實驗一 微生物實驗課介紹與要求及環(huán)境、人體表面微生物的檢測(張理珉)課件

微生物學(xué)實驗課介紹與要求

及環(huán)境、人體表面微生物的檢測程立忠（）王紹輝（）張理珉（）余澤芬（）教材用書

1．沈萍，范秀容，李廣武主編．微生物學(xué)實驗（第三版）．北京：高等教育出版社，1999第四版已于2007年11月出版主要參考書1．杜連祥，路福平主編．微生物學(xué)實驗技術(shù)[M]．北京：中國輕工業(yè)出版社，2005．2．周德慶．微生物學(xué)實驗教程（第2版）[M]．北京：高等教育出版社，2006．3．楊文博主編．微生物學(xué)實驗[M]．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2004．4．趙斌，何紹江主編．微生物學(xué)實驗[M]．北京：科學(xué)出版社，2002．5．東秀珠，蔡妙英主編．常見細菌系統(tǒng)分類和鑒定方法[M]．北京：科學(xué)出版社，2001．

實驗內(nèi)容一

微生物學(xué)實驗課介紹

與安全教育1、實驗課的目的掌握微生物實驗的最基本操作技術(shù)相關(guān)技術(shù)得到充分訓(xùn)練（熟練掌握最好）讀、想、學(xué)、會、用2、實驗課的內(nèi)容介紹意義：微生物學(xué)是生命科學(xué)中最基礎(chǔ)的學(xué)科之一，實驗技術(shù)的獨特性和重要性。促進了多個學(xué)科的建立和發(fā)展——生物化學(xué)、分子生物學(xué)、生物工程學(xué)、免疫學(xué)、病毒學(xué)等等廣泛的應(yīng)用——基礎(chǔ)理論研究、工業(yè)、農(nóng)業(yè)、環(huán)境、醫(yī)學(xué)、食品等，實驗內(nèi)容無菌操作技術(shù)；培養(yǎng)基的制備和消毒滅菌技術(shù)；微生物的分離培養(yǎng)純化技術(shù)；菌種的保藏技術(shù)微生物制片染色技術(shù)；微生物數(shù)量和大小測定技術(shù)；噬菌體的分離純化及效價的測定；微生物生理生化反應(yīng)；微生物DNA提取技術(shù)介紹；免疫學(xué)技術(shù)介紹；實驗課學(xué)習(xí)要求認(rèn)真對待，做好預(yù)習(xí)，加強自主拋磚引玉，增強學(xué)科聯(lián)系多發(fā)現(xiàn)問題，多和教師交流注重原理，努力創(chuàng)新做到“讀、想、學(xué)、會、用”實驗課安排根據(jù)教學(xué)計劃，本門實驗課程2學(xué)分，4學(xué)時/周，14周共56學(xué)時，每學(xué)時45分鐘，每次課3小時；實驗結(jié)果的觀察是實驗過程的重要內(nèi)容。分組——兩人一組，登記聯(lián)系電話；穿白色實驗服進入實驗室；每組準(zhǔn)備記號筆和打火機各一個；值日生由班委每次實驗前委派；下午實驗課改在13：30上，上午的不變。實驗報告的格式實驗?zāi)康膶嶒炘韺嶒灢牧虾推鞑膶嶒灧椒ê筒襟E實驗結(jié)果、數(shù)據(jù)分析討論及思考題實驗報告要求

1.每位學(xué)生準(zhǔn)備規(guī)定式樣的實驗報告紙。2.上課時每給出一次作業(yè)，就在下一次上課前上交這一次的實驗報告，不得拖延時間，否則后果自負(fù)。3.報告要求寫清楚實驗?zāi)康?、原理、步驟、結(jié)果及思考題。希望簡潔、工整。4.本門課結(jié)束前，要求使用統(tǒng)一的封面，把自己的所有實驗報告按實驗先后順序裝訂成一冊，交給實驗教師。實驗成績平時成績（20%，安排于實驗過程中或期末進行操作考核）實驗習(xí)慣（10%）期末考試（20%，筆試考試）實驗報告（50%）可能組織就實驗內(nèi)容進行答辯，替代期末考試

