紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定課件整理

紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定1、合法而穩(wěn)定的權(quán)力在使用得當(dāng)時(shí)很少遇到抵抗?！ぜs翰遜2、權(quán)力會使人漸漸失去溫厚善良的美德?！?、最大限度地行使權(quán)力總是令人反感；權(quán)力不易確定之處始終存在著危險(xiǎn)?！ぜs翰遜4、權(quán)力會奴化一切?！髻?、雖然權(quán)力是一頭固執(zhí)的熊，可是金子可以拉著它的鼻子走?！勘燃t細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定1、合法而穩(wěn)定的權(quán)力在使用得當(dāng)時(shí)很少遇到抵抗?！ぜs翰遜2、權(quán)力會使人漸漸失去溫厚善良的美德?！?、最大限度地行使權(quán)力總是令人反感；權(quán)力不易確定之處始終存在著危險(xiǎn)?！ぜs翰遜4、權(quán)力會奴化一切?！髻?、雖然權(quán)力是一頭固執(zhí)的熊，可是金子可以拉著它的鼻子走。——莎士比紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定概述：血液由血漿和血細(xì)胞兩部分組成。通過循環(huán)系統(tǒng)與全身各個(gè)組織器官密切聯(lián)系參與機(jī)體各項(xiàng)生理功能活動，維持機(jī)體正常新陳代謝和內(nèi)環(huán)境平衡。在病理情況下，血液系統(tǒng)疾病除直接累及血液外，也可以影響全身組織器官，而各組織器官的病變也可直接或間接地引起學(xué)液發(fā)生變化，臨床上較多的檢驗(yàn)項(xiàng)目是通過血液標(biāo)本的檢驗(yàn)來了解機(jī)體的變化。紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定1、合法而穩(wěn)定的權(quán)力在使用得當(dāng)時(shí)很少1紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定課件整理2紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定課件整理3紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定課件整理4紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定課件整理5一、紅細(xì)胞基礎(chǔ)理論（一）RBC來源、生成、壽命及衰亡

紅細(xì)胞系祖細(xì)胞早幼、中幼和（BFU-E和FU-E）晚幼各發(fā)育階段骨髓造血干細(xì)胞骨髓原紅細(xì)胞（CFU-S）促紅細(xì)胞生成素3~5次分裂（Erythropoietion，EPO）網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟紅細(xì)胞從骨髓益出至外周血的全過程約需5天時(shí)間一個(gè)原紅細(xì)胞最終可生成8~16個(gè)成熟紅細(xì)胞紅細(xì)胞的生存時(shí)間為120天珠蛋白參與再造血衰亡的RBC鐵膽紅素，參與膽紅素代謝一、紅細(xì)胞基礎(chǔ)理論6（二）

RBC的生理機(jī)能（見課件）

（三）Hb的組成及結(jié)構(gòu)

珠蛋白（含兩對肽鏈）血紅蛋白（Hb）亞鐵血紅素（Fe+4個(gè)卟啉）（二）RBC的生理機(jī)能（見課件）7

α2β2（成人主要Hb，簡稱HbA占90%）α鏈（141AA）珠蛋白

組合形式

α2δ2（成人次要β鏈（146AA）Hb，HbA2占1~3%）

α2γ2（胎兒主要Hb，HbF占2%以下）

紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定課件整理8紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定課件整理9二、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（一）原理：用等滲稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)（用已校準(zhǔn)的一次性微量采血管或Hb吸管，吸取全血20ul加到3.8ml稀釋液內(nèi)混勻），滴入血細(xì)胞計(jì)數(shù)盤內(nèi)，然后于顯微鏡下計(jì)數(shù)一定范圍內(nèi)的RBC數(shù)，經(jīng)過換算即可求得每升血液中的紅細(xì)胞數(shù)。二、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)10（二）試劑枸櫞酸鈉（2Na3C6H5O7·11H2O），3克甲醛（40%）1ml以上溶解后加蒸餾水100ml此配方克服了傳統(tǒng)的Hayem液的缺點(diǎn)。（三）操作見課件（二）試劑11（四）參考值RBC（×1012/L）Hb（g/L）男：4.0~5.5120~160女：3.5~5.0110~150

