第章蛋白質化學課件

第12章蛋白質化學生化教研室夏花英8403課程代碼：22680b57e1第12章蛋白質化學生化教研室第十二章蛋白質化學22022/12/16第一節(jié)蛋白質的分子組成元素組成：CHONS蛋白質的特征元素，平均含量：16%蛋白質含量（g）的計算：樣品中含氮量（g）×6.25第十二章蛋白質化學22022/12/12第一節(jié)蛋白質的第十二章蛋白質化學32022/12/16一、蛋白質的基本組成單位——氨基酸蛋白質（20種）氨基酸酸、堿、酶（標準氨基酸）（編碼氨基酸）第十二章蛋白質化學32022/12/12一、蛋白質的基本組第十二章蛋白質化學42022/12/16（一）氨基酸的結構α-碳原子為手性碳原子都為L-α-氨基酸（甘氨酸、脯氨酸除外）α氨基酸的共同結構COOH|H2N—C—H|H甘氨酸COOH|HN—C—H|CH2—CH2脯氨酸H2C第十二章蛋白質化學42022/12/12（一）氨基酸的結構第十二章蛋白質化學52022/12/16人體內氨基酸均為：L-氨基酸氨基酸的構型也以甘油醛為標準：第十二章蛋白質化學52022/12/12人體內氨基酸均為第十二章蛋白質化學62022/12/16（二）氨基酸分類根據(jù)R基結構不同分：脂肪族氨基酸芳香族氨基酸雜環(huán)氨基酸第十二章蛋白質化學62022/12/12（二）氨基酸分類根第十二章蛋白質化學72022/12/161、中性非極性氨基酸（R基無極性、疏水）2、中性極性氨基酸（R基不帶電，但有極性、親水）3、酸性氨基酸（R基含有羧基）4、堿性氨基酸（R基含有氨基）根據(jù)R基極性大小分：第十二章蛋白質化學72022/12/121、中性非極性氨基第十二章蛋白質化學82022/12/16⑴中性非極性氨基酸NHCH32CH2第十二章蛋白質化學82022/12/12⑴中性非極性氨基第十二章蛋白質化學92022/12/16⑵中性極性氨基酸Cys，第十二章蛋白質化學92022/12/12⑵中性極性氨基酸C第十二章蛋白質化學102022/12/16⑶酸性氨基酸第十二章蛋白質化學102022/12/12⑶酸性氨基酸第十二章蛋白質化學112022/12/16⑷堿性氨基酸H2N-C-NH-=NH第十二章蛋白質化學112022/12/12⑷堿性氨基酸H第十二章蛋白質化學122022/12/16（三）氨基酸的理化性質氨基酸具有氨基、羧基、特殊R基等具堿性具酸性與醇反應成酯脫羧成胺特殊R基具有各種不同的顏色反應（兩性）第十二章蛋白質化學122022/12/12（三）氨基酸的第十二章蛋白質化學132022/12/161.氨基酸的兩性電離和等電點等電點（pI）：氨基酸所帶正負電荷相等時溶液的pH值即該氨基酸的等電點pHpHpHpIpIpI第十二章蛋白質化學132022/12/121.氨基酸的兩性第十二章蛋白質化學142022/12/16等電點是氨基酸的特征常數(shù)（固定不變）pH值離等電點越遠，氨基酸帶凈電荷越多pH＞pI，氨基酸帶負電荷pH＜pI，氨基酸帶正電荷pH＝pI，氨基酸正負電荷相等（凈電荷=0）電泳：帶電粒子在電場中向相反電極移動第十二章蛋白質化學142022/12/12等電點是氨基酸的第十二章蛋白質化學152022/12/16利用不同氨基酸pI不同（在某一pH條件下帶電不同），可對它們進行電泳分離。例：下列各氨基酸在pH6.0條件下電泳結果原點+-AspGluGlyLysArg2.83.26.09.710.8pI第十二章蛋白質化學152022/12/12利用不同氨基酸p第十二章蛋白質化學162022/12/163.氨基酸的紫外吸收芳香族氨基酸（酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸）λ=280nm光吸收蛋白質分子中含有芳香族AA，故也有280nm的紫外吸收，故此法也可用于Pr定量。260nm第十二章蛋白質化學162022/12/123.氨基酸的紫外第十二章蛋白質化學172022/12/16二、肽肽：氨基酸通過肽鍵連接縮合而成的化合物（一）肽的形成和命名H2N－C－C－OHR1HO－－=H－N－C－COOHR2H－－－H-H2OH2N－C－C－R1HO－－=N－C－COOHR2－－H－H肽鍵第十二章蛋白質化學172022/12/12二、肽肽：氨第十二章蛋白質化學182022/12/16第十二章蛋白質化學182022/12/12第十二章蛋白質化學192022/12/16氨基末端羧基末端肽鍵第十二章蛋白質化學192022/12/12氨基末端羧基末端第十二章蛋白質化學202022/12/16多肽鏈書寫與命名命名：丙氨酰甘氨酰絲氨酸（或簡寫：H-丙-甘-絲-OH）第十二章蛋白質化學202022/12/12多肽鏈書寫與命名第十二章蛋白質化學212022/12/16（二）體內重要的活性肽由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸組成功能基：-SH解毒劑GSHH谷胱甘肽谷氨酰半胱氨酰甘氨酸第十二章蛋白質化學212022/12/12（二）體內重要的第十二章蛋白質化學222022/12/16第二節(jié)蛋白質的分子結構蛋白質的分子結構基本結構空間結構一級結構二級結構三級結構四級結構第十二章蛋白質化學222022/12/12第二節(jié)蛋白質的第十二章蛋白質化學232022/12/16一、蛋白質的一級結構概念：多肽鏈中氨基酸的排列順序主要化學鍵：肽鍵第十二章蛋白質化學232022/12/12一、蛋白質的一級第十二章蛋白質化學242022/12/16二、蛋白質的二級結構結構基礎：肽鍵平面概念：以肽鍵平面為單位，盤繞、折疊形成的空間結構第十二章蛋白質化學242022/12/12二、蛋白質的二級第十二章蛋白質化學252022/12/16（一）肽鍵平面肽鍵（CO-NH）的特點：第十二章蛋白質化學252022/12/12（一）肽鍵平面肽第十二章蛋白質化學262022/12/16第十二章蛋白質化學262022/12/12第十二章蛋白質化學272022/12/16（二）二級結構類型①α-螺旋②-折疊③-轉角④自由回轉（無規(guī)卷曲）留學生掌握：類型、作用鍵第十二章蛋白質化學272022/12/12（二）二級結構類第十二章蛋白質化學282022/12/16①α-螺旋右手螺旋3.6個殘基/周螺距0.54nm穩(wěn)定鍵：-NH①和-CO④之間

