèi)蛋白類原癌基因的分類按原癌基因的結(jié)構(gòu)、產(chǎn)物的功能、所在的位置分為下7細(xì)胞癌基因與致癌癌基因在生物進(jìn)化中具高度保守性正常細(xì)胞中的癌基因和腫瘤細(xì)胞中的癌基因的核苷酸順序十分相似，后者可使NIH3T3細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，前者需經(jīng)激活后才具有轉(zhuǎn)化能力說(shuō)明：在正常情況下細(xì)胞癌基因不致癌，生理?xiàng)l件下內(nèi)外環(huán)境中的某些刺激可激活癌基因，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和信息傳遞細(xì)胞癌基因與致癌癌基因在生物進(jìn)化中具高度保守性8通常認(rèn)為：癌基因并不是腫瘤所特有是細(xì)胞的正?；蚰苷T導(dǎo)正常細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化，并使正常細(xì)胞獲得一個(gè)或多個(gè)新的生物特性的基因只有在被激活后發(fā)生異常表達(dá)時(shí)，才會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化通常認(rèn)為：癌基因并不是腫瘤所特有9細(xì)胞癌基因的生理功能主要表現(xiàn)為：①調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)②參與細(xì)胞分化和發(fā)育過(guò)程具有正常生理功能的同時(shí)又具有潛在致癌能力的原癌基因，其致癌潛能的發(fā)揮，首先需要被激活細(xì)胞癌基因的生理功能主要表現(xiàn)為：①調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)10常見的激活因素：病毒

化學(xué)物質(zhì)

輻射常見的激活因素：病毒

11原癌基因的激活機(jī)理1.DNA重排2.基因放大3.點(diǎn)突變4.其它調(diào)控的異常原癌基因的激活機(jī)理1.DNA重排12DNA重排插入具有高活性的啟動(dòng)子或增強(qiáng)子，使原癌基因持久、過(guò)量地表達(dá)負(fù)調(diào)控區(qū)的失活或丟失

DNA重排插入具有高活性的啟動(dòng)子或增強(qiáng)子，使原癌基因持久、13DNA重排

1插入具有高活性的啟動(dòng)子或增強(qiáng)子，使原癌基因持久、過(guò)量地表達(dá)插入的啟動(dòng)子或增強(qiáng)子來(lái)自細(xì)胞外（外源性）如：雞B淋巴細(xì)胞瘤由于ALV的LTR插入c-myc的旁側(cè)（5’或3’端），使c-myc過(guò)量表達(dá)插入的啟動(dòng)子或增強(qiáng)子來(lái)自細(xì)胞內(nèi)（內(nèi)源性）如：內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒的LTRDNA重排

1插入具有高活性的啟動(dòng)子或增強(qiáng)子，使原癌基14染色體易位是原癌基因DNA重排的典型例子人B淋巴瘤中免疫球蛋白基因與c-myc的重排，使c-myc激活c-myc基因定位于8q24，Ig、Ig、Igλ鏈的基因位點(diǎn)分別定位在14q32、2p13和22q11c-myc易位到Ig位點(diǎn)的高活性轉(zhuǎn)錄區(qū)，從而組成一個(gè)高轉(zhuǎn)活性的重排基因，啟動(dòng)c-myc轉(zhuǎn)錄，使c-myc表達(dá)增強(qiáng)，促進(jìn)細(xì)胞惡變，最后導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生DNA重排

1插入具有高活性的啟動(dòng)子或增強(qiáng)子，使原癌基因持

久、過(guò)量地表達(dá)染色體易位是原癌基因DNA重排的典型例子DNA重排

115腫瘤相關(guān)基因課件16DNA重排

2負(fù)調(diào)控區(qū)的失活或丟失小鼠c-myc，c-fos，c-mos等原癌基因在旁側(cè)順序具有抑制轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)的負(fù)調(diào)控區(qū)人c-myc的負(fù)調(diào)控區(qū)在5’端428-1188bp處，而在B淋巴瘤中，該區(qū)有多點(diǎn)突變或部分丟失Duesberg提出：1號(hào)外顯子被切斷時(shí)，ras基因即被激活雖然這一結(jié)論還有待更多實(shí)驗(yàn)證實(shí)；但是，原癌基因上游或下游旁側(cè)順序存在負(fù)調(diào)控區(qū)（并不是個(gè)別現(xiàn)象），因而使原癌基因被激活的可能性大為減少DNA重排

2負(fù)調(diào)控區(qū)的失活或丟失小鼠c-myc，c17點(diǎn)突變

在ras基因族，在人體腫瘤中已從膀胱、小細(xì)胞肺癌（Ha-ras，Kit-ras），胃（N-ras），乳腺（Ha-ras）等證明在12或61號(hào)編碼子出現(xiàn)點(diǎn)突變所導(dǎo)致一個(gè)氨基酸的置換突變（一個(gè)氨基酸置換）可使其編碼產(chǎn)物蛋白p21的GTPase活性明顯下降，從而影響p21的生物學(xué)活性點(diǎn)突變?cè)趓as基因族，在人體腫瘤中已從膀胱、小細(xì)胞肺18基因放大

基因擴(kuò)增，可導(dǎo)致基因過(guò)量表達(dá)基因放大一般被認(rèn)為與惡性演進(jìn)有關(guān)，未必是惡性早期的改變?cè)谌梭w腫瘤中，如：人肝癌中出現(xiàn)N-ras重排及其基因放大小細(xì)胞肺癌中c-myc及L-myc基因放大與癌轉(zhuǎn)移可能有關(guān)神經(jīng)母細(xì)胞瘤中N-myc基因放大明顯與病程發(fā)展有關(guān)基因放大基因擴(kuò)增，可導(dǎo)致基因過(guò)量表達(dá)19其它調(diào)控的異常

反式（Trans）調(diào)控系統(tǒng)轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控異常其它調(diào)控的異常反式（Trans）調(diào)控系統(tǒng)20反式（Trans）調(diào)控系統(tǒng)已證明某些基因產(chǎn)物可影響其它基因的轉(zhuǎn)錄，如：病毒HTLV-Ⅰ，Ⅱ中TAT（LOR）區(qū)SV40中的某些片段RSV的gag區(qū)原癌基因很可能會(huì)接受其它基因（包括病毒的基因產(chǎn)物）的控制或影響值得注意的是：v-myc進(jìn)入細(xì)胞后，可關(guān)閉細(xì)胞本身c-myc的表達(dá)，同時(shí)，c-myc激活后亦可使另一個(gè)正常表達(dá)的c-myc等位基因關(guān)閉，提示：myc產(chǎn)物或由myc誘導(dǎo)產(chǎn)生的物質(zhì)對(duì)c-myc的轉(zhuǎn)錄發(fā)生Trans的負(fù)控制反式（Trans）調(diào)控系統(tǒng)已證明某些基因產(chǎn)物可影響其它基因的21轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控異常

成纖維細(xì)胞經(jīng)生長(zhǎng)因子處理后，結(jié)果：c-myc的mRNA量增高轉(zhuǎn)錄水平并不改變說(shuō)明：mRNA轉(zhuǎn)錄后加工或穩(wěn)定性的改變基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控：當(dāng)前了解甚少，原癌基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的異常了解的更少轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控異常

成纖維細(xì)胞經(jīng)生長(zhǎng)因子處理后，結(jié)果：22抑癌基因

tumorsuppressorgene腫瘤抑制基因（抗癌基因）最早由A.KnudsonJr.提出細(xì)胞內(nèi)一類抑制腫瘤發(fā)生、生長(zhǎng)的基因，最近又發(fā)展為指能對(duì)抗癌基因作用的基因在生物體內(nèi)與癌基因功能相抵抗，共同保持生物體內(nèi)正負(fù)信號(hào)相互作用的相對(duì)穩(wěn)定腫瘤抑制基因的失活和癌基因的激活都是癌化過(guò)程的一部分抑癌基因

tumorsuppressorgene腫瘤抑23抗癌基因主要功能(1)誘導(dǎo)終末分化(2)維持基因穩(wěn)定(3)觸發(fā)衰老，誘導(dǎo)細(xì)胞程序性死亡(4)調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)(5)抑制蛋白激酶活性(6)改變DNA甲基化酶活性(7)調(diào)節(jié)組織蛋白酶活性(8)調(diào)節(jié)血管形成(9)促進(jìn)細(xì)胞間聯(lián)系抗癌基因主要功能(1)誘導(dǎo)終末分化24腫瘤細(xì)胞

轉(zhuǎn)移基因與轉(zhuǎn)移抑制基因腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移基因的激活和/或轉(zhuǎn)移抑制基因失活均可誘發(fā)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移表型而導(dǎo)致轉(zhuǎn)移的發(fā)生原發(fā)部位腫瘤組織中具有轉(zhuǎn)移潛性的細(xì)胞群是腫瘤轉(zhuǎn)移的細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)

腫瘤細(xì)胞

轉(zhuǎn)移基因與轉(zhuǎn)移抑制基因腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移基因的激活和/或25目前發(fā)現(xiàn)：癌基因有100多個(gè)抗癌基因有7個(gè)轉(zhuǎn)移基因（metastasisgene）有一些?直接促進(jìn)轉(zhuǎn)移發(fā)生的關(guān)鍵基因，其存在或表達(dá)增強(qiáng)會(huì)引起侵襲轉(zhuǎn)移的發(fā)生轉(zhuǎn)移相關(guān)基因（metastasis-asscciatedgene）有一些?只涉及轉(zhuǎn)移的某個(gè)階段，并非參與整個(gè)轉(zhuǎn)移過(guò)程目前發(fā)現(xiàn)：癌基因有100多個(gè)26目前發(fā)現(xiàn)：轉(zhuǎn)移抑制基因（metastasissuppressorgene）有一些？Soble認(rèn)為：凡是能抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的基因均可命名為轉(zhuǎn)移抑制基因抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移表型研究表明，腫瘤的轉(zhuǎn)移與轉(zhuǎn)移基因激活或轉(zhuǎn)移抑制基因失活有關(guān)，是多種轉(zhuǎn)移相關(guān)基因及轉(zhuǎn)移抑制相關(guān)基因綜合作用的結(jié)果目前發(fā)現(xiàn)：轉(zhuǎn)移抑制基因（metastasissuppres27腫瘤相關(guān)基因的發(fā)現(xiàn)和深入研究的意義：——提高了人們的認(rèn)識(shí)細(xì)胞增殖與分化的調(diào)控機(jī)制惡性腫瘤的發(fā)生，發(fā)展規(guī)律腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移機(jī)制——為腫瘤的診斷提供了嶄新的途徑腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移與某些特定的癌基因密切相關(guān)，對(duì)這些癌基因及其產(chǎn)物的檢測(cè)，為腫瘤的臨床診斷提供了一條嶄新的途徑，必將受到臨床實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員和腫瘤工作者的重視腫瘤相關(guān)基因的發(fā)現(xiàn)和深入研究的意義：——提高了人們的認(rèn)識(shí)28ras癌基因