新生兒：6.0~7.0170~200（四）參考值12（五）臨床意義升高：相對升高——與脫水有關(guān)（吐、瀉、汗、尿、灼、癌）絕對升高——與乏氧有關(guān)生理性（高原、胎兒、新生兒、運(yùn)動、精神因素）病理性（心肺疾患、真性紅細(xì)胞增多癥）降低：生理性降低——妊娠、嬰幼兒、老年人病理性降低——生成降低、原料不足、造血障礙、丟失增多（失血）、破壞增多（溶血）

由于各種病因?qū)е轮車t細(xì)胞減少，即病理性貧血其貧血的病因?qū)W分類見第9頁“表2-1”（五）臨床意義13三、血紅蛋白測定（一）血紅蛋白測定方法改良沙利（Sahli）氏法托爾克維斯脫（Tallgvist）氏法光電比色法硫酸銅溶液比重法酸化（堿化）光電比色法氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）測定法十二烷基硫酸鈉血紅蛋白（SDS-Hb）測定法堿羥高鐵血紅素（AHD-575）法上機(jī)分析

三、血紅蛋白測定14（二）氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）法

原理：血紅蛋白被高鐵氰化鉀[K3Fe（CN）6]氧化成高鐵血紅蛋白（Hi）再與氰離子（CN-）結(jié)合，生成穩(wěn)定的氰化高鐵血紅蛋（hemigl-obinCyanide，簡稱HiCN）。氰化高鐵血紅蛋白在波長540nm處有吸收峰，可用校準(zhǔn)的高精度分光光度計(jì)進(jìn)行直接定量測定?；蛴肏iCN參考液進(jìn)行比色測定。

（二）氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）法15而幻燈片12而幻燈片1216試劑：常用的Hb轉(zhuǎn)化液為文齊氏液（見實(shí)習(xí)指導(dǎo)）

靜置操作：血液20ul+轉(zhuǎn)化液5ml———比色5分鐘計(jì)算：64458Hb（g/L）=測定吸光度（A）×————×25144×1000=A×367.764458是目前國際公認(rèn)的血紅蛋白平均分子量44是1965年國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會（ICSH）公布的血紅蛋白摩爾吸光度。251是稀釋倍數(shù)試劑：常用的Hb轉(zhuǎn)化液為文齊氏液（見實(shí)習(xí)指導(dǎo)）17（三）注意事項(xiàng)：必須以HiCN法為標(biāo)準(zhǔn)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線HiCN試劑不能貯存于塑料瓶中，應(yīng)放40C冰箱不能圖工作方便不顧質(zhì)量管理要求遇到白細(xì)胞數(shù)過多或異常球蛋白增高的血標(biāo)本，HiCN比色液會出現(xiàn)渾濁，可離心取上清夜或向比色液中加少許NaCL（約0.25g）或碳酸鉀（0.1g）氰化鉀是劇毒品，應(yīng)妥善保管，配試劑時(shí)要按劇毒品管理程序操作若用分光光度計(jì)作精度定量測定，分光光度計(jì)的波長和吸光度需校正，帶寬應(yīng)小于1nm，比色杯光徑1.00cm，允許誤差為0.5%（0.995~1.005cm），測定溫度200C~250C。（三）注意事項(xiàng)：18HiCN參考液的標(biāo)準(zhǔn)（1）波峰540nm±1nm，波谷504~502nm（2）A540/A504應(yīng)在1.59~1.63之間（3）A750＜0.002（4）棕色容器保存，穩(wěn)定期長，40C下至少保存6年（5）無菌試驗(yàn)（包括厭氧培養(yǎng)）陰性（6）測定精度＜±0.1%(7)定值由指定多個(gè)參考實(shí)驗(yàn)室測定廢液處理（1）按每升HiCN廢液加次氯酸鈉溶液40ml，充分混勻，敞開容器，置室溫3小時(shí)。（2）用“84”消毒液40ml代替（3）鹼性硫酸亞鐵懸液40m/每升HiCN廢液HiCN參考液的標(biāo)準(zhǔn)19（四）方法學(xué)評價(jià)