形成氫鍵第十二章蛋白質化學282022/12/12①α-螺旋右手螺第十二章蛋白質化學292022/12/16②β-折疊數(shù)條肽鏈平行排列呈鋸齒狀肽鏈可順向或逆向排列穩(wěn)定鍵：鏈間-CO和-NH之間氫鍵第十二章蛋白質化學292022/12/12②β-折疊數(shù)條第十二章蛋白質化學302022/12/16③-轉角第十二章蛋白質化學302022/12/12③-轉角第十二章蛋白質化學312022/12/16三、蛋白質的三級結構概念：是蛋白質分子中所有原子（主鏈+側鏈）的空間位置關系作用鍵：疏水鍵、離子鍵、氫鍵、范得華引力、二硫鍵第十二章蛋白質化學312022/12/12三、蛋白質的三級第十二章蛋白質化學322022/12/16二硫鍵極性基團離子鍵蛋白質三級結構：第十二章蛋白質化學322022/12/12二硫鍵極性基團第十二章蛋白質化學332022/12/16四、蛋白質的四級結構兩個或兩個以上獨立三級結構的多肽鏈通過次級鍵結合而形成的空間結構亞基疏水鍵、氫鍵、鹽鍵概念：第十二章蛋白質化學332022/12/12四、蛋白質的四級第十二章蛋白質化學342022/12/16血紅蛋白的四級結構第十二章蛋白質化學342022/12/12血紅蛋白的四級結第十二章蛋白質化學352022/12/16蛋白質1-4級結構第十二章蛋白質化學352022/12/12蛋白質1-4級結第十二章蛋白質化學362022/12/16五、維持蛋白質構象的主要作用力離子鍵疏水鍵二硫鍵氫鍵范德華力第十二章蛋白質化學362022/12/12五、維持蛋白質構第十二章蛋白質化學372022/12/16第十二章蛋白質化學372022/12/12第十二章蛋白質化學382022/12/16蛋白質一級結構的作用鍵？二級結構的作用鍵？