—參與人類腫瘤的發(fā)生發(fā)展最初在急性轉(zhuǎn)化性逆轉(zhuǎn)錄病毒實(shí)驗(yàn)中，從Harvey、Kirsten兩株大鼠肉瘤病毒中克隆出的轉(zhuǎn)化基因自82年Weinberg等人發(fā)現(xiàn)人膀胱癌細(xì)胞系中有活化的H-ras基因后，對(duì)ras在人類腫瘤發(fā)生發(fā)展中所起的作用引起了極大關(guān)注目前研究認(rèn)為：ras癌基因參與細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的調(diào)控參與多種腫瘤的形成與發(fā)展ras癌基因

—參與人類腫29ras基因家族家族中與人類腫瘤相關(guān)的特征性基因有：

H-ras定位于11號(hào)染色體是大鼠肉瘤病毒的轉(zhuǎn)化基因

K-ras定位于12號(hào)染色體是大鼠肉瘤病毒的轉(zhuǎn)化基因N-ras定位于1號(hào)染色體人神經(jīng)母細(xì)胞瘤中分離得到ras基因家族家族中與人類腫瘤相關(guān)的特征性基因有：30ras基因家族ras家族的基因所共有的特征為：

1.基因組中有5個(gè)外顯子：4個(gè)編碼的外顯子和1個(gè)5’端非編碼外顯子

2.外顯子所編碼的蛋白為188-189個(gè)氨基酸殘基，分子量為21kD（p21蛋白），此蛋白具有高度特異性和同源性，尤其在氨基酸序列的前80個(gè)氨基酸殘基中，幾乎無(wú)種屬間差別，具有高度保守性ras基因家族ras家族的基因所共有的特征為：31正常ras蛋白具有以下特點(diǎn)：p21（ras蛋白）位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)面，以軟脂酸共價(jià)鍵形式固定于脂質(zhì)雙層膜的內(nèi)表面對(duì)GTP和GDP具有高度親和力，并具有同源性GTP酶的活性

正常ras蛋白具有以下特點(diǎn)：p21（ras蛋白）位于細(xì)胞膜的32ras蛋白ras蛋白的生化性質(zhì)與G蛋白非常類似G蛋白具有從膜結(jié)合受體到腺苷酸環(huán)化過(guò)程的信號(hào)傳導(dǎo)作用，提示：ras蛋白可能也具有信號(hào)傳導(dǎo)通路的作用目前，尚未發(fā)現(xiàn)ras蛋白作用的特異受體和靶細(xì)胞ras蛋白ras蛋白的生化性質(zhì)與G蛋白非常類似33G蛋白G蛋白34G蛋白G蛋白35ras蛋白有人推測(cè)：在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中ras蛋白作用的靶分子：很可能是磷脂酶Cras蛋白有人推測(cè)：在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中36磷脂酶C

——信號(hào)傳遞途徑的一個(gè)重要成份被激活后的磷脂酶CPIP2

IP3+DGIP3和DG是促進(jìn)細(xì)胞增殖的第二信使現(xiàn)已證實(shí)，在ras癌基因轉(zhuǎn)化的細(xì)胞中IP3，DG和PIP2的含量均明顯多于未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞磷脂酶C

——信號(hào)傳遞途徑的一個(gè)重要成份被激活后的磷脂酶37腫瘤相關(guān)基因課件38腫瘤相關(guān)基因課件39ras基因激活機(jī)制：原癌基因的激活過(guò)程稱為活化活化后的ras基因能使NIH3T3細(xì)胞系轉(zhuǎn)化為腫瘤細(xì)胞ras基因活化的主要方式有：(1)編碼區(qū)內(nèi)的突變(2)插入激活ras基因激活機(jī)制：原癌基因的激活過(guò)程稱為活化40突變激活

——ras基因家族的主要激活方式在實(shí)體瘤中占10～15%目前較公認(rèn)：ras基因突變點(diǎn)位于三種ras基因的第12、13、59或61位氨基酸密碼子Seeburg等采用定點(diǎn)突變技術(shù)，對(duì)H-ras基因第12位密碼子——甘氨酸的所有置換氨基酸的可能性進(jìn)行了分析，結(jié)果表明，此位點(diǎn)上，除置換氨基酸為脯氨酸外，其余的置換氨基酸均具有轉(zhuǎn)化潛能，但有程度差異到目前為止，在腫瘤中尚未發(fā)現(xiàn)二個(gè)或三個(gè)位點(diǎn)同時(shí)突變突變激活

——ra41插入激活ras基因附近插入一個(gè)強(qiáng)啟動(dòng)子（promoter）或增強(qiáng)子（enhaner）可使ras基因表達(dá)增強(qiáng)插入激活ras基因附近插入一個(gè)強(qiáng)啟動(dòng)子（promoter）42基因擴(kuò)增，堿基缺失正?；虻臄U(kuò)增或非編碼外顯子的缺失也能使ras基因呈高表達(dá)但這兩種方式在ras基因激活中較少見

基因擴(kuò)增，堿基缺失正?；虻臄U(kuò)增或非編碼外顯子的缺失也能使43ras蛋白目前認(rèn)為：兩種形式活化非活化通常情況下，細(xì)胞內(nèi)的ras蛋白分子處于非活化狀態(tài)ras蛋白目前認(rèn)為：兩種形式44非活化狀態(tài)下的ras蛋白特征:具有GTP酶活性能夠與GDP結(jié)合當(dāng)ras蛋白受到信號(hào)傳遞通道上游某一外界因子的刺激時(shí)，使GDP磷酸化變成GTP，隨后ras蛋白發(fā)生構(gòu)象改變，成為活化狀態(tài)活化的ras蛋白與效應(yīng)分子相互作用，實(shí)現(xiàn)生長(zhǎng)信號(hào)的傳遞，而且這種作用發(fā)生，活化的ras蛋白會(huì)迅速失活，轉(zhuǎn)變?yōu)榕cGDP結(jié)合的非活化形式此過(guò)程主要是ras蛋白自身的GTP酶作用，它能催化GTP水解，使活化ras蛋白能立即轉(zhuǎn)變成為非活化狀態(tài)的ras蛋白非活化狀態(tài)下的ras蛋白特征:具有GTP酶活性45活化的ras蛋白的生化性質(zhì)ras基因的任何突變使正常的ras蛋白轉(zhuǎn)變?yōu)槟軌蚴筃IH3T3細(xì)胞轉(zhuǎn)化的蛋白，從生化角度上講，這種突變激活可分為二種(1)突變失去內(nèi)在的GTP酶活性(2)突變改變了對(duì)GDP和GTP的親和力ras蛋白功能取決于編碼蛋白的基因序列和與之密切相關(guān)的結(jié)構(gòu)域突變激活的常見位點(diǎn)多集中在GTP、GDP結(jié)合的domain附近結(jié)構(gòu)的改變導(dǎo)致了ras蛋白的功能異?；罨膔as蛋白的生化性質(zhì)ras基因的任何突變使正常的ras46ras基因的突變r(jià)as基因的突變：擾亂正常狀態(tài)下活化與非活化ras蛋白的這種平衡機(jī)制，使正常非活化的ras蛋白轉(zhuǎn)變成活化形式實(shí)際上，ras基因的12、13、61位密碼子的活化突變，并不影響p21蛋白與GDP和GTP的結(jié)合，但卻降低了p21蛋白自身GTP酶活性，使其水解GTP的速效大為降低，從而使ras蛋白維持于活化狀態(tài)，不斷激活靶分子，引起信號(hào)傳導(dǎo)的持續(xù)效應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞大量增殖，而發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化ras基因的突變r(jià)as基因的突變：擾亂正常狀態(tài)下活化與非活47理論上

ras蛋白維持于活化狀態(tài)有三種可能機(jī)制(1)ras蛋白自身GTP酶活性降低，使GTP水解減少(2)GDP與GTP間的交換增加(3)誘導(dǎo)了不需與鳥苷酸結(jié)合的ras蛋白的活化構(gòu)象有人推測(cè)：ras蛋白的調(diào)節(jié)機(jī)制可能與其本身所具有的一種“開放”、“關(guān)閉”構(gòu)型有關(guān)，構(gòu)型處于“開放”時(shí)，能活躍地傳導(dǎo)特定的生長(zhǎng)信號(hào)；而“關(guān)閉”時(shí)則不能傳導(dǎo)。如關(guān)鍵位點(diǎn)（12、13或61位密碼子）發(fā)生了點(diǎn)突變，則使這種構(gòu)型的開關(guān)不能再回轉(zhuǎn)到閉合狀態(tài)，使活化的ras蛋白持續(xù)傳導(dǎo)一種不適當(dāng)?shù)纳L(zhǎng)信號(hào)理論上