Sahli法HiCN測定法操作簡便，但誤差較大。操作簡便，結(jié)果穩(wěn)定可靠。不能轉(zhuǎn)化生理或病理中全除SHb外，其余各種Hb均可很快地轉(zhuǎn)部的Hb，對Hbco、Hbred化為HiCN.轉(zhuǎn)化很慢或轉(zhuǎn)化不完全.Hb轉(zhuǎn)化時(shí)間較長，5分鐘HiCN在540nm處吸收峰較寬，可用一轉(zhuǎn)化88%，10分鐘轉(zhuǎn)化95%般分光光度計(jì)進(jìn)行比色。2小時(shí)才基本轉(zhuǎn)化完畢。終點(diǎn)反應(yīng)不明顯，比色過顯色快而穩(wěn)定，因此HiCN液可制成程不易標(biāo)準(zhǔn)化。在相當(dāng)長時(shí)間（至少6年）內(nèi)穩(wěn)定不變的標(biāo)準(zhǔn)液，這對進(jìn)行質(zhì)量控制較為有利。有摩爾消光系數(shù)可通過分光光度計(jì)測定吸光度值直接計(jì)算測定誤差小.

（四）方法學(xué)評價(jià)20

SDS-Hb測定法AHD-575測定法優(yōu)點(diǎn)：無劇毒試劑單一，操作簡操作簡單單，易行，無毒、呈色穩(wěn)定，可用氯化血紅素作標(biāo)準(zhǔn)品。缺點(diǎn)：本身質(zhì)量差無消光系數(shù)無標(biāo)準(zhǔn)SDS-Hb測定法21

堿羥高鐵血紅素（AHD-575）法[原理]：非離子化去垢劑堿性溶液（AHD試劑）能使血紅素，血紅蛋白及其衍生物全部轉(zhuǎn)化為一種穩(wěn)定堿性羥高鐵血紅素，在575nm處有一特征性的吸收峰。[試劑]：任選一種轉(zhuǎn)化液TritonX-10025g皂素1g＋Brig-3525g＋0.1NNaOH1000mL聚乙二醇辛基苯基醚（乳化劑0P）25ml堿羥高鐵血紅素（22[操作]：取血20ul加到上述任一轉(zhuǎn)化液3ml中，充分混勻，靜置3分鐘，于分光光度計(jì)（帶寬應(yīng)小于8nm）波長575nm處，用光徑1.000cm比色杯，以轉(zhuǎn)化液調(diào)零，讀取吸光度（A）值。[計(jì)算]：64438Hb（g/L）=測定管吸光度（A）×————×151=A×349.76958×46958:氯化血紅素摩爾消光系數(shù)64458：目前國際公認(rèn)的血紅蛋白分子量4：一個(gè)分子Hb含有4個(gè)血紅素151：稀釋倍數(shù)[操作]：23THANKSTHANKS24謝謝你的閱讀知識就是財(cái)富豐富你的人生71、既然我已經(jīng)踏上這條道路，那么，任何東西都不應(yīng)妨礙我沿著這條路走下去?！档?/p>

72、家庭成為快樂的種子在外也不致成為障礙物但在旅行之際卻是夜間的伴侶?！魅_

73、堅(jiān)持意志偉大的事業(yè)需要始終不渝的精神。——伏爾泰

74、路漫漫其修道遠(yuǎn)，吾將上下而求索。——屈原

75、內(nèi)外相應(yīng)，言行相稱?！n非謝謝你的閱讀知識就是財(cái)富71、既然我已經(jīng)踏上這條道路，那么，25紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定1、合法而穩(wěn)定的權(quán)力在使用得當(dāng)時(shí)很少遇到抵抗?！ぜs翰遜2、權(quán)力會使人漸漸失去溫厚善良的美德?！?、最大限度地行使權(quán)力總是令人反感；權(quán)力不易確定之處始終存在著危險(xiǎn)?！ぜs翰遜4、權(quán)力會奴化一切。——塔西佗5、雖然權(quán)力是一頭固執(zhí)的熊，可是金子可以拉著它的鼻子走?！勘燃t細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定1、合法而穩(wěn)定的權(quán)力在使用得當(dāng)時(shí)很少遇到抵抗?！ぜs翰遜2、權(quán)力會使人漸漸失去溫厚善良的美德。——伯克3、最大限度地行使權(quán)力總是令人反感；權(quán)力不易確定之處始終存在著危險(xiǎn)?！ぜs翰遜4、權(quán)力會奴化一切。——塔西佗5、雖然權(quán)力是一頭固執(zhí)的熊，可是金子可以拉著它的鼻子走?！勘燃t細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定概述：血液由血漿和血細(xì)胞兩部分組成。通過循環(huán)系統(tǒng)與全身各個(gè)組織器官密切聯(lián)系參與機(jī)體各項(xiàng)生理功能活動，維持機(jī)體正常新陳代謝和內(nèi)環(huán)境平衡。在病理情況下，血液系統(tǒng)疾病除直接累及血液外，也可以影響全身組織器官，而各組織器官的病變也可直接或間接地引起學(xué)液發(fā)生變化，臨床上較多的檢驗(yàn)項(xiàng)目是通過血液標(biāo)本的檢驗(yàn)來了解機(jī)體的變化。紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定1、合法而穩(wěn)定的權(quán)力在使用得當(dāng)時(shí)很少26紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定課件整理27紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定課件整理28紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定課件整理29紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定課件整理30一、紅細(xì)胞基礎(chǔ)理論（一）RBC來源、生成、壽命及衰亡

