大小型層析柱的裝填實(shí)踐介紹課件

大小型層析柱的裝填實(shí)踐介紹大小型層析柱的裝填實(shí)踐介紹大小型層析柱的裝填實(shí)踐介紹大小型層析柱的裝填實(shí)踐介紹大小型層析柱的裝填實(shí)踐介紹大小型層1TOYOPEARL樹脂填料的裝填裝填前的準(zhǔn)備工作小顆粒的去除緩沖液平衡勻漿準(zhǔn)備裝填步驟/層析柱類型層析柱的操作柱子的平衡與柱效評價(jià)保存內(nèi)容提要PeakBiotechTOYOPEARL樹脂填料的裝填裝填前的準(zhǔn)備工作內(nèi)容提要Pe裝填的一般原則☆TOYOPEARL的裝填壓力最好在0.5-5bar的范圍內(nèi)☆裝填流速至少比實(shí)際操作流速高50%☆不要使用會(huì)產(chǎn)生剪切力的裝置（如：磁力攪拌器、

齒輪泵）-這些裝置會(huì)磨碎樹脂填料并產(chǎn)生小顆粒☆TOYOPEARL是一種剛性強(qiáng)的樹脂填料，裝填時(shí)務(wù)必區(qū)別于一般的軟式瓊脂糖凝膠

Superformance/G?tecTOYOPEARL樹脂填料的裝填裝填的一般原則Superformance/G?tecTO基本步驟去除小顆粒裝填緩沖液平衡勻漿準(zhǔn)備裝柱TOYOPEARL出貨時(shí)為懸浮液狀態(tài)（含20%乙醇）TOYOPEARL樹脂填料的裝填基本步驟去除小顆粒裝填緩沖液平衡勻漿準(zhǔn)備裝柱TOYOPEAR裝柱前務(wù)必進(jìn)行小顆粒去除的操作!小顆粒的存在會(huì)阻塞篩板或燒結(jié)板，并最終會(huì)導(dǎo)致整個(gè)柱子的壓降增大小顆粒的去除采取懸浮靜置移注法重復(fù)這一步驟不少于3次借助顯微鏡可檢查小顆粒的存在小顆粒的去除裝柱前務(wù)必進(jìn)行小顆粒去除的操作!借助顯微鏡可檢查小顆粒的存在TOYOPEARL粒徑CoarseC級規(guī)格:100μmMediumM級規(guī)格:65μmFineF級規(guī)格:45μmSuperfineS級規(guī)格:35μm水中靜置時(shí)間15-30Min.30-45Min.45-60Min.60-90Min.AmiconModuline-120cmID顯微鏡微觀顯示–Toyopearl650MTOYOPEARL的靜置時(shí)間TOYOPEARL粒徑水中靜置時(shí)間AmiconModu在去除小顆粒時(shí)的最后一次步驟中可加入裝填緩沖液進(jìn)行填料的平衡最好根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)中所使用的緩沖液選取合適的裝填緩沖溶液一般來講，分離純化工藝中將使用到的最高離子強(qiáng)度的流動(dòng)相是裝填緩沖液的首選這一操作可以將填料裝得最為緊密，并且可以防止死體積的發(fā)生或膠體內(nèi)溝槽的出現(xiàn)。

裝填緩沖液的平衡在去除小顆粒時(shí)的最后一次步驟中可加入裝填緩沖液進(jìn)行填料的平衡TOYOPEARL-典型的裝填緩沖溶液TOYOPEARL-典型的裝填緩沖溶液利用量筒測量靜置膠體體積或使用水泵抽濾漿液至濕濾餅后計(jì)算裝填所需要的填料體積通過添加裝填緩沖液調(diào)節(jié)漿液濃度:流動(dòng)式裝填柱~40-70%(v/v)自動(dòng)裝填柱20-60%(v/v)