ras蛋白維持于活化狀態(tài)有三種可能機(jī)制(1)ras48ras基因與人類腫瘤82年以來(lái)，在膀胱癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、腎癌、肝癌、肺癌、胰腺癌、胃癌、及造血系腫統(tǒng)瘤中，均檢出了ras癌基因的異常Pulciani等人研究表明，被檢腫瘤DNA中所含活化ras基因僅占10～20%（似乎ras癌基因在人類腫瘤發(fā)生發(fā)展中并非起主要作用）事實(shí)上，ras癌基因參與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展，只不過(guò)突變率相差很大ras基因與人類腫瘤82年以來(lái)，在膀胱癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、49ras基因與人類腫瘤不同腫瘤類型，ras基因的突變率相差明顯，如：最高的是在胰腺癌中（90%），其次是甲狀腺癌（53%）和結(jié)腸癌（47%）突變r(jià)as基因的種類與某些腫病類型密切相關(guān)，即有優(yōu)勢(shì)激活現(xiàn)象。如胰腺癌、結(jié)腸癌、肺癌等以K-ras突變?yōu)橹?，造血系統(tǒng)腫瘤多發(fā)現(xiàn)N-ras的突變，泌尿系腫瘤則以H-ras突變?yōu)橹鱮as基因與人類腫瘤不同腫瘤類型，ras基因的突變率相差明50ras基因與人類腫瘤目前的資料表明H-ras和K-ras的表達(dá)不僅與膀胱癌、腎盂癌、肺癌、結(jié)腸癌有密切的關(guān)系，而且也與膽囊癌、胰腺癌、腎母細(xì)胞癌、慢性淋巴細(xì)胞白血病、黑色素瘤形成密切相關(guān)N-ras表達(dá)水平上升主要發(fā)生在造血系統(tǒng)的惡性腫瘤中，如APL、AML、BL，但在神經(jīng)母細(xì)胞瘤、纖維肉瘤，橫紋肌肉瘤中的表達(dá)也有一定的上升，并認(rèn)為是這些腫瘤形成的主要原因檢測(cè)ras突變對(duì)了解腫瘤的發(fā)生發(fā)展，以及監(jiān)測(cè)惡性腫瘤的治療效果具有重大意義ras基因與人類腫瘤目前的資料表明51c-myc癌基因c-myc基因是myc基因家族的重要成員之一c-myc基因是一種可易位基因是一種多種物質(zhì)調(diào)節(jié)的可調(diào)節(jié)基因是一種可使細(xì)胞無(wú)限增殖，促進(jìn)細(xì)胞分裂的基因myc基因參與細(xì)胞凋亡，c-myc基因與多種腫瘤發(fā)生發(fā)展有關(guān)c-myc癌基因c-myc基因是myc基因家族的重要成員之52人c-myc基因：定位于8q24Ig、Ig、Igλ鏈的基因位點(diǎn)分別定位在14q32、2p13和22q11c-myc易位到Ig位點(diǎn)的高活性轉(zhuǎn)錄區(qū)，從而組成一個(gè)高轉(zhuǎn)活性的重排基因，啟動(dòng)c-myc轉(zhuǎn)錄，使c-myc表達(dá)增強(qiáng)，促進(jìn)細(xì)胞惡變，最后導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生人c-myc基因：定位于8q2453腫瘤相關(guān)基因課件54c-myc癌基因結(jié)構(gòu)c-myc與禽類髓細(xì)胞病毒（AMN）MC-29的v-myc同源c-myc基因由3個(gè)外顯子及2個(gè)內(nèi)含子組成第一個(gè)外顯子不編碼，只起調(diào)節(jié)作用只有外顯子2和3與v-myc相對(duì)應(yīng)，編碼一個(gè)439個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)c-myc癌基因結(jié)構(gòu)c-myc與禽類髓細(xì)胞病毒（AMN）M55c-myc癌基因結(jié)構(gòu)c-myc基因由啟動(dòng)子P1或P2起始轉(zhuǎn)錄，并在第一內(nèi)含子中有一個(gè)潛在啟動(dòng)子P，當(dāng)?shù)谝粋€(gè)內(nèi)含子發(fā)生斷裂時(shí)，P可被激活而成為一個(gè)異常轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)，但蛋白合成起始位點(diǎn)不變，并與正常c-myc基因產(chǎn)物相同不同的動(dòng)物中，c-myc基因的第2、3外顯子具有高度保守性，而第1外顯子則有較大的差異小鼠和人的外顯子1有70%的同源性c-myc癌基因結(jié)構(gòu)c-myc基因由啟動(dòng)子P1或P2起始轉(zhuǎn)56c-myc癌基因的表達(dá)c-myc基因的表達(dá)與細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)有關(guān)：生長(zhǎng)因子刺激成纖維細(xì)胞，c-myc表達(dá)增強(qiáng)相反，在細(xì)胞分化時(shí)c-myc表達(dá)降低在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，用c-myc表達(dá)結(jié)構(gòu)或反義寡脫氧核酸進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)c-myc在細(xì)胞G0期到S期的過(guò)程中也起作用表明c-myc表達(dá)的變化與細(xì)胞的增殖及分化狀態(tài)有關(guān)，其表達(dá)產(chǎn)物在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化或惡性轉(zhuǎn)化中發(fā)揮作用c-myc癌基因的表達(dá)c-myc基因的表達(dá)與細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)57c-myc基因表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能c-myc基因的產(chǎn)物為磷酸化蛋白p62分子量為：62kD由c-myc基因的外顯子2和3共同編碼由439個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)c-myc基因?qū)俸说鞍谆?，定位?xì)胞核內(nèi)，產(chǎn)物為核蛋白c-myc基因表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能c-myc基因的產(chǎn)物為磷58c-myc基因表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能具有轉(zhuǎn)化細(xì)胞的能力具有與染色體DNA結(jié)合的特性在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化及惡性轉(zhuǎn)化中發(fā)揮作用c-myc蛋白在結(jié)構(gòu)上可分為：轉(zhuǎn)錄激活區(qū)，非特異DNA結(jié)合區(qū)，核靶序列，堿性區(qū)，螺旋-環(huán)-螺旋（HLH）及亮氨酸拉鏈區(qū)c-myc基因表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能具有轉(zhuǎn)化細(xì)胞的能力59螺旋-環(huán)-螺旋（HLH）螺旋-環(huán)-螺旋（HLH）60亮氨酸拉鏈（leuzipper）亮氨酸拉鏈（leuzipper）61c-myc基因表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能在c-myc蛋白中，螺旋-環(huán)-螺旋緊隨著堿性區(qū)，揭示其以特異性序列方式和DNA相互作用在以原核生物為實(shí)驗(yàn)對(duì)象的研究表明：堿性區(qū)以一個(gè)自由環(huán)存在，當(dāng)以特殊方式結(jié)合到DNA上時(shí)，則變成螺旋，該區(qū)是c-myc蛋白與DNA特異序列的結(jié)合部位c-myc基因表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能在c-myc蛋白中，62c-myc基因表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能c-myc中：還存在著與抑制細(xì)胞分化、自身抑制有關(guān)的區(qū)域腫瘤轉(zhuǎn)化所必需的區(qū)域Smith等研究了c-myc的亮氨酸拉鏈區(qū)，該區(qū)介導(dǎo)各種轉(zhuǎn)錄因子的二聚作用在亮氨酸重復(fù)部位的突變能顯著降低c-myc抑制鼠紅白血?。∕EL）細(xì)胞分化能力此區(qū)的插入突變能消除c-myc的轉(zhuǎn)化活性認(rèn)為：正是這些c-myc結(jié)構(gòu)成分的表達(dá)阻止了細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期，從而抑制許多細(xì)胞系的分化c-myc基因表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能c-myc中：還存在著63c-myc基因表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能Cronch等對(duì)c-myc亮氨酸拉鏈區(qū)的亮氨酸進(jìn)行致突變研究發(fā)現(xiàn)：突變導(dǎo)致失去自身抑制說(shuō)明：亮氨酸拉鏈區(qū)在自身抑制中具有重要作用c-myc基因表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能Cronch等64c-myc基因表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能Stone等研究認(rèn)為：c-myc分子的中間1/3以及N-端，C-端是腫瘤轉(zhuǎn)化所必需的，是c-myc基因與腫瘤轉(zhuǎn)化有關(guān)的區(qū)段（功能區(qū)域）c-myc功能區(qū)域，促使c-myc在胞漿內(nèi)合成后，與其它蛋白形成寡聚體，再轉(zhuǎn)移到核內(nèi)，并結(jié)合到特異性的DNA序列上，從而激活和抑制許多靶基因的轉(zhuǎn)錄，引起細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的改變，發(fā)揮其生理調(diào)節(jié)功能及惡性轉(zhuǎn)化作用c-myc基因表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與功能Stone等研究認(rèn)為：65myc蛋白參與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡細(xì)胞凋亡（ProgrammedCelldeath，PCD）研究的深入，發(fā)現(xiàn)myc蛋白參與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡c-myc基因表達(dá)的失調(diào)是多種細(xì)胞凋亡的主要誘因細(xì)胞發(fā)生凋亡的速度及其對(duì)誘導(dǎo)因素的敏感性均依賴于c-myc蛋白的含量尚未成熟胸腺細(xì)胞中：myc基因的高表達(dá)是胚胎胸腺細(xì)胞凋亡的誘因，而且在凋亡細(xì)胞的死亡階段，也觀察到c-myc基因的高水平表達(dá)，如果用反義寡核苷酸阻斷c-myc基因的表達(dá)，則細(xì)胞凋亡受到嚴(yán)重干擾myc蛋白參與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡細(xì)胞凋亡（Programmed66myc蛋白參與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡Evan發(fā)現(xiàn)，c-myc表達(dá)的失調(diào)也會(huì)啟動(dòng)去除生長(zhǎng)因子后培養(yǎng)細(xì)胞的成熟前凋亡觀察了小鼠IL-3依賴性髓樣細(xì)胞株32D，發(fā)現(xiàn)在洗去IL-3后，可立即觀察到c-myc基因表達(dá)下調(diào)，結(jié)果使培養(yǎng)細(xì)胞停止于G1期將攜帶c-myc基因載體轉(zhuǎn)染32D細(xì)胞，獲得穩(wěn)定表達(dá)c-myc基因的32D細(xì)胞克隆，結(jié)果這種細(xì)胞去除IL-3后，不停止于G1期，而是啟動(dòng)以凋亡為特征的程序性細(xì)胞死亡結(jié)果揭示細(xì)胞凋亡是清除固定突變及細(xì)胞周期調(diào)控失衡的細(xì)胞的重要機(jī)制，一旦細(xì)胞發(fā)生障礙，c-myc基因會(huì)啟動(dòng)凋亡程序，相反，則導(dǎo)致腫瘤形成myc蛋白參與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡Evan發(fā)現(xiàn)，c-myc表達(dá)的失67myc癌基因與人類腫瘤myc基因定位于染色體8q24Ig、Ig、Igλ鏈的基因位點(diǎn)分別在14q32、2p13和22q11在BL中：c-myc基因位點(diǎn)與Ig基因位點(diǎn)之間的易位，即c-myc易位到Ig位點(diǎn)的高活性轉(zhuǎn)錄區(qū)，從而組成一個(gè)高轉(zhuǎn)活性的重排基因，啟動(dòng)c-myc轉(zhuǎn)錄，使c-myc表達(dá)增強(qiáng)，促進(jìn)細(xì)胞惡變，最后導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生myc癌基因與人類腫瘤myc基因定位于染色體8q2468myc癌基因與人類腫瘤在不同的人體腫瘤細(xì)胞系中，已發(fā)現(xiàn)c-myc或c-myc相關(guān)序列的擴(kuò)增粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞系視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞系某些神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系乳腺癌細(xì)胞系某些肺癌細(xì)胞系腸癌細(xì)胞系成骨肉瘤、軟骨肉瘤、脊索瘤、脂肪肉瘤、橫紋肌肉瘤myc癌基因與人類腫瘤在不同的人體腫瘤細(xì)胞系中，已發(fā)現(xiàn)c-69myc癌基因與人類腫瘤c-myc過(guò)量表達(dá)與腫瘤的早期復(fù)發(fā)有關(guān)在致瘤中，已發(fā)現(xiàn)ras與myc、sis與myc、myc與fos偶聯(lián)激活，協(xié)同致瘤等許多資料表明c-myc位點(diǎn)在所有受檢的B細(xì)胞腫瘤中有重排myc癌基因與人類腫瘤c-myc過(guò)量表達(dá)與腫瘤的早期復(fù)發(fā)有70myc癌基因與人類腫瘤Casares等：發(fā)現(xiàn)定位在8號(hào)染色體上的c-myc與定位在14號(hào)染色體上的Ig重鏈基因有同樣的14.2Kb的EcoRⅠ酶切片段，因而認(rèn)為發(fā)生了8∶14易位8∶14易位可能是何杰氏淋巴瘤的一個(gè)標(biāo)志N-myc在人神經(jīng)母細(xì)胞瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤和小細(xì)胞肺癌中有擴(kuò)增，擴(kuò)增的程度與腫瘤的發(fā)病進(jìn)程有關(guān)Schwab等報(bào)告20%的神經(jīng)母細(xì)胞瘤有N-myc擴(kuò)增，其中大多數(shù)是侵襲性腫瘤myc癌基因與人類腫瘤Casares等：發(fā)現(xiàn)定位在8號(hào)染色71myc癌基因與人類腫瘤Seeger等報(bào)告，myc基因拷貝數(shù)的多少預(yù)示疾病的進(jìn)程c-myc與小細(xì)胞肺癌30%的病例c-myc擴(kuò)增，復(fù)發(fā)病人中myc擴(kuò)增者的生存期短于沒有擴(kuò)增的病例接受化療的腫瘤病人易引起myc擴(kuò)增myc基因擴(kuò)增與其它腫瘤的關(guān)系也有許多報(bào)道目前認(rèn)為胃癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、宮頸癌、何杰金氏病及頭部腫瘤等都有myc基因的擴(kuò)增或過(guò)度表達(dá)myc癌基因與人類腫瘤Seeger等報(bào)告，myc基因拷貝數(shù)72nm23基因nm23基因是腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因nm23編碼的產(chǎn)物具有抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的功能nm23在分化良好的腫瘤中呈高水平表達(dá)，且nm23基因表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，與無(wú)病生存期，整個(gè)生存期呈正相關(guān)檢測(cè)nm23基因的表達(dá)高低，可以作為判斷腫瘤有無(wú)轉(zhuǎn)移的一個(gè)重要指標(biāo)nm23基因nm23基因是腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因73nm23基因及表達(dá)nm23基因：Steeg（美國(guó)國(guó)立癌癥研究所，1988）等，從7個(gè)轉(zhuǎn)移潛力不同的K-1735鼠黑色素瘤細(xì)胞株中用消減雜交分離克隆獲得nm23基因：在低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株中的表達(dá)強(qiáng)度是高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株內(nèi)的10倍，表明nm23基因在高轉(zhuǎn)移腫瘤中表達(dá)降低人基因組中存在著兩個(gè)nm23基因，即nm23-H1，和nm23-H2，定位于17q32.1、3nm23基因及表達(dá)nm23基因：Steeg（美國(guó)國(guó)立癌癥研74nm23基因及表達(dá)nm23-H1mRNA、nm23-H2mRNA：由兩個(gè)完全不同的基因轉(zhuǎn)錄nm23-H1、nm23-H2：受兩個(gè)獨(dú)立的調(diào)控系統(tǒng)調(diào)節(jié)nm23-H1的mRNA的水平與癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移關(guān)系更密切nm23基因及表達(dá)nm23-H1mRNA、nm23-H75nm23基因及表達(dá)nm23-H2基因與myc基因之間功能性連接nm23蛋白：轉(zhuǎn)錄因子Postel等研究：多肽PUF，是myc轉(zhuǎn)錄的重要調(diào)節(jié)物，PUF可與c-myc啟動(dòng)子特異區(qū)域相結(jié)合Postel等，從Hela細(xì)胞克隆了PUFcDNA，發(fā)現(xiàn)它的核苷酸序列實(shí)際上與人nm23-H2序列一致一系列的生化及免疫學(xué)研究證明：PUF與nm23-H2蛋白的一致性，該蛋白通過(guò)與啟動(dòng)子序列特異地結(jié)合使mycDNA序列在體外轉(zhuǎn)錄nm23基因及表達(dá)nm23-H2基因與myc基因之間功能性76nm23基因及表達(dá)目前認(rèn)為，nm23雖然不一定是myc的轉(zhuǎn)錄刺激物，但至少是myc的一個(gè)重要調(diào)節(jié)基因細(xì)胞死亡時(shí)，nm23可以誘導(dǎo)myc的表達(dá)nm23-H1喪失，有助于細(xì)胞永生化nm23基因及表達(dá)目前認(rèn)為，nm23雖然不一定是myc的77nm23表達(dá)產(chǎn)物及功能nm23-H1和nm23-H2基因：編碼由152個(gè)氨基酸所組成的17kD蛋白，nm23-H1和nm23-H2的氨基酸序列同源性達(dá)88%其氨基酸序列在疏水性和電荷性上高度保守，有94%的氨基酸組成是相同的nm23蛋白（p17）與核苷二磷酸激酶（NDPK）的氨基酸序列高度同源nm23-H1蛋白與NDPK的同源性達(dá)89%nm23-H2蛋白與NDPK的同源性達(dá)97%nm23表達(dá)產(chǎn)物及功能nm23-H1和nm23-H2基因：78NDPK是一類廣泛存在的酶將5’NTP的一個(gè)磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移到5’NDP上，使蛋白變?yōu)榛钚誀顟B(tài)功能：在腫瘤的發(fā)生和發(fā)育上，至少參與兩個(gè)重要作用NDPK是一類廣泛存在的酶79NDPK功能之一：

