菊花的組織培養(yǎng)47

扦插嫁接壓條

第一頁，共四十五頁。營養(yǎng)繁殖扦插嫁接壓條

通過必修課的學(xué)習(xí)，我們已經(jīng)了解到大多綠色開花植物都是靠種子來繁殖的。那么，有沒有不用種子來培育植物的方法呢？組織培養(yǎng)第二頁，共四十五頁。專題3植物組織培養(yǎng)技術(shù)第三頁，共四十五頁。課題一菊花的組織培養(yǎng)第四頁，共四十五頁。一、課題背景二、基礎(chǔ)知識(shí)（一）植物組織培養(yǎng)的基本過程在植物的個(gè)體發(fā)育過程中，細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上都會(huì)出現(xiàn)穩(wěn)定性的差異，形成這些差異的過程叫做細(xì)胞分化。離體的植物組織或細(xì)胞，在培養(yǎng)了一段時(shí)間以后，會(huì)通過細(xì)胞分裂，形成排列疏松而無規(guī)則的高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的一群薄壁細(xì)胞。1.細(xì)胞分化：2.愈傷組織：3.脫分化：4.再分化：第五頁，共四十五頁。人參的愈傷組織第六頁，共四十五頁。菠蘿的愈傷組織第七頁，共四十五頁。一、課題背景二、基礎(chǔ)知識(shí)（一）植物組織培養(yǎng)的基本過程在植物的個(gè)體發(fā)育過程中，細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上都會(huì)出現(xiàn)穩(wěn)定性的差異，形成這些差異的過程叫做細(xì)胞分化。離體的植物組織或細(xì)胞，在培養(yǎng)了一段時(shí)間以后，會(huì)通過細(xì)胞分裂，形成排列疏松而無規(guī)則的高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的一群薄壁細(xì)胞。由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，稱為植物細(xì)胞的脫分化。1.細(xì)胞分化：2.愈傷組織：3.脫分化：4.再分化：第八頁，共四十五頁。第九頁，共四十五頁。一、課題背景二、基礎(chǔ)知識(shí)（一）植物組織培養(yǎng)的基本過程在植物的個(gè)體發(fā)育過程中，細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上都會(huì)出現(xiàn)穩(wěn)定性的差異，形成這些差異的過程叫做細(xì)胞分化。離體的植物組織或細(xì)胞，在培養(yǎng)了一段時(shí)間以后，會(huì)通過細(xì)胞分裂，形成排列疏松而無規(guī)則的高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的一群薄壁細(xì)胞。由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，稱為植物細(xì)胞的脫分化。由脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官，這個(gè)過程叫做再分化。1.細(xì)胞分化：2.愈傷組織：3.脫分化：4.再分化：第十頁，共四十五頁。第十一頁，共四十五頁。5.植物組織培養(yǎng)過程：第十二頁，共四十五頁。離體的植物器官、組織、細(xì)胞脫分化愈傷組織再分化根芽植物體植物組織培養(yǎng)的基本過程:脫分化和再分化過程是組織培養(yǎng)中的關(guān)鍵。第十三頁，共四十五頁。指植物的離體部分（包括任何器官、組織、細(xì)胞或原生質(zhì)體），在人工控制的培養(yǎng)基及環(huán)境條件（溫度及光照）下，得以生長和分化成完整植株的一種無菌培養(yǎng)技術(shù)。又稱：植物離體培養(yǎng)6.植物組織培養(yǎng)：第十四頁，共四十五頁。細(xì)胞的全能性是指已分化的細(xì)胞具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能。是生物體的每一個(gè)細(xì)胞都含有該物種所特有的全套遺傳物質(zhì)。7.植物組織培養(yǎng)原理：植物細(xì)胞的全能性（1）概念：（2）原因：第十五頁，共四十五頁。（二）影響植物組織培養(yǎng)的因素：1、外植體的選取