最終裝填好的柱床體積是要小于裝填前膠體靜置體積或抽干的濕濾餅的體積SlurrypreparationinthecolumnSlurrypreparationinaseparatetankSettlingresinAmiconModuline-120cmID勻漿準(zhǔn)備利用量筒測量靜置膠體體積或使用水泵抽濾漿液至濕濾餅后計(jì)算裝填ToyopearlHW-40,HW-50,HW-55HW-65andHW-75FEther-650,Phenyl-650Butyl-650,DEAE-650Super-Q-650,CM-650SP-650andallAffinityQAE-550CandSP-550C使用約1.1倍柱體積的靜置膠使用約1.2倍柱體積的靜置膠使用約1.25-1.4倍柱體積的靜置膠對于給定的柱子，裝柱所需的靜置膠體積Toyopearl對于給定的柱子，裝柱所需的靜置膠體積恒流速裝填法恒壓裝填法輔助的重力沉降裝填法

不同裝填方法的特點(diǎn)裝填方法 恒流速

恒壓

重力沉降裝填速度

快 快 慢流速范圍 可增大至較高 可增大至較高 只能慢操作重復(fù)性 很好

很好 好

泵 恒速 恒壓

蠕動(dòng)泵壓力計(jì) 需要 需要 不需要主要裝填方法恒流速裝填法 不同裝填方法的特點(diǎn)主要裝填方法方法簡介:將柱底篩板用裝填緩沖液潤濕（趕走氣泡）任何時(shí)候，均需確保漿液在注入層析柱前進(jìn)行過勻漿操作勻漿液倒入后，立刻將分配器置于儲(chǔ)槽內(nèi)漿液表面分配器與溶液漿液間不應(yīng)有氣泡存在階段性調(diào)整裝填流速至目標(biāo)流速，以產(chǎn)生一個(gè)實(shí)時(shí)的、沒有太大振動(dòng)的栓塞流在最初的壓實(shí)操作基礎(chǔ)上，為進(jìn)一步壓實(shí)柱床，至少泵入5-10倍柱體積的裝填緩沖液調(diào)整分配器至膠體表面重復(fù)后兩個(gè)步驟，直至柱床被徹底壓實(shí)。最后將分配器移至距離柱床2-5mm處（最后一次）。不要擔(dān)心使用分配器的同時(shí)進(jìn)行柱床的壓實(shí)操作！MilliporeQuikScaleFlowPackedColumns(Millipore-QuikScale+Moduline,GEHealthcare-BPG,G?tec-Superformance,BioRad-Geltec,etc.)恒流速裝填方法方法簡介:MilliporeFlowPackedColu模式填料類型柱尺寸[cmIDxL]填料等級裝填流速[cm/h]操作流速

[cm/h]SECHW-40HW-50HW-55HW-65HW-752,2x602,2x602,2x602,2x602,2x60S(30um)F(45um)C(75um)S(30um)F(45um)S(30um)F(45um)S(30um)F(45um)F(45um)30–4060–80120–16025–3550–7025–3550–7020–7540–15040–15010–2525–5050–10010–2025–3510–2025–3510–1515–3015–30IECDEAE-650,SuperQ-650CM-650,SP-650SP-550,QAE-550MegaCapIISP-5502,2x202,2x202,2x20S(35um)M(65um)C(100um)C(100um)EC(100-300um)400–600800–1000800–1200700–1000800–120045–6580–13080–60080–24080–500HICEther-650,Phenyl-650,Butyl-650

PPG-600,Butyl-600SuperButy-550,Hexyl-5502,2x202,2x202,2x20S(35um)M(65um)C(100um)M(65um)C(100um)400–600800–1000800–1200800–1000800–120045–6580–13080–50080–13080–500AFCAF-Amino-650,AF-Carboxy-650AF-Formyl-650,AF-Epoxy-650AF-Tresyl-650,AF-Chelate-650,AF-BlueHC-650,AF-Heparin-HC-650AF-Red-6502,2x10M(65um)800–100030–130實(shí)驗(yàn)室規(guī)模最優(yōu)化的裝填及柱操作流速模式填料類型柱尺寸填料等級裝填流速操作流速SECHW-402柱尺寸(I.D.xL)2.2cmx60cm9cmx30cm25cmx30cm填料類型HW-55SQAE-550CDEAE-650M目標(biāo)流速(ml/min)23002000增加量(ml/min)0.550500