——微管的聚合一方面可能使微管聚合異常而引起減數(shù)分裂時(shí)紡綞體的異常，從而導(dǎo)致癌細(xì)胞染色體非整倍體的形成，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)展另一方面它可能通過(guò)影響細(xì)胞骨架而引起細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，從而參與浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過(guò)程和發(fā)育過(guò)程N(yùn)DPK功能之一：

——微管的聚合一方面可能使微管聚合異常80NDPK功能之二：

——G蛋白介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中，使GDP還原為GTP，從而使G蛋白激活Nm23蛋白以這種方式能調(diào)節(jié)大量的G蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)反應(yīng)，進(jìn)而參與發(fā)育和腫瘤的發(fā)展NDPK功能之二：

——G蛋白介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)81nm23基因與腫瘤轉(zhuǎn)移SteegPS，等——nm23基因表達(dá)與乳原癌轉(zhuǎn)移和預(yù)后的關(guān)系17份腫瘤標(biāo)本，原位雜交技術(shù)檢測(cè)nm23mRNA含量結(jié)果：瘤細(xì)胞（來(lái)自有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病人）：均含有低水平的nm23mRNA瘤細(xì)胞（來(lái)自無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病人）：含有較高水平的nm23mRNAnm23基因與腫瘤轉(zhuǎn)移SteegPS，等82nm23基因與腫瘤轉(zhuǎn)移進(jìn)一步，對(duì)71例原發(fā)性乳腺癌患者進(jìn)行研究（nm23基因的表達(dá)）方法Northernblot免疫細(xì)胞化學(xué)的方法結(jié)果表明：nm23在分化良好的腫瘤呈高水平表達(dá)，nm23表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，與無(wú)病生存期，整個(gè)生存期呈正相關(guān)目前認(rèn)為nm23基因產(chǎn)物，在抑制表型中起重要作用nm23基因與腫瘤轉(zhuǎn)移進(jìn)一步，對(duì)71例原發(fā)性乳腺癌患者進(jìn)行研83nm23基因與腫瘤轉(zhuǎn)移nm23低表達(dá)與人胃癌的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)到目前為止，nm23已在胃癌、骨肉瘤、膀胱癌、乳腺癌、腸癌等具有轉(zhuǎn)移潛能的腫瘤細(xì)胞中呈低表達(dá)在大腸癌中nm23在低表達(dá)與腫瘤狀態(tài)和遠(yuǎn)距離轉(zhuǎn)移緊密相關(guān)檢測(cè)nm23表達(dá)程度可以判斷腫瘤有無(wú)轉(zhuǎn)移，對(duì)臨床治療具有普遍意義，國(guó)外已在91年開展這項(xiàng)常見檢查。國(guó)內(nèi)？nm23基因與腫瘤轉(zhuǎn)移nm23低表達(dá)與人胃癌的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)84mdm2癌基因1992年，從一個(gè)含有雙微體（murinedoublemimut，DM）的自發(fā)轉(zhuǎn)化的BALB3T3DM細(xì)胞中克隆出來(lái)的一個(gè)高度擴(kuò)增的基因位于小鼠的第10號(hào)染色體的C1-C3區(qū)已在多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)其突變與擴(kuò)增，而且mdm2突變與p53突變不共存mdm2擴(kuò)增與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)目前研究表明，mdm2參與細(xì)胞基本生理過(guò)程。因此，mdm2癌基因的變化對(duì)闡明腫瘤發(fā)病機(jī)理以及轉(zhuǎn)移機(jī)理具有重大意義，對(duì)臨床也具有指導(dǎo)意義mdm2癌基因1992年，從一個(gè)含有雙微體（murine85mdm2癌基因mdm2基因在進(jìn)化上比較保守，在許多動(dòng)物細(xì)胞的染色體上都有同源序列核苷酸序列己測(cè)定，由2372個(gè)堿基組成，在3’端和5’端各有數(shù)百個(gè)堿基組成的非編碼區(qū)起始密碼AUG從第311個(gè)堿基處開始，編碼區(qū)全長(zhǎng)1473個(gè)堿基，編碼一個(gè)長(zhǎng)度為491個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)mdm2癌基因mdm2基因在進(jìn)化上比較保守，在許多動(dòng)物細(xì)胞86