三級結構的作用鍵？

四級結構的作用鍵？

第十二章蛋白質化學382022/12/12蛋白質一級結構的第十二章蛋白質化學392022/12/16第三節(jié)蛋白質結構與功能的關系第十二章蛋白質化學392022/12/12第三節(jié)蛋白質第十二章蛋白質化學402022/12/16血紅蛋白結構與功能正常β鏈：H-纈—組—亮—蘇—脯—谷—谷—貧血β鏈：H-纈—組—亮—蘇—脯—纈—谷—第十二章蛋白質化學402022/12/12血紅蛋白結構與功第十二章蛋白質化學412022/12/16第十二章蛋白質化學412022/12/12第十二章蛋白質化學422022/12/16第十二章蛋白質化學422022/12/12第十二章蛋白質化學432022/12/16第四節(jié)蛋白質的理化性質與分離純化第十二章蛋白質化學432022/12/12第四節(jié)蛋白質的第十二章蛋白質化學442022/12/16一、蛋白質的理化性質（一）蛋白質的一般性質1.呈色反應2.紫外吸收特征3.兩性電離與等電點（二）蛋白質的高分子性質4.蛋白質的膠體性質5.蛋白質的變性與復性第十二章蛋白質化學442022/12/12一、蛋白質的理化第十二章蛋白質化學452022/12/16（1）雙縮脲反應：

Cu2+

蛋白質紫色絡合物

OH-原理：利用蛋白質分子中的肽鍵CO-NH540nm比色分析1.呈色反應第十二章蛋白質化學452022/12/12（1）雙縮脲反應第十二章蛋白質化學462022/12/16（2）Folin-酚試劑反應：磷鎢酸蛋白質

藍色化合物磷鉬酸650nm比色分析原理：利用蛋白質分子中含有酚性羥基的酪氨酸等第十二章蛋白質化學462022/12/12（2）Foli第十二章蛋白質化學472022/12/16（3）考馬斯亮藍反應：考馬斯亮藍（G-250）蛋白質藍綠色595nm比色分析第十二章蛋白質化學472022/12/12（3）考馬斯亮第十二章蛋白質化學482022/12/162.紫外吸收特征蛋白質的紫外吸收：λ=280nm（色氨酸、酪氨酸）（苯丙氨酸260nm）在一定范圍內，紫外吸收與蛋白質濃度成正比摩爾吸光度（M-1cm-1）10,000100010010

200250

300波長（nm）TrpPheTyr第十二章蛋白質化學482022/12/122.紫外吸收特第十二章蛋白質化學492022/12/163.兩性電離和等電點帶負電荷凈電荷為零帶正電荷第十二章蛋白質化學492022/12/123.兩性電離和第十二章蛋白質化學502022/12/16蛋白質所帶正負電荷相等時溶液的PH值即該蛋白質的等電點電泳帶電粒子在電場中向相反電極移動的現(xiàn)象等電點利用電泳可將不同等電點的蛋白質分離開第十二章蛋白質化學502022/12/12蛋白質所帶正負電第十二章蛋白質化學512022/12/164.蛋白質的親水膠體性質透析可分離純化蛋白質破壞電荷和水化膜，蛋白質沉淀穩(wěn)定因素：同種電荷和水化膜分子大小：1~100nm，具膠體性質超速離心可沉降蛋白質第十二章蛋白質化學512022/12/124.蛋白質的親水第十二章蛋白質化學522022/12/16蛋白質顆粒表面的水化膜和電荷第十二章蛋白質化學522022/12/12蛋白質顆粒表面的第十二章蛋白質化學532022/12/165.蛋白質的變性與復性變性：理化因素影響→蛋白質空間構象破壞→蛋白質理化性質改變，生物學活性喪失理化因素：加熱、紫外線、強酸強堿、有機溶劑、重金屬鹽等可逆變性（復性）：去除變性因素，蛋白質構象恢復，恢復原有生物學活性第十二章蛋白質化學532022/12/125.蛋白質的變性第十二章蛋白質化學542022/12/16核糖核酸酶的可逆變性（復性）8M尿素或β-巰基乙醇透析第十二章蛋白質化學542022/12/12核糖核酸酶的可逆第十二章蛋白質化學552022/12/16蛋白質變性的應用：利用蛋白質的變性原理達到消毒、滅菌的目的蛋白制劑的制備與儲存過程中，應注意