保持時(shí)間(min)0.522

恒流速裝填法中流速的增加量舉例：恒流速裝填方法柱尺寸填料類型目標(biāo)流速增加量保持時(shí)間恒流速裝填法中流速的增加G?tec/Superformance20cmIDColumn氣泡會(huì)由于切換閥、管路連接處、

活塞運(yùn)動(dòng)、未脫氣緩沖液而引起........恒流速裝填方法-擾動(dòng)（由入口處篩板下氣泡而引起的）G?tec/Superformance20cmIDCo裝填運(yùn)行管路清洗卸料HorizontalFlow-“SelfPacker”-presetcolumnvolume(Pall/Euroflow-ResoluteTM,Millipore-IsoPakTM,GEHealthcare-Chromaflow,EasternRiver)優(yōu)點(diǎn)：易于裝填弱點(diǎn)：填料用量較大,卸料可能較難,有剪切力發(fā)生,

卸料會(huì)導(dǎo)致大量的漿液體積Resolute恒壓裝填方法裝填運(yùn)行管路清洗卸料HorizontalFlow-“SRadialFlow-“SelfPacker”-presetcolumnvolume

(Proxcys-CRIO)Lowspacerequirements–only0,5~1m2;even600literBVismountedonwheelsLargeinletsurfacearea–cotrolled&gentleproductapplication(“NaturalDistribution”).Thinfritkeepstheresintogether–itisnotusedasflowdistributor–>abarrierofonly~60um–negligibleinfluenceonpressuregenerationIdenticalpathlengthforallsubstancesA-ECRIO601S5literBVCRIO-ColonneRadialeInOxidable恒壓裝填方法RadialFlow-“SelfPacker”-DynamicAxialCompression(Novasep,PeakBiotech,Technikrom,GEHealthcare)UnpackingPneumatic/HydraulicSlurrytransfer優(yōu)點(diǎn)：裝填操作簡單，非?？烊秉c(diǎn)：卸料會(huì)導(dǎo)致大量的漿液體積(whilecolumnisassembled)；不易操作g(whiledisassemblingthecolumn),卸料緩慢PeakBiotech/DanProcess-DAC恒壓或恒流速裝填方法DynamicAxialCompression(Nov不要使用沒有進(jìn)行正確柱效評價(jià)的層析柱!!!SEC、RPC及HIC型層析柱的柱效與裝填質(zhì)量密切相關(guān)的。只有IEC和AFC型層析柱，在沒有高塔板數(shù)時(shí)也能正常工作。盡管如此，對稱性因子還是相當(dāng)重要的。層析柱操作不要使用沒有進(jìn)行正確柱效評價(jià)的層析柱!!!層析柱操作使用5-10倍柱體積的低離子強(qiáng)度緩沖液進(jìn)行柱子的平衡使用低分子量、無保留的化合物進(jìn)行柱效的測定（如：丙酮、鹽）進(jìn)樣體積為柱體積的0.25-1%將測定而得的塔板數(shù)、不對稱性因子與廠家提供的最小值相比較如果未達(dá)到最小塔板數(shù)等期望值，必須重新進(jìn)行柱子的裝填！可供選擇的方法:使用高離子強(qiáng)度的裝填緩沖液，使用低鹽溶液或水進(jìn)樣，會(huì)產(chǎn)生一個(gè)負(fù)的電導(dǎo)信號/倒峰（不需要平衡、節(jié)省時(shí)間等）柱效評價(jià)使用5-10倍柱體積的低離子強(qiáng)度緩沖液進(jìn)行柱子的平衡可供選擇N=platespercolumnVe=elutionvolume[cmorml]W1/2=widthofthepeakathalfpeakheight[cmorml]Symmetry:Distanceb/a=peakwidthat10%peakheight[cmorml]Injectionab1/10hhhVe1/2hW1/2N=5.54(Ve/W1/2)2結(jié)果與下列因素有關(guān):

評價(jià)操作（因人而異）

進(jìn)樣的可重復(fù)性（硬件影響）流速

進(jìn)樣樣品的分子尺寸柱效與不對稱性因子的計(jì)算N=platespercolumnInjection樣品：丙酮Pall–Resolute400TOYOPEARL填料裝填柱的最小柱效值樣品：丙酮Pall–Resolute400TOYOPE理想的峰形(Gau?)與非理想的峰形Gau?