a不同植物的組織培養(yǎng)難度不同b對于同一種植物材料，材料的年齡、保存時(shí)間的長短等也會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。2、培養(yǎng)基的配制(MS培養(yǎng)基)大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co有機(jī)物：甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等植物激素：生長素、細(xì)胞分裂素等未開花植株的莖上部新萌生的側(cè)枝第十六頁，共四十五頁。MS固體培養(yǎng)基成分及比例第十七頁，共四十五頁。微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同，MS培養(yǎng)基則需提供大量無機(jī)營養(yǎng)，無機(jī)鹽混合物包括植物生長必須的大量元素和微量元素兩大類。思考以下問題:1.同微生物培養(yǎng)基相比，MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同？2、你認(rèn)為組織培養(yǎng)過程中，成功的關(guān)鍵有哪些？這些步驟的適宜條件是什么？組織的脫分化及愈傷組織的再分化。植物組織培養(yǎng)過程中，影響植物細(xì)胞脫分化、再分化的最重要因素是植物激素，細(xì)胞分裂素與生長素之間的濃度比可以調(diào)控植株組培過程中芽和根的形成。第十八頁，共四十五頁。3、不同植物激素使用順序使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果先生長素，后細(xì)胞分裂素先細(xì)胞分裂素，后生長素同時(shí)使用有利于細(xì)胞分裂但不分化細(xì)胞既分裂也分化分化頻率提高

第十九頁，共四十五頁。4、不同植物激素使用量生長素/細(xì)胞分裂素比值結(jié)果比值高時(shí)比值低時(shí)比值適中促根分化，抑芽形成

促芽分化，抑根形成促進(jìn)愈傷組織生長第二十頁，共四十五頁。5、pH、溫度、光照（菊花組培）

pH=5.8溫度控制在18—22℃每日光照12h6、消毒在培養(yǎng)的整個(gè)過程中，都需要是一個(gè)無菌環(huán)境第二十一頁，共四十五頁。1、實(shí)驗(yàn)操作流程制備MS固體培養(yǎng)基外植體消毒接種培養(yǎng)栽培移栽三、實(shí)驗(yàn)操作第二十二頁，共四十五頁。2、實(shí)驗(yàn)具體操作（1）制備MS固體培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)室一般使用_____℃保存的配制好的培養(yǎng)基母液來制備①配制各種母液配制母液時(shí)，大量元素濃縮__________，微量元素濃縮__________。常溫保存。激素類、維生素類以及用量比較小的有機(jī)物可以按照__________的質(zhì)量濃度單獨(dú)配制母液。用母液配制培養(yǎng)基時(shí)，需要根據(jù)各種母液的濃縮倍數(shù)，計(jì)算用量。1mg/ml410倍100倍三、實(shí)驗(yàn)操作第二十三頁，共四十五頁。②配制培養(yǎng)基。按配方稱取瓊脂、蔗糖以及各種母液，配制MS培養(yǎng)基。2、實(shí)驗(yàn)具體操作（1）制備MS固體培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)室一般使用_____℃保存的配制好的培養(yǎng)基母液來制備4植物激素在菊花組織培養(yǎng)中，可以不添加_________________，原因是菊花莖段組織培養(yǎng)___________________。比較容易三、實(shí)驗(yàn)操作第二十四頁，共四十五頁。③滅菌將分裝好的培養(yǎng)基連同其他器械一起進(jìn)行_________________。2、實(shí)驗(yàn)具體操作（1）.制備MS固體培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)室一般使用_____℃保存的配制好的培養(yǎng)基母液來制備4高壓蒸汽滅菌三、實(shí)驗(yàn)操作第二十五頁，共四十五頁。此時(shí)的組織或細(xì)胞為離體的，即細(xì)胞所生活的環(huán)境為液體有機(jī)物營養(yǎng)環(huán)境，而不是能體現(xiàn)其整個(gè)植物體的光能自養(yǎng)。高等植物是光能自養(yǎng)型生物，為什么在植物組織培養(yǎng)過程中還需要提供有機(jī)物培養(yǎng)基？思考第二十六頁，共四十五頁。2、實(shí)驗(yàn)具體操作（2）外植體消毒

