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專題5蛋白質技術第74天時間：____月____日1.血紅蛋白的提取和分離一般分為四步：樣品處理→粗分離→純化→純度鑒定。如圖所示：2．第一步樣品處理的注意事項：(1)洗滌紅細胞(用生理鹽水洗滌的目的：去除雜蛋白)→①檸檬酸鈉的作用：防止血液凝固；②低速短時離心的作用：防止________________沉淀；③緩慢攪拌的目的是：防止紅細胞破裂。④洗滌干凈的標志是：離心后上清液中________。(2)釋放血紅蛋白→①蒸餾水的作用：使紅細胞大量吸水脹裂；②加入甲苯的作用：溶解紅細胞的細胞膜；③充分攪拌的目的：________________。(3)________血紅蛋白溶液→①2000r/min離心10min：從上到下第三層紅色透明為血紅蛋白溶液；②濾紙過濾除去脂溶性沉淀層；③分液漏斗內靜置，分出下層紅色透明液。(P64)3．第二步粗分離的注意事項：(1)透析膜：是________，蛋白質是大分子，它不能透過透析膜，而小分子物質可以自由通過透析膜與周圍的緩沖溶液進行溶質交換，進入到透析液。(2)1mL血紅蛋白溶液裝入透析袋中，再置于____________中透析12h。(3)磷酸緩沖液的作用：________________________________________。(P65)4．第三步________的注意事項：(1)純化方法：____________，又稱為____________。(2)原理：根據(jù)被分離物質的蛋白質相對分子質量的大小，利用具有網(wǎng)狀結構的凝膠的分子篩作用，來進行分離。分子量較小的蛋白質進入凝膠內部，路程長、移動速度慢。分子量較大的蛋白質在凝膠外移動，路程短、移動速度快。(3)純化的步驟：①凝膠色譜柱的制作；②凝膠色譜柱的填裝；③樣品的加入和洗脫。(P67)【注意】1.色譜柱填裝時色譜柱中不能有氣泡，因為會擾亂________________；2.色譜柱制作成功的標志是________________________。5．第四步純度鑒定的注意事項：(1)純度鑒定方法：___________________________________________。(2)原理：在蛋白質樣品加到凝膠上后，接通電源，所有SDS－蛋白質復合物都向著陽極遷移。大的蛋白質會遇到更多的阻力，因此________________________________。凝膠通過染色(常用的考馬斯亮藍染料)出現(xiàn)不同蛋白帶，蛋白帶越靠前的蛋白質分子量越小。(3)SDS的作用：使蛋白質解成單鏈；消除蛋白質自身凈電荷對遷移速度的影響。(P69)答案(1)白細胞和淋巴細胞沒有黃色(2)加速紅細胞的破裂(3)分離3.(1)半透膜(2)磷酸緩沖液(3)調節(jié)pH，避免pH變化引起蛋白質結構改變4.純化(1)凝膠色譜法分配色譜法(

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