前沿/前伸峰

拖尾峰

柱效評價(jià)–峰形理想的峰形(Gau?)與非理想的峰形Gau?前沿峰的處理提高漿液濃度降低裝填壓力縮短靜置時(shí)間(在柱中)拖尾峰的處理與前沿峰的處理方法相反低柱效的處理去除小顆粒重新平衡膠體改變樣品/樣品緩沖液檢查檢測器/泵Pall-Resolute柱效評價(jià)–常見問題及處理前沿峰的處理Pall-Resolute柱效評價(jià)–常見II流動(dòng)式裝填中出現(xiàn)溝槽/管路柱床發(fā)生塌陷IBPG20cmIDColumn/ToyopearlDEAE-650MResolute40cmIDColumn/ToyopearlButyl-650M2-3cmlength->notcriticalChannels>5cmlength->critical!!!處理方法：柱子的最大耐壓為3bar->

更換耐壓較高的柱子（如：7bar）處理方法：盡量將活塞靠近柱床表面

盡可能降低裝填速度非理想的裝填I(lǐng)I流動(dòng)式裝填中出現(xiàn)溝槽/管路柱床發(fā)生塌陷IBPG20cmBeddepressioninthecenterFrompacktopackreproduciblysplitpeakgenerationInEuroflowandSuperformancecolumnsIIIIV處理方法：

Superformance->更換篩板/優(yōu)化流量分配系統(tǒng)Pall/Euroflow->修改裝填程序處理方法：更換柱篩板非理想的裝填BeddepressioninthecenterFr裝填好的柱子或已使用過的散裝填料應(yīng)保存在含有抑菌劑（如：20%的乙醇）的蒸餾水溶液中，并最好在4~25°C下存儲(chǔ)。儲(chǔ)存后，如果需要重新使用層析柱，必須進(jìn)行清洗操作。（鹽析/鹽沉淀的影響；微生物的生長；病毒的清除）柱子/填料的保存裝填好的柱子或已使用過的散裝填料應(yīng)保存在含有抑菌劑（如：20工藝層析柱裝填實(shí)例工藝層析柱裝填實(shí)例CustomertraininginEurope

感謝您的光臨!AchimSprauerTechnicalSpecialistTOSOHBioscienceGmbHGermanyAchim.TOYOPEARL樹脂填料的裝填實(shí)踐CustomertraininginEurope

感謝人有了知識，就會(huì)具備各種分析能力，明辨是非的能力。所以我們要勤懇讀書，廣泛閱讀，古人說“書中自有黃金屋?！蓖ㄟ^閱讀科技書籍，我們能豐富知識，培養(yǎng)邏輯思維能力；通過閱讀文學(xué)作品，我們能提高文學(xué)鑒賞水平，培養(yǎng)文學(xué)情趣；通過閱讀報(bào)刊，我們能增長見識，擴(kuò)大自己的知識面。有許多書籍還能培養(yǎng)我們的道德情操，給我們巨大的精神力量，鼓舞我們前進(jìn)。人有了知識，就會(huì)具備各種分析能力，30大小型層析柱的裝填實(shí)踐介紹大小型層析柱的裝填實(shí)踐介紹大小型層析柱的裝填實(shí)踐介紹大小型層析柱的裝填實(shí)踐介紹大小型層析柱的裝填實(shí)踐介紹大小型層31TOYOPEARL樹脂填料的裝填裝填前的準(zhǔn)備工作小顆粒的去除緩沖液平衡勻漿準(zhǔn)備裝填步驟/層析柱類型層析柱的操作柱子的平衡與柱效評價(jià)保存內(nèi)容提要PeakBiotechTOYOPEARL樹脂填料的裝填裝填前的準(zhǔn)備工作內(nèi)容提要Pe裝填的一般原則☆TOYOPEARL的裝填壓力最好在0.5-5bar的范圍內(nèi)☆裝填流速至少比實(shí)際操作流速高50%☆不要使用會(huì)產(chǎn)生剪切力的裝置（如：磁力攪拌器、