低溫、避光、防止酸堿污染等第十二章蛋白質化學552022/12/12蛋白質變性的應用第十二章蛋白質化學562022/12/16二、蛋白質的分離、純化與鑒定技術（一）沉淀法定義：蛋白質分子相互聚集從溶液中析出的現(xiàn)象原理：破壞同種電荷和水化膜第十二章蛋白質化學562022/12/12二、蛋白質的分離第十二章蛋白質化學572022/12/16常用沉淀蛋白質的方法：鹽析——破壞水化膜，中和電荷有機溶劑沉淀——破壞水化膜（條件pH=pI)生物堿試劑沉淀——中和正電荷(條件pH＜pI)重金屬鹽沉淀——中和負電荷(條件pH＞pI)第十二章蛋白質化學572022/12/12常用沉淀蛋白質的第十二章蛋白質化學582022/12/161、鹽析概念：高濃度中性鹽沉淀水溶液中的蛋白質原理：破壞水化膜，中和電荷常用中性鹽：（NH4）2SO4、Na2SO4、NaCl、MgSO4特點：蛋白質不變性第十二章蛋白質化學582022/12/121、鹽析第十二章蛋白質化學592022/12/16半飽和（NH4）2SO4——沉淀球蛋白飽和（NH4）2SO4——沉淀清蛋白分段鹽析：不同飽和度的鹽分段析出蛋白質原理：利用不同蛋白質的分子量、帶電荷多少不同，在鹽溶液中的溶解度不同而分離第十二章蛋白質化學592022/12/12半飽和（NH4）第十二章蛋白質化學602022/12/162、有機溶劑沉淀原理：破壞水化膜等電點時更易沉淀常用有機溶劑：乙醇、丙酮特點：蛋白質易變性，需低溫進行第十二章蛋白質化學602022/12/122、有機溶劑沉淀第十二章蛋白質化學612022/12/163、重金屬鹽類沉淀沉淀條件：PH>PI，蛋白質帶負電荷重金屬離子：Cu2+、Hg2+、Pb2+、Ag+特點：蛋白質變性PrNH3+COO-PrNH2COO-OH-M+重金屬離子PrNH2COOM第十二章蛋白質化學612022/12/123、重金屬鹽類沉第十二章蛋白質化學622022/12/164、生物堿試劑沉淀沉淀條件：pH<pI，蛋白質帶正電荷生物堿試劑：三氯醋酸、苦味酸、鞣酸特點：蛋白質易變性PrNH3+COO-PrNH3+COOHH+X-生物堿試劑PrNH3XCOOH第十二章蛋白質化學622022/12/124、生物堿試劑沉第十二章蛋白質化學632022/12/16第五節(jié)蛋白質分類1.按化學組成分2.按對稱性分單純蛋白結合蛋白球狀蛋白纖維狀蛋白第十二章蛋白質化學632022/12/12第五節(jié)蛋白質第12章蛋白質化學生化教研室夏花英8403課程代碼：22680b57e1第12章蛋白質化學生化教研室第十二章蛋白質化學652022/12/16第一節(jié)蛋白質的分子組成元素組成：CHONS蛋白質的特征元素，平均含量：16%蛋白質含量（g）的計算：樣品中含氮量（g）×6.25第十二章蛋白質化學22022/12/12第一節(jié)蛋白質的第十二章蛋白質化學662022/12/16一、蛋白質的基本組成單位——氨基酸蛋白質（20種）氨基酸酸、堿、酶（標準氨基酸）（編碼氨基酸）第十二章蛋白質化學32022/12/12一、蛋白質的基本組第十二章蛋白質化學672022/12/16（一）氨基酸的結構α-碳原子為手性碳原子都為L-α-氨基酸（甘氨酸、脯氨酸除外）α氨基酸的共同結構COOH|H2N—C—H|H甘氨酸COOH|HN—C—H|CH2—CH2脯氨酸H2C第十二章蛋白質化學42022/12/12（一）氨基酸的結構第十二章蛋白質化學682022/12/16人體內氨基酸均為：L-氨基酸氨基酸的構型也以甘油醛為標準：第十二章蛋白質化學52022/12/12人體內氨基酸均為第十二章蛋白質化學692022/12/16（二）氨基酸分類根據(jù)R基結構不同分：脂肪族氨基酸芳香族氨基酸雜環(huán)氨基酸第十二章蛋白質化學62022/12/12（二）氨基酸分類根第十二章蛋白質化學702022/12/161、中性非極性氨基酸（R基無極性、疏水）2、中性極性氨基酸（R基不帶電，但有極性、親水）3、酸性氨基酸（R基含有羧基）4、堿性氨基酸（R基含有氨基）根據(jù)R基極性大小分：第十二章蛋白質化學72022/12/121、中性非極性氨基第十二章蛋白質化學712022/12/16⑴中性非極性氨基酸NHCH32CH2第十二章蛋白質化學82022/12/12⑴中性非極性氨基第十二章蛋白質化學722022/12/16⑵中性極性氨基酸Cys，第十二章蛋白質化學92022/12/12⑵中性極性氨基酸C第十二章蛋白質化學732022/12/16⑶酸性氨基酸第十二章蛋白質化學102022/12/12⑶酸性氨基酸第十二章蛋白質化學742022/12/16⑷堿性氨基酸H2N-C-NH-=NH第十二章蛋白質化學112022/12/12⑷堿性氨基酸H第十二章蛋白質化學752022/12/16（三）氨基酸的理化性質氨基酸具有氨基、羧基、特殊R基等具堿性具酸性與醇反應成酯脫羧成胺特殊R基具有各種不同的顏色反應（兩性）第十二章蛋白質化學122022/12/12（三）氨基酸的第十二章蛋白質化學762022/12/161.