mdm2基因1992年，Momand等人，首次分離和證明了大鼠的mdm2基因產(chǎn)物是一種分子為90kD的蛋白質(zhì)同年Baraby等人測(cè)定的分子量約95kD該蛋白質(zhì)的分子量是90kD或95kD，故稱為p90或p95p90是一種高度酸性的蛋白質(zhì)，等電點(diǎn)非常低p90結(jié)構(gòu)：一級(jí)結(jié)構(gòu)己根據(jù)mdm2基因的核苷酸序列推測(cè)出來(lái)，高級(jí)結(jié)構(gòu)的研究目前尚未見報(bào)道氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)：具有1個(gè)核定位信號(hào)和2個(gè)鋅指蛋白，提示著它是一種DNA結(jié)合蛋白，可能具有轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用mdm2基因1992年，Momand等人，首次分離和證明87人mdm2基因Oliner等人，對(duì)人mdm2基因進(jìn)行了克隆，并定位于12q13-4正常情況下，人體許多器官都有mdm2mRNA（5.5kb）的表達(dá)，以骨胳肌最高在小鼠的許多器官組織中也有mdm2mRNA的表達(dá)，以睪丸、胸腺和腦中最高mdm2在哺乳動(dòng)物中有如此廣泛的表達(dá)，說(shuō)明它在細(xì)胞的基本生理過(guò)程中有一定作用，根據(jù)對(duì)mdm2癌基因產(chǎn)物分析也提示：mdm2癌基因在控制細(xì)胞生長(zhǎng)上有一定作用人mdm2基因Oliner等人，對(duì)人mdm2基因進(jìn)行了克88mdm2癌基因的成瘤性研究mdm2癌基因在自發(fā)轉(zhuǎn)化的BALB/3T3DM細(xì)胞系有高度擴(kuò)增，其擴(kuò)增程度是正常的50倍以上，而且這些轉(zhuǎn)化的細(xì)胞在軟瓊脂上可以生長(zhǎng)，并在裸鼠皮下可以成瘤，成瘤速度非常快，在1-2周內(nèi)就可以出現(xiàn)一個(gè)快速生長(zhǎng)的腫瘤mdm2癌基因的成瘤性研究mdm2癌基因在自發(fā)轉(zhuǎn)化的B89mdm2癌基因的成瘤性研究用mdm2基因，轉(zhuǎn)染NIH3T3細(xì)胞和大鼠的Rat細(xì)胞，可以使轉(zhuǎn)染細(xì)胞的mdm2mRNA水平增高10-15倍過(guò)度表達(dá)的程度與mdm2在這些細(xì)胞內(nèi)的擴(kuò)增程度有直接關(guān)系將轉(zhuǎn)染的細(xì)胞接種到16只裸鼠皮下，裸鼠均發(fā)生了腫瘤，但出現(xiàn)腫瘤的時(shí)間要晚于3T3DM細(xì)胞，這可能與3T3DM細(xì)胞的mdm2的表達(dá)程度較高有關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)說(shuō)明：mdm2癌基因，可以使細(xì)胞轉(zhuǎn)化和具有成瘤性，并可以促進(jìn)移植瘤的快速出現(xiàn)mdm2癌基因的成瘤性研究用mdm2基因，轉(zhuǎn)染NIH3T390mdm2癌基因在人類腫瘤的擴(kuò)增和表達(dá)1992年Oliner等首次報(bào)道m(xù)dm2癌基因在人體的軟組織和骨的肉瘤中有擴(kuò)增47例肉瘤中有17例擴(kuò)增（7例脂肪肉瘤、7例惡性纖組織細(xì)胞瘤、3例骨肉瘤）擴(kuò)增程度從5-50倍不等，在有高度擴(kuò)增的肉瘤細(xì)胞中有高水平的mdm2癌基因產(chǎn)物p90的表達(dá)mdm2癌基因在人類腫瘤的擴(kuò)增和表達(dá)1992年Oliner等91mdm2癌基因在人類腫瘤的擴(kuò)增和表達(dá)Ladanyi等人，研究了28例骨肉瘤（16例原發(fā)、11例轉(zhuǎn)移、1例局部復(fù)發(fā)）的mdm2癌基因的擴(kuò)增情況，結(jié)果：4例（3例轉(zhuǎn)移和1例復(fù)發(fā)）有mdm2癌基因擴(kuò)增在原發(fā)性骨肉瘤中未見有mdm2癌基因的擴(kuò)增Ladanyi認(rèn)為mdm2癌基因的擴(kuò)增可能與骨肉瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移有關(guān)mdm2癌基因在人類腫瘤的擴(kuò)增和表達(dá)Ladanyi等人，研究92mdm2癌基因在人類腫瘤的擴(kuò)增和表達(dá)Reifenferger等，最近發(fā)現(xiàn)：mdm2癌基因在人腦腫瘤中有擴(kuò)增對(duì)157例人腦腫瘤檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：8-10%的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和變型星型細(xì)胞瘤有mdm2癌基因擴(kuò)增擴(kuò)增程度從8-70倍不等mdm2癌基因在人類腫瘤的擴(kuò)增和表達(dá)Reifenferger93mdm2癌基因在人類腫瘤的擴(kuò)增和表達(dá)Sheikh等發(fā)現(xiàn)：在雌激素受體陽(yáng)性的乳腺癌細(xì)胞系中，mdm2mRNA表達(dá)水平是雌激素受體陰性細(xì)胞系的30倍在良性軟組織腫瘤（脂肪瘤）和結(jié)腸、直腸、腎、宮頸癌中未發(fā)現(xiàn)有mdm2癌基因的擴(kuò)增mdm2癌基因在人類腫瘤的擴(kuò)增和表達(dá)Sheikh等發(fā)現(xiàn)：94mdm2癌基因研究的展望mdm2癌基因的研究才剛剛起步，初步的研究結(jié)果己顯出來(lái)，在膠質(zhì)瘤、骨肉瘤和軟組織肉瘤中有一定關(guān)系在骨肉瘤中檢測(cè)mdm2的擴(kuò)增有可能成為一個(gè)估計(jì)預(yù)后的指標(biāo)mdm2在乳腺癌細(xì)胞系中的擴(kuò)增，但在胃腸道和宮頸癌中未發(fā)現(xiàn)有擴(kuò)增在其它腫瘤的表達(dá)情況及與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系有待進(jìn)一步探討mdm2癌基因研究的展望mdm2癌基因的研究才剛剛起步，初95mdm2癌基因研究的展望

mdm2癌基因表達(dá)產(chǎn)物在人類為p90p90可以與p53蛋白形成復(fù)合物（p90-p53），使p53失活mdm2的精確功能尚不清楚，因此它的過(guò)度表達(dá)是否可以通過(guò)其它機(jī)理，而不是通過(guò)滅活p53而促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)?對(duì)其表達(dá)產(chǎn)物的氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)，具有與DNA結(jié)合特定模序mdm2癌基因研究的展望

mdm2癌基因表達(dá)產(chǎn)物在人類為p96mdm2癌基因研究的展望mdm2基因位于12q，在這個(gè)區(qū)域還有其它兩個(gè)基因sas和gil，這兩個(gè)基因在一些惡腫瘤中也有擴(kuò)增在膠質(zhì)瘤、軟組織和骨肉瘤中位于染色體同一區(qū)域的mdm2、sas和gil會(huì)不會(huì)同時(shí)擴(kuò)增，擴(kuò)增程度等仍是值得探討的問(wèn)題mdm2癌基因研究的展望mdm2基因位于12q，在這個(gè)區(qū)97p16基因1994年（美國(guó)冷泉實(shí)驗(yàn)室Kamb等）新發(fā)現(xiàn)的抗癌基因又叫MTS（multipletumorsuppressor1）基因是一種細(xì)胞周期中的基本基因，直接參與細(xì)胞周期的調(diào)控，負(fù)調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖及分裂在人類50%腫瘤細(xì)胞株中發(fā)現(xiàn)有純合子缺失，突變，認(rèn)為p16是比p53更重要的一種新型抗癌基因有人把它比作細(xì)胞周期中的剎車裝置，一旦失靈則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞惡性增殖，導(dǎo)致惡性腫瘤發(fā)生p16基因1994年（美國(guó)冷泉實(shí)驗(yàn)室Kamb等）新發(fā)現(xiàn)的98p16基因在肺癌、乳腺癌、腦腫瘤、骨腫瘤、皮膚癌、膀胱癌、腎癌、卵巢癌和淋巴瘤、黑色素瘤中發(fā)現(xiàn)：p16基因純合子缺失，無(wú)義、錯(cuò)義移碼突變，表明p16基因以缺失，突變方式廣泛參與腫瘤形成檢測(cè)p16基因有無(wú)改變對(duì)判斷患者腫瘤的易感性以及預(yù)測(cè)腫瘤的預(yù)后，具有十分重要的臨床意義p16基因在肺癌、乳腺癌、腦腫瘤、骨腫瘤、皮膚癌、膀胱癌、99p16基因結(jié)構(gòu)及表達(dá)p16基因定位于人染色體9p21，由2個(gè)內(nèi)含子及3個(gè)外顯子組成第1外顯子由126bp組成第2外顯子由307bp組成第3外顯子由bp組成p16基因是細(xì)胞周期中的一種基本基因，其表達(dá)產(chǎn)物直接參與細(xì)胞增殖的負(fù)調(diào)節(jié)p16基因如何調(diào)整起始轉(zhuǎn)錄？其相關(guān)調(diào)節(jié)因子有哪些？如何調(diào)節(jié)？尚不清楚p16基因結(jié)構(gòu)及表達(dá)p16基因定位于人染色體9p21，由2個(gè)100p16基因的表達(dá)產(chǎn)物及功能p16基因編碼產(chǎn)物是p16蛋白，定位于細(xì)胞核內(nèi)DavidBeach等證明：p16蛋白是作用于細(xì)胞分裂周期（celldivisioncycle，cdc）的關(guān)鍵酶之一是CDK（cyclin-dependentkinase）的抑制因子p16基因的表達(dá)產(chǎn)物及功能p16基因編碼產(chǎn)物是p16蛋白，定101p16基因的表達(dá)產(chǎn)物及功能cdc基因編碼產(chǎn)物是蛋白激酶，參與調(diào)控G1-S，G2-M的關(guān)鍵點(diǎn)轉(zhuǎn)換控制細(xì)胞分化的機(jī)制涉及到多種組成成分，最重要的是細(xì)胞周期素（cyclin）Cyclin：周期性累積與分解對(duì)細(xì)胞周期時(shí)程的調(diào)控作用CDK與cyclin復(fù)合體分別在細(xì)胞周期的不同時(shí)相發(fā)揮作用，啟動(dòng)DNA復(fù)制及誘發(fā)有絲分裂CDK可能是調(diào)控細(xì)胞周期裝置的核心，通過(guò)對(duì)一系列關(guān)鍵底物磷酸化作用來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期p16基因的表達(dá)產(chǎn)物及功能cdc基因編碼產(chǎn)物是蛋白激酶，參與102CellcycleCellcycle103p16基因的表達(dá)產(chǎn)物及功能CDK與cyclin復(fù)合體參與G1-S轉(zhuǎn)換的調(diào)控p16蛋白抑制CDK活性，最終阻止細(xì)胞進(jìn)入S期p16基因（因缺失，突變等原因）功能缺失，則不能抑制CDK，最終導(dǎo)致細(xì)胞進(jìn)入惡性增殖，加速腫瘤發(fā)生p16基因的表達(dá)產(chǎn)物及功能CDK與cyclin復(fù)合體參與G1104p16基因的表達(dá)產(chǎn)物及功能CDK-cyclin可作用于多種癌基因產(chǎn)物，如：pp60c-syc，c-abl產(chǎn)物，對(duì)其進(jìn)行磷酸化修飾調(diào)節(jié)，CDK-cyclin亦可作用于某些抗癌基因產(chǎn)物，如：Rb蛋白磷酸化后則生長(zhǎng)抑制功能喪失，在G1/S交界處，CDK-G1cyclin，使Rb磷酸化而失活，細(xì)胞從靜止態(tài)進(jìn)入增殖態(tài)可見，p16基因是一種非常重要的抗癌基因，p16基因失活，則會(huì)引起細(xì)胞惡性增殖p16基因的表達(dá)產(chǎn)物及功能CDK-cyclin可作用于多種癌105p16基因與腫瘤Gianic等：定量PCR檢測(cè)了32例惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤的p16外顯子2發(fā)現(xiàn)：59%惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤中，p16基因的量有改變，根據(jù)光密度掃描，24%的病人是因p16基因純合子缺失所致p16基因與腫瘤Gianic等：106p16基因與腫瘤JenJ，等：PCR技術(shù)檢測(cè)57例腦腫瘤p16基因發(fā)現(xiàn)26例出現(xiàn)純合子缺失p16基因與腫瘤JenJ，等：107p16基因與腫瘤Kamb等從肺癌、乳腺癌、囊腫瘤、骨腫瘤、皮膚癌、膀胱癌、腎癌、卵巢癌、淋巴瘤等中檢測(cè)出50%以上的p16基因純合子缺失在黑色素瘤中，還檢出無(wú)義錯(cuò)義，移碼突變研究表明：p16基因參與了各種組織的腫瘤形成檢測(cè)p16基因的突變與缺失，是判斷腫瘤的性質(zhì)及預(yù)后的一項(xiàng)重要指標(biāo)p16基因與腫瘤Kamb等108p16基因與腫瘤p16基因體積小，只有p53的1/10p16基因用于基因診療、更易操作，對(duì)臨床腫瘤治療更具有現(xiàn)實(shí)意義研究p16基因正是目前及今后一段時(shí)期的熱點(diǎn)p16基因與腫瘤p16基因體積小，只有p53的1/10109抗腫瘤基因的實(shí)驗(yàn)證據(jù)