齒輪泵）-這些裝置會(huì)磨碎樹脂填料并產(chǎn)生小顆粒☆TOYOPEARL是一種剛性強(qiáng)的樹脂填料，裝填時(shí)務(wù)必區(qū)別于一般的軟式瓊脂糖凝膠

Superformance/G?tecTOYOPEARL樹脂填料的裝填裝填的一般原則Superformance/G?tecTO基本步驟去除小顆粒裝填緩沖液平衡勻漿準(zhǔn)備裝柱TOYOPEARL出貨時(shí)為懸浮液狀態(tài)（含20%乙醇）TOYOPEARL樹脂填料的裝填基本步驟去除小顆粒裝填緩沖液平衡勻漿準(zhǔn)備裝柱TOYOPEAR裝柱前務(wù)必進(jìn)行小顆粒去除的操作!小顆粒的存在會(huì)阻塞篩板或燒結(jié)板，并最終會(huì)導(dǎo)致整個(gè)柱子的壓降增大小顆粒的去除采取懸浮靜置移注法重復(fù)這一步驟不少于3次借助顯微鏡可檢查小顆粒的存在小顆粒的去除裝柱前務(wù)必進(jìn)行小顆粒去除的操作!借助顯微鏡可檢查小顆粒的存在TOYOPEARL粒徑CoarseC級規(guī)格:100μmMediumM級規(guī)格:65μmFineF級規(guī)格:45μmSuperfineS級規(guī)格:35μm水中靜置時(shí)間15-30Min.30-45Min.45-60Min.60-90Min.AmiconModuline-120cmID顯微鏡微觀顯示–Toyopearl650MTOYOPEARL的靜置時(shí)間TOYOPEARL粒徑水中靜置時(shí)間AmiconModu在去除小顆粒時(shí)的最后一次步驟中可加入裝填緩沖液進(jìn)行填料的平衡最好根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)中所使用的緩沖液選取合適的裝填緩沖溶液一般來講，分離純化工藝中將使用到的最高離子強(qiáng)度的流動(dòng)相是裝填緩沖液的首選這一操作可以將填料裝得最為緊密，并且可以防止死體積的發(fā)生或膠體內(nèi)溝槽的出現(xiàn)。

裝填緩沖液的平衡在去除小顆粒時(shí)的最后一次步驟中可加入裝填緩沖液進(jìn)行填料的平衡TOYOPEARL-典型的裝填緩沖溶液TOYOPEARL-典型的裝填緩沖溶液利用量筒測量靜置膠體體積或使用水泵抽濾漿液至濕濾餅后計(jì)算裝填所需要的填料體積通過添加裝填緩沖液調(diào)節(jié)漿液濃度:流動(dòng)式裝填柱~40-70%(v/v)自動(dòng)裝填柱20-60%(v/v)

最終裝填好的柱床體積是要小于裝填前膠體靜置體積或抽干的濕濾餅的體積SlurrypreparationinthecolumnSlurrypreparationinaseparatetankSettlingresinAmiconModuline-120cmID勻漿準(zhǔn)備利用量筒測量靜置膠體體積或使用水泵抽濾漿液至濕濾餅后計(jì)算裝填ToyopearlHW-40,HW-50,HW-55HW-65andHW-75FEther-650,Phenyl-650Butyl-650,DEAE-650Super-Q-650,CM-650SP-650andallAffinityQAE-550CandSP-550C使用約1.1倍柱體積的靜置膠使用約1.2倍柱體積的靜置膠使用約1.25-1.4倍柱體積的靜置膠對于給定的柱子，裝柱所需的靜置膠體積Toyopearl對于給定的柱子，裝柱所需的靜置膠體積恒流速裝填法恒壓裝填法輔助的重力沉降裝填法