紅細(xì)胞系祖細(xì)胞早幼、中幼和（BFU-E和FU-E）晚幼各發(fā)育階段骨髓造血干細(xì)胞骨髓原紅細(xì)胞（CFU-S）促紅細(xì)胞生成素3~5次分裂（Erythropoietion，EPO）網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟紅細(xì)胞從骨髓益出至外周血的全過程約需5天時(shí)間一個(gè)原紅細(xì)胞最終可生成8~16個(gè)成熟紅細(xì)胞紅細(xì)胞的生存時(shí)間為120天珠蛋白參與再造血衰亡的RBC鐵膽紅素，參與膽紅素代謝一、紅細(xì)胞基礎(chǔ)理論31（二）

RBC的生理機(jī)能（見課件）

（三）Hb的組成及結(jié)構(gòu)

珠蛋白（含兩對肽鏈）血紅蛋白（Hb）亞鐵血紅素（Fe+4個(gè)卟啉）（二）RBC的生理機(jī)能（見課件）32

α2β2（成人主要Hb，簡稱HbA占90%）α鏈（141AA）珠蛋白

組合形式

α2δ2（成人次要β鏈（146AA）Hb，HbA2占1~3%）

α2γ2（胎兒主要Hb，HbF占2%以下）

紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定課件整理33紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定課件整理34二、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（一）原理：用等滲稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)（用已校準(zhǔn)的一次性微量采血管或Hb吸管，吸取全血20ul加到3.8ml稀釋液內(nèi)混勻），滴入血細(xì)胞計(jì)數(shù)盤內(nèi)，然后于顯微鏡下計(jì)數(shù)一定范圍內(nèi)的RBC數(shù)，經(jīng)過換算即可求得每升血液中的紅細(xì)胞數(shù)。二、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)35（二）試劑枸櫞酸鈉（2Na3C6H5O7·11H2O），3克甲醛（40%）1ml以上溶解后加蒸餾水100ml此配方克服了傳統(tǒng)的Hayem液的缺點(diǎn)。（三）操作見課件（二）試劑36（四）參考值RBC（×1012/L）Hb（g/L）男：4.0~5.5120~160女：3.5~5.0110~150

新生兒：6.0~7.0170~200（四）參考值37（五）臨床意義升高：相對升高——與脫水有關(guān)（吐、瀉、汗、尿、灼、癌）絕對升高——與乏氧有關(guān)生理性（高原、胎兒、新生兒、運(yùn)動、精神因素）病理性（心肺疾患、真性紅細(xì)胞增多癥）降低：生理性降低——妊娠、嬰幼兒、老年人病理性降低——生成降低、原料不足、造血障礙、丟失增多（失血）、破壞增多（溶血）

由于各種病因?qū)е轮車t細(xì)胞減少，即病理性貧血其貧血的病因?qū)W分類見第9頁“表2-1”（五）臨床意義38三、血紅蛋白測定（一）血紅蛋白測定方法改良沙利（Sahli）氏法托爾克維斯脫（Tallgvist）氏法光電比色法硫酸銅溶液比重法酸化（堿化）光電比色法氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）測定法十二烷基硫酸鈉血紅蛋白（SDS-Hb）測定法堿羥高鐵血紅素（AHD-575）法上機(jī)分析