1．遺傳性腫瘤中某些基因的丟失早在70年代已經(jīng)證明：某些遺傳性腫瘤中染色體的某些位點(diǎn)可發(fā)生專一的丟失視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的40％屬先天性這些遺傳性病例（大多為雙側(cè)性）的患兒，約5％可見13q14的一個(gè)等位基因位點(diǎn)的缺失，而且腫瘤發(fā)生時(shí)，腫瘤細(xì)胞中另一個(gè)等位基因也發(fā)生了缺失，成為純合體提示：第一次的缺陷屬先天性，第二次屬體細(xì)胞突變（A.Kmudson，提出了“兩次突變”學(xué)說(shuō)）抗腫瘤基因的實(shí)驗(yàn)證據(jù)

1．遺傳性腫瘤中某些基因的丟失110只有兩個(gè)等位基因同時(shí)缺失時(shí)才發(fā)生視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，因此這種抗視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的原癌基因（Rb基因）具有顯著性的意義根據(jù)酯酶D的測(cè)定和與染色體13有關(guān)的限制性內(nèi)切片段長(zhǎng)并多態(tài)性（restrictionfragmentlengthpolymorphism，RFLP）證明：至少50％的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞中存在純合體的13q14、20缺失經(jīng)治療后痊愈的兒童，以后易患肉瘤，而這種瘤細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)了13號(hào)染色體標(biāo)志位點(diǎn)的缺失只有兩個(gè)等位基因同時(shí)缺失時(shí)才發(fā)生視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，因此這種抗視111另一個(gè)相似的例子是腎母細(xì)胞瘤（Wilm瘤），在腫瘤細(xì)胞中出現(xiàn)純合子的11q13的缺失11p標(biāo)記位點(diǎn)的缺少還與肝母細(xì)胞瘤，小兒橫紋肌肉瘤、腎上腺皮須癌有關(guān)另一個(gè)相似的例子是腎母細(xì)胞瘤（Wilm瘤），在腫瘤細(xì)胞中出現(xiàn)112抗腫瘤基因的實(shí)驗(yàn)證據(jù)

2.正常和惡性細(xì)胞雜交中正常染色體對(duì)惡性行為的抑制應(yīng)用體細(xì)胞雜交技術(shù)，正常細(xì)胞與惡性細(xì)胞雜交后所形成的雜體細(xì)胞，其惡性程度降低，但隨著正常染色體被逐－排斥，惡性度又恢復(fù)正常小鼠成纖維細(xì)胞和惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞雜交后，抑制惡性生長(zhǎng)的基因位于小鼠染色體4正常人成纖維細(xì)胞與中國(guó)倉(cāng)鼠或金倉(cāng)鼠惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞雜交時(shí)，抑制惡性行為的基因分別位于染色體2或1正常人成纖維細(xì)胞和人HeLa細(xì)胞雜交時(shí)，這種“阻抑基因”位于染色體11及14不同種屬，不同種類惡性細(xì)胞的抗腫瘤基因的種類不相同抗腫瘤基因的實(shí)驗(yàn)證據(jù)

2.正常和惡性細(xì)胞雜交中正常染色113抗腫瘤基因的性質(zhì)和生物學(xué)意義由于對(duì)抗腫瘤基因編碼的產(chǎn)物尚不了解，所以目前仍難以說(shuō)明抗腫瘤基因的性質(zhì)和確切的生物學(xué)功能R.Sager推測(cè)：抗腫瘤基因的產(chǎn)物包括不少抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的物質(zhì)，其中有抑素（chalone）生長(zhǎng)抑制因子（GIF）細(xì)胞MHC-1抗原（有助于機(jī)體免疫系統(tǒng)的有效識(shí)別）抗腫瘤基因的性質(zhì)和生物學(xué)意義由于對(duì)抗腫瘤基因編碼的產(chǎn)物尚不了114抗腫瘤基因可能包括：1．編碼抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的一些物質(zhì)

2．基因表達(dá)的調(diào)節(jié)控制序列，包括trans調(diào)節(jié)或cis調(diào)節(jié)的負(fù)控制區(qū)

3．調(diào)控基因組穩(wěn)定性的某些基因以上僅僅是根據(jù)現(xiàn)有材料的一些推測(cè)，將有待于實(shí)驗(yàn)的證實(shí)抗腫瘤基因可能包括：1．編碼抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的一些物質(zhì)

2．基因115最近，有三方面的實(shí)驗(yàn)室結(jié)果，比較直接提供存在抗瘤基因的證據(jù)Rb基因的分離：美國(guó)哈佛大學(xué)麻省理工學(xué)院加州大學(xué)分別分離出Rb基因的cDNA及其DNA序列分析最近，有三方面的實(shí)驗(yàn)室結(jié)果，比較直接提供存在抗瘤基因的證據(jù)R116證據(jù)Friend.S.H.等人用一個(gè)定位于13q14、11，以前用于Rb基因限制性內(nèi)切酶長(zhǎng)度多態(tài)性研究的DNA片段H3-8為探針，從人胎盤cDNA文庫(kù)中篩選出一個(gè)4.7kb的cDNA片段，并同時(shí)分離出相應(yīng)的基因片段的克隆，用上述cDNA為探針，可在正常人的組織DNA中看到雜交信號(hào)，而在部分的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的DNA中則可看到信號(hào)的缺失證據(jù)Friend.S.H.等人用一個(gè)定位于13q14、11，117證據(jù)如果用Nouthern吸印雜交的技術(shù)來(lái)檢測(cè)正常人某些組織及視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的mRNA，可發(fā)現(xiàn)在前才有4.7kb的信號(hào)，而在后者則此mRNA缺失目前該cDNA的全部DNA序列已經(jīng)測(cè)出

證據(jù)如果用Nouthern吸印雜交的技術(shù)來(lái)檢測(cè)正常人某些組織118證據(jù)李文華（WH.Lee）等人，利用酯酶D的基因，通過(guò)染色體移步（chromosomalwalking）應(yīng)用cDNA和單一順序DNA片段向兩側(cè)延伸，終于分離到Rb基因的cDNA及基因片段此cDNA長(zhǎng)4.6kb，涉及到的基因大于100kb，由27個(gè)外顯子組成。從cDNA序列分析，預(yù)計(jì)可翻譯出816個(gè)氨基酸組成的多肽在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中，不僅可見基因的部分丟失，而且可看到mRNA轉(zhuǎn)錄物的缺失或異常證據(jù)李文華（WH.Lee）等人，利用酯酶D的基因，通過(guò)染色體119另一方面，對(duì)Wilm瘤的研究也有所突破：Stambridge等人，應(yīng)用微細(xì)胞雜交技術(shù)，首次證明了將11號(hào)染色體短臂片段導(dǎo)入Wilm瘤細(xì)胞，可使細(xì)胞喪失在軟瓊脂中生長(zhǎng)的能力和在裸鼠體內(nèi)的成瘤能力。但對(duì)瘤細(xì)胞的形態(tài)、c-myc、N-myc及c-sis的表達(dá)均無(wú)影響用其它染色體片段如13號(hào)染色體對(duì)Wilm瘤的成瘤能力并無(wú)作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，11號(hào)染色體上的抗瘤基因產(chǎn)物與腫瘤形成后期存在某種聯(lián)系

另一方面，對(duì)Wilm瘤的研究也有所突破：120對(duì)癌基因與抗癌基因的評(píng)論如果說(shuō)癌基因是一個(gè)涵義混亂不確切的命名，抗癌基因是同樣的模糊不清所謂癌基因與抗癌基因都是一大類控制細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的基因，對(duì)其單個(gè)基因來(lái)說(shuō)，它的產(chǎn)物所具有的功能因細(xì)胞種類甚至細(xì)胞發(fā)育階段而異對(duì)癌基因與抗癌基因的評(píng)論如果說(shuō)癌基因是一個(gè)涵義混亂不確切的命1211．癌基因與抗癌基因的相對(duì)意義同一種癌基因及其產(chǎn)物，在不同細(xì)胞中可起完全相反的作用最典型的例子是ras基因及其產(chǎn)物p21。在成纖維細(xì)胞中已有充分證據(jù)說(shuō)明，微量注入p21蛋白能使細(xì)胞迅速進(jìn)入S期和開始分裂。人ras基因可使成纖維細(xì)胞和某些上皮細(xì)胞惡變。但對(duì)點(diǎn)突變的嗜鉻細(xì)胞瘤pc12細(xì)胞，將ras基因引入或微量注射p21使惡性細(xì)胞停止分裂并開始分化。src基因?qū)﹄u成纖維細(xì)胞中的致癌作用是確定無(wú)疑的，但在胚胎發(fā)育過(guò)程中，src基因的表達(dá)神經(jīng)系統(tǒng)的分化密切相關(guān)，估計(jì)這樣的例子可能不盡是個(gè)別的1．癌基因與抗癌基因的相對(duì)意義同一種癌基因及其產(chǎn)物，在不同細(xì)122從生物學(xué)意義上來(lái)說(shuō)，ras基因?qū)Τ衫w維細(xì)胞來(lái)說(shuō)是癌基因，對(duì)交感神經(jīng)切來(lái)源的pc12來(lái)說(shuō)是抗癌基因。同一基因的產(chǎn)物，是促進(jìn)生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)，是抗癌還是致癌，似乎不取決于該基因的本身，而決定于細(xì)胞類別的差異。同時(shí)提示不同細(xì)胞中以ras基因產(chǎn)物的效應(yīng)系統(tǒng)不同，因此最后的生物學(xué)功能也不同。從生物學(xué)意義上來(lái)說(shuō)，ras基因?qū)Τ衫w維細(xì)胞來(lái)說(shuō)是癌基因，對(duì)交1232.促進(jìn)和抑制生長(zhǎng)物質(zhì)的雙重性顧名思義，應(yīng)將生長(zhǎng)因子列入癌基因的范疇，而生長(zhǎng)抑制因子則應(yīng)屬抗癌基因之列。事實(shí)上，生長(zhǎng)因子對(duì)不同細(xì)胞的作用差別很大，除了受體的因素外，生長(zhǎng)因子既可促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)，也可抑制細(xì)胞生長(zhǎng)。同樣，生長(zhǎng)抑制因子既可抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，也可促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。因此，不區(qū)別細(xì)胞的種類即判斷哪些基因是促進(jìn)或抑制生長(zhǎng)，顯然是不合理的2.促進(jìn)和抑制生長(zhǎng)物質(zhì)的雙重性顧名思義，應(yīng)將生長(zhǎng)因子列入1243．腫瘤是一種異常生長(zhǎng)早在上一世紀(jì)，Virchow已提出腫瘤是一種異常生長(zhǎng)的疾病。癌細(xì)胞是一種以自主的，帶有分化缺陷的持續(xù)生長(zhǎng)的細(xì)胞癌基因與抗癌基因的研究，尤其是前者，從基因水平揭開了控制細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的物質(zhì)基礎(chǔ)，應(yīng)該既不受癌基因或抗癌基因的概念所束縛，同時(shí)也充分利用上述研究的大量材料，來(lái)揭示腫瘤發(fā)生3．腫瘤是一種異常生長(zhǎng)早在上一世紀(jì)，Virchow已提出腫瘤125評(píng)論：癌基因研究的戰(zhàn)略及具體技術(shù)目前癌基因的研究，極需在概念和技術(shù)上有所突破概念問(wèn)題現(xiàn)從戰(zhàn)略角度來(lái)討論目前癌基因研究技術(shù)路線的得與失，并提出當(dāng)前需要發(fā)展的技術(shù)路線及其可行性問(wèn)題評(píng)論：癌基因研究的戰(zhàn)略及具體技術(shù)目前癌基因的研究，極需在概念126傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—1各實(shí)驗(yàn)室用于分離癌基因的技術(shù)路線大體上有以下幾個(gè)方面：