氨基酸的兩性電離和等電點等電點（pI）：氨基酸所帶正負電荷相等時溶液的pH值即該氨基酸的等電點pHpHpHpIpIpI第十二章蛋白質化學132022/12/121.氨基酸的兩性第十二章蛋白質化學772022/12/16等電點是氨基酸的特征常數(shù)（固定不變）pH值離等電點越遠，氨基酸帶凈電荷越多pH＞pI，氨基酸帶負電荷pH＜pI，氨基酸帶正電荷pH＝pI，氨基酸正負電荷相等（凈電荷=0）電泳：帶電粒子在電場中向相反電極移動第十二章蛋白質化學142022/12/12等電點是氨基酸的第十二章蛋白質化學782022/12/16利用不同氨基酸pI不同（在某一pH條件下帶電不同），可對它們進行電泳分離。例：下列各氨基酸在pH6.0條件下電泳結果原點+-AspGluGlyLysArg2.83.26.09.710.8pI第十二章蛋白質化學152022/12/12利用不同氨基酸p第十二章蛋白質化學792022/12/163.氨基酸的紫外吸收芳香族氨基酸（酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸）λ=280nm光吸收蛋白質分子中含有芳香族AA，故也有280nm的紫外吸收，故此法也可用于Pr定量。260nm第十二章蛋白質化學162022/12/123.氨基酸的紫外第十二章蛋白質化學802022/12/16二、肽肽：氨基酸通過肽鍵連接縮合而成的化合物（一）肽的形成和命名H2N－C－C－OHR1HO－－=H－N－C－COOHR2H－－－H-H2OH2N－C－C－R1HO－－=N－C－COOHR2－－H－H肽鍵第十二章蛋白質化學172022/12/12二、肽肽：氨第十二章蛋白質化學812022/12/16第十二章蛋白質化學182022/12/12第十二章蛋白質化學822022/12/16氨基末端羧基末端肽鍵第十二章蛋白質化學192022/12/12氨基末端羧基末端第十二章蛋白質化學832022/12/16多肽鏈書寫與命名命名：丙氨酰甘氨酰絲氨酸（或簡寫：H-丙-甘-絲-OH）第十二章蛋白質化學202022/12/12多肽鏈書寫與命名第十二章蛋白質化學842022/12/16（二）體內重要的活性肽由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸組成功能基：-SH解毒劑GSHH谷胱甘肽谷氨酰半胱氨酰甘氨酸第十二章蛋白質化學212022/12/12（二）體內重要的第十二章蛋白質化學852022/12/16第二節(jié)蛋白質的分子結構蛋白質的分子結構基本結構空間結構一級結構二級結構三級結構四級結構第十二章蛋白質化學222022/12/12第二節(jié)蛋白質的第十二章蛋白質化學862022/12/16一、蛋白質的一級結構概念：多肽鏈中氨基酸的排列順序主要化學鍵：肽鍵第十二章蛋白質化學232022/12/12一、蛋白質的一級第十二章蛋白質化學872022/12/16二、蛋白質的二級結構結構基礎：肽鍵平面概念：以肽鍵平面為單位，盤繞、折疊形成的空間結構第十二章蛋白質化學242022/12/12二、蛋白質的二級第十二章蛋白質化學882022/12/16（一）肽鍵平面肽鍵（CO-NH）的特點：第十二章蛋白質化學252022/12/12（一）肽鍵平面肽第十二章蛋白質化學892022/12/16第十二章蛋白質化學262022/12/12第十二章蛋白質化學902022/12/16（二）二級結構類型①α-螺旋②-折疊③-轉角④自由回轉（無規(guī)卷曲）留學生掌握：類型、作用鍵第十二章蛋白質化學272022/12/12（二）二級結構類第十二章蛋白質化學912022/12/16①α-螺旋右手螺旋3.6個殘基/周螺距0.54nm穩(wěn)定鍵：-NH①和-CO④之間