實驗用到儀器設(shè)備顯微鏡（光學(xué)——普通、相差、微分干涉差、暗視野；電子——掃描、透射）；高壓蒸汽滅菌鍋（立式和臥式）；超凈工作臺、隔水式恒溫培養(yǎng)箱；鼓風(fēng)恒溫干燥箱；恒溫振蕩培養(yǎng)箱（旋轉(zhuǎn)式和往復(fù)式）；旋渦振蕩器；恒溫水浴鍋；pH計；分光光度計（紫外、可見光、紅外、原子吸收等）；離心機；電泳儀、PCR儀、發(fā)酵罐、酶標(biāo)儀、冰箱；微波爐等。實驗用到器械試管（testtube）德漢氏小管（Durhamtube）小塑料離心管，又稱Eppendorf管玻璃吸管（glasspipette）微量吸管（micropipette）[微量加樣槍]培養(yǎng)皿（petridish）三角燒瓶（erlenmeyerflask）常見的接種工具

（可根據(jù)要求自已定做）常用玻璃儀器實驗室安全實驗教學(xué)過程中出現(xiàn)的各類突發(fā)事故和事件主要有：1、火災(zāi)；2、觸電；3、跑（漏）水；4、化學(xué)品傷害及中毒；5、灼傷；6、割（劃）傷。實驗室安全(一)化學(xué)藥品及溶劑的處理方法1.在使用強酸或強堿時必需戴上安全手套，并戴上安全眼鏡。2.有機溶劑，固體化學(xué)藥品，酸、堿化合物均需分類存放，揮發(fā)性之化學(xué)藥品更必需放置于具有抽氣裝置的藥品柜內(nèi)。3.高揮發(fā)性或易于氧化之化學(xué)藥品必需存放于冰箱或冰柜之中。4.強酸或強堿（包括廢酸堿）不得存放于金屬架之上。(二)安全用電，防止事故1.了解實驗室總電源開關(guān)的安裝位置。2.不可用濕手操作電器，使用電工工具前確認(rèn)其完好無損。3.嚴(yán)禁在實驗室內(nèi)私自接用電源。4.確保漏電保護器起作用，用電器外殼接好地線，實驗室無人時要切斷電源。5.遇有電器失火，先要切斷電源，再行滅火。6.人身觸電，立即人工呼吸，再送醫(yī)院，切忌打強心針。

（三）節(jié)約用水，防止跑漏1.不用水時，隨手關(guān)閉閥門。2.廢物廢液不準(zhǔn)倒在水槽內(nèi)，實驗完了放水沖洗水槽和下水管，勿使廢液殘留其中。實驗時需特別注意：人身安全防止割傷、灼傷，如有發(fā)生，應(yīng)用急救藥品施治。意外對策學(xué)生衣服著火的對策以滅火「氈」包裹該同學(xué)，并使其在地上滾動其他同學(xué)立刻通知老師。實驗室的窗簾布著火的對策：取出滅火器，拔出安全針。把噴咀對準(zhǔn)火源。按掣使滅火器噴出二氧化碳。其他同學(xué)立刻通知老師。酒精濺在實驗桌上并著火的對策：利用沙桶或濕抹布把燃燒的液體用沙蓋著。其他同學(xué)立刻通知老師。學(xué)生打破了燒杯，被碎片割傷流血的對策以清水沖洗傷口。貼上干凈的消毒膠布。其他同學(xué)立刻通知老師?；瘜W(xué)藥品濺進學(xué)生的眼睛內(nèi)的對策用洗眼瓶以大量清水沖洗眼睛。其他同學(xué)立刻通知老師。一個學(xué)生在傾倒酸時意外地接觸到酸的對策立刻以大量清水沖洗患處最少五分鐘。立刻通知老師。實驗物品常見警告標(biāo)識符號滅火器及其使用方法實驗內(nèi)容二