1．癌細(xì)胞的基因組DNA，通過(guò)DNA轉(zhuǎn)染后導(dǎo)入某些受體細(xì)胞。發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化后，組建轉(zhuǎn)化細(xì)胞株的基因文庫(kù)，從中分離出癌基因的克隆具體分以下幾個(gè)環(huán)節(jié)：

傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—1各實(shí)驗(yàn)室用于分離癌基因的技術(shù)路線大體上127傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—1

環(huán)節(jié)之一：癌細(xì)胞的材料來(lái)源，文獻(xiàn)報(bào)道，多數(shù)直接癌的體外細(xì)胞株作為材料，其優(yōu)點(diǎn)是材料易得而且單純，易于提取到較完整的高分子DNA。缺點(diǎn)是體外培養(yǎng)過(guò)程中，癌細(xì)胞的某些原癌基因可發(fā)生突變，新的原癌基因也可被激活，因此與體內(nèi)原發(fā)性腫瘤的癌基因譜不一定相同。所以，對(duì)某種特定的癌來(lái)說(shuō)，材料來(lái)源奕以原發(fā)性腫瘤為主，可以癌細(xì)胞株的研究提供相互驗(yàn)證。但原發(fā)性腫瘤的材料不均一，常伴有壞死，提取高分DNA有時(shí)會(huì)遇到一定困難，因此在提取DNA時(shí)應(yīng)注意防止DNA的降解

傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—1

環(huán)節(jié)之一：癌細(xì)胞的材料來(lái)源，文獻(xiàn)報(bào)道128傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—1

環(huán)節(jié)之二：高分子DNA的提取用于DNA轉(zhuǎn)染的DNA，要求并不高。在轉(zhuǎn)染前，還將用針筒吸抽或其它機(jī)械方法將DNA分子撕裂至60kb左右，以利于導(dǎo)入細(xì)胞。由于這樣的處理，使用DNA轉(zhuǎn)染技術(shù)獲得的轉(zhuǎn)化基因一般在50kb以下。這是DNA轉(zhuǎn)染在技術(shù)上的限制傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—1

環(huán)節(jié)之二：高分子DNA的提取用于DN129傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—1

環(huán)節(jié)之三：受體細(xì)胞的選擇基因轉(zhuǎn)移的常用的受體細(xì)胞為小鼠NIH3T3細(xì)胞，大鼠RAT-1細(xì)胞，倉(cāng)鼠CHEF細(xì)胞。上述細(xì)胞都屬成纖維細(xì)胞。少數(shù)實(shí)驗(yàn)已開始用小鼠腎上皮細(xì)胞。上述細(xì)胞中，NIH3T3對(duì)接受外源轉(zhuǎn)化基因而發(fā)生惡性極為敏感，但自發(fā)生轉(zhuǎn)化率高。過(guò)去不少作者提出責(zé)難：NIH3T3細(xì)胞為一種“非整倍體”細(xì)胞，已屬非正常細(xì)胞，所以應(yīng)用NIH3T3作為受體細(xì)胞大多獲得的轉(zhuǎn)化基因仍多屬ras族。因此認(rèn)為，為什么獲得上述結(jié)果，另有原因。這是由于DNA轉(zhuǎn)染技術(shù)本身的局限性傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—1

環(huán)節(jié)之三：受體細(xì)胞的選擇基因轉(zhuǎn)移的常130傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—1

環(huán)節(jié)之四：DNA轉(zhuǎn)染目前最常用的基因轉(zhuǎn)移方法是DNA轉(zhuǎn)染，即將DNA直接放入培液，通過(guò)一定方式，使它進(jìn)入受體細(xì)胞傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—1

環(huán)節(jié)之四：DNA轉(zhuǎn)染目前最常用的基因131DNA導(dǎo)入的技術(shù)有—1：

——磷酸鈣沉淀法原理：利用pH7.01磷酸鈣形成細(xì)顆粒，DNA吸附于顆粒而被導(dǎo)入細(xì)胞優(yōu)點(diǎn)：方法簡(jiǎn)便、易于重復(fù)缺點(diǎn)：轉(zhuǎn)移導(dǎo)入的效率低，均在10-6-10-7之間DNA導(dǎo)入的技術(shù)有—1：

——磷酸鈣沉淀法原理：利用pH7.132DNA導(dǎo)入的技術(shù)有—2：

——電穿孔技術(shù)原理：利用高壓電場(chǎng)，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行脈沖式處理，使細(xì)胞表面通透性改變，有利于DNA分子進(jìn)入細(xì)胞其效率一般比磷酸鈣方法提高二個(gè)數(shù)量級(jí)或更多DNA導(dǎo)入的技術(shù)有—2：

——電穿孔技術(shù)原理：利用高壓電場(chǎng)，133DNA導(dǎo)入的技術(shù)有—3：

——抗藥基因的共轉(zhuǎn)染由于DNA導(dǎo)入的效率很低（最高僅10-3），因此如果共同導(dǎo)入抗藥基因，可通過(guò)藥物去除大量未被轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，在具有抗藥性的細(xì)胞中選擇出惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞，而且會(huì)顯著降低自發(fā)轉(zhuǎn)化灶的背景數(shù)常用的抗藥基因?yàn)閜SV2-neo。用G418進(jìn)行篩選的缺點(diǎn)是G418價(jià)格昂貴DNA導(dǎo)入的技術(shù)有—3：

——抗藥基因的共轉(zhuǎn)染由于DNA導(dǎo)134傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—1

環(huán)節(jié)之五：

轉(zhuǎn)化細(xì)胞的篩選經(jīng)典的方法是通過(guò)G418篩選后，在轉(zhuǎn)染后21在左右，收集轉(zhuǎn)化細(xì)胞灶，分別擴(kuò)增。然后將轉(zhuǎn)化細(xì)胞通過(guò)軟瓊脂生長(zhǎng)，推測(cè)其生長(zhǎng)能力。若獲得細(xì)胞集落，將其收集后，再度擴(kuò)增。達(dá)到一定細(xì)胞數(shù)后，按106-107細(xì)胞．鼠接種裸鼠，鑒定其在體內(nèi)的成瘤能力。若獲得陽(yáng)性結(jié)果，從上述細(xì)胞株或裸鼠腫瘤中提取出DNA，經(jīng)Southern轉(zhuǎn)移雜交，確定是否有人的DNA順序整合入鼠類的基因組。探針一般應(yīng)用人的總DNA或Alu序列。若結(jié)果為陽(yáng)性，說(shuō)明獲得了第一輪轉(zhuǎn)化細(xì)胞株。必要時(shí)，還需用上述轉(zhuǎn)化細(xì)胞株的DNA，再次轉(zhuǎn)染受體細(xì)胞，進(jìn)行第二輪、第三輪DNA轉(zhuǎn)染，以純化具有轉(zhuǎn)化活性的人DNA序列。傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—1

環(huán)節(jié)之五：轉(zhuǎn)化細(xì)胞的篩選經(jīng)典的方法135最近二年來(lái)，G.VandeWoude及D.Blair的實(shí)驗(yàn)室，采用了簡(jiǎn)化的篩選方法：經(jīng)藥物G418篩選后，將大量擴(kuò)增的細(xì)胞直接種裸鼠，觀察是否有腫瘤形成。這樣可明顯節(jié)省時(shí)間和人力。上述方法存在的共同問(wèn)題是：在DNA轉(zhuǎn)染后，細(xì)胞經(jīng)藥物篩選、擴(kuò)增、裸鼠內(nèi)生長(zhǎng)的不同階段中，外源導(dǎo)入的DNA序列可發(fā)生突變和DNA重排。因此有可能會(huì)發(fā)現(xiàn)原癌基因的重排或?qū)嵶?，即人為的激活。例如trk和mas這兩個(gè)癌基因是在DNA轉(zhuǎn)染中所發(fā)生的兩個(gè)基因片段的重排和拼接的結(jié)果。因此，對(duì)結(jié)果的分析必須極為謹(jǐn)慎。最近二年來(lái)，G.VandeWoude及D.Blair的實(shí)驗(yàn)室136傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—1

環(huán)節(jié)之六：

轉(zhuǎn)化細(xì)胞株基因文庫(kù)的建立基因文庫(kù)的組建技術(shù)，可參考分子克隆技術(shù)的專著（T.Maniatis等）。但在技術(shù)上提出幾點(diǎn)，可供讀者參考：1）基因組DNA的部分酶切：按T.Maniatis的步驟，用不同酶量，先小樣后放大在量，很難重復(fù)，往往失敗，浪費(fèi)得之不易的DNA樣品。我們采用定量酶（一般以0.2U/μgDNA），酶切不同時(shí)間，從而選出獲得不完全酶切的最佳時(shí)間和條件，然后放大樣進(jìn)行反應(yīng)，其優(yōu)點(diǎn)是重復(fù)性強(qiáng)。該方法已成為本實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)方法。傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—1

環(huán)節(jié)之六：轉(zhuǎn)化細(xì)胞株基因文庫(kù)的建立137傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—1

環(huán)節(jié)之六：

2）載體的選擇：目前最常用的是EMBL3或EMBL4噬菌體系統(tǒng)。其優(yōu)點(diǎn)是：可用雙酶切（EcoRI及BamHI），使噬菌體載體難以重組，因此不需對(duì)噬菌體雙臂加以純化；應(yīng)用的受體菌為Spi-，大大降低了非插入性噬菌體的背景3）應(yīng)用上述載體系統(tǒng)，在包裝后，可按1×105pfu/平皿的滴度用平板進(jìn)行擴(kuò)增，獲得>108-109pfu/ml的基因文庫(kù)重組噬菌體（一般為50ml以上）。這樣的基因文庫(kù)可儲(chǔ)存一年以上，供上百次的篩選。傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—1