三、血紅蛋白測定39（二）氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）法

原理：血紅蛋白被高鐵氰化鉀[K3Fe（CN）6]氧化成高鐵血紅蛋白（Hi）再與氰離子（CN-）結(jié)合，生成穩(wěn)定的氰化高鐵血紅蛋（hemigl-obinCyanide，簡稱HiCN）。氰化高鐵血紅蛋白在波長540nm處有吸收峰，可用校準(zhǔn)的高精度分光光度計(jì)進(jìn)行直接定量測定?；蛴肏iCN參考液進(jìn)行比色測定。

（二）氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）法40而幻燈片12而幻燈片1241試劑：常用的Hb轉(zhuǎn)化液為文齊氏液（見實(shí)習(xí)指導(dǎo)）

靜置操作：血液20ul+轉(zhuǎn)化液5ml———比色5分鐘計(jì)算：64458Hb（g/L）=測定吸光度（A）×————×25144×1000=A×367.764458是目前國際公認(rèn)的血紅蛋白平均分子量44是1965年國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會（ICSH）公布的血紅蛋白摩爾吸光度。251是稀釋倍數(shù)試劑：常用的Hb轉(zhuǎn)化液為文齊氏液（見實(shí)習(xí)指導(dǎo)）42（三）注意事項(xiàng)：必須以HiCN法為標(biāo)準(zhǔn)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線HiCN試劑不能貯存于塑料瓶中，應(yīng)放40C冰箱不能圖工作方便不顧質(zhì)量管理要求遇到白細(xì)胞數(shù)過多或異常球蛋白增高的血標(biāo)本，HiCN比色液會出現(xiàn)渾濁，可離心取上清夜或向比色液中加少許NaCL（約0.25g）或碳酸鉀（0.1g）氰化鉀是劇毒品，應(yīng)妥善保管，配試劑時(shí)要按劇毒品管理程序操作若用分光光度計(jì)作精度定量測定，分光光度計(jì)的波長和吸光度需校正，帶寬應(yīng)小于1nm，比色杯光徑1.00cm，允許誤差為0.5%（0.995~1.005cm），測定溫度200C~250C。（三）注意事項(xiàng)：43HiCN參考液的標(biāo)準(zhǔn)（1）波峰540nm±1nm，波谷504~502nm（2）A540/A504應(yīng)在1.59~1.63之間（3）A750＜0.002（4）棕色容器保存，穩(wěn)定期長，40C下至少保存6年（5）無菌試驗(yàn)（包括厭氧培養(yǎng)）陰性（6）測定精度＜±0.1%(7)定值由指定多個(gè)參考實(shí)驗(yàn)室測定廢液處理（1）按每升HiCN廢液加次氯酸鈉溶液40ml，充分混勻，敞開容器，置室溫3小時(shí)。（2）用“84”消毒液40ml代替（3）鹼性硫酸亞鐵懸液40m/每升HiCN廢液HiCN參考液的標(biāo)準(zhǔn)44（四）方法學(xué)評價(jià)

Sahli法HiCN測定法操作簡便，但誤差較大。操作簡便，結(jié)果穩(wěn)定可靠。不能轉(zhuǎn)化生理或病理中全除SHb外，其余各種Hb均可很快地轉(zhuǎn)部的Hb，對Hbco、Hbred化為HiCN.轉(zhuǎn)化很慢或轉(zhuǎn)化不完全.Hb轉(zhuǎn)化時(shí)間較長，5分鐘HiCN在540nm處吸收峰較寬，可用一轉(zhuǎn)化88%，10分鐘轉(zhuǎn)化95%般分光光度計(jì)進(jìn)行比色。2小時(shí)才基本轉(zhuǎn)化完畢。終點(diǎn)反應(yīng)不明顯，比色過顯色快而穩(wěn)定，因此HiCN液可制成程不易標(biāo)準(zhǔn)化。在相當(dāng)長時(shí)間（至少6年）內(nèi)穩(wěn)定不變的標(biāo)準(zhǔn)液，這對進(jìn)行質(zhì)量控制較為有利。有摩爾消光系數(shù)可通過分光光度計(jì)測定吸光度值直接計(jì)算測定誤差小.

（四）方法學(xué)評價(jià)45

SDS-Hb測定法AH