實驗室環(huán)境及人體表面微生物的檢測一、目的要求

檢查實驗室空氣中及各人手上的微生物(細菌為主)，并加以統(tǒng)計、比較和描述（數(shù)量、菌落形態(tài)等）。使學(xué)生認(rèn)識到微生物無處不在，以便在以后的實驗中重視無菌操作。二、實驗原理微生物廣泛分布于室內(nèi)外、水、空氣和土壤中；通過對環(huán)境和人體表面微生物的檢測及觀察，建立起“微生物無處不在、無孔不入”的概念。形成自身良好的衛(wèi)生習(xí)慣，認(rèn)識到在微生物實驗中無菌操作的重要性。平板培養(yǎng)基含有微生物生長所需的營養(yǎng)成分，當(dāng)不同來源的樣品接種于培養(yǎng)基上，在適宜溫度下培養(yǎng)，1~2天內(nèi)每一菌體細胞即能通過很多次細胞分裂而進行繁殖，形成一個肉眼可見的細胞群體（菌落）；每種微生物都有其特有的菌落形態(tài)，一般情況下一個菌落對應(yīng)一個微生物活細胞，這樣就可以統(tǒng)計不同微生物在某樣品中的數(shù)量。三、實驗材料及器材牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板3個/組；洗手液、酒精燈、記號筆、恒溫培養(yǎng)箱等。四、實驗方法及步驟（一）實驗室空氣中微生物檢查（二）手上微生物檢測

1、取一無菌牛肉膏蛋白胨瓊脂平板，打開上皿蓋（皿蓋扣放，開始計時），使培養(yǎng)基暴露于空氣中30分鐘，蓋上皿蓋。2、在37℃下倒置培養(yǎng)24~48小時，觀察結(jié)果，統(tǒng)計微生物數(shù)量。（一）實驗室空氣中微生物檢查

（沉降法）3、利用沉降法測定計算空氣中微生物的數(shù)量，結(jié)果的表示的方法有兩種：①一種是每一平皿上菌落形成單位;②另一種是每一平皿實測得的菌落形成單位，再按奧梅梁斯基公式換算成為每立方米多少個細菌。

根據(jù)前蘇聯(lián)奧梅梁斯基提出的建議：面積為100cm2的平板培養(yǎng)基，暴露在空氣中5分鐘相當(dāng)于10升空氣中的菌落數(shù)。具體計算公式如下：除沉降法外，常用還有撞擊式（有專門儀器設(shè)備）。多級撞擊式空氣微生物采樣器1、取一個牛肉膏蛋白胨瓊脂平板，用記號筆在平板底部（外面）劃線等分成2半，用手指在其中一半上?。ɑ蚰Σ粒紫拢ú荒馨雅囵B(yǎng)基劃破）；然后用肥皀洗手，用同一手指在另一半上?。ɑ蚰Σ粒紫?。2、在37℃下倒置培養(yǎng)24~48小時，觀察結(jié)果，統(tǒng)計比較洗手前后的微生物數(shù)量及菌落種類。（二）手上微生物檢測

（三）菌落特征描寫方法①大小大、中、小、針尖狀?？上葘⒄麄€平板上的菌落粗略觀察一下，再決定大、中、小的標(biāo)準(zhǔn)，或由教師指出一個大小范圍。②顏色黃色、金黃色、灰色、乳白色、紅色、粉紅色等。③干濕情況干燥、濕潤、粘稠④形態(tài)圓形、不規(guī)則等⑤高度扁平、隆起、凹下⑥透明程度透明、半透明、不透明⑦邊緣整齊、不整齊本次實驗的思考題1、將你在平板上觀察到的結(jié)果填入下表樣品來源菌落數(shù)(近似值)菌落類型特征描寫大小形態(tài)干濕高度透明度顏色邊緣洗手前1234洗手后1234空氣中12342、計算出相應(yīng)的空氣中微生物