環(huán)節(jié)之六：2）載體的選擇：目前最常138傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—1

環(huán)節(jié)之七：

基因的篩選及克性化若為未千的癌基因，可用人總DNA作為探針進(jìn)行篩選；若為已千的癌基因，則用相應(yīng)的癌基因探針。選摜的噬菌體密度增加至105pfu/15cm直徑平皿。這樣可前顯增加篩選出陽(yáng)性克隆的機(jī)率，經(jīng)過(guò)三輪篩選，可期獲得純化的分子克隆。傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—1

環(huán)節(jié)之七：基因的篩選及克性化若為未139傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—2對(duì)已知的有染色體易位的癌基因進(jìn)行分離：如：慢性髓細(xì)胞白血病中有abl與bcr的重排，形成ph1染色體。由于abl基因大于100kb，不可能通過(guò)DNA轉(zhuǎn)染或從基因文庫(kù)中分暾出c-ablBaltimore實(shí)驗(yàn)室從cRNA文庫(kù)中獲得了全長(zhǎng)的c-abl的cDNA。從c-abl的cDNA同時(shí)可獲得重排的bcr基因采用這種方法要有兩個(gè)前提：一是這種染色體易位要有代表性；二是其中一個(gè)癌基因是已知的傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—2對(duì)已知的有染色體易位的癌基因進(jìn)行分離：140傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—3分析癌基因或原癌基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物即mRNA；由于過(guò)量表達(dá)也是原癌基因被激活的一種形式，同時(shí)過(guò)量的表達(dá)產(chǎn)、物，即使沒有突變，同樣可導(dǎo)致細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，如Ha-ras原癌基因在上游區(qū)安裝強(qiáng)的啟動(dòng)子后同樣可以使NIH3T3細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，因此分析腫瘤的mRNA表達(dá)，也可提供原癌基因被激活的證據(jù)。但是必須注意幾點(diǎn)：傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—3分析癌基因或原癌基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物即mRN141傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—3

注意點(diǎn)：1.必須有相應(yīng)的正常組織和癌旁的增生組織為對(duì)照。以肝癌為例，應(yīng)以肝癌的周圍肝組織作為對(duì)照2.用β－actin或其它基因作為內(nèi)對(duì)照，以排除mRNA制備過(guò)程中降解所造成的差異

傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—3

注意點(diǎn)：1.必須有相應(yīng)的正常組織和142傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—3

注意點(diǎn)：3.用Northern轉(zhuǎn)移和雜交的結(jié)果說(shuō)明的是mRNA的水平，它代表轉(zhuǎn)錄水平、轉(zhuǎn)錄后加工以及mRNA的代謝速度（半衰期長(zhǎng)短）的總和，但并不等于轉(zhuǎn)錄水平的高低4.如果用細(xì)胞核和32P-UTP摻入，然后進(jìn)行分子雜交，則反應(yīng)了轉(zhuǎn)錄階段mRNA延伸的速度及數(shù)量，一般說(shuō)來(lái)，可提示轉(zhuǎn)錄水平，但不等于最后成熟的mRNA水平。因此，在解釋以上3)、4)兩個(gè)方面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，必須注意其實(shí)際的內(nèi)容傳統(tǒng)的研究技術(shù)路線—3

注意點(diǎn)：3.用Northern轉(zhuǎn)移143新的戰(zhàn)略的探索1．應(yīng)用癌細(xì)胞的cDNA基因文庫(kù)進(jìn)行DNA轉(zhuǎn)染：由于在轉(zhuǎn)染過(guò)程中應(yīng)用的基因組，能進(jìn)入細(xì)胞并完整地整合于受體細(xì)胞基因組的外源DNA片段，一般僅在50kb以下，因此應(yīng)考慮采用cDNA文庫(kù)作為轉(zhuǎn)染的DNA來(lái)源。但存在問(wèn)題是，必須獲得所謂全長(zhǎng)cDNA文庫(kù)。在技術(shù)上來(lái)講這是有相當(dāng)難度的，同時(shí)，cDNA整合后，能否持久表達(dá)，也還在不少未知因素，但是，這仍是值得設(shè)法采用的技術(shù)。新的戰(zhàn)略的探索1．應(yīng)用癌細(xì)胞的cDNA基因文庫(kù)進(jìn)行DNA轉(zhuǎn)染144新的戰(zhàn)略的探索2．應(yīng)用細(xì)胞融合來(lái)代替DNA轉(zhuǎn)染：存在問(wèn)題是該技術(shù)只能限于人癌細(xì)胞和異種細(xì)胞（NIH3T3或RAT-1）的融合。若用人－人細(xì)胞雜交，對(duì)外源的基因難以選擇。新的戰(zhàn)略的探索2．應(yīng)用細(xì)胞融合來(lái)代替DNA轉(zhuǎn)染：存在問(wèn)題是該145新的戰(zhàn)略的探索3．應(yīng)用人體細(xì)胞作為受體細(xì)胞這更接近于人體腫瘤癌變模型，但存在的問(wèn)題是：（1）只適用物已知的癌基因，并需帶有質(zhì)粒載體，后者可用來(lái)作為選擇的標(biāo)記（2）用人癌細(xì)胞或其DNA來(lái)轉(zhuǎn)染，由于缺乏選擇的標(biāo)記，無(wú)法辨認(rèn)外源的基因（3）人體細(xì)胞對(duì)一般已知的癌基因如ras、myc均具有抗性，即不出現(xiàn)惡性的表型新的戰(zhàn)略的探索3．應(yīng)用人體細(xì)胞作為受體細(xì)胞這更接近于人體腫瘤146腫瘤相關(guān)基因腫瘤相關(guān)基因147腫瘤相關(guān)基因癌基因抑癌基因腫瘤轉(zhuǎn)移基因腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因腫瘤相關(guān)基因癌基因148癌基因（oncogene）病毒癌基因

virusoncogene（v-onc）細(xì)胞癌基因

cellularoncogene（c-onc）原癌基因proto-onc癌基因（oncogene）病毒癌基因

virusoncog149病毒癌基因

virusoncogene（v-onc）1968年Duesberg等首次發(fā)現(xiàn)Rous肉瘤病毒基因組編碼酪氨酸蛋白激酶基因，證實(shí)它在細(xì)胞轉(zhuǎn)化中起關(guān)鍵作用來(lái)自病毒，因而被命名為病毒癌基因病毒癌基因

virusoncogene（v-onc）196150細(xì)胞癌基因

cellularoncogene（c-onc）1972年Bishop核酸分子雜交法證實(shí)：幾乎在所有高等動(dòng)物細(xì)胞基因組中，都有和v-onc相似的DNA序列這些序列是細(xì)胞基因組的成員之一，其編碼的產(chǎn)物具有重要的功能細(xì)胞癌基因在正常情況下的表達(dá)有時(shí)間、空間限制，表達(dá)產(chǎn)物參與細(xì)胞分化、增殖細(xì)胞癌基因

cellularoncogene（c-onc）151原癌基因（proto-onc）未激活的細(xì)胞癌基因在人體正常細(xì)胞中存在是一種正常基因作用：調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)和分化廣泛存在于生物界中，從酵母到人的細(xì)胞中都存在原癌基因（proto-onc）未激活的細(xì)胞癌基因152原癌基因的分類按原癌基因的結(jié)構(gòu)、產(chǎn)物的功能、所在的位置分為下列四類：

1.蛋白激酶類

2.信息傳遞蛋白類

3.生長(zhǎng)因子及其受體類

4.核內(nèi)蛋白類原癌基因的分類按原癌基因的結(jié)構(gòu)、產(chǎn)物的功能、所在的位置分為下153細(xì)胞癌基因與致癌癌基因在生物進(jìn)化中具高度保守性正常細(xì)胞中的癌基因和腫瘤細(xì)胞中的癌基因的核苷酸順序十分相似，后者可使NIH3T3細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，前者需經(jīng)激活后才具有轉(zhuǎn)化能力說(shuō)明：在正常情況下細(xì)胞癌基因不致癌，生理?xiàng)l件下內(nèi)外環(huán)境中的某些刺激可激活癌基因，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和信息傳遞細(xì)胞癌基因與致癌癌基因在生物進(jìn)化中具高度保守性154通常認(rèn)為：癌基因并不是腫瘤所特有是細(xì)胞的正?；蚰苷T導(dǎo)正常細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化，并使正常細(xì)胞獲得一個(gè)或多個(gè)新的生物特性的基因只有在被激活后發(fā)生異常表達(dá)時(shí)，才會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化通常認(rèn)為：癌基因并不是腫瘤所特有155細(xì)胞癌基因的生理功能主要表現(xiàn)為：①調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)②參與細(xì)胞分化和發(fā)育過(guò)程具有正常生理功能的同時(shí)又具有潛在致癌能力的原癌基因，其致癌潛能的發(fā)揮，首先需要被激活細(xì)胞癌基因的生理功能主要表現(xiàn)為：①調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)156常見的激活因素：病毒

化學(xué)物質(zhì)

輻射常見的激活因素：病毒

157原癌基因的激活機(jī)理1.DNA重排2.基因放大3.點(diǎn)突變4.其它調(diào)控的異常原癌基因的激活機(jī)理1.DNA重排158DNA重排插入具有高活性的啟動(dòng)子或增強(qiáng)子，使原癌基因持久、過(guò)量地表達(dá)負(fù)調(diào)控區(qū)的失活或丟失

DNA重排插入具有高活性的啟動(dòng)子或增強(qiáng)子，使原癌基因持久、159DNA重排

1插入具有高活性的啟動(dòng)子或增強(qiáng)子，使原癌基因持久、過(guò)量地表達(dá)插入的啟動(dòng)子或增強(qiáng)子來(lái)自細(xì)胞外（外源性）如：雞B淋巴細(xì)胞瘤由于ALV的LTR插入c-myc的旁側(cè)（5’或3’端），使c-myc過(guò)量表達(dá)插入的啟動(dòng)子或增強(qiáng)子來(lái)自細(xì)胞內(nèi)（內(nèi)源性）如：內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒的LTRDNA重排

1插入具有高活性的啟動(dòng)子或增強(qiáng)子，使原癌基160染色體易位是原癌基因DNA重排的典型例子人B淋巴瘤中免疫球蛋白基因與c-myc的重排，使c-myc激活c-myc基因定位于8q24，Ig、Ig、Igλ鏈的基因位點(diǎn)分別定位在14q32、2p13和22q11c-myc易位到Ig位點(diǎn)的高活性轉(zhuǎn)錄區(qū)，從而組成一個(gè)高轉(zhuǎn)活性的重排基因，啟動(dòng)c-myc轉(zhuǎn)錄，使c-myc表達(dá)增強(qiáng)，促進(jìn)細(xì)胞惡變，最后導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生DNA