形成氫鍵第十二章蛋白質化學282022/12/12①α-螺旋右手螺第十二章蛋白質化學922022/12/16②β-折疊數(shù)條肽鏈平行排列呈鋸齒狀肽鏈可順向或逆向排列穩(wěn)定鍵：鏈間-CO和-NH之間氫鍵第十二章蛋白質化學292022/12/12②β-折疊數(shù)條第十二章蛋白質化學932022/12/16③-轉角第十二章蛋白質化學302022/12/12③-轉角第十二章蛋白質化學942022/12/16三、蛋白質的三級結構概念：是蛋白質分子中所有原子（主鏈+側鏈）的空間位置關系作用鍵：疏水鍵、離子鍵、氫鍵、范得華引力、二硫鍵第十二章蛋白質化學312022/12/12三、蛋白質的三級第十二章蛋白質化學952022/12/16二硫鍵極性基團離子鍵蛋白質三級結構：第十二章蛋白質化學322022/12/12二硫鍵極性基團第十二章蛋白質化學962022/12/16四、蛋白質的四級結構兩個或兩個以上獨立三級結構的多肽鏈通過次級鍵結合而形成的空間結構亞基疏水鍵、氫鍵、鹽鍵概念：第十二章蛋白質化學332022/12/12四、蛋白質的四級第十二章蛋白質化學972022/12/16血紅蛋白的四級結構第十二章蛋白質化學342022/12/12血紅蛋白的四級結第十二章蛋白質化學982022/12/16蛋白質1-4級結構第十二章蛋白質化學352022/12/12蛋白質1-4級結第十二章蛋白質化學992022/12/16五、維持蛋白質構象的主要作用力離子鍵疏水鍵二硫鍵氫鍵范德華力第十二章蛋白質化學362022/12/12五、維持蛋白質構第十二章蛋白質化學1002022/12/16第十二章蛋白質化學372022/12/12第十二章蛋白質化學1012022/12/16蛋白質一級結構的作用鍵？二級結構的作用鍵？