①選取菊花莖段時(shí)，要取________________。流水沖洗酒精無菌水氯化汞無菌水②消毒流程：濃度______搖動(dòng)_____次時(shí)間_____s濃度______時(shí)間_____min至少清洗___次漂凈_______生長旺盛的嫩枝70%2～36～70.1%1～23消毒水三、實(shí)驗(yàn)操作第二十七頁，共四十五頁。不是。對外植體進(jìn)行表面消毒時(shí)，既要考慮到消毒效果，又要考慮到植物的耐受能力。在外植體消毒過程中，是不是強(qiáng)度越大越好，為什么？

思考第二十八頁，共四十五頁。旁欄思考：你打算做幾組重復(fù)？你打算設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)嗎？答：每種材料或配方至少要做一組以上的重復(fù)。設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)可以取用一個(gè)經(jīng)過滅菌的裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng)，用以說明培養(yǎng)基制作合格，沒有被雜菌污染。第二十九頁，共四十五頁。2、實(shí)驗(yàn)具體操作（3）接種

①前期準(zhǔn)備：用_________________消毒工作臺(tái)，點(diǎn)燃酒精燈。所有工作都必須在酒精燈旁進(jìn)行，器械使用前后都要用_________________滅菌。②接種操作：插入外植體時(shí)_________________端朝上，每個(gè)錐形瓶接種_________________個(gè)外植體。70％的酒精火焰灼燒形態(tài)學(xué)上6～8三、實(shí)驗(yàn)操作第三十頁，共四十五頁。2、實(shí)驗(yàn)具體操作（4）培養(yǎng)

接種后的錐形瓶最好放在__________中培養(yǎng)。培養(yǎng)期間定期進(jìn)行_________，溫度控制在_________℃，并且每天用日光燈光照_________h。無菌箱18～2212消毒三、實(shí)驗(yàn)操作第三十一頁，共四十五頁。在培養(yǎng)過程中，是脫分化、再分化的過程，隨著芽和根的形成，就具有了自養(yǎng)的能力，是由細(xì)胞到一個(gè)個(gè)體的演變過程培養(yǎng)過程中為什么需要進(jìn)行光照？思考第三十二頁，共四十五頁。2、實(shí)驗(yàn)具體操作（5）移栽