不同裝填方法的特點(diǎn)裝填方法 恒流速

恒壓

重力沉降裝填速度

快 快 慢流速范圍 可增大至較高 可增大至較高 只能慢操作重復(fù)性 很好

很好 好

泵 恒速 恒壓

蠕動(dòng)泵壓力計(jì) 需要 需要 不需要主要裝填方法恒流速裝填法 不同裝填方法的特點(diǎn)主要裝填方法方法簡介:將柱底篩板用裝填緩沖液潤濕（趕走氣泡）任何時(shí)候，均需確保漿液在注入層析柱前進(jìn)行過勻漿操作勻漿液倒入后，立刻將分配器置于儲(chǔ)槽內(nèi)漿液表面分配器與溶液漿液間不應(yīng)有氣泡存在階段性調(diào)整裝填流速至目標(biāo)流速，以產(chǎn)生一個(gè)實(shí)時(shí)的、沒有太大振動(dòng)的栓塞流在最初的壓實(shí)操作基礎(chǔ)上，為進(jìn)一步壓實(shí)柱床，至少泵入5-10倍柱體積的裝填緩沖液調(diào)整分配器至膠體表面重復(fù)后兩個(gè)步驟，直至柱床被徹底壓實(shí)。最后將分配器移至距離柱床2-5mm處（最后一次）。不要擔(dān)心使用分配器的同時(shí)進(jìn)行柱床的壓實(shí)操作！MilliporeQuikScaleFlowPackedColumns(Millipore-QuikScale+Moduline,GEHealthcare-BPG,G?tec-Superformance,BioRad-Geltec,etc.)恒流速裝填方法方法簡介:MilliporeFlowPackedColu模式填料類型柱尺寸[cmIDxL]填料等級裝填流速[cm/h]操作流速

[cm/h]SECHW-40HW-50HW-55HW-65HW-752,2x602,2x602,2x602,2x602,2x60S(30um)F(45um)C(75um)S(30um)F(45um)S(30um)F(45um)S(30um)F(45um)F(45um)30–4060–80120–16025–3550–7025–3550–7020–7540–15040–15010–2525–5050–10010–2025–3510–2025–3510–1515–3015–30IECDEAE-650,SuperQ-650CM-650,SP-650SP-550,QAE-550MegaCapIISP-5502,2x202,2x202,2x20S(35um)M(65um)C(100um)C(100um)EC(100-300um)400–600800–1000800–1200700–1000800–120045–6580–13080–60080–24080–500HICEther-650,Phenyl-650,Butyl-650

PPG-600,Butyl-600SuperButy-550,Hexyl-5502,2x202,2x202,2x20S(35um)M(65um)C(100um)M(65um)C(100um)400–600800–1000800–1200800–1000800–120045–6580–13080–50080–13080–500AFCAF-Amino-650,AF-Carboxy-650AF-Formyl-650,AF-Epoxy-650AF-Tresyl-650,AF-Chelate-650,AF-BlueHC-650,AF-Heparin-HC-650AF-Red-6502,2x10M(65um)800–100030–130實(shí)驗(yàn)室規(guī)模最優(yōu)化的裝填及柱操作流速模式填料類型柱尺寸填料等級裝填流速操作流速SECHW-402柱尺寸(I.D.xL)2.2cmx60cm9cmx30cm25cmx30cm填料類型HW-55SQAE-550CDEAE-650M目標(biāo)流速(ml/min)23002000增加量(ml/min)0.550500

保持時(shí)間(min)0.522

恒流速裝填法中流速的增加量舉例：恒流速裝填方法柱尺寸填料類型目標(biāo)流速增加量保持時(shí)間恒流速裝填法中流速的增加G?tec/Superformance20cmIDColumn氣泡會(huì)由于切換閥、管路連接處、

活塞運(yùn)動(dòng)、未脫氣緩沖液而引起........恒流速裝填方法-擾動(dòng)（由入口處篩板下氣泡而引起的）G?tec/Superformance20cmIDCo裝填運(yùn)行管路清洗卸料HorizontalFlow-“SelfPacker”-presetcolumnvolume(Pall/Euroflow-ResoluteTM,Millipore-IsoPakTM,GEHealthcare-Chromaflow,EasternRiver)優(yōu)點(diǎn)：易于裝填弱點(diǎn)：填料用量較大,卸料可能較難,有剪切力發(fā)生,

卸料會(huì)導(dǎo)致大量的漿液體積Resolute恒壓裝填方法裝填運(yùn)行管路清洗卸料HorizontalFlow-“SRadialFlow-“SelfPacker”-presetcolumnvolume

(Proxcys-CRIO)Lowspacerequirements–only0,5~1m2;even600literBVismountedonwheelsLargeinletsurfacearea–cotrolled&gentleproductapplication(“NaturalDistribution”).Thinfritkeepstheresintogether–itisnotusedasflowdistributor–>abarrierofonly~60um–negligibleinfluenceonpressuregenerationIdenticalpathlengthforallsubstancesA-ECRIO601S5literBVCRIO-ColonneRadialeInOxidable恒壓裝填方法RadialFlow-“SelfPacker”-DynamicAxialCompression(Novasep,PeakBiotech,Technikrom,GEHealthcare)UnpackingPneumatic/HydraulicSlurrytransfer優(yōu)點(diǎn)：裝填操作簡單，非常快缺點(diǎn)：卸料會(huì)導(dǎo)致大量的漿液體積(whilecolumnisassembled)；不易操作g(whiledisassemblingthecolumn),卸料緩慢PeakBiotech/DanProcess-DAC恒壓或恒流速裝填方法DynamicAxialCompression(Nov不要使用沒有進(jìn)行正確柱效評價(jià)的層析柱!!!SEC、RPC及HIC型層析柱的柱效與裝填質(zhì)量密切相關(guān)的。只有IEC和AFC型層析柱，在沒有高塔板數(shù)時(shí)也能正常工作。盡管如此，對稱性因子還是相當(dāng)重要的。層析柱操作不要使用沒有進(jìn)行正確柱效評價(jià)的層析柱!!!層析柱操作使用5-10倍柱體積的低離子強(qiáng)度緩沖液進(jìn)行柱子的平衡使用低分子量、無保留的化合物進(jìn)行柱效的測定（如：丙酮、鹽）進(jìn)樣體積為柱體積的0.25-1%將測定而得的塔板數(shù)、不對稱性因子與廠家提供的最小值相比較如果未達(dá)到最小塔板數(shù)等期望值，必須重新進(jìn)行柱子的裝填！可供選擇的方法:使用高離子強(qiáng)度的裝填緩沖液，使用低鹽溶液或水進(jìn)樣，會(huì)產(chǎn)生一個(gè)負(fù)的電導(dǎo)信號/倒峰（不需要平衡、節(jié)省時(shí)間等）柱效評價(jià)使用5-10倍柱體積的低離子強(qiáng)度緩沖液進(jìn)行柱子的平衡可供選擇N=platespercolumnVe=elutionvolume[cmorml]W1/2=widthofthepeakathalfpeakheight[cmorml]Symmetry:Distanceb/a=peakwidthat10%peakheight[cmorml]Injectionab1/10hhhVe1/2hW1/2N=5.54(Ve/W1/2)2結(jié)果與下列因素有關(guān):

評價(jià)操作（因人而異）

進(jìn)樣的可重復(fù)性（硬件影響）流速

進(jìn)樣樣品的分子尺寸柱效與不對稱性因子的計(jì)算N=platespercolumnInjection樣品：丙酮Pall–Resolute400TOYOPEARL填料裝填柱的最小柱效值樣品：丙酮