三級結構的作用鍵？

四級結構的作用鍵？

第十二章蛋白質化學382022/12/12蛋白質一級結構的第十二章蛋白質化學1022022/12/16第三節(jié)蛋白質結構與功能的關系第十二章蛋白質化學392022/12/12第三節(jié)蛋白質第十二章蛋白質化學1032022/12/16血紅蛋白結構與功能正常β鏈：H-纈—組—亮—蘇—脯—谷—谷—貧血β鏈：H-纈—組—亮—蘇—脯—纈—谷—第十二章蛋白質化學402022/12/12血紅蛋白結構與功第十二章蛋白質化學1042022/12/16第十二章蛋白質化學412022/12/12第十二章蛋白質化學1052022/12/16第十二章蛋白質化學422022/12/12第十二章蛋白質化學1062022/12/16第四節(jié)蛋白質的理化性質與分離純化第十二章蛋白質化學432022/12/12第四節(jié)蛋白質的第十二章蛋白質化學1072022/12/16一、蛋白質的理化性質（一）蛋白質的一般性質1.呈色反應2.紫外吸收特征3.兩性電離與等電點（二）蛋白質的高分子性質4.蛋白質的膠體性質5.蛋白質的變性與復性第十二章蛋白質化學442022/12/12一、蛋白質的理化第十二章蛋白質化學1082022/12/16（1）雙縮脲反應：

Cu2+

蛋白質紫色絡合物

OH-原理：利用蛋白質分子中的肽鍵CO-NH540nm比色分析1.呈色反應第十二章蛋白質化學452022/12/12（1）雙縮脲反應第十二章蛋白質化學1092022/12/16（2）Folin-酚試劑反應：磷鎢酸蛋白質

藍色化合物磷鉬酸650nm比色分析原理：利用蛋白質分子中含有酚性羥基的酪氨酸等第十二章蛋白質化學462022/12/12（2）Foli第十二章蛋白質化學1102022/12/16（3）考馬斯亮藍反應：考馬斯亮藍（G-250）蛋白質藍綠色595nm比色分析第十二章蛋白質化學472022/12/12（3）考馬斯亮第十二章蛋白質化學1112022/12/162.紫外吸收特征蛋白質的紫外吸收：λ=280nm（色氨酸、酪氨酸）（苯丙氨酸260nm）在一定范圍內，紫外吸收與蛋白質濃度成正比摩爾吸光度（M-1cm-1）10,000100010010

200250

300波長（nm）TrpPheTyr第十二章蛋白質化學482022/12/122.紫外吸收特第十二章蛋白質化學1122022/12/163.兩性電離和等電點帶負電荷凈電荷為零帶正電荷第十二章蛋白質化學492022/12/123.兩性電離和第十二章蛋白質化學1132022/12/16蛋白質所帶正負電荷相等時溶液的PH值即該蛋白質的等電點電泳帶電粒子在電場中向相反電極移動的現(xiàn)象等電點利用電泳可將不同等電點的蛋白質分離開第十二章蛋白質化學502022/12/12蛋白質所帶正負電第十二章蛋白質化學1142022/12/164.蛋白質的親水膠體性質透析可分離純化蛋白質破壞電荷和水化膜，蛋白質沉淀穩(wěn)定因素：同種電荷和水化膜分子大小：1~100nm，具膠體性質超速離心可沉降蛋白質第十二章蛋白質化學512022/12/124.蛋白質的親水第十二章蛋白質化學1152022/12/16蛋白質顆粒表面的水化膜和電荷第十二章蛋白質化學522022/12/12蛋白質顆粒表面的第十二章蛋白質化學1162022/12/165.蛋白質的變性與復性變性：理化因素影響→蛋白質空間構象破壞→蛋白質理化性質改變，生物學活性喪失理化因素：加熱、紫外線、強酸強堿、有機溶劑、重金屬鹽等可逆變性（復性）：去除變性因素，蛋白質