移栽生根的試管苗之前，應(yīng)先打開封口膜，在培養(yǎng)間生長幾日；然后用流水清洗___________，將幼苗移植到____________________等環(huán)境中生活一段時(shí)間，進(jìn)行壯苗。最后進(jìn)行露天栽培。根部培養(yǎng)基消過毒的蛭石或珍珠巖三、實(shí)驗(yàn)操作第三十三頁，共四十五頁。固體基質(zhì)型，含水量高、蓄水性強(qiáng)、透性好，適合栽培珍珠巖,珍珠巖是一種火山噴發(fā)的酸性熔巖，經(jīng)急劇冷卻而成的玻璃質(zhì)巖石，有弧形或圓形裂隙，如珍珠的結(jié)構(gòu)，所以被命名為珍珠巖。蛭石是一種天然、無毒的礦物質(zhì)，在高溫作用下會(huì)膨脹的礦物。它是一種比較少見的礦物，屬于硅酸鹽。第三十四頁，共四十五頁。（六）栽培幼苗移栽后，每天觀察并記錄幼苗的生長情況，適時(shí)澆水、施肥，直至開花第三十五頁，共四十五頁。制備MS固體培養(yǎng)基外植體消毒接種培養(yǎng)栽培移栽沖洗—酒精—無菌水沖洗—氯化汞—無菌水沖洗至少三次之上配制各種母液配制培養(yǎng)基滅菌實(shí)驗(yàn)操作流程第三十六頁，共四十五頁。1、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）2、外植體的消毒（酒精、氯化汞）3、接種的無菌操作（酒精、酒精燈——灼燒）4、無菌箱中的培養(yǎng)；5、移栽到消過毒的環(huán)境中生存一段時(shí)間。在整個(gè)操作過程中，是如何來實(shí)現(xiàn)無菌環(huán)境的？思考第三十七頁，共四十五頁。2.是否完成了對植物組織的脫分化和再分化3.是否進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)、對照與記錄4.生根苗的移栽是否合格1.外植體在培養(yǎng)過程中可能會(huì)被污染，你認(rèn)為造成污染的原因有哪些？培養(yǎng)基滅菌不徹底；外植體消毒不徹底；接種中被雜菌污染；錐形瓶密封性差等。四、結(jié)果分析與評價(jià)第三十八頁，共四十五頁。一般說來，容易進(jìn)行_________繁殖的植物，也容易進(jìn)行組織培養(yǎng)。如蘆薈、豆瓣綠、秋海棠、月季等。無性五、課題延伸第三十九頁，共四十五頁。一.課題背景（一）植物組織培養(yǎng)的基本過程二.基礎(chǔ)知識(shí)（二）影響植物組織培養(yǎng)的因素三.實(shí)驗(yàn)操作四.結(jié)果分析與評價(jià)五.課題延伸制備MS固體培養(yǎng)基外植體消毒接種培養(yǎng)移栽栽培課堂小結(jié)第四十頁，共四十五頁。菊花的組織培養(yǎng)再分化材料性質(zhì)、營養(yǎng)物質(zhì)、調(diào)節(jié)物質(zhì)、環(huán)境條件外植體的消毒接種基本原理:細(xì)胞的全能性基本過程:脫分化愈傷組織影響因素：操作流程：配制MS固體培養(yǎng)基培養(yǎng)移栽栽培第四十一頁，共四十五頁。課后練習(xí)：1.答：植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差，對培養(yǎng)條件的要求較高。用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合于某些微生物的生長，如一些細(xì)菌、真菌等的生長。而培養(yǎng)物一旦受到微生物的污染，就會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)前功盡棄，因此要進(jìn)行嚴(yán)格的無菌操作。2.答：外植體的生理狀態(tài)是成功進(jìn)行組織培養(yǎng)的重要條件之一。生長旺盛的嫩枝生理狀況好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。第四十二頁，共四十五頁。1.下列那組符合菊花組織培養(yǎng)的基本步驟（）A．制備MS培養(yǎng)基→外植體消毒→接種→培養(yǎng)→移栽→栽培B．制備MS培養(yǎng)基→外植體消毒→接種→培養(yǎng)→栽培→移栽C．制備MS培養(yǎng)基→外植體消毒→接種→栽培→培養(yǎng)→移栽D．制備MS培養(yǎng)基→外植體消毒→接種→移栽→培養(yǎng)→栽培練習(xí)2.在外植體脫分化形成愈傷組織的過程中，下列哪個(gè)條件是不需要的（）A．消毒滅菌B．適宜的溫度C．充足的光照D．適宜的養(yǎng)料和激素AC第四十三頁，共四十五頁。3．某同學(xué)在做菊花組織培養(yǎng)時(shí)，操作完成了3-4天后，觀察同一溫室中的外植體，發(fā)現(xiàn)有的瓶內(nèi)外植體正常生長，有的瓶內(nèi)外植體已經(jīng)死亡，你認(rèn)為死亡的原因不可能的是（）A．培養(yǎng)條件，比如pH、溫度等不適宜B．接種時(shí)外植體未滅菌C．接種工具消毒后未冷卻就接種外植體D．將菊花莖段倒插入培養(yǎng)基中4．

MS培養(yǎng)基與微生物培養(yǎng)基相比不同的是（）

A．MS培養(yǎng)基不含有機(jī)物

B．微生物培養(yǎng)基以有機(jī)物為主

C．MS培養(yǎng)基不含微量